Las reacciones de hipersensibilidad son, de las patologas producidas por hongos,

las que ms nos interesan desde el aspecto aerobiolgico. Teniendo en cuenta la

propia definicin de alrgeno, al menos tericamente, todas las esporas fngicas
presentes en el aire seran alrgenos potenciales, ya que la respuesta de
hipersensibilidad puede ser provocada por cualquier especie de hongo, y slo
depender de la carga inmune y anamnesis del posible paciente.

No obstante, y a pesar de las altas concentraciones de esporas que pueden llegar

a alcanzarse en un momento dado en el aire, las sensibilizaciones que se
producen frente a stas, son muy inferiores a las producidas por la mayora de los
plenes aerovagantes, y an menos frecuentes los sujetos monosensibles a
hongos, pues generalmente la reactividad fngica est asociada a otro tipo de
alrgenos como polen o caros.

Como regla general, aunque con las lgicas excepciones derivadas por ejemplo,
del tipo de respiracin y de las caractersticas de cada tipo esporal, se considera
que las esporas fngicas con un tamao superior a las 5 micras son responsables
de reacciones inmediatas (tipo I, segn la clasificacin clsica de Gell y Coombs
de 1963), mientras que aquellas de un tamao inferior, tendran facilitada su
penetracin en el tracto respiratorio y posibilitaran la aparicin de reacciones de
tipo III.

No obstante, en la relacin hongos/alergias, es importante no slo la influencia

estacional, sino el medio en el que se desenvuelve el posible paciente; siendo muy
de tener en cuenta, las condiciones particulares de los hbitats de interiores (pues
muchas especies fngicas esporulan de una manera casi continua), o los
fenmenos meteorolgicos recientes (especialmente aumentos bruscos de
humedad) por la facilidad de los hongos para esporular con gran rapidez. Todos
estos aspectos provocan una diferencia de matiz en el estudio de polen y hongos
presentes en la atmsfera.
Algunos de los alrgenos fngicos ms importantes
son: Alternaria, Aspergillus, Cladosporium y Penicillium

Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos. Se han descrito

aproximadamente 500.000 especies, (se estima que pueden existir entre 1 y 1,5
millones de especies), pero slo un pequeo nmero (aproximadamente 100) son
patgenos de animales y plantas.

Presentan una amplia distribucin en la naturaleza, contribuyendo a la

descomposicin de la materia orgnica y participando en numerosos ciclos
biolgicos.

Desde 1969, los hongos han pasado a constituir un reino aparte, el reino Fungi
(Whittaker). Segn, Ainswort (1973), los hongos verdaderos (Eumycota) estn
agrupados en una gran divisin que presenta 5 subdivisiones: Mastigomycotina,
Zigomycotina, Ascomycotina, Basidiomycotina, Deuteromycotina. Todas las
subdivisiones, excepto Mastigomycotina, presentan hongos de importancia
mdica.
Alexopoulos et al., (1996) proponen una nueva clasificacin de los organismos del
Reino. Ellos incorporan a los hongos en 4 Phyla: Chitridiomycota, Zygomycota,
Ascomycota, Basidiomycota. Los organismos clasificados anteriormente como
Deuteromycotina fueron reagrupados y la gran mayora se integraron al Phylum
Ascomycota. Esta nueva clasificacin se basa en el anlisis con mtodos
modernos, principalmente por tcnicas de biologa molecular.

La morfologa de los hongos es variable, pero bsicamente se reconocen 2

formas: unicelulares denominadas levaduras y pluricelulares, multinucleados que
corresponden a loshongos filamentosos o miceliales. Pueden reproducirse en
forma asexual (anamorfa) por conidios y sexual (teleomorfa) por esporas.
Adems la reproduccin puede ser interna o externa y cada grupo de hongos
presenta un tipo particular de reproduccin sexual y asexual.
Tabla 1. Phyla que presentan especies de hongos de importancia mdica y el
tipo de reproduccin.

El desarrollo de una infeccin

fngica depende del estado de los
mecanismos de defensa del
hospedero, los factores de
virulencia del hongo y la dosis
infectante. En general, los hongos
causan enfermedades en
hospederos inmunodeprimidos,
aunque existen algunas especies de
hongos que son patgenos
primarios (siempre producen
infecciones) tanto en pacientes
inmunocompetentes como
inmunodeprimidos.

El elevado nmero de conidios presentes en el aire y la baja incidencia de las

micosis en hospederos inmunocompetentes nos demuestra que, a pesar de que
la mayor parte de las personas estn expuestas a un gran nmero de hongos,
estos microorganismos son habitualmente eliminados por los mecanismos de
defensa del hospedero.
La exposicin a los conidios de diversos hongos se produce tanto en espacios
abiertos como interiores, muchos de los hongos que se encuentran en el
interior, son los mismos que se encuentran en el exterior de los edificios,
penetrando por ventanas y puertas, sistemas de ventilacin, o por grietas u otras
aberturas en las paredes.
Los hongos pueden tambin ser introducidos en los edificios a travs de la tierra
arrastrada por los zapatos.

Algunas especies de hongos, como Penicillium y Aspergillus, (Figura 1) se

encuentran en concentraciones mayores en el interior de los edificios que exterior.
El desarrollo de una infeccin fngica depende del estado de los mecanismos de
defensa del hospedero, los factores de virulencia del hongo y la dosis infectante.
En general, los hongos causan enfermedades en hospederos inmunodeprimidos,
aunque existen algunas especies de hongos que son patgenos primarios
(siempre producen infecciones) tanto en pacientes inmunocompetentes como
inmunodeprimidos.
El elevado nmero de conidios presentes en el aire y la baja incidencia de las
micosis en hospederos inmunocompetentes nos demuestra que, a pesar de que
la mayor parte de las personas estn expuestas a un gran nmero de hongos,
estos microorganismos son habitualmente eliminados por los mecanismos de
defensa del hospedero.

La exposicin a los conidios de diversos hongos se produce tanto en espacios

abiertos como interiores, muchos de los hongos que se encuentran en el
interior, son los mismos que se encuentran en el exterior de los edificios,
penetrando por ventanas y puertas, sistemas de ventilacin, o por grietas u otras
aberturas en las paredes.
Los hongos pueden tambin ser introducidos en los edificios a travs de la tierra
arrastrada por los zapatos.
Algunas especies de hongos, como Penicillium y Aspergillus, (Figura 1) se
encuentran en concentraciones mayores en el interior de los edificios que exterior.
 Colonias de Penicillium yAspergillus

El nmero total de conidios fngicos en el aire puede variar desde < de 200 hasta
> de un milln por metro cbico, dependiendo del momento del da, la estacin
del ao, la localizacin geogrfica, la presencia de fuentes de esporulacin, etc.

