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Entamoebaa histolytic
Entamoeb histolytica:
y ca:
l estructura
la estructuura interna de
d un
destructor por naturaleza

Bibiana Chvez Mungua y Arturo Gonzlez Robles

nnnnnnn

La investigacin de Entamoeba histolytica comenz cuando el parsito

fue identificado en muestras de heces y en tejidos humanos infectados, lo
que permiti hacer una detallada descripcin de sus componentes. Se
logr entonces estudiar su morfologa y la estructura interna de sus dos
etapas biolgicas: la amiba o trofozoto y el quiste.

E
ntamoeba histolytica, causante de la amibiasis invasora humana, es un orga-
nismo unicelular con ciclo de vida bifsico; es decir, presenta dos etapas
biolgicas en las cuales su forma es diferente.
Una de ellas es el trofozoto, comnmente llamado amiba, que habita,
se nutre y multiplica dentro del intestino del hospedero humano, y es capaz de
destruir cualquier tipo de clula y casi cualquier tejido.
La otra es el quiste, que asegura la persistencia del parsito en el ambiente ex-
terno y es la forma responsable de iniciar la infeccin en nuevos hospederos cuando
los quistes son ingeridos al consumir agua o alimentos contaminados con ellos.
Numerosos estudios han analizado la estructura de las dos formas de este parsi-
to. Por ser tan pequeo, su anlisis ha requerido el uso de diversos tipos de micros-
copios. Desde que se identificaron tanto las amibas como los quistes, una pregunta
importante ha sido, cmo es que este organismo causa dao a su hospedero? La
investigacin comenz identificando al parsito en muestras de heces y en tejidos
humanos infectados, y observando las muestras por microscopa, los que permiti
hacer una descripcin detallada de sus componentes que se pudieron identificar
por su morfologa y se compararon con aquellos ya caracterizados en otras clulas.
Se logr as obtener una visin de la estructura interna tanto de los trofozotos
como de los quistes. Una sorpresa fue descubrir que las amibas presentan pocas
estructuras y organelos celulares, pero tienen una gran cantidad de vacuolas de

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Amibiasis

diferente tamao y un ncleo bien definido. Sin em-
bargo, cuando fue posible utilizar el microscopio elec-
trnico para analizar amibas fijadas qumicamente y
deshidratadas con disolventes, se logr un adelanto im-
portante en identificar otras estructuras y apreciar me-
jor aquellas que se haban descrito con microscopios de
menor resolucin.
El inconveniente de estos mtodos de preparacin es
que se pueden crear artificios, y eventualmente algunos
componentes citoplsmicos pueden desaparecer. Por
el contrario, la fijacin mediante congelacin ultrarr-
pida, seguida de deshidratacin a muy baja temperatu-
ra, aumenta la posibilidad de una mejor preservacin
de la estructura biolgica.
En este artculo se muestran imgenes obtenidas con
estas tcnicas que han permitido apreciar y describir
en forma muy precisa la estructura interna de los trofo-
zotos y los quistes de este parsito. Estas metodologas,
junto con los avances obtenidos a varios niveles que
se examinan en otros artculos de este nmero de la re-
vista, han permitido establecer la presencia de organe-
los cuya existencia se negaba hace apenas unos aos, y
que permiten a las amibas sobrevivir e invadir los teji-
dos de su hospedero.
Estructura del trofozoto
El trofozoto o amiba (Figura 1A) mide entre 20 y
40 micrmetros (1 micrmetro = 0.001 milmetros), es
pleiomrfico, es decir, cambia su forma continuamen-
te debido a la fluidez de su citoplasma, a la plasticidad
de su membrana plasmtica y a la capacidad de rees-
tructuracin de ciertos organelos internos que en con-
junto se conocen como el citoesqueleto. Estas carac-
tersticas no slo le permiten moverse y desplazarse
eficientemente sobre cualquier superficie formando
proyecciones del citoplasma llamadas seudpodos, sino
que tambin son determinantes para su nutricin. Los
seudpodos participan en la captura de alimento me-
diante los mecanismos celulares conocidos como pino-
citosis, para ingerir lquidos, y fagocitosis, para capturar
slidos. Estas propiedades permiten a los trofozotos
una gran motilidad y desplazamiento, lo cual, aunado
a un alto contenido de enzimas proteolticas (que des-

Figura 1. Trofozotos de Entamoeba histolytica . A) Trofozoto observado a travs del microscopio

electrnico de barrido. Fotos B a D: microscopa electrnica de transmisin. B) Corte fino de un
trofozoto en el que se aprecia el ncleo (N) y algunas vacuolas (V). C) Numerosos polirribosomas
(Pr) y perfiles de delgados tbulos citoplasmticos (T). D) Numerosos grnulos de glucgeno (G) y
un grupo de cisternas aplanadas (C) similares al Golgi. Barra = 1 micrmetro.

