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GUA DE PRCTICAS
de
FISIOLOGIA HUMANA
Autores:
Docentes del Curso
Dr. Carlos Ramrez Velasco
Dra. Pedro Nez Huaman
Dr. Enrique vila Zamora
Dr. Edgar Zrate Sez
2016
LIMA - PER
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA
OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN
ANIMALES Y SERES HUMANOS.
MANEJO DE ANIMALES DE
EXPERIMENTACION.
Introduccin
Definicin de Bioseguridad:
Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en
salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos.
Agentes de riesgo o causantes de dao: agentes biolgicos trasmitidos por ingesta, inhalacin, inoculacin,
y por contacto directo a travs de piel y mucosas.
La Bioseguridad implica una accin de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El
descuido de una persona es el riesgo de todos"
Riesgo Biolgico: es la probabilidad de infectarse con un agente patgeno (agente patgeno se llama a
toda aquella noxa que es capaz de producir una enfermedad en la actividad laboral.
Exposicin: Es un contacto que implica riesgo con un patgeno capaz de trasmitirse por la va donde se
est produciendo la exposicin.
Propsito de la Bioseguridad:
Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada rea de
trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biolgico y vigilancia del
cumplimiento de las normas de bioseguridad. Adems promover, sugerir y establecer polticas que apoyen
la educacin continua de los trabajadores de salud.
PRACTICAS DE SEGURIDAD
Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiolgico o ingresa a l debe seguir reglas de seguridad.
Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditacin acadmica,
sino porque consisten en prcticas que otorgan seguridad y proteccin al personal, alumnos e
investigadores que trabajan en los laboratorios bioqumicos, fisiolgicos, bacteriolgicos, biolgicos,
qumicos, etc. Muy especialmente en el campo mdico donde trabajamos con muestras material
biolgico que es considerado potencialmente patgeno patgeno. La mxima seguridad y proteccin es
necesaria en estos casos
PRACTICAS GENERALES
Se prohbe fumar, comer y aplicarse cosmticos, para evitar la diseminacin de agentes infecciosos o
productos qumicos txicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes
infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo,
mandil, la bata de laboratorio. Estas prendas de proteccin externa no deben usarse fuera del laboratorio.
Los zapatos han de ser de punta y taln cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el
laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden
producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan ms
tiempo en la crnea.
Se recomienda el uso de lentes de proteccin o protectores para la cara a las personas que usan lentes de
contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyera de tipo colgante,
el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras
superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como mquinas rotatorias o
centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier
otra sustancia biolgica debern usarse pipetas manuales automticas.
DERRAMES . .
Es necesario desarrollar y tener polticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los
empleados acerca de la manera de manejar derrames qumicos y biolgicos. Existen en el comercio
estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institucin el
laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo.
LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminacin de agentes infecciosos.
Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que stos tengan huecos
microscpicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos
aunque se utilicen guantes.
LIMPIEZA
No debe permitirse que la basura, los desperdicios biolgicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se
acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes
etiolgicos deben taparse cuando no se estn empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las
superficies de trabajo con algn desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de
laboratorio fisiolgico es responsable de mantener el rea de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya
servicio de limpieza adicional por parte de la institucin.
ETIQUETAS Y SEALES
Todos los recipientes que contienen productos qumicos deben etiquetarse con claridad, indicando el
nombre del producto y cualquier precaucin para su manejo. Las reas en que se almacenan productos
inflamables, peligrosos o txicos y carcingenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas
claramente. Las reas en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas
claramente con el signo de riesgo biolgico.
DESECHO DE DESPERDICIOS
Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biolgicos. El desecho de materiales
biolgicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes especficas del
Ministerio de Salud Pblica.
AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS.
Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo fsico de infeccin potencial para el personal
de laboratorio fisiolgico. Todas las agujas desechables y dems objetos punzantes deben colocarse en un
reclpl9nte resistente a la perforacin y a prueba de fugas, marcado con el smbolo de riesgo biolgico.
Estos recipientes se descartan, siguiendo las polticas de la institucin, cuando estn llenos hasta la mitad o
las tres cuartas partes. La mayora de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos
punzantes. Inmediatamente despus de usada una aguja deber incinerarse y para ello existen en la
actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas. Nunca, deber
reenfundarse volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algn dispositivo como
pinzas diseadas para este fin, para evitar la puncin cutnea accidental. Las agujas nunca deben cortarse,
ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros lquidos al medio.