Es frecuente que el recuento de conidios fngicos supere los 4000 por metro
cbico, siendo de stos, ms de 2000 de Cladosporium y ms de 1000 de
Alternaria. Cabe destacar que Cladosporium herbarum, contribuye con el mayor
nmero de conidios en los ambientes abiertos y es considerado una causa
importante de alergia respiratoria.

La posibilidad de que una persona inhale conidios fngicos, tanto en ambientes

abiertos como cerrados, es elevada. Sin embargo, aunque la concentracin en
el aire de Cladosporium es mayor, existen ms personas alrgicas a Alternaria
que a Cladosporium y las respuestas son ms severas contra Alternaria.

Estudios realizados en nios alrgicos, han demostrado que el riesgo de

sintomatologa respiratoria aumenta de 1,5 a 3,5 veces cuando viven en casas con
porcentajes elevados de humedad o lugares en los cuales se demuestra el
crecimiento de hongos de forma similar a lo observado en ambientes donde los
nios estn expuestos a humo de tabaco y otros contaminantes ambientales. Se
considera que estos problemas de humedad y crecimiento fngico afectan a un
2050% de las casas y se asocian a un mantenimiento inadecuado de los
sistemas de calefaccin, ventilacin o de aire acondicionado, todos ellos factores
importantes para el crecimiento fngico.
Las condiciones ptimas para el crecimiento de los hongos se producen en un
ambiente caluroso y con una humedad relativa del aire elevada. En los bosques,
los hongos crecen en troncos y vegetacin putrefacta, especialmente en reas
hmedas y en sombra. En los hogares, son ms frecuentes en los stanos y
armarios hmedos, cuartos de bao, frigorficos, colchones, contenedores de
basura y muebles tapizados.

Algunos conidios fngicos son propulsados a la atmsfera por procesos que

dependen de la presencia de agua y aumenta su concentracin area durante los
perodos de humedad y lluvia, mientras que otros son transportados libremente
por el viento en das secos y ventosos. Este polvo orgnico puede sedimentar en
diferentes superficies o puede ser inhalado por el ser humano u otros animales y
depositarse en la superficies mucosas respiratorias o en la conjuntiva. La
exposicin repetida a estas partculas fngicas aumentan el riesgo de que se
desarrollen reacciones alrgicas especficas contra antgenos fngicos.

Aspergillus est ampliamente distribuido en el ambiente, se encuentra en el suelo,

en el aire, en plantas y materia orgnica en descomposicin y en los hogares en
el polvo y alimentos. Su presencia en el ambiente hospitalario se ha asociado en
algunas situaciones a brotes de infecciones nosocomiales. Ejemplo: Aspergillus
fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger. Muchos de
estos brotes intrahospitalarios estn relacionados con obras de construccin, ya
sea en el mismo hospital o cerca de l, especialmente cercanos a salas de
pacientes neutropnicos, con cncer o transplantados o bien por sistemas de
ventilacin.

La medida de prevencin ms importante se basa en evitar la exposicin a los

conidios de los hongos, tanto en ambientes internos como externos , medida que
es imposible de ejecutar, por lo tanto, se recomienda evitar humedad en
paredes, closet, marcos de ventanas , airear las habitaciones con frecuencia, no
guardar ropa o zapatos hmedos , eliminar desperdicios alimenticios y basuras
con frecuencia , no acumular polvo en las habitaciones y alfombras. La norma de
considera que los hongos deben estar en un nivel de presencia de 750 ufc/mm3
de aire.
En los espacios abiertos se recomienda evitar exponerse a vegetacin en
descomposicin, zonas de elaboracin y transporte de granos y harinas, y
movimientos de tierra, especialmente obras de construccin de casas o edificios

Efectos sobre la salud

Los hongos a travs de sus esporas, micotoxinas y por la emisin de VOC

(compuestos voltiles orgnicos), pueden causar diferentes tipos de
enfermedades o alteraciones de la salud:

Enfermedad infecciosa o patognica: aspergilosis (por exposicin a

Aspergillus fumigatus), histoplasmosis (por Histoplasma), criptococosis (por
Crypto coccus) y coccidiomicosis (por Coccidioides)

Reacciones alrgicas, como rinitis y asma

Neumonitis por hipersensibilidad

Cncer debido a micotoxinas carcinognicas

Desrdenes inmunolgicos por micotoxinas inmunosupresivas

Reacciones txicas por micotoxinas

Reacciones de inflamacin debidas al -1,3-glucano, compuesto de la

pared celular de los hongos

Irritacin debida a VOC fngicos como por ejemplo alcohol

 Sndrome del edificio enfermo

Principales mtodos de identificacin de hongos filamentosos

La identificacin de los hongos filamentosos se basa en el examen macroscpico

de la colonia y en sus caractersticas microscpicas. Semejanzas macroscpicas
como la forma de la colonia, el color de la superficie, la textura y la produccin de
pigmentos son muy tiles para la identificacin.

En general, la morfologa microscpica de los hongos es estable y presenta pocas

variaciones. La identificacin definitiva se basa en la forma caracterstica, mtodo
de produccin y ordenamiento de las esporas, siendo tambin importante conocer
el tamao y la disposicin de las hifas.

La preparacin del material para la observacin microscpica puede realizarse en

fresco, con cinta de celofn adhesiva o mediante cultivo sobre portaobjetos.

Preparacin en fresco

Se realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:

1. Seleccionar una colonia aislada.

2. Calentar a la llama el alambre de un asa de siembra, y doblar de forma que

se convierta en un objeto cortante.

3. Con la ayuda del asa, extraer un fragmento triangular de la colonia que

contenga adems un poco de agar en la parte inferior.

4. Depositar el fragmento extrado sobre un portaobjetos en el cual,

previamente, se ha depositado una gota de azul de lactofenol.

5. Cubrir con un portaobjetos y presionar suavemente para dispersar la

colonia y el agar; de esta forma, la muestra est disponible para su
observacin al microscopio.
Este procedimiento es el que utilizan la mayora de los laboratorios, ya que las
muestras se preparan con facilidad y rapidez y adems permite identificar muchas
de las especies de hongos ms habituales. El mayor inconveniente de la
observacin en fresco es que se puede alterar el ordenamiento caracterstico de
las esporas al presionar con el cubreobjetos, por lo que este procedimiento no es
vlido en los casos en que es necesario conocer la disposicin de las esporas.

Fig. 1: Preparacin en fresco

Preparacin con cinta de celofn adhesiva

El procedimiento se lleva a cabo como sigue :

1. Apoyar el lado engomado de un trozo de cinta adhesiva transparente sobre

la superficie de una colonia.