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Entamoeba histolytica: la estructura interna de un destructor por naturaleza
truyen protenas) en la membrana y el citoplasma,
confieren al parsito un sorprendente potencial inva-
sivo. Varios estudios de biologa celular y molecular
han demostrado que estos procesos son determinantes
en el dao que ocasionan las amibas a los tejidos del
hospedero.
Los trofozotos presentan un ncleo esfrico (Figu-
ra 1B) que mide de 4 a 7 micrmetros de dimetro. A
diferencia de otras clulas que tienen un ncleo bien
formado (eucariontes), en la periferia del ncleo de las
amibas se localiza el cido ribonucleico (ARN, cido
nucleico que lleva la informacin gentica del ncleo a
la maquinaria celular que fabrica protenas), mientras
que el cido desoxirribonucleico (ADN), que constituye
el material gentico, se encuentra en posicin central y
aparentemente no se forman cromosomas tpicos.
Dentro del ncleo es frecuente observar un nme-
ro variable de pequeas esferas que al microscopio de
luz se observan refringentes, miden de 0.2 a 0.5 micr-
metros de dimetro y son denominadas esfrulas nuclea-
res. Su funcin an se desconoce. En cultivos de este
parsito, que es la forma en que se mantiene regular-
mente a las amibas para su estudio en el laboratorio,
pueden observarse con frecuencia dos o ms ncleos;
no obstante, en condiciones naturales el trofozoto
tiene slo un ncleo.
El citoplasma de los trofozotos de E. histolytica pre-
senta numerosas vacuolas limitadas por una membrana
que tiene caractersticas moleculares muy especficas
para su funcin en el transporte de diversos materia-
les que se internalizan durante los mecanismos llamados
fagocitosis, pinocitosis o por la fusin de varias vacuo-
las. Tambin se encuentran abundantes grnulos de
glucgeno y numerosos agregados en forma de bastn
formados por ribosomas dispuestos helicoidalmente,
en donde se lleva a cabo la sntesis de las protenas.
En estudios realizados en amibas fijadas qumica-
mente no se haban podido identificar los organelos
celulares presentes en la mayora de las clulas, como
mitocondrias, retculo endoplsmico y sistema de Golgi.
Estos resultados eran sorprendentes, pues los estudios
de biologa molecular han identificado en las amibas a
algunas de las protenas que participan en funciones
caractersticas de las citadas estructuras. Por ello, se es-
perara que estuvieran presentes para llevar a cabo
estas funciones. La congelacin ultrarrpida ha permi-
tido identificar un sistema de pequeos canalculos que
podra corresponder a un retculo endoplsmico liso
(Figura 1C). Tambin se han identificado grupos de
cisternas aplanadas muy similares al Golgi (Figura 1D).
Estos datos hacen pensar que tales organelos s existen
en las amibas, pero que son particularmente sensibles
a las tcnicas de fijacin qumica usadas comnmente.
Una de las estructuras que ms se ha estudiado uti-
lizando varias metodologas es la membrana plasm-
tica que limita a cada amiba. Aunque la composicin
molecular es muy semejante a la de las membranas
plasmticas de otras clulas, los lpidos que la forman
son especficos para el parsito, y se encuentran recep-
tores y otras molculas involucradas en la adhesin de
las amibas a clulas blanco y a sustratos proteicos para
su destruccin.
La membrana tiene un espesor de aproximadamen-
te 10 nanmetros (un nanmetro es la millonsima
parte de un milmetro), y para poder observarla se re-
quiere hacer cortes transversales del cuerpo de la ami-
ba y utilizar una amplificacin alta (30 000 veces). En
estas condiciones se observa como una lnea doble
(Figura 2A). En especmenes criofijados y criosustitui-
dos la superficie externa de la membrana plasmtica
muestra una capa muy fina de apariencia aterciopela-
da. Esta capa es la cubierta celular, llamada tambin
glicoclix, constituida por carbohidratos que forman
complejos con las protenas que se han integrado a esta
membrana, como los receptores.
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Amibiasis

Figura 2. A) Membrana plasmtica (MP) con el glicoclix (G). B) Casquete. C) Sobre la cara inter-
na de la membrana plasmtica (MP) del trofozoto se observan dos grnulos electrondensos ( GED ).
Uno de ellos ocupa una proyeccin de la membrana. D) Grupo de virus (V) formando una roseta
circular en el citoplasma. Barra = 100 nanmetros.