SEGURIDAD CONTRA INCENDIOS
Tipos de Incendio
En el laboratorio Fisiolgico u otros laboratorios biolgicos se requieren lquidos inflamables y
combustibles para ciertos procedimientos, y en ellos tambin existe el riesgo potencial de incendios
elctricos y de basura. El cientfico del laboratorio debe comprender estos peligros y la manera de
afrontarlos en caso de urgencia. Los incendios se clasifican de la clase A a la D.
Los incendios de clase A ocurren con combustibles ordinarios, como madera o papel; los de la clase B
ocurren con lquidos inflamables; en los de la clase C participan circuitos elctricos energetizados, sin
importar el combustible; y los de la clase D, son producidos por metales combustibles como el sodio. Para
cada tipo de incendio se requiere un extinguidor diferente y adecuado con el fin de controlar de manera
eficiente el fuego y evitar que se ste se extienda.
SEGURIDAD BIOLOGICA
Proteccin Personal
La dispersin epidmica del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupacin
acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el
laboratorio. Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios mdicos en general, fisiolgicos,
bacterilogos, bilogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo
para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana
(HIV). En 1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron
recomendaciones para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la
infeccin por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se
tomen precauciones congruentes al manejar sangre y lquidos corporales de todos los pacientes y las
muestras que se obtengan".
Esto se conoce como precauciones universales. Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para
proteccin personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos
al manipular sangre y lquidos corporales en el laboratorio. La revisin de los CDC en 1988 recomend
usar equipo de proteccin personal para manejar todas las sustancias biolgicas y animales. Deben tratarse
todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras
enfermedades adems de HBV y HIV que se transmiten a travs de diversos lquidos del organismo
humano y de los animales.
En 1991 la OSHA public una regulacin final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens
(Exposicin ocupacional a patgenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrn debe
proporcionar equipo de proteccin personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos
entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La
regla tambin indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo
biolgico y seala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposicin a
todos los empleados que corran este riesgo.
Adems de describir equipo de proteccin personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de
manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y
descontaminacin del equipo.
Derrames
Es necesario que las personas que limpian algn derrame biolgico utilicen guantes descartables y bata de
laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vaca desinfectante sobre ellas. Tras
dejarlo reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los
cojinetes absorbentes son tiles para derrames grandes) A continuacin se coloca el material contaminado
en un recipiente para riesgos biolgicos: bolsas plstico grueso color rojo en el Per y bolsa de color
negro para basura domstica.
Despus de absorber la mayor parte de material, el rea se limpia con un desinfect8nte de fuerza
intermedia o alta, por ejemplo, dilucin de Leja 1:10. La solucin desinfectante se absorbe con material
desechable. El rea se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar
un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biolgico que contenga todos los materiales
necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan
dichas muestras.
SEGURIDAD QUIMICA
1. Identificacin del producto qumico (nombre qumico, y sinnimo y/o nombre vulgar.)
2. Ingredientes peligrosos
3. Datos fsicos
4. Datos de incendios y explosiones
5. Informacin de riesgos para la salud
6. Datos de reactividad
7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho
8. Informacin de proteccin personal.
9. Precauciones especiales y comentarios
Manejo de Animales
La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instruccin
prctica directa. Pueden enunciarse aqu algunos principios generales.
El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. cobayas. ratones)., pequeos
araazos cuando el animal trata de escapar; pero raras veces intenta ste lesionar al operador. En el caso de
las ratas, las cosas cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir mordeduras
peligrosas, Tambin los monos deben manejarse con cuidado. En cualquier caso, es indispensable que aun
los pequeos araazos de animales se traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con
material patolgico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al
personal contra las consecuencias de la mordedura. Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse
mdicamente cualquier lesin, por pequea que sea.
TECNICA
1. Limpie la piel con una torunda de algodn con alcohol de 70 o con otro desinfectante adecuado
y deje secar.
2. Haga una puncin profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estril desechable. La puncin
debe efectuarse de un golpe y rpidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del
lbulo de la oreja).