2. Colocar la cinta bien extendida sobre una gota de azul de lactofenol o azul
de anilina colocada, a su vez, sobre un portaobjetos.

3. Observar al microscopio para conocer la forma y ordenamiento

caracterstico de las esporas.

Este mtodo puede considerarse como el ms simple, econmico y adecuado

para la identificacin de hongos, recomendable para los laboratorios
microbiolgicos de cualquier nivel.
La preparacin de la cinta transparente permite observar al microscopio como se
desarrolla el microorganismo en el cultivo. Generalmente las esporas se
mantienen intactas y la identificacin se realiza con facilidad.

Una de las desventajas de este mtodo es que si la cinta transparente no se

presiona con suficiente firmeza sobre la superficie de la colonia, la muestra no es
adecuada, ya que al no quedar bien adherida la cinta, las esporas o las hifas no se
pueden identificar.

En los casos en que mediante este mtodo no se observen esporas deber

realizarse la preparacin en fresco.

Fig. 2: Preparacin con cinta de celofn adhesiva

Cultivo sobre portaobjetos

Se realiza empleando el procedimiento descrito a continuacin:

1. Cortar un bloque pequeo de un medio slido adecuado (agar), que ha sido

vertido en una cpsula de Petri, hasta una altura de 2 cm. El bloque puede
cortarse con la ayuda de un bistur estril o con un tubo de ensayo estril
sin reborde (lo que permite obtener un taco redondo).
 2. Colocar un portaobjetos estril sobre una capa de agar al 2% contenida en
una cpsula de Petri.

3. Colocar el bloque de agar sobre el portaobjetos.

4. Con una asa de siembra cuyo alambre ha sido doblado en ngulo recto,
inocular los cuatro cuadrantes del taco con el microorganismo a identificar.

5. Colocar un cubreobjetos estril sobre la superficie del bloque de agar.

6. Tapar la cpsula de Petri que contiene el cultivo e incubar a 30 o C.

7. Finalizado el perodo de incubacin, retirar el cubreobjetos (este proceso

debe realizarse en una cabina de seguridad biolgica), y colocarlo en un
portaobjetos que contenga azul de lactofenol o azul de anilina.

8. La observacin al microscopio permite distinguir la forma y disposicin de

las esporas.

9. Si con este proceso no ha sido posible la identificacin, el resto del cultivo

puede ser usado ms adelante si se contina incubando. Entonces se retira
el bloque de agar y se agrega una gota de azul de lactofenol o azul de
anilina sobre la zona del cultivo y se coloca un cubreobjetos sobre ella. Es
recomendable realizar dos cultivos sobre el mismo portaobjetos de modo
que si en uno no se pueden observar las caractersticas microscpicas
puede disponerse del segundo despus de un perodo adicional de
incubacin.

Este mtodo permite la observacin microscpica del hongo mientras se

desarrolla directamente debajo del cubreobjetos, de forma que las caractersticas
microscpicas se distinguen con facilidad, las estructuras se mantienen intactas y
puede observarse un gran nmero de reas representativas.
No deben realizarse cultivos en portaobjetos de hongos de crecimiento lento que
pueden ser patgenos dimorfos, como Histoplasma capsulatum, Blastomyces
derma titidis, Coccidioides immitis, Paracoccidioides brasilien sis o Sporothrix
schenckii.

Fig. 3: Cultivo sobre portaobjetos

Principales mtodos de identificacin de levaduras

Se requiere una combinacin de pruebas bioqumicas y morfolgicas para

identificar las levaduras. En las caractersticas morfolgicas debe incluirse el color
de las colonias, la medida y la forma de las clulas, la presencia de cpsula, la
produccin de hifas o pseudohifas, y la produccin de clamidiosporas. Las
pruebas bioqumicas incluyen la asimilacin y fermentacin de azcares y la
asimilacin de nitrato.

Muchas levaduras asociadas con infecciones humanas pueden ser identificadas

usando alguno de los test comerciales que existen basados en la asimilacin de
azcares. No obstante, es importante recordar que el examen morfolgico es
esencial para evitar confusin entre microorganismos con perfiles bioqumicos
idnticos. En consecuencia, hay un nmero de pruebas simples para la
identificacin presuntiva de algunas de las levaduras ms importantes. stas
incluyen la prueba del tubo germinativo para la identificacin rpida de Candida
albicans y la prueba de la ureasa para Cryptoccus neo formans, que se describen
ms adelante.
Si la prueba del tubo germinativo es positiva, el organismo es Candida albicans. Si
se observa una cpsula puede hacer pensar que el organismo es Cryptoccus neo
formans. La prueba de la ureasa es til para la identificacin de este organismo,
pero debe complementarse con otras pruebas adicionales. Si no se produce
germinacin en el tubo y no se observa la presencia de cpsula, deben efectuarse
otras pruebas bioqumicas y morfolgicas.

Actualmente existen en el mercado sistemas estandarizados de identificacin (kits)

para conocer el perfil bioqumico de las levaduras. Estos kits permiten una
identificacin ms rpida de las levaduras aisladas que los mtodos clsicos de
asimilacin y fermentacin. La ventaja ms importante es que estos sistemas
proporcionan una identificacin que surge de una base de datos sobre miles de
biotipos de levaduras, que incluyen diversas variaciones y patrones de utilizacin
de substratos.

Prueba del tubo germinativo

Se realiza de acuerdo con el siguiente procedimiento:

1. Suspender un inculo muy pequeo de clulas de la levadura obtenidas a

partir de una colonia aislada en 0,5 ml de suero de oveja (o de suero
humano, procedente de un individuo sano).

2. Incubar los tubos a 35-37o C, no superando las 3 horas.

3. Despus de la incubacin, tomar una gota de la suspensin y colocarla

sobre un portaobjetos. Observar con el microscopio a poco aumento la
presencia de tubos germinativos. Un tubo germinativo se define como un
apndice con la mitad de ancho y 3 a 4 veces el largo de la clula de la cual
emerge. En la mayor parte de los casos no existe constriccin en el origen
del tubo germinativo.

Produccin de cpsula
El procedimiento se desarrolla del siguiente modo:

1. Tomar una pequea cantidad del inculo suspendindola en una gota de

una solucin acuosa de tinta India al 50% en un portaobjetos.

2. Observar al microscopio la presencia de la cpsula, que se distingue como

un halo claro alrededor de las clulas.

Prueba selectiva rpida para ureasa

Se realiza segn el siguiente procedimiento:

1. Pasar un hisopo de algodn impregnado con un substrato con urea

deshidratado sobre la superficie de dos o tres colonias, de modo que la
punta se cubra con el microorganismo.

