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PRACTICAS DE LABORATORIO
BIOQUIMICA
ELABORADO POR:
QUIMICA DIANA ANGELICA LOPEZ ZARAMA
OBJETIVO:
FUNDAMENTO TEORICO:
Las disoluciones cidas y bsicas son frecuentes en la naturaleza; muchas de ellas son
fluidos del organismo humano y otras son productos de uso diario. Los fluidos del organismo
difieren tanto en su carcter cido o bsico como en su grado de acidez. El del estmago es
el ms cido, manteniendo su pH en un intervalo bastante reducido (1.0 3.0). El plasma
sanguneo es ligeramente bsico y su intervalo de pH es muy limitado. Si el pH del plasma
vara sobrepasando este intervalo, la capacidad de la sangre para transportar oxgeno se
reduce. Por ello es importante para la vida humana que las modificaciones en el pH de la
sangre estn siempre dentro de un intervalo pequeo. En contraste con el plasma
sanguneo, la orina presenta un amplio intervalo de pH, pudiendo ser cida, bsica o neutra.
Esto es debido a que muchas sustancias cidas, bsicas son eliminadas por el organismo a
travs de la orina para mantener el adecuado pH de la sangre.
La acidez de una disolucin se puede determinar tambin por medio de un Indicador; que es
un compuesto orgnico que cambia de color dentro de un determinado intervalo de pH. Un
ejemplo muy conocido es el tornasol, cuyo color es rojo a valores de pH inferiores a 5, y azul
a valores superiores a 8.5. De los dos mtodos posibles de medir el pH de una disolucin, el
pH-metro es la ms precisa; los indicadores se utilizan fundamentalmente en valoraciones
cido base.
En bioqumica la mayora de sustancias cidas y bsicas son cidos dbiles o bases dbiles,
que solo se disocian parcialmente. En una solucin acuosa de un cido dbil existe un
equilibrio, que puede medirse, entre el cido y su base conjugada, que es la sustancia que
puede aceptar un protn y formar de nuevo el cido; como lo indica la siguiente ecuacin:
HA H+ + A-
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
Ka = [H+][A-] (2)
[HA]
Por definicin: - log [H+] se llama pH, y - log Ka se llama pKa; por lo tanto la ecuacin
finalmente se vuelve:
MATERIALES Y REACTIVOS:
Materiales:
Reactivos:
PROCEDIMIENTO:
2. En los tubos del 1 al 4 prepare una serie de diluciones de HCl: Tubo 1, vierta 10 ml de
HCl 0.01 M, traslade al Tubo 2 un mililitro de esta solucin y diluya agregando 9 ml de
agua destilada, mezcle. Vierta 1 ml del Tubo 2 al Tubo 3 y adicione 9 ml de agua
destilada; haga lo mismo para el Tubo 4. Mida el pH de cada solucin.
3. En los tubos del 5 al 8 prepare una serie de diluciones de NaOH: Tubo 5 vierta 10 ml de
NaOH 0.01 m y diluya para los siguientes tubos. Mida el pH de cada solucin.
4. En el Tubo 9 mezcle 1 ml de HCl del Tubo 2 con 1 ml de NaOH del Tubo 5. Determine el
pH de esta solucin.
1. Haga un zumo de cada uno de los materiales: limn, tomate, huevo. Mida el pH de estas
soluciones.
2. Vierta 1 ml de cada una de estas sustancias en tubos de ensayo: vinagre, leche, orina.
Mida el pH de estas sustancias.
ANALISIS DE RESULTADOS:
PARTE I:
2. Que compuesto empleado en esta parte del laboratorio es cido, cul base, cul neutro?
3. Elabore un cuadro con el nmero de los tubos, las concentraciones de HCl y NaOH, y el
valor de pH obtenido para cada solucin.
PARTE II:
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
NH2
+ - -
NH2 NH3 OH R C COO + H2O
Forma Bsica
-
R C COOH R C COO H
+
NH3
H H H
R C COOH
Forma No Ion Dipolar Forma cida
Disociada Zwiterion H
Un aminocido tiene, entonces, por lo menos dos constantes de equilibrio: K 1 y K2; que
representan respectivamente las constantes de disociacin del grupo carboxilo y del grupo
amino. A su logaritmo negativo, se le denomina pK: pK 1 = -log K1 y pK2 = -log K2. Pueden
existir ms valores de pK ya que en el aminocido puede haber ms de un grupo carboxilo
(COOH) o ms de un grupo amino (NH2) u otros grupos disociables (por ejemplo, el grupo
SH en la cistena). Estos valores de pK se pueden establecer mediante una curva de
titulacin.