3. La primera gota de sangre se elimina por que contiene desechos tisulares. La sangre no debe
exprimirse o se obtendr una muestra diluida; peso s puede hacerse presin a distancia del sitio
de la puncin. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que
debe presionar sobre el sitio de lesin.
SANGRE VENOSA
Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas ante cubitales, pero con frecuencia tambin se
puncionan las venas de las manos las muecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes
prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo la yugular externa o la femoral) Las venas
deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan. Para
facilitar el examen se usa un torniquete de jebe.
EQUIPO.
La muestras se toman previa desinfeccin con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19
20 x1 (cuanto ms bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar
la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtencin de sangre para transfusiones).
TECNICA
1. El paciente debe estar acostado o sentado cmodamente y con el brazo apoyado en una mesa o
soporte. Algunas pacientes en especiales los jvenes pueden sufrir malestar o incluso
desmayarse. Por tanto mantngase alerta ante seales como palidez o piel fra.
2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fcilmente. No efectu demasiada
presin ya que puede detener la circulacin arterial.
3. Pida al paciente que abra y cierre el puo un par veces para obtener mayor distensin de las
venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan.
4. Una vez elegido el sitio de puncin se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se
fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el
pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta
entre el pulgar y los tres ltimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del
paciente. El dedo ndice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como gua. El bisel de la
aguja debe quedar hacia arriba.
5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y
dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensacin de crujido. Cuando el
acceso a la vena no es tan perceptible, la puncin se efecta en dos tiempos: primero se punza la
piel y luego la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una traccin ligera sobre el
embolo evite realizar una traccin excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de
la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse
ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operacin puede producir
hematomas; si se advierte seales de extravasacin de sangre a los tejidos, retire la aguja de
inmediato y aplique presin local.
6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puo. En cuanto se
adquiera la destreza necesaria, esta ltima operacin se efecta cuando la sangre termina de
entrar a la jeringa. El paciente debe mantener la presin con una torunda en el sitio de la puncin
y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas.
7. Tras la obtencin de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un
movimiento de torsin y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la
pared interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas. La sangre se
vaca suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemlisis. Si la determinacin que
se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con
anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea
obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de 37 C para que el cogulo se forme
ms rpido. La retraccin del cogulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un
aplicador de madera. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos.
USO DE VACUTAINER
En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre
venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos estn sellados con un tapn de goma y extraen un volumen de
sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapn de goma alcanc
justo la lnea gua. La aguja ms corta se mete dentro del tapn de goma, pero no penetra y por lo tanto no
rompe el vaci. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo
hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vaco y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se
retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer
para dosaje de gases arteriales.
SANGRE ARTERIAL
Para la determinacin de gases se requiere puncin arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el
latido por palpacin muy cuidadosa. La puncin es necesariamente ms profunda y se requiere mayor
cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el mdico.
ANTICOAGULANTES
Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico,
Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulacin al sustraer el calcio del plasma
sanguneo por precipitacin o fijacin en forma no ionizada, e inhibe la activacin de los factores de la
coagulacin.
El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulacin de la sangre destinada a transfusiones. El
Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica.
La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de
sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos
globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con
rapidez formas dentadas en los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitos y artefactos
en los ncleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta
mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para determinados qumicas de nitrgeno ni potasio.
El citrato trisdico en solucin acuosa al 3.8%, se mezcla a razn de 1/9 con sangre para investigaciones
de coagulacin. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentracin de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal
di sdica o di potsica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el
recuento de las clulas sanguneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio del
hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfolgicos lo supera, ya que impide la
deformacin y artefactos incluso despus de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun
cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24 hs si la sangre se refrigera. Tambin es posible realizar el
recuento de plaquetas aun despus de unas pocas horas.
La heparina, a razn de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamao corpuscular ni el hematocrito. Es el
mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica. No resulta
satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por
que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teidas con el colorante de Wright.
Chapas.
Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeas chapas de aluminio que se fijan a una oreja
de animal por medio de una grapa o un hilo metlico que perfore estos rganos y atraviese tambin los
orificios de las chapas.
Para los animales de mayor tamao pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las
casas de artculos veterinarios.
Descripcin.