2. Colocar el hisopo con la levadura dentro de un tubo que contenga 3 gotas

de cloruro de benzalconio al 1% (pH 4,86 0,01) y rotar con firmeza contra
el fondo para poner en contacto los microorganismos con las fibras de
algodn.

3. Tapar el tubo e incubar a 45oC durante 30 minutos.

4. Examinar a los 10, 15, 20 y 30 minutos para detectar un cambio de color de

amarillo a prpura. Un color rojo a prpura indica produccin de ureasa.

Medidas de prevencin

Todos los trabajos realizados para la identificacin o el cultivo de los hongos

deben efectuarse en las condiciones adecuadas para no contaminar ni el
laboratorio donde se realizan los anlisis ni al personal que los manipula.

Todos los cultivos de hongos filamentosos han de ser manipulados en el interior de

una cabina de seguridad biolgica clase II, sin excepciones. Es permisible el
manejo de los cultivos de levaduras en la mesa del laboratorio pero deben ser
tratados como material infeccioso. Siempre que sea posible, se utilizarn asas de
siembra de un solo uso y cuando esto no sea posible se recurrir a la utilizacin
de un incinerador o la llama de un mechero para la descontaminacin del asa. Los
cultivos de hongos deben ser sellados con cinta adhesiva para evitar la
contaminacin del laboratorio y deben ser esterilizados en el autoclave o bien
eliminarlos en los recipientes adecuados para residuos sanitarios grupo III o de
riesgo.

Si los hongos se manipulan tomando las precauciones habituales de seguridad y

observando con cuidado unas buenas prcticas de laboratorio cabe esperar muy
pocos problemas relacionados con la contaminacin del laboratorio o del personal.

Fuente: Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo, Espaa.

Mtodo para el recuento de bacterias y hongos en aire:

Fundamento del mtodo

El mtodo se basa en el muestreo del aire problema mediante el aparato SAS

(Surface Aire System) compact. De los muestreadores descritos en la NTP-203, se
escogi ste por ser de fcil manejo, porttil y que permite elegir el medio de
cultivo adecuado a cada requerimiento.

El aire muestreado se hace incidir sobre un medio de cultivo determinado, segn

se pretendan valorar bacterias u hongos. Posteriormente se procede a la
incubacin a una temperatura adecuada y finalmente se efecta el contaje de
colonias expresando el resultado en ufc/m3 (unidades formadoras de colonias por
metro cbico).

Reactivos y productos

Todos los reactivos deben tener como mnimo la especificacin "para anlisis".

El agua utilizada ha de ser bidestilada o de calidad equivalente.

Medios de cultivo

Triptisoy Agar (TSA)

Es un medio de cultivo slido compuesto por:

Peptona de casena...............15,0 g/l

Peptona de soja.......................5,0 g/l

Cloruro sdico.........................5,0 g/l

Agar-Agar.............................15,0 g/l

pH del medio a punto de uso: 7,3 aproximadamente

Preparacin del medio:

Aadir 40 g de esta mezcla a un litro de agua destilada. Dejar embeber y llevar a

ebullicin hasta disolver totalmente el agar. Esterilizar al autoclave durante 15
minutos a 121 C. Con esta preparacin llenar las cpsulas de Petri, hacindolo en
el ambiente estril de la cmara de bioseguridad, dejar enfriar y una vez
solidificado el medio colocar las cpsulas 24 horas en la estufa de cultivo a 37C.
Pasado este tiempo se observan las placas desechando las que presenten
contaminacin.

Agar de sabouraud con cloranfenicol

Es un medio de cultivo slido, especfico para hongos, compuesto por:

Peptona de casena............ 5,0 g/l

Peptona de carne............... 5,0 g/l

D (+) Glucosa................... 40,0 g/l

 Cioranfenicol...................... 0,5 g/l

Agar - agar...................... 15,0 g/l

pH del medio a punto de uso: 5,6, aproximadamente

Preparacin del medio:

Suspender 65,5 g de la mezcla en un litro de agua destilada y llevar a ebullicin.

Esterilizar al autoclave durante 10 minutos a 121C. Evitar el sobrecalentamiento
que afectara a la gelificacin. Una vez distribuido en placas de Petri hacer la
prueba de esterilidad como se ha explicado en el punto anterior.

Solucin de Armil al 1/1000

Se disuelve 1 ml. de Armil en 1 litro de agua.

Aparatos y material

Muestreador de aire . "SAS compact"

Tal como se describe en el punto 5 de la Nota Tcnica de Prevencin n 203,

existen diferentes tipos de muestreadores de aire para contaminantes biolgicos.
En la presente NTP se expone el procedimiento a emplear con el equipo "SAS
compact" (ver la figura 1, cuyas caractersticas son las siguientes:

El aire a examinar es aspirado a una velocidad fijada durante un tiempo

variable,a travs de una cubierta de proteccin perforada con mltiples agujeros
pequeos de diseo especial.

El flujo de aire es dirigido sobre la superficie de una cpsula de Petri del tipo
"Rodac", que contiene el medio de cultivo adecuado para el examen
microbiolgico que se desee hacer.
 El aparato es transportable, funciona con bateria recargable y el control del
tiempo de funcionamiento es programable.

Placas de cultivo

Se utilizan las placas tipo "Rodac", tiles tambin para anlisis de superficies.

Estufas de cultivo

Estufa de cultivo a 37C de temperatura, para el cultivo de bacterias.

Estufa de cultivo a 28C de temperatura, para el cultivo de los hongos.

Contador de colonias

Autoclave

Campana de seguridad biolgica Bio - II - A

Contenedores para residuos biolgicos

Procedimiento de anlisis

Toma de muestra

Antes de empezar a tomar la muestra con el "SAS compact" ha de esterilizarse la

cubierta del aparato. sta puede llevarse a cabo por medio del autoclave durante
20 minutos a 21 atmsferas. Tambin se puede efectuar limpiando la cubierta del
aparato con una solucin desinfectante.

A continuacin se coloca la cpsula de Petri en el lugar indicado del aparato de

muestreo. Para manejar las cpsulas de Petri (conteniendo ya el medio de cultivo )
y el muestreador se recomienda hacerlo con guantes estriles desechables.
Despus de cada bloque de toma de muestras, limpiar la cubierta del muestreador
con una solucin desinfectante, teniendo la precaucin de que se haya secado
totalmente antes de tomar una nueva muestra.