La fluidez de la membrana plasmtica de las amibas,
dada por sus componentes lipdicos, permite una gran
movilidad de estos componentes en el plano de la mem-
brana, y su translacin a diferentes regiones de la misma
como respuesta a un estmulo o seal del exterior. Esto
sucede cuando la amiba se desplaza en una direccin
definida y el movimiento requiere la polarizacin de
componentes en la parte posterior del cuerpo para im-
pulsar el citoplasma hacia el frente. Este procedimien-
to permite a las amibas dirigirse hacia molculas o c-
lulas que las atraen y llegar a sitios definidos en el
organismo hospedero para poder invadir sus tejidos.
Otra accin muy caracterstica de las amibas es la
formacin de un casquete membranal, en el cual mo-
lculas ancladas a la membrana tanto por la parte ex-
tracelular como por la parte interna se concentran en
la parte posterior del trofozoto, de donde se despren-
den. Se considera que este proceso ayuda a las amibas
a escapar de la respuesta inmunitaria del hospedero, al
librarse de los anticuerpos que se hubiesen generado
contra molculas amibianas y que se han logrado unir
a la superficie del parsito. La formacin del casquete
ayuda tambin a las amibas a desprenderse de molcu-
las que pudieran daarlas (Figura 2B).
En la cara interna de la membrana plasmtica fre-
cuentemente se observan pequeos grnulos a los que,
por su apariencia oscura cuando son vistos a travs del
microscopio electrnico de transmisin, se les llam
grnulos electrondensos (Figura 2C). Miden de 10 a
200 nanmetros de dimetro y pueden encontrarse dis-
persos en el citoplasma o asociados a la cara interna de
la membrana plasmtica. En ellos se han identificado
molculas con actividad proteoltica, como las enzimas
colagenasa y gelatinasa. Se ha demostrado que estos
grnulos se desprenden de la membrana y salen al exte-
rior cuando las amibas interactan con clulas en cul-
tivo o con protenas de la matriz que rodea y sostiene a
los tejidos en el organismo hospedero. Se ha propuesto
que algunas de las enzimas que las amibas utilizan para
destruir clulas y para abrirse camino dentro de los te-
jidos del husped estn contenidas en estos grnulos.
En los trofozotos es frecuente observar estructuras
con una morfologa que se asemeja a partculas virales
de diferentes tipos cuando stas son observadas a tra-
vs del microscopio electrnico. Estas estructuras pue-
den encontrarse aisladas o formando grupos circulares
(Figura 2D). Su identidad y su posible funcin en los
trofozotos se desconocen, aunque se ha especulado
sobre la posibilidad de que fuesen partculas virales que
infectan a las amibas y que podran destruirlas. sta es
una posibilidad muy interesante, ya que se podran uti-
lizar estos virus como vectores para acarrear genes le-
tales al interior de las amibas mediante mtodos de
biologa molecular. Al expresarse las protenas letales
codificadas en estos genes, las amibas moriran. Sin
embargo, esta posibilidad no se ha estudiado a fondo.

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Entamoeba histolytica: la estructura interna de un destructor por naturaleza