Cuando se use nicamente este mtodo de identificacin y haya que alojar juntos en una misma jaula
varios animales, deben seleccionarse los que presenten seales o colores diferentes .Para facilitar el
registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratn , cobayo o conejo. Este mtodo se
utiliza junto con el de la chapa metlica a fin de asegurar la identificacin si la chapa se perdiera.
Asimismo, debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o sea particular .El sexo debe registrarse
en la descripcin (macho y hembra).
Seales o marcas para identificacin de animales
Los animales pequeos, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintndose la
piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohlicas saturadas de fucsina o cido picrico).Las jaulas
habrn de rotularse.
Las pipetas, tubos de ensayo y dems instrumentos empleados en la experimentacin fisiolgica tambin
se desinfectarn con una solucin lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarn inmediatamente por
ebullicin durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal.
Los recipientes, lminas portaobjetos u otro material contaminado con orina heces secreciones
biolgicas de los animales, contaminados con productos biolgicos humanos, no se volvern a tocar por
ningn concepto sino que se sometern a un proceso de desinfeccin inmediata, como hemos indicado
lneas ms arriba
Los calentadores y dems aparatos elctricos se comprobarn con frecuencia para verificar la exactitud de
su funcionamiento, reparando sin prdida de tiempo sus averas a fin de evitar cortos circuitos incendios
.El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables .Siempre se
verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio , igualmente se
asegurar de cerrar la llave del baln contenedor del gas la llave general del gas del Laboratorio de ser el
caso. El ter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto elctrico. Es
obligacin del servicio de mantenimiento realizar revisiones peridicas de mantenimiento preventivo.
FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE
FRAGILIDAD OSMTICA
Introduccin
Todas las clulas del organismo estn rodeadas de una membrana limitante, a travs de la cual obtienen
sus alimentos y el oxgeno y excretan sus productos de deshecho y el C02 resultante de su metabolismo.
La membrana celular tiene propiedades bien establecidas: Solo deja entrar las sustancias que se necesitan
y solo deja salir las secreciones, los productos de desecho y las sustancias no indispensables, en otras
palabras, es semipermeable. Estas funciones las realiza a travs de diversos mecanismos, que hemos
revisado con detalle en las clases tericas. En la presente prctica trataremos de una de ellas que es la
Osmosis. En general la osmosis significa el paso de lquidos a travs de una membrana semipermeable.
Cuando dos soluciones de diferentes concentraciones estn separadas por una membrana semipermeable,
el solvente y los solutos atraviesan la membrana siguiendo las leyes que rigen el fenmeno de la smosis.
El agua es transportada a travs de la membrana celular por una fuerza hidrosttica llamada presin
osmtica, dicho de otro modo, la presin osmtica es la fuerza de atraccin que ejercen las partculas
sobre el agua atrayndola. La osmolaridad depende del nmero de partculas que se encuentran es
solucin. La Unidades de Osmolaridad son el Osmol /Kg H2O , en medicina usamos el sub mltiplo mili
Osmol /Kg H20
Un Osmol por Kg es la fuerza para atraer agua que ejerce un MOL de partculas que se encuentran en 1
Litro Kg de solucin. Cada partcula (tomo) ejerce una presin osmtica independientemente; por
ejemplo un mol de glucosa disuelto en un Kg (litro ) de agua ejerce una presin osmtica de 1 Osmol /kg
agua; en cambio un mol de ClNa disuelto en un litro de agua ejercer una presin Osmtica de dos
Osmoles debido a las dos partculas en que se disocia, una de sodio y otra de cloro. (Na+ y Cl- )
La capacidad de una partcula para producir un flujo de agua a travs de la membrana celular se llama
tonicidad.
Una solucin extracelular que permite que el agua fluya hacia dentro de la clula haciendo que sta se
hinche se llama hipotnica (Hipo osmolar)
Una solucin que permite que el agua fluya hacia fuera de la clula se llama hipertnica. (Hiper osmolar)
La membrana del glbulo rojo nos servir en la presente prctica para demostrar este fenmeno y
asimismo demostrar que la membrana tiene ciertos lmites de resistencia normales a variaciones de la
tonicidad en el medio interno.
Aplicacin clnica.
