CONTEO DE ERITROCITOS

OBJETIVO

Una vez conocemos la cmara de recuento neubauer, aprender las tcnicas y el

procedimiento para el recuento de hemates con sangre diluida.

FUNDAMENTO Y MATERIAL NECESARIO

Los recuentos celulares son procedimientos que se utilizan para determinar el

nmero de los distintos tipos celulares en una unidad de volumen de sangre
(generalmente, en 1 mm cbico).

Para hacer el recuento hay que seguir estos tres pasos:

- Dilucin de la sangre.
- Conteo del nmero de clulas.
- Clculo matemtico del nmero de clulas presentes en 1 mm 3 de sangre.

En clase vamos a practicar con la cmara de recuento neubauer, que hemos

estudiado con la prctica anterior. Para ello, necesitaremos tambin:
Cubreobjetos
Debe ser algo ms grueso que los normalmente utilizados. Se coloca de

forma que apoye sobre las dos bandas laterales de la porcin central de la
cmara. De esta manera, queda delimitado un espacio entre la banda central
y el cubre en el que se deposita la muestra y cuyo espesor es de 0,1 mm.
Pipeta de Thoma

Son unas pipetas especiales de cristal que constan de un largo tubo capilar
graduado y de una dilatacin en forma de ampolla o bulbo.

El tubo capilar termina en punta, a nivel de uno de sus extremos, y se

contina con el bulbo, a nivel del otro de sus extremos. Adems, est
dividido en 10 partes iguales, y en su superficie estn especialmente bien
marcadas la 5 divisin (con un 0,5) y la 10 (con un 1).
El bulbo contiene una perla de vidrio para facilitar la mezcla de la sangre con
el lquido de dilucin, y acaba en un tubo capilar corto. La perla de vidrio es
roja en las pipetas empleadas para el recuento de hemates, y blanca en las
usadas para el recuento de leucocitos. Adems, en las pipetas para hemates
la capacidad del bulbo es 100 veces superior a la del tubo capilar largo, por
lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 101. En las pipetas para
leucocitos la capacidad del bulbo es 10 veces mayor que la del tubo capilar
largo, por lo que en el tubo capilar corto hay una marca de 11.
Goma de aspiracin y propipeta

Es un tubo de goma que permite la aspiracin de la muestra y del lquido de

dilucin.

En uno de sus extremos tiene encajada una boquilla, y por el otro se

ensambla al tubo capilar corto de cualquiera de las pipetas de Thoma. Al
tubo se le aplica una propipeta para la aspiracin.

Camara de Neubauer

Microscopio

REACTIVOS

Lquido de dilucin: Debe ser isotnico, para evitar alteraciones en los

hemates o su lisis.
Se suele utilizar el de Hayem, que est compuesto por:
2,5g de sulfato sdico
0,5g de cloruro sdico
0,25g de cloruro mercrico
100ml de agua destilada
O en su caso se puede utilizar Solucin Salina. ( 1:200)

MUESTRA
Sangre capilar o venosa anticoagulada con EDTA. Esta sangre se utilizar
convenientemente diluida.
 LIMPIEZA DEL MATERIAL
Con respecto a la limpieza de la cmara de neubauer, tras su uso, ha de ser
aclarada con agua tibia y posteriormente debe secarse con un pao suave y
limpio dejndola al aire.

Tras el empleo de las pipetas de Thoma, stas deben lavarse interiormente

del siguiente modo:

Primero, haciendo pasar a travs de ellas agua corriente, una vez.

Luego, haciendo pasar a travs de ellas agua destilada, 3 veces.
Finalmente, haciendo pasar a travs de ellas acetona o alcohol de 95, otra
vez.

Tras ello, ha de secarse su interior, preferentemente mediante un secador de

aire.

DESARROLLO DE LA PRCTICA

PASO 1. Colocamos el cubre sobre el retculo de la cmara.

PASO 2. Con la pipeta, aspiramos la sangre hasta la seal de 0,5 1. Si

ocupamos el volumen de 0.5 la dilucin ser de 1:100, si ocupamos la marca
hasta 1, la dilucin ser 1:200

3. Limpiamos el exterior de la pipeta con una gasa, con cuidado de que no

descienda el volumen de sangre.