La curva posee un punto en el cual el aminocido se comporta como una sal neutra. Para
este valor de pH la carga elctrica del aminocido es nula. Este punto se denomina Punto
Isoelctrico y se simboliza pI.
pI = (pK1 + pK2)
2
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
RESULTADOS:
1. En una sola grfica, en papel milimetrado, represente los resultados de la titulacin del
aminocido. Coloque los valores de pH en las ordenadas y los mili equivalentes de cido
clorhdrico y de hidrxido de sodio en las abscisas.
2. Con base en la grfica halle los valores de pK del aminocido utilizado y su punto
isoelctrico.
3. Compare los valores obtenidos con lo que se encuentran en literatura. En caso de que los
dos valores difieran en ms de 0.5 unidades explique la causa de la diferencia.
NOTA: Al final de la prctica entregue al profesor una tabla de datos donde figuren los ml de
HCl y de NaOH adicionados y el pH correspondiente en cada caso.
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Las reacciones de los aminocidos son las que en general, corresponden a compuestos que
contienen grupos amino y carboxilo. Adems, todo grupo adicional que pudiera estar
presente dar su propio conjunto de reacciones.
Las cadenas laterales de los aminocidos poseen grupos funcionales que experimentan
importantes reacciones. As, el grupo Tiol (-SH) de la cistena se oxida fcilmente por accin
del oxgeno del aire o de otros agentes oxidantes suaves dando cistina, en la que existe un
enlace disulfuro (S S) entre dos molculas de cistena:
Otra reaccin importante y caracterstica del grupo tiol de la cistena es la que tiene lugar con
ciertos cationes metlicos, como Mercurio (Hg +) y Plomo (Pb+2) para formar mercptidas. La
sal formada es insoluble en medio acuoso. En los seres vivos, esta reaccin rompe el enlace
disulfuro de las protenas y provoca su precipitacin. Por otra parte, estos cationes metlicos
tambin reaccionan con el grupo carbxilo dando sales insolubles. Estas reacciones son las
responsables de la toxicidad de estos cationes metlicos par la mayora de los seres vivos.
La Ninhidrina es un agente oxidante fuerte que reacciona con todos los -aminocidos a un
pH entre 4 y 8, para dar un compuesto de color prpura. La reaccin es muy sensible por lo
cual se utiliza en cromatografa.
Las sustancias que, como los aminocidos tiene grupos amino libres, reaccionan con el cido
nitroso para producir nitrgeno en forma de pequeas burbujas. Esta reaccin permite
distinguir a los aminocidos libres de las protenas ya que estas slo reaccionan
parcialmente y en soluciones muy concentradas.
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
Los compuestos que poseen grupos fenlicos reaccionan con el reactivo de Millon formando
compuestos rojos; esta reaccin sirve para identificar a la tirosina o sus derivados.
La prueba de Hopkins-Cole, se basa en la reaccin del anillo indlico con el cido glioxlico
en medio fuertemente cido y deshidratante. Tambin se puede utilizar cido actico glacial
que se haya expuesto a la luz, el cual contiene cido glioxlico como impureza, en cantidad
suficiente para que la reaccin se manifieste.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
La histidina inhibe la reaccin, pero esta inhibicin es eliminada por la glicina. Repita la
prueba anterior con los mismos aminocidos pero adicionando inicialmente 1 ml de histidina
a cada uno y omitiendo la adicin de glicina. Antes de botar el residuo de los tubos de ensayo
a la caera alcalinice cada uno con 2 o 3 ml de hidrxido de sodio al 20%.
RESULTADOS:
1. Anote sus resultados en una tabla indicando cuales pruebas fueron positivas y cuales
negativas. Explique las razones de estos resultados.
2. En los casos en los cuales el resultado de las pruebas fueron negativos, explique la
causa.
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Las protenas constituyen un grupo de biomolculas muy importantes, puesto que son las
responsables de muchas funciones biolgicas: como la formacin de tejidos y la actividad
enzimtica. Conocer los contenidos de protenas presentes en los tejidos, ha sido objeto de
varios estudios y en consecuencia se han desarrollado muchas tcnicas de anlisis. Existen
varios mtodos mediante los cuales se puede determinar el contenido de protena bruta,
protena real y nitrgeno no proteico en muestras tanto de origen vegetal como de origen
animal.
MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS
Estos mtodos son particularmente tiles en la valoracin del contenido de protena real,
puesto que se basan en la formacin de complejos coloreados entre algunos aminocidos
proteicos el enlace peptdico, con reactivos especficos. Dentro de los mtodos clsicos
est el que emplea el reactivo de Biuret, el cual se fundamenta en la formacin de un
complejo coordinado entre los iones cpricos del reactivo y el enlace peptdico de la protena,
reaccin que transcurre en medio alcalino. Tambin es de uso frecuente el mtodo que
emplea la espectrofotometra con base en la reactivo de Folin. En los dos casos anteriores,
se elaboran curvas de calibracin con una protena patrn, normalmente la albmina de
huevo o la albmina bovina estabilizada estndar, y en las mismas condiciones de reaccin
se hace el desarrollo de la coloracin para la muestra que se est analizando.
MTODOS VOLUMTRICOS
El mtodo de Kjeldahl consta de tres etapas que en su orden son: digestin de la muestra,
destilacin con arrastre de vapor del amoniaco producido y valoracin cido base de este
amoniaco.
O sea que multiplicando la cantidad de nitrgeno obtenida por 6.25 se tiene la cantidad
aproximada de protena presente en una muestra dada.
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
Digestin:
Baln con
muestra,
mezcla
catalizadora
y cido
Destilacin:
Lave el baln que contiene la muestra con 10 ml de agua destilada con el fin de solubilizarla
y llene con esta solucin la parte superior del equipo de destilacin, asegurndose que la
llave de paso se encuentre abierta. Vuelva a enjuagar el baln con 2 porciones de 10 ml de
agua destilada y llene la muestra en el equipo. A continuacin agregue 10 ml de reactivo de
Hidrxido de sodio Tiosulfato de sodio; note que la muestra se oscurece. En el otro extremo
del destilador coloque un beaker pequeo con 10 ml de indicador de cido Brico, la punta
del refrigerante debe quedar sumergida en la solucin indicadora. Sobre esta solucin se
recogen de 30 a 40 ml de destilado hasta que la solucin cambie de violeta a azul o verde
esmeralda. Despus de la destilacin de la muestra se debe hacer un lavado del equipo con
agua destilada.
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
Deposito
de
Baln con
agua
Beaker con
Indicador
de cido
Titulacin:
Transfiera el destilado a un erlenmeyer y titule con el Acido Clorhdrico 0.1 N hasta obtener
una coloracin similar a la del cido brico original.
Blanco:
Simultneamente con las muestras se debe realizar todo el proceso anterior con un blanco,
en el cual la muestra biolgica se reemplaza por una cantidad equivalente de agua destilada.
RESULTADOS:
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Las enzimas son protenas producidas por el organismo, que catalizan reacciones biolgicas
especficas. Estos compuestos controlan las distintas reacciones que se producen en la
clula, y tambin controlan qu reacciones tienen lugar y a qu velocidad transcurren.
Las enzimas son sensibles a las variaciones de pH del medio; la desnaturalizacin o rotura
de la estructura tridimensional de una protena, supone para las enzimas la prdida de su
actividad cataltica. Todas las enzimas poseen su mxima actividad en un pequeo intervalo
de pH cuyo valor medio se denomina pH ptimo.
La presencia de iones de metales pesados tambin afecta la actividad de las enzimas; por
ejemplo los iones de Plomo (Pb+2) y Mercurio (Hg+2) reaccionan con los grupos Tiol y
Carboxilato de las protenas y enzimas destruyendo su capacidad para mantener su
estructura; estos iones se conocen entonces como Inhibidores de la actividad enzimtica.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
Tubo 3 5 6 7 9
Almidn 0.5% 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Amortiguador pH 3 4ml - - - -
Amortiguador pH 5 - 4ml - - -
Amortiguador pH 6 - - 4ml - -
Amortiguador pH 7 - - - 4ml -
Amortiguador pH 8 - - - - 4ml
Amilasa salival 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml
Despus de 3 minutos deposite cinco gotas del tubo 3 en una concavidad de la gradilla
inmunolgica en la que previamente haba depositado 2 gotas del reactivo de lugol y observe
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
el color producido. Repita el mismo procedimiento con los dems tubos. El pH ptimo para la
alfa-amilasa corresponde a aquel tubo donde se obtenga ms rpidamente el color amarillo
ocre. En caso de que no se observe este color en ninguno de los ensayos se repite el
procedimiento cada 30 segundos hasta que el cambio se d.