En clulas eucariontes en general, el complejo es-
tructural llamado citoesqueleto se encuentra formado
principalmente por actina (protena que forma estruc-
turas fibrilares en el citoplasma), as como por miosina
(otra protena fibrilar que se asocia con actina y otras
molculas para producir movimiento) y por tubulina
(protena que forma microtbulos). Como se mencio-
n previamente, el citoesqueleto es un elemento di-
rectamente relacionado con la capacidad motriz e in-
vasiva de los trofozotos. En este parsito se han
identificado ya los genes que codifican a varias formas
de estas tres protenas, y se conoce mucho sobre cmo
se regula la sntesis de muchas de ellas.
Tambin se han identificado varias de las protenas
que se asocian a la miosina y a la actina, y para regular
diferentes funciones que dependen de la motilidad ce-
lular. Si bien los microtbulos slo han sido observados
durante la mitosis formando un haz dentro del ncleo
pues a diferencia de otras clulas eucariontes, la mito-
sis en las amibas se lleva a cabo sin que se desorganice
la membrana nuclear (Figura 3A), se han identificado
ya los genes correspondientes a diferentes formas de la
tubulina. Es posible que los microtbulos citoplsmicos
sean particularmente sensibles a los fijadores, por lo
que no se han podido observar.
Protenas fibrilares como la actina y la miosina tam-
bin interactan y participan continuamente en la for-
macin de estructuras transitorias como los seudpodos
y estructuras para la fagocitosis y la pinocitosis. Estas
protenas fibrilares participan adems en la formacin
de las llamadas placas de adhesin, que son requeridas
para que las amibas puedan adherirse al sustrato du-
rante su desplazamiento, as como en la formacin del
casquete. Durante el proceso de divisin celular, la ac-
tina y la miosina intervienen tambin en la formacin
de un cinturn alrededor del cuerpo de la amiba que,
al contraerse por la interaccin de las dos protenas,
ayuda a la separacin de las clulas hijas resultantes de
la mitosis (Figura 3B).
La microscopa electrnica de transmisin ha permi-
tido observar que en el cinturn contrctil la miosina y
la actina presentan una organizacin similar a la que se

Figura 3. A) Ncleo en proceso de mitosis que muestra numerosos microtbulos en corte longi-
tudinal. Recuadro A, mayor aumento. B) Agregado fibrilar observado durante la divisin celular.
C) Corte transversal de un agregado fibrilar. Barra = 20 nanmetros.

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Amibiasis

observa en las fibras musculares (Figura 3C). La organi-
zacin y funciones de los elementos contrctiles en las
amibas se consideran fundamentales para llevar a cabo sus
actividades destructoras e invasoras, ya que se ha demos-
trado que las amibas que no expresan o que sobreexpre-
san estas protenas en el citoplasma se comportan como
no invasoras, debido a sus movimientos defectuosos.
Estructura del quiste
El quiste es la forma del parsito mediante la cual
se disemina la infeccin. Por ello es muy resistente,
ya que al ser arrojado al medio ambiente exterior tiene
que sobrevivir en condiciones hostiles hasta encontrar
un nuevo hospedero.
Los quistes son expulsados en gran nmero tanto
por los pacientes con sntomas como por los individuos
que son portadores y no presentan una infeccin inva-
sora. Ya en el exterior, pueden contaminar alimentos y
agua que, al ser consumidos, reiniciarn la infeccin. En
el tracto digestivo los jugos gstricos favorecen que los
quistes se rompan, dando lugar a los trofozotos que
causan la sintomatologa conocida de una infeccin
amibiana.
Los quistes son completamente esfricos y miden
de 10 a 20 micrmetros (Figura 4A). Durante el pro-
ceso de enquistamiento en el intestino grueso, en la
superficie de la amiba se forma la pared del quiste. Esta
gruesa capa lo proteger de la desecacin y de otras con-
diciones adversas cuando sea arrojado ya como quiste al
medio ambiente. La pared es una capa fibrosa que mide
de 120 a 150 nanmetros de espesor y cuyo principal
componente es la quitina, un polmero de carbohidra-
tos formado por unidades de N-acetil-D glucosamina.

Figura 4. A) Quistes de Entamoeba histolytica . Se observa la superficie rugosa de la pared del

quiste por microscopa de barrido. B) En el citoplasma de un quiste tratado con rojo de rutenio se
observan vacuolas, el ncleo (N), dos cuerpos cromatoides y la pared del quiste (PQ). Barra = 1 mi-
crmetro. C) Cuerpos cromatoides a mayor amplificacin, que muestran polirribosomas cortados
transversal y longitudinalmente. D) y E) Pared del quiste (PQ) con rojo de rutenio (D) y sin rojo de
rutenio (E). Barra = 100 nanmetros.