4. Aspiramos lquido diluyente hasta la seal 101.

5. Desenganchamos el tubo de goma de la pipeta y movemos suavemente

el contenido de forma horizontal, para que se mezcle la sangre con el lquido
de dilucin durante 2-3 minutos.
6. Desechamos las tres primeras gotas que se vierten con la pipeta y la
siguiente (cuarta) gota la colocamos entre la cmara y el cubre por uno de
los bordes de la cmara, dejndola que penetre por capilaridad. Debemos
intentar que no rebose la sangre diluida, ni se formen burbujas.

Como tenemos dos retculos, echamos una gota en el borde externo de cada
retculo.

7. Dejamos reposar la sangre diluida ya en la cmara, durante unos minutos

(en un ambiente hmedo). As las clulas tienen tiempo de sedimentarse.

8. Ya tenemos la cmara preparada para el estudio al microscopio.

OBSERVACIN AL MICROSCOPIO

Para recuento celular de glbulos rojos enfocar cmara en 40X en el

cuadrante de en medio.

Para hacer el recuento de hemates, tenemos que contar los eritrocitos

presentes en 80 cuadros pequeos del cuadrado central. En la teora de
varias bibliografas se recomienda contar los cuadrados pequeos
contenidos en los cuatro cuadrados medianos de las esquinas y el mediano
del centro, contenidos, a su vez, en el cuadrado central.
Para evitar contar repetidamente los mismos hemates, contamos los que
estn contenidos dentro del cuadrado y los que estn en contacto con sus
lneas de demarcacin superior o derecha.
Tambin se aconseja hacer el conteo en zig-zag.

Una vez contados los cinco cuadrados, obtenemos los siguientes resultados:

El conteo total (H) de los 80 cuadrados pequeos sera 538 hemates.

Teniendo en cuenta que:
El cuadrado grande central tiene 25 cuadrados medianos pero solo se
contaron 5 (por eso habr que multiplicar el resultado por 5)
El volumen del cuadro es el siguiente: La longitud de cada lado del
cuadrado grande central es de 1 mm y La longitud del espacio entre dicho
cuadrado y el cubre es de 0.1 mm (Por eso habr que multiplicar el resultado
por 10, para determinar la cantidad de hemates en 1 mm3)
La dilucin (FD) de la sangre previa al recuento (Habr que multiplicar
por 100 o 200 segn el caso).

RG/mm3 = _H X FD * inverso de volumen

# cuadrantes contados

RBC= Recuento de hemates por mm3 de sangre

H= Hemates contados en 5 cuadros medianos
FD= Factor de dilucin
RBC = (538 x 200 x 250)/5= 5,380,000 hemates por mm3.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Los valores normales de RBC estn comprendidos entre los 4 y los 5,5
millones/mm3 en mujeres, y entre los 4,5 y los 6 millones/mm3 en los
hombres, creemos que la sangre con la que hemos realizado la prctica est
deteriorada por el tiempo que tiene, pues los valores obtenidos estn muy
por debajo de la media.
 EJERCICIOS

1. Qu se debe hacer si el lquido de Hayem contiene precipitados? Debe

ser filtrado.

2. Cul es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los
cuadrados pequeos donde se han contado los hemates?
0,05 x 0,05 x 0,1 = 0,00025mm3

3. Cul es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los
cuadrados medianos donde se han contado los hemates?
0,2 x 0,2 x 0,1 = 0,04mm3

4. Cul es el volumen de sangre diluida que hay sobre el cuadrado

central?
1 x 1 x 0,1 = 0.1mm3

5. Si la pipeta Thoma se enrasa con sangre hasta la seal de 1, cul es la

dilucin posteriormente obtenida?
1/100

6. Si la sangre se diluye a 1/200 y se cuentan 450 hemates en 5 cuadrados

medianos, cul es el RBC obtenido?
RBC = 450 x 5 x 10 x 200
RBC = 4500000 hemates/mm3

RESULTADOS OBTENIDOS

Hemates contados en 5 cuadrados medianos: 538.

Factor de dilucin: 1/100.
RBC: 2 690 000 hemates/mm3 de sangre

VALORACIN DE LOS RESULTADOS

Sexo de la persona a la que pertenece la sangre: Femenino
RBC obtenido es: Bajo