Tubo 1 2 3 4
Almidn 0.5 % 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml
Amortiguador de pH ptimo 5.9 ml 5.7 ml 5.1 ml 3.3 ml
Amilasa salival 0.1 ml 0.3 ml 0.9 ml 2.7 ml
Realice los mismos ensayos que para determinar la temperatura y el pH ptimos. Encuentre
la concentracin ptima de enzima.
Almidn 0.5 % 2 ml 2 ml
Amortiguador de pH ptimo 4 ml 4 ml
Amilasa salival 1 ml -
Pepsina 0.1% - 1 ml
6. Efecto de los iones metlicos pesados sobre la accin de la amilasa: Rotule tres
tubos de ensayo amilasa, Hg y Pb depostelos en un bao de agua a la temperatura ptima y
agregue, en su orden:
Almidn 0.5 % 2 ml 4 ml 4 ml
Amortiguador pH ptimo 1 ml - -
HgCl2 1% - 1 ml -
Pb(NO3)2 - - 1 ml
Repita el procedimiento de los casos anteriores y determine el efecto de los iones metlicos
pesados sobre la amilasa.
7. Efecto de la concentracin de sustrato: Rotule cinco tubos de ensayo 0.5, 1.0, 2.0. 3.0 y
4.0, depostelos en un bao de agua a la temperatura ptima y, agregue en su orden:
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
Cada minuto extraiga 3 gotas de cada tubo y ensaye la presencia de almidn con 1 gota del
reactivo de lugol. Anote el tiempo requerido para la aparicin del color rojo pardo.
RESULTADOS:
BIBLIOGRAFIA
6. IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Como aldehdos que son, las aldosas reaccionan con fenilhidracina para generar
fenilhidrazonas. Si se emplea un exceso de fenilhidracina, la reaccin contina hasta dar
productos conocidos como Osazonas que contienen dos residuos de fenilhidracina por
molcula. Una de las dificultades que presenta el trabajo con carbohidratos lo manifiesta su
tendencia a formar jarabes; el tratamiento con fenilhidracina convierte carbohidratos en
osazonas slidas, que se pueden aislar y purificar con facilidad, y que tambin pueden
identificarse por sus formas cristalinas caractersticas.
La prueba de Molisch, es una reaccin general para los carbohidratos; estos se deshidratan
en presencia de cido concentrado, dando un derivado de tipo furfural. Se condensa el
furfural con -Naftol y se obtiene un color rojo a violeta. Una reaccin negativa en una
sustancia dada puede aceptarse como prueba de ausencia de carbohidratos.
El cido ntrico oxida tanto al grupo aldehdo como al grupo alcohol primario terminal de los
monosacridos, produciendo cidos mono y dicarboxlicos que reciben el nombre general de
cidos sacricos. El cido msico es el menos soluble en agua, de todos los cidos
sacricos. Esta caracterstica facilita la identificacin de la galactosa o de los azcares que la
contienen.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
Miel de abejas: Disuelva 10 gramos de miel de abejas en agua destilada hasta completar
100 ml. Si es necesario, caliente suavemente, con agitacin constante, dentro de un bao
mara.
Leche: Deposite 100 ml de leche en un beaker de precipitados de 250 ml. Adicione cido
actico al 25 %, gota a gota y agitando despus de cada adicin hasta que se produzca un
floculo o un precipitado. En ese momento el pH debe estar cercano a 4.8. Centrifugue a 3000
rpm durante 5 minutos. Deseche el precipitado y utilice el sobrenadante para determinar los
azcares presentes en la leche.
Clara de huevo: Dentro de una probeta mida el volumen de una clara de huevo. Agregue
cinco veces su volumen en agua y agite bien. Con esta solucin se harn las pruebas para
determinar los azcares presentes.
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
RESULTADOS:
1. Coloque en una tabla en forma horizontal los carbohidratos ensayados y en forma vertical
las pruebas realizadas. Indique con +, - o ? si los resultados fueron positivos, negativos o
dudosos.
2. Compare los resultados obtenidos entre las muestras biolgicas y los diferentes
carbohidratos preparados en el laboratorio. Con base en esto deduzca qu carbohidratos se
encuentran presentes en las muestras biolgicas con las cuales trabaj.