El aparato dispone de un conector de control de tiempo, dividido en unidades que

van de 1 a 15, representando cada una de ellas un tiempo de 20 segundos. El
volumen de aire muestreado en cada unidad es equivalente a 30 litros, lo que
implica que se pueden realizar muestreos de una duracin de 20 segundos hasta
5 minutos y con unos volmenes de 30 a 450 litros de aire.

El tiempo y el volumen de muestreo dependen de la contaminacin ambiental que

se sospeche. Cuanto mayor sea sta, menor es el tiempo de muestreo que se
debe aplicar y viceversa.

Medios de cultivo

Triptisoy-agar

Se utiliza este medio de cultivo para efectuar el contaje de bacterias. Una vez
tomada la muestra, se trasladan las cpsulas de Petri al laboratorio, dejndolas en
la estufa de cultivo a 37C durante 48 horas.

Agar-Sabouraud con cloranfenicol

Se utiliza este medio de cultivo para efectuar el contaje de hongos. Una vez
tomada la muestra, se trasladan las cpsulas de Petri al laboratorio dejndolas en
la estufa de cultivo a 28C durante 5 das.

Recuento de colonias

Pasado el tiempo de incubacin, se observa el crecimiento de las colonias y se

procede al recuento de las mismas mediante un contador de colonias que
proporciona el nmero de colonias formadas por placa.
Clculos

Una vez determinado el nmero de colonias, y sabiendo el flujo de aire y el tiempo

de muestreo que se ha aplicado, se puede calcular el nmero de unidades
formadoras de colonias por metro cbico de aire, aplicando la frmula siguiente:

siendo:

NC: nmero de colonias por placa

NU: nmero de unidades de tiempo empleadas en el muestreo

Las cpsulas de Petri una vez llevado a cabo el recuento se retiran del laboratorio
empleando un contenedor de residuos biolgicos.

Campo de aplicacin

En lugares que, por el tipo de trabajo que se realiza en ellos, no precisan ser
estriles, se recomienda llevar a cabo el recuento de hongos y bacterias en aire
cuando exista una sintomatologa en la poblacin expuesta que sugiera una
posible contaminacin biolgica causada por estos microorganismos.

Cuando el n de ufc/m3 hallado sea superior a 500 se recomienda efectuar la

identificacin de los grmenes existentes en el aire muestreado.

En ambientes considerados estriles el n de ufc/m3 debe ser 0.

Bibliografa

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ambientes laborales. NTP 203 INSHT, Barcelona, 1988

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Environment. SAS (Surface Air System) pbi international, Miln, Italia 1978
Actividad celuloltica

Los pastos son el forraje ms utilizado en alimentacin, pero no todos son

eficientes, porque su digestibilidad vara segn su estado vegetativo sea tierno o
maduro.

Las bacterias celulolticas del rumen por accin de sus enzimas

Celulolasas atacan los diferentes componentes de las paredes celulares. La
Lignina se encuentra en un rango de 2% de la MS en los forrajes tiernos y hasta
15% en los maduros; la hemicelulosa vara ampliamente de 6 a 40%, la celulosa
es la ms abundante y la menos soluble, se encuentra en un rango de 15 a 50%
de la MS.

El ataque enzimtico de las bacterias celulolticas y su efectividad depende

de factores como la humedad de la fibra, el tamao de los poros entre las fibras, la
impregnacin de celulosa y hemicelulosa con lignina y el mayor o menor contacto
de las bacterias con las paredes celulares.

La digestin del material fibroso debe estudiarse conjuntamente con la vida

de los microorganismos, estos deben recibir sus requerimientos nutricionales en
cantidades adecuadas para crecer y multiplicarse y poder efectuar su funcin
simbitica: digerir la celulosa. La celulosis depende:

a) Del nivel de lignificacin de los vegetales.

b) Del nivel de carbohidratos solubles en la dieta.

c) Del nivel de nitrgeno en la racin.

 Las plantas muy lignificadas impiden que las bacterias entren en contacto
con los. carbohidratos ms solubles. La actividad de flora microbiana depende del
suministro de carbohidratos solubles fcilmente fermentables; pequeas
cantidades de este tipo de carbohidratos aumentan ligeramente la digestibilidad de
la celulosa pero las grandes cantidades la deprimen. El Nitrgeno es uno de los
nutrientes que ms limita la digestibilidad de la fibra, su deficiencia la disminuye,
porque las bacterias lo necesitan para sintetizar sus propias enzimas. Los
organismos celulolticos necesitan nitrgeno vegetal y nitrgeno sinttico en forma
de NNP (Urea), ellos pueden sintetizar aminocidos a partir del amonio (NH3) pero
adems, parte de la racin debe consistir de protena verdadera ya que esta
ejerce una accin benfica en la digestibilidad de la celulosa.

La alimentacin con forrajes fibrosos de baja digestibilidad adicionada de

pequeas cantidades de urea y de carbohidratos de fcil fermentacin, facilita la
formacin de los AGV requeridos para aprovechar el NH3 formado por hidrlisis de
la Urea.

Tabla 17 Fuentes de NNP para los rumiantes.

Actividad Enzimtica:

Las protenas realizan mltiples funciones en los seres vivos, contraccin,

transporte, regulacin, sostn, defensa etc.

Las protenas especializadas en la funcin cataltica reciben el nombre de

enzimas y las sustancias sobre las cuales actan se denomina sustratos.

Lo que distingue a las enzimas de las dems protenas es precisamente que,

una vez producido el reconocimiento molecular del sustrato, se realiza la
transformacin de la sustancia reconocida, o sea, como consecuencia de
diferentes interacciones entre la protena enzimtica y su sustrato este
experimenta un reordenamiento de sus elementos constituyentes debido a la
ruptura y formacin de algunos enlaces qumicos. La que resulta de la accin de la
enzima sobre el sustrato recibe el nombre de producto.

La existencia del complejo enzima-sustrato y la caracterstica de que la mayora

de los sustratos presentan un tamao varias veces menor que la estructura de la
enzima, implica que la enzima solo entra en contacto con el sustrato en una
pequea zona especfica de su voluminosa estructura.

Las protenas enzimticas presentan dos regiones o sitios importantes, uno de

ellos reconoce y liga al sustrato (sitio de reconocimiento) y el otro cataliza la
reaccin (sitio cataltico) toda vez que el sustrato se ha unido. Estos dos sitios
estn adyacentes uno al otro en la forma activa de la enzima y en ocasiones, el
sitio cataltico es parte del de reconocimiento, estas dos regiones en conjunto
reciben el nombre de centro activo.

De lo estudiado hasta el momento sobre las enzimas podemos concluir que

estas poseen dos propiedades fundamentales, derivndose estas de las
caractersticas del centro activo:

Gran eficiencia cataltica.