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Entamoeba histolytica: la estructura interna de un destructor por naturaleza
Tradicionalmente se consider a la pared del quiste
como una estructura impermeable que mantena al pa-
rsito completamente aislado del medio exterior. Sin
embargo, cuando los quistes son tratados con una solu-
cin que contiene un colorante denso a los electrones,
la pared se observa obscura, por el paso del colorante
al interior (Figura 4B, C), a diferencia de quistes no
tratados con el colorante en los que la pared se observa
casi transparente (Figura 4D). Este hecho demuestra
que la pared del quiste es permeable al agua y a par-
tculas muy pequeas, lo que les permite mantener el
mnimo de humedad e intercambio selectivo necesa-
rios para su supervivencia en el exterior.
En el citoplasma del quiste (Figura 4B) se presentan
de 1 a 4 ncleos, dependiendo de su estado de madurez.
La poblacin de vacuolas es notablemente menor que
en los trofozotos. Destacan tambin uno o varios agre-
gados de polirribosomas dispuestos ordenadamente y
de apariencia cristaloide, denominados cuerpos croma-
toides (Figura 4E). Estos agregados no estn limitados
por una membrana y por su tamao son fcilmente vi-
sibles en el microscopio ptico. Son considerados como
un marcador caracterstico de una infeccin amibiana
cuando se hace un examen de las heces de un indivi-
duo con sntomas que sugieren esta condicin.
Todos los estudios indican que los quistes slo se
forman en el ambiente del colon, para de ah ser ex-
pulsados e iniciar la infeccin en nuevos hospederos,
completando as su ciclo vital.
A pesar de la importancia del quiste en la disemi-
nacin de la amibiasis, an se conoce muy poco sobre
el proceso de enquistamiento. Una dificultad ha sido
la carencia de un mtodo para la produccin masiva
de quistes in vitro (es decir, en condiciones de labora-
torio), necesaria para hacer estudios bioqumicos y
moleculares.
Un mejor conocimiento del quiste de E. histolytica,
as como de los procesos de enquistamiento y desen-
quistamiento, es uno de los retos por resolver, ya que al
impedir la transmisin del parsito se podra avanzar
rpidamente hacia el control de la amibiasis humana.
Bibiana Chvez Mungua es doctora en patologa experimen-
tal por el Centro de Investigacin y Estudios Avanzados del
Instituto Politcnico Nacional (Cinvestav), del que actualmente es
profesora titular en el Departamento de Infectmica y Patogne-
sis Molecular. Utilizando microscopa electrnica estudia diversas
parasitosis que afectan al ser humano, como la amibiasis y la
giardiasis. Ha publicado numerosos artculos en revistas cientficas
de difusin internacional.
bchavez@cinvestav.mx
Arturo Gonzlez Robles es doctor en patologa experimental
por el Centro de Investigacin y Estudios Avanzados (Cinvestav).
Es investigador titular del Departamento de Infectmica y
Patognesis Molecular. Ha colaborado en numerosos proyectos
de investigacin relacionados con diversas infecciones que afec-
tan al ser humano, producidas principalmente por protozoarios
parsitos. Ha intervenido en la publicacin de ms de 70 artculos
relacionados con el tema.
goroa@cinvestav.mx
Lecturas recomendadas
Chvez-Mungua, B., P. Talams-Rohana, A. Ros, M. Gon-
zlez-Lzaro y A. Martnez-Palomo (2008), Entamoeba
Histolytica: Fibrilar Aggregates in Dividing Trophozoi-
tes, Experimental Parasitology, 118, 280-284.
Chvez-Mungua, B., G. Castan, V. Hernndez-Ramrez,
M. Gonzlez-Lzaro, P. Talams-Rohana y A. Martnez-
Palomo (2012), Entamoeba Histolytica Electrodense
Granules Secretion in Vitro and in Vivo: Ultraestructural
Study, Microscopy Research and Technique, 72, 189-196.
Martnez Palomo, A. (1982), The Biology of Entamoeba
Histolytica, en Brown, K. N. (compilador), Tropical
Medicine Research Studies Series, Chichester, Research
Studies Press.
Martnez-Palomo, A., A. Gonzlez-Robles, B. Chvez, E.
Orozco, S. Fernndez-Castelo y A. Cervantes (1985),
Structural Bases of the Cytolytic Mechanisms of Enta-
moeba Histolytica, Journal of Protozoology, 32, 166-175.
Meza, I., P. Talams-Rohana y M. A. Vargas (2006), The
Cytoskeleton of Entamoeba Histolytica: Structure, Func-
tion and Regulation by Signaling Pathways, Archives
of Medical Research, 37, 234-243.
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