BIBLIOGRAFIA
7. DILISIS DE CARBOHIDRATOS
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Una membrana que permite el paso de molculas e iones pequeos, pero que retiene las
molculas grandes y las partculas coloidales, se denomina Membrana Dializante; El paso
selectivo de pequeas molculas o iones en cualquier sentido a travs de una membrana
dializante se denomina Dilisis.
El proceso de dilisis consiste en una bolsa formada por una membrana dializante, tal como
una vejiga animal o papel celofn; la bolsa contiene una mezcla de coloides, molculas e
iones disueltos que se coloca en un recipiente por el que circula agua pura. El agua arrastra
los iones y molculas que pasan a travs de la membrana, mientras que los colides
permanecen.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
Deje el conjunto en esta posicin durante 90 minutos, agitando de vez en cuando y en forma
suave, el beaker. Transcurrido este tiempo, rotule cuatro tubos de ensayo 1, 2, 3 y 4. En los
tubos 1 y 2 deposite 2 ml de la solucin a dializar. En los tubos 3 y 4 deposite 2 ml del lquido
del beaker. A los tubos 1 y 3 agrgueles 2 ml del reactivo de Benedict y colquelos en un
bao de agua hirviendo, durante diez minutos, Observe si aparece un color rojo o
anaranjado.
A los tubos 2 y 4 agrgueles 2 gotas del reactivo de Lugol y observe si aparece un color azul
oscuro indicativo de la presencia de almidn.
RESULTADOS:
Indique en qu caso(s) el resultado fue positivo (+) o negativo (-). En base a sus resultados
deduzca si hubo dilisis o no.
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
Determinar los ndices de saponificacin, acidez, perxidos y yodo de una grasa o aceite.
FUNDAMENTO TEORICO:
ndice De Perxidos:
ndice De Acidez:
La acidez es consecuencia del contenido en cidos grasos libres en una grasa o aceite,
provenientes de la hidrlisis de los glicridos. Se expresa normalmente como Grado de
Acidez o Acidez libre que representa el porcentaje de dichos cidos expresados en cido
oleico. Tambin puede expresarse como ndice de acidez, que es el nmero de miligramos
de KOH necesarios para neutralizar 1 g de grasa.
ndice De Saponificacin:
Es una medida aproximada del peso molecular promedio de los cidos grasos. Se define
como el nmero de mg de KOH que se necesitan para neutralizar los cidos grasos
contenidos en 1 g de grasa.
Este ndice da una idea de la longitud de la cadena de cidos grasos presentes en el lpido
ya que entre ms corta la cadena de cido graso mayor ser el nmero de radicales de
COOH por gramo. A mayor ndice de saponificacin menor longitud de la cadena de cido
graso.
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
ndice De Yodo
Son los gramos de yodo absorbidos por 100 gramos de grasa. Medida de las insaturaciones
presentes en los cidos grasos que conforman un TRIGLICERIDO.
Este ndice es una propiedad qumica relacionada con la insaturacin, con el ndice de
Refraccin y con la densidad: a mayor ndice de yodo, mayor ndice de refraccin y mayor
densidad. Los aceites comestibles contienen buena cantidad de cidos grasos insaturados,
dando Indice de yodo relativamente altos.
Existe relacin entre el grado de insaturacin y el grado de enranciamiento, puesto que los
glicridos de cidos grasos con 2 o 3 dobles enlaces son ms sensibles a la oxidacin.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
Repita el mismo procedimiento anterior pero utilizando 1.5 ml de agua en lugar del aceite.
Este es el blanco. En ambos casos anote los valores obtenidos en la titulacin.
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
Haga un blanco con los mismos reactivos pero sin aceite y deje en reposo, en la oscuridad,
durante 30 minutos Transcurrido este tiempo agregue, en cada recipiente, 10 ml de yoduro
potsico al 10 % y 50 ml de agua destilada. Titule inmediatamente con solucin de tiosulfato
de sodio 0.1 N hasta un color amarillento. Agregue 1 ml de almidn 1 % y contine la
titulacin hasta que desaparezca el color azul. Durante la titulacin se debe agitar
fuertemente el erlenmeyer para asegurarse que todo el yodo se ha removido de la capa de
cloroformo. Anote el volumen total de tiosulfato gastado en la titulacin del blanco y de la
muestra.