Elevada especificidad.
 Siendo esta ultima la que sirve de fundamento para establecer la clasificacin y
nomenclatura de las enzimas.

Se han establecido 6 grupos principales:

1 Oxidoreductasas: Enzimas que catalizan reacciones de oxidoreduccion.

2 Transferasas: Catalizan la transferencia de un grupo qumico entre un donante y

un aceptor, se excluyen aquellas que transfieren electrones o sus equivalentes,
pues pertenecen a la clase anterior y aquellas en que el aceptor del grupo es el
agua y pertenece a la clase siguiente.

3 Idrolasas: Catalizan la ruptura de enlaces qumicos con la participacin de las

molculas de agua.

4 Liasas: Catalizan reacciones en las cuales se produce la adicin o sustraccin

de grupos qumicos a dobles enlaces.

5 Isomerasas: Catalizan la interconversin de dos ismeros.

6 Ligasas: Catalizan la unin covalente de dos sustratos mediante la energa de

hidrlisis de nuclesidos trifosfatados, generalmente el ATP.

Siempre se debe recordar que las enzimas son protenas cuya funcin es la de
catalizar reacciones, por tanto, debe existir una correspondencia entre el nombre
de la enzima y la reaccin que ellas catalizan. Conociendo la reaccin se puede
deducir el nombre, y aparte de este se puede inferir la reaccin.-

No obstante, existen algunas enzimas que recibieron nombres triviales por sus
descubridores y que la prctica ha conservado como el caso de la pepsina,
tripsina, quimotripsina, etc.
RELACION ENTRE COENZIMAS Y VITAMINAS.

Los cofactores enzimticos son sustancias de diferente naturaleza qumica, que

participan en las reacciones enzimticas debido a que las enzimas no poseen en
su estructura todos los grupos funcionales necesarios para llevar a cabo la
catlisis de todas las reacciones metablicas; los cofactores no son componentes
obligados de todas las reacciones.
Los cofactores pueden ser iones inorgnicos que facilitan la unin enzima-
sustrato o estabilizan la estructura tridimensional de la enzima, o constituyen por s
los centros catalticos que ganan eficiencia y especificidad al unirse a las
protenas.

Las coenzimas son sustancias orgnicas que an cuando pueden funcionar de

formas muy variadas, lo ms frecuente es que lo hagan como transportadores
interenzimticos o intraenzimticos, muchas coenzimas son formas funcionales de
las vitaminas.

Las vitaminas son sustancias qumicas que deben ser ingeridas por el
organismo para su normal crecimiento y desarrollo. Es un hecho comprobado que
muchas vitaminas, especialmente las hidrosolubles, tienen importancia funcional
por ser componentes de la estructura de las coenzimas, por ello muchas veces se
habla de forma coenzimaticas de determinada vitamina. En la porcin vitamnica
de la coenzima en general radica el grupo funcional especifico de la coenzima,
aquel que es transformado por la accin de la enzima, pero es necesario tener
presente que no todas las vitaminas forman parte de coenzimas, ni todas las
coenzimas contienen una vitamina en su estructura.

Las coenzimas.

Piridn nucletidos: Estas coenzimas presentan la nicotinamida, integrante del

complejo vitamnico B como parte de su estructura. Existiendo dos formas
coenzimticas: El nicotinadenindinucletido (NAD+) y el nicotinadenindinucletido
fosfatado (NADP+).Ambos participan en reacciones de oxidacin-reduccin
catalizadas por deshidrogenasas.

Flavn nucletidos: Las flavinas constituyen un grupo numeroso de sustancias en

la naturaleza, la riboflavina, o vitamina B2, es la que forma parte de esta
coenzima. Presentndose dos formas coenzimticas: El flavinnononucletido
(FMN) y el flavinadenindinucletido (FAD). Las dos formas participan en
reacciones de oxidacin-reduccin catalizadas por deshidrogenasas y oxidasas.

Los flavn nucletidos funcionan con enzimas (flavoprotenas) que sustraen dos
tomos de hidrgeno de carbonos adyacentes, originando compuestos
insaturados como en el caso de la succinato deshidrogenasa.

Los flavn nucletidos se encuentran generalmente como grupos prostticos y

actan entre un sustrato y una coenzima o entre dos coenzimas.

cido lipoico: El cido lipoico es tambin un componente del complejo vitamnico

B.

Su estructura es una cadena carbonada de 8 carbones, con dos grupos

funcionales SH y el grupo carboxilo que le permite unirse a la protena
enzimtica para formar la estructura de la coenzima. Casi siempre se encuentra
unido de forma covalente a la enzima por un enlace amida entre su grupo
carboxilo y el grupo amino de la cadena lateral de una lisina (lipoamida); la parte
funcional de la molcula est constituida por los grupos-SH que se reducen y
oxidan de manera alternativa.
 La unin coenzima-enzima hace que el grupo funcional (-SH) est unido a una
larga cadena carbonada que le permite gran movilidad, por lo que puede
trasladarse grandes distancias dentro de la enzima.

La funcin metablica de esta coenzima es participar en el complejo proceso de

descarboxilacin oxidativa de alpha cetocidos, como la reaccin de conversin
del alpha-cetaglutrico en succinil-CoA.

Glutatin: El glutatin es un tripptido que est distribuido de forma universal en

los seres vivos.

2 Glutatin-SH

Gracias a la presencia de los grupos SH, el glutatin funciona en reacciones

redox. Esta coenzima es muy importante en los mecanismos involucrados en el
mantenimiento de la estructura de las membranas celulares, especialmente en los
eritrocitos, pues participan en los mecanismos de defensa contra el estrs
oxidativo.

Porfirinas: Constituyen un grupo numeroso de sustancias de amplia

distribucin en la naturaleza, el representante de este grupo ms abundante en la
naturaleza es el grupo hemo. Estas coenzimas se unen a la enzima
(hemoprotenas) de forma diversa y pueden actuar en estado Fe3+, Fe2+ o
alternando de una a otra, de esta ltima forma intervienen como coenzimas de
oxidacin-reduccin, tal es el caso de los citocromos de la cadena transportadora
de electrones.

Biotina: Constituye un compuesto esencial para el crecimiento y desarrollo de los

seres humanos, encontrndose unido de forma covalente a la enzima mediante un
enlace amida; participa en dos tipos de reacciones: La carboxilacin dependiente
del ATP que resulta hidrolizado en ADP y Pi, como en la acetil-CoA carboxilasa:
Y de transcorboxilacin, como la catalizada por la metilmalonil oxalacetato
transcarboxilasa.

El mecanismo de las reacciones dependientes de biotina incluye dos etapas; la

primera, que requiere ATP, el CO2 es incorporado al N-4 de la biotina liberando
ADP y Pi , una segunda etapa, el CO2, se transfiere al sustrato.

Pirofosfato de tiamina: El pirofosfato de tiamina es la forma coenzimtica de la tiamina o vitamina

B1 ; en su estructura presenta un anillo de pirimidina sustituido, unido por un grupo de metilo a un
anillo de tiazol tambin sustituido, unido a su vez a un grupo etilo al pirofosfato. La vitamina carece
de pirofosfato.

Esta coenzima que est muy distribuida en la naturaleza, participa en tres tipos de
reacciones:

1- La descarboxilacin no oxidativa de alpha-ceto-cidos.

2- La descarboxilacin oxidativa de alpha-ceto-cidos.

3- La formacin de alpha-cetoles.

cido tetrahidroflico: El ac tetrahidroflico (FH4) es la forma coenzimtica del

cido flico, su estructura est formada por una pteridina, el cido p-amino-
benzoico y el cido glutmico; pueden encontrarse formas que contienen hasta 7
molculas de cido glutmico unidas por enlaces isopeptdicos, aquellos donde
interviene el grupo carboxilo de la cadena lateral. La parte funcional de la molcula
est representada por los nitrgenos que ocupan las posiciones 5 y 10, esta
coenzima presenta mltiples formas interconvertibles.

S-Adenosil-Metionila: Esta coenzima se forma por la reaccin entre la metionina y

el ATP, dando como resultado una estructura que contiene un grupo metilo muy
lbil y por tanto puede cederse fcilmente.

Coenzima A: La coenzima A es la ms sobresaliente de las coenzimas que en los

sistemas vivientes transfieren grupos acilos; su existencia universal y la gran
variedad de reacciones en que intervienen sus derivados enfatizan su importancia.
La estructura de la molcula es muy compleja y presenta numerosos grupos
funcionales.
Entre estos grupos se destaca el cido pantotnico (componente del complejo
vitamnico B).
Fosfato de piridoxal: El fosfato de piridoxal es una de las coenzimas que
intervienen en un mayor nmero de reacciones enzimticas, casi todas
relacionadas con el metabolismo de los aminocidos; desde el punto de vista
nutricional deriva de la piridoxina o vitamina B6.
Como vitamina B6 se reconocen al menos tres compuestos: Piridoxol, Piridoxal y
Piridoxamina; las formas fosfatadas de los dos ltimos presentan actividad
coenzimtica.
 Entre las reacciones en que interviene esta coenzima se encuentran:
1 Racemizacin de aminocidos, a partir de un enantiomorfo obtenindose
una mezcla de los dos.

2 Descarboxilacin de Aa con formacin de compuestos de gran actividad

biolgica denominados aminas bigenas.
3 La deshidratacin de la serina que produce pirvico.
4 La desaldolizacin de la serina que d lugar a la formacin de glicina, etc.

Coenzima B12: (5-adenosil-cobalamina) esta coenzima es un derivado de la

vitamina B12. Hasta el momento se ha podido comprobar la participacin de la
coenzima B12 en cuatro reacciones enzimticas: malonil-CoA mutasa, glutamato
mutasa, diol deshidrogenasa y la conversin de homocistena en metionina.

Nuclesidos trifosfatados: La estructura de estos compuestos se conoce como

precursores de los cidos nucleicos, de ellos slo a los ribonucletidos se les
conocen funciones coenzimticas:

Adenosintrifosfato (ATP): El ATP participa en numerosas reacciones, sirve

como fuente de energa, de elementos estructurales o ambas.

Guanosintrifosfato (GTP): Su funcin es menos generalizada que en el ATP,

pues acta casi siempre sirviendo de fuente de energa como en la reaccin
de la fosfoenolpirvico-carboxiquinasa. Acta como coenzima de
transferencia de derivados de monosacridos en la sntesis de
glicoprotenas.
 Uridintrifosfato (UTP): Los nucletidos de uridina intervienen como
coenzimas que transfieren monosacridos en forma de UDP-derivados,
estos derivados se forman por la reaccin entre el UTP con un monosacrido
fosfatado.

Citidintrfosfato (CTP): Acta de forma similar al UTP, pero transfiere grupos al

nivel de oxidacin de alcohol; interviene fundamentalmente en la formacin
de fosftidos de glicerina y esfingolpidos, su forma coenzimtica se origina
por reaccin del CTP con un alcohol fosfatado, por ejemplo:

REGULACIN DE ACTIVIDAD ENZIMTICA:

Cuando un sistema o proceso es capaz de variar su comportamiento como

respuesta a cambios que se produzcan en su entorno, de forma que la respuesta
directa o indirectamente tiende a modificar el estmulo para volver a la situacin
inicial se dice que este sistema est regulado.

La regulacin enzimtica se refiere a la posibilidad que tienen las enzimas de

variar la velocidad de las reacciones que aquellas catalizan al producirse
determinados cambios en el medio; esa posibilidad viene dado por caractersticas
estructurales de las enzimas y que son una vez ms manifestaciones del vnculo
que existe entre la estructura y la funcin de las biomolculas.

Los cambios de velocidad observados durante el proceso de adaptacin son

debido a cambios cuantitativos o cualitativos de los centros activos, y atendiendo a
esto las formas bsicas de la regulacin enzimtica se manifiestan por variacin
en la cantidad o la actividad de las enzimas.
 COMPONENTES DE UN SISTEMA DE REGULACIN.

(S) Seal, que existe generalmente como la concentracin de una sustancia

especfica cuya variacin la convierte en estmulo (E), que es captado por el
receptor (R).
El transductor (T) convierte al estmulo en una seal interna del sistema que bien
puede trasmitirse al amplificador (A) que aumenta la intensidad de la seal o pasar
de manera directa al efector (E) que da lugar a la aparicin de la respuesta. Esta
respuesta, tarde o temprano, modifica el estmulo inicial, cerrando el ciclo de
regulacin.