RESULTADOS:
meq KOH necesarios para neutralizar 1g de grasa = meq KOH adicionados meq KOH residuales
Por consiguiente:
meq KOH gastados = meq HCl blanco meq HCl residuales en la muestra
= (Vb Vm) N
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Para cumplir con la definicin debemos determinar cuntos meq se requieren por 1g de
grasa o aceite:
Entonces, por Q gramos de muestra se gastaron (Vb Vm) meq; por 1g (Vb Vm) N
Q
1 meq de KOH equivale a 56mg de KOH: (Vb Vm) N meq equivalen a:
Q
Por otro lado, 1 meq de KOH es igual a 1 meq de cido graso saponificado: un triglicrido, al
hidrolizarse, libera 3 molculas de cido graso, por lo cual 3 meq de KOH son
aproximadamente iguales a 1 meq de grasa o sea a M/1000, donde M es el peso molecular
promedio de la grasa. O sea que para saponificar un nmero de gramos igual a M se
necesitan 3 x 56 x 1000 mg de KOH. De manera que el ndice de saponificacin es tambin
igual a:
S = 3 x 56 x 1000
M
De donde: M = 16800
S
El Yodo absorbido por el aceite ser igual al yodo presente en el blanco menos el yodo
residual en la muestra. Los meq de yodo presente en ambos casos (blanco y muestra) son
iguales a los meq de Tiosulfato; o sea:
1 meq de yodo es igual a 0.127 mg de yodo: (Vb Vm) N mqe son iguales a 0.127 (Vb Vm)
N gramos; esto en Q gramos de aceite; en 100 g (para cumplir con la definicin del ndice de
yodo) ser:
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TERCER SEMESTRE DE ING. AMBIENTAL
En base a la frmula anterior determine el ndice de yodo y exprese su opinin acerca del
grado de insaturacin de su aceite o grasa.
Los meq de KOH gastados en la titulacin son iguales a los meq de cidos grasos libres
presentes en la grasa.
A = 56 x V x N
Q
Los meq de Tiosulfato utilizados indican los meq de Yodo liberados por la reaccin con los
perxidos que es igual al nmero de meq de perxidos presentes en la muestra:
P = V x N x 1000
Q
BIBLIOGRAFIA
OBJETIVOS:
FUNDAMENTO TEORICO:
Es til descomponer los cidos nucleicos en los nucletidos, nuclesidos, bases, azcares y
fosfatos que los integran, con fines de anlisis e identificacin.
Las principales etapas del aislamiento de los cidos nucleicos son: destruccin de la clula
por choque osmtico; homogenizacin, digestin enzimtica o ataque mecnico leve,
seguidos a veces por aislamiento de ncleos, mitocondrias, virus u otras formaciones
subcelulares. Puesto que los cidos nucleicos se unen muy fuertemente a los cationes y las
protenas catinicas como histonas y protaminas, es necesario separarlos de estas
sustancias con lesiones mnimas de la cadena polinucleotdica.
Para este fin se han utilizado con xito las soluciones acuosas de fenol adicionadas de
detergentes y agentes quelantes. Esta mezcla disolvente, aadida a los fragmentos de tejido,
produce un sistema de dos fases; los cidos nucleicos quedan en la capa acuosa y las
protenas desnaturalizadas se disuelven en el fenol o precipitan en la interfase. La
separacin de los cidos nucleicos y las protenas, se facilita por la adicin de detergentes
aninicos y de sales concentradas. Tambin se aaden agentes quelantes para eliminar
metales polivalentes que podran formar sales con los grupos fosfatos de los cidos
nucleicos. Finalmente, se trabaja con pH ligeramente alcalino para reducir las interacciones
electrostticas de cidos nucleicos con otros iones.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Reactivos:
Materiales:
PROCEDIMIENTO:
A uno de los tubos agregue 3 ml del reactivo de Bial. Caliente en un bao de agua hirviendo
durante 20 minutos y luego enfre. La aparicin de un color verde indica la presencia de una
pentosa.
Centrifugue en fro a 3000 rpm, durante 5 minutos la solucin que dej guardada en la
nevera. Deseche el sobrenadante, resuspenda el precipitado en etanol: agua (3:1); lave con
etanol absoluto y finalmente con ter; deje secar al aire y pese. Previamente pese el beaker
que va utilizar.
RESULTADOS:
NOTA: En caso de quemadura con fenol lvese inmediatamente con abundante etanol.
BIBLIOGRAFIA