REGULACIN ALOSTRICA.
Cada vez es ms numerosa la cantidad de enzimas que al estudiarse el
comportamiento de la velocidad de reacciones, por ellas catalizadas en funcin de
la concentracin de sustratos, se obtienen curvas diferentes a la hiperblica de
Michaellis y Menten, que en la mayora de los casos tienen un aspecto sigmoidal
(en forma de S alargada). Estas curvas se desplazan a lo largo del eje de las
abscisas cuando se aade a la reaccin algunas sustancias especficas como se
muestra en la grfica para la enzima Fosfofructoquinasa. Para la misma
concentracin de sustrato (So) pueden obtenerse diferentes velocidades de
reaccin al variar la concentracin de las sustancias aadidas, luego una
caracterstica esencial de estas enzimas es presentar una actividad variable. Las
enzimas que as se comportan reciben el nombre de alostrica.
La grfica que se muestra a continuacin representa la modificacin de la
actividad de una enzima alostrica. La fosfofructoquinasa es una enzima alostrica
como se deduce del comportamiento de su velocidad al variar la concentracin de
sustrato. La presencia de ATP desplaza la curva hacia la derecha y por tanto acta
como un inhibidor. La concentracin de ADP desplaza la curva hacia la izquierda,
actuando como un activador.

Se han propuesto varios modelos para explicar las causas del comportamiento de
las enzimas alostricas, existiendo dos modelos principales: el simtrico o
concertado y el secuencial.

Segn el modelo simtrico o concertado las enzimas alostricas existen en dos

estados conformacionales interconvertibles, que se denominaron ( R ) relajado y
(T) tenso.
Estas enzimas son oligomricas, formadas por varias subunidades (estructura
cuaternaria) y todas estas se encuentran en el mismo estado conformacional, de
ah el nombre de simtrico.

A la enzima puede unirse no solo el sustrato, sino algunas sustancias especficas

(ligandos), pero la enzima presentar diferente afinidad para cada uno de ellos de
acuerdo al estado conformacional en que se encuentre.

Si el sustrato puede unirse al estado R y no al T, entonces R representa la

conformacin activa, pues no puede haber transformacin sin unin, lo que indica
que en el estado R existe una conformacin del centro activo que facilita la unin
del sustrato, mientras que en el estado T la unin del sustrato al centro activo no
es posible.
Adems del centro activo, existen en las subunidades otros sitios de unin
especficos para los ligandos, pero tambin cada sitio presenta una conformacin
adecuada para cada ligando solo en un de sus dos conformaciones, nunca en las
dos. Estos sitios son muy especficos, en lo cual se parecen al centro activo pero
en ellos no se producen la transformacin del ligando; los ligandos se unen a
estos sitios por fuerzas no covalentes y de forma muy reversible; cuando la
concentracin de un ligando aumenta en el medio se favorece su asociacin, y al
disminuir ocurre la disociacin. La existencia de estos sitios es lo que determin la
denominacin de alostrico; por tanto las enzimas alostricas son aquellas que
presentan otros sitios diferentes al centro activo, que al igual que este son sitios
de reconocimiento molecular.

Veamos un ejemplo: Una enzima con 3 ligandos, uno de los cuales es el sustrato
(S), los dems son el ligando A que slo puede unirse al estado R y el I que slo lo
hace al estado T.
En ausencia de los 3 ligandos la enzima existe en un equilibrio entre los dos
estados conformacionales, caracterizados por una constante de equilibrio que
recibe el nombre de constante alostrica (L).
 Al comenzar a aadir el sustrato, este se une a la forma R formando el complejo
RS, equivalente al complejo ES ya estudiado, en este momento se produce una
disminucin de la concentracin de R y disminuyendo la de T, mientras ms
aumenta S, tambin R y con ello la velocidad de la reaccin. El paso de T a R
significa un aumento de la fraccin de centros activos tiles y de ah el efecto
sobre la velocidad; esta situacin explica por qu la unin del sustrato a la enzima
favorece la unin sucesiva de los sustratos, o sea, un efecto cooperativo que es
homotrpico positivo.
Si aadimos al sistema la sustancia A esta se une a la forma R formando el
complejo RA, que aumenta el desplazamiento del equilibrio hacia la conformacin
activa.
Como A y S se unen por sitios diferentes se darn las situaciones siguientes:

Se observa que existen 4 formas para el estado activo y slo la forma R est en
equilibrio con T, por lo que los incrementos de velocidad son considerables.
A las sustancias que como A se unen al estado activo y con ellos favorecen un
incremento de la velocidad de reaccin se les llama efectores positivos o
activadores alostricos.
 Si en vez de A, al sistema en equilibrio se le aade el ligando I este se une al
estado T , formando el complejo TI que provoca un desplazamiento del equilibrio
en el sentido contrario al anterior, con lo cual la concentracin del estado T
aumenta y la del R disminuye, mientras mayor sea la concentracin de I aadido,
mayor ser la fraccin de enzimas en estado T, lo que provoca una disminucin en
la velocidad de reaccin, pues es menor el nmero de centros activos con la
formacin favorable para la unin con el sustrato.
A las sustancias que como I se unen al estado inactivo y que provocan una
disminucin de la velocidad de la reaccin se les conoce como efectores negativos
o inhibidores alostricos.

Modelo secuencial:

1 En este modelo existen dos estados conformacionales (R y T) posibles

para cada una de las subunidades de la enzima.
2 La unin del sustrato cambia la conformacin de la subunidad a la cual se
une, pero la conformacin del resto de las unidades no se altera
apreciablemente.
3 La transconformacin ocurrida en subunidad que ha ligado al sustrato
puede incrementar o disminuir la afinidad por el sustrato de las dems
subunidades de la misma enzima.
En el modelo secuencial a diferencia del modelo simtrico las formas R y T no
estn en equilibrio y la unin del sustrato se produce de manera secuencial, pues
slo afecta la conformacin de la subunidad a la cual se ha unido.
El modelo admite la formacin de hbridos conformacionales. La velocidad global
de la reaccin depender de la fraccin de subunidades que estn en la
conformacin ms activa.
No obstante, independientemente del modelo que se aplique las enzimas
alostricas poseen caractersticas generales:
 Son protenas oligomricas de elevado peso molecular y estructura
compleja.
Existen en varios estados conformacionales interconvertibles y con un
grado de afinidad diferente para cada uno de sus ligandos.
Los ligandos se unen a la enzima en sitios especficos por fuerzas no
covalentes y de forma reversible, afectando el estado conformacional de las
enzimas.
Los cambios conformacionales en una subunidad se comunican en menor o
mayor grado al resto de las subunidades.
La curva de la velocidad en funcin de concentracin siempre presenta una
forma diferente a la clsica curva hiperblica de Michaellis-Menten.

Lo importante de este tipo de modificacin es que los activadores e inhibidores

son sustancias propias de la clula y su concentracin vara como consecuencia
de la propia actividad celular. En ocasiones el activador y el inhibidor forman una
pareja cuyas concentraciones varan de manera contraria, cuando aumenta la de
uno de ellos, disminuye la del otro. Estas variaciones de concentracin constituyen
estmulos metablicos que adaptan el funcionamiento de las enzimas a las
condiciones celulares en constante cambio.