Existen algunas enfermedades en las cuales se producen alteraciones en la membrana que generan
hemlisis por mayor fragilidad de la membrana, son defectos genticos heterogneos que afectan a las
protenas constitutivas de la membrana del eritrocito. La Enfermedad Esferocitosis es una de ellas, en la
en la cual se ha demostrado una disminucin de la protena membranal Espectrina del hemate, y el grado
de dficit de la protena Espectrina parece asociarse con la gravedad clnica de esta enfermedad, pues los
hemates son muy frgiles y se hemolizan produciendo anemia intensa.
Fundamento
Se llama resistencia globular osmtica a la que presentan los hemates suspendidos en soluciones salinas
hipotnicas. Si empleamos soluciones salinas de 0.76 a 0.9 % y suspendemos dentro de ellas los hemates
veremos que stos se conservan sin alteracin durante varias horas, y que una vez sedimentados
(espontneamente por centrifugan), el lquido que sobrenada es claro y transparente como la misma
solucin salina. Pero si efectuamos suspensiones de hemates en soluciones de cloruro sdico a
concentraciones progresivamente decrecientes observaremos que al llegar a una determinada
concentracin empiezan a destruirse, liberndose la Hb, lo que confiere al lquido una ligera coloracin
rojiza que no desaparece por centrifugacin. Esto se le llama hemlisis inicial o resistencia mnima, que
normalmente se presenta entre las concentraciones de 0.46 y 0.42 %.Esta hemlisis de los hemates va
aumentando en cantidad a medida que la solucin de cloruro sdico va siendo ms hipotnica hasta
presentarse una hemlisis total. Esta hemlisis total se observa entre las concentraciones de 0.34 a 0.30 %
Esta prctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glbulos rojos a la hemlisis en
presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotnicas a temperatura ambiente y
veremos en cul de ellas se presenta hemlisis inicial y total.
.
Reactivos y Equipos Necesarios
1. Solucin salina al 0.9 %
2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01
10 ml al 0.1
5 ml al 0.1
3.- Micropipetas de 0.1 ml
4.- Fiola de 100 ml
6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada hemates lavados.
7.- Agua destilada
8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde
Mtodo
1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 19, segn la tabla adjunta,
haciendo las diluciones con agua destilada segn lo indicado:
2.- Una vez hecha la distribucin anterior, mezclar bien, por inversin cada uno de
los tubos. NO OLVIDAR ESTE PASO.
3.- Recin ahora, despus de haber mezclado, aadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los
tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversin suave.
5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar
por inversin suave.
6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos.
Examinar por simple inspeccin visual en cual de los tubos se inicia la hemlisis (hemlisis leve),
generalmente a partir del tubo N 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo
del lquido) y luego examinar en qu otro tubo la hemlisis es intensa (aproximadamente en 0.36 % NaCl
).
En el Tubo N 19 se producir hemlisis total y corresponde al 100% de Hemlisis. (Destruccin total de
los hemates y no deja nada de sedimento).
Valores Normales:
Referencias Bibliogrficas
S., Mellor Leslie ,J. Inwood, Linch R. Medical Laboratory Technology.W.B.Saunders Co.Phila.USA.
1996.
Clinical Diagnosis by Lab Methods. Todd. Stanford, W.B Saunders Co. Phila. USA. 2002
Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .Reich P.MD. Little Brown Co. Boston USA.2004.
Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate.Lea Febiger. 1999.
Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. 1998.
Diagntico Hematolgico .Laboratorio y Clnica. Ciscar y Farrera. Edit.Jims 1998.
INTERCAMBIO DE LQUIDOS ELECTROLITOS Y OTROS SOLUTOS A
TRAVS DE MEMBRANAS
Introduccin
Existe un intercambio continuo de sustancias entre el medio ambiente y el organismo, a travs de los
epitelios drmicos, digestivos y respiratorios.
Dentro del mismo organismo existe un intercambio entre los espacios intracelulares y extracelular.
Algunas sustancias pueden atravesar la membrana celular por difusin pasiva .Otras requieren consumir
energa para moverse a travs de las membranas contra sus gradientes de concentracin .Estos fenmenos
de difusin pasiva y transporte activo permiten la creacin de una composicin orgnica diferenciada.
La piel del sapo no solamente separa al espacio extracelular del medio ambiente, sino que permite el
pasaje de muchas sustancias, incluyendo el agua, el sodio, el cloro y la glucosa. La direccin del
intercambio depende del tipo de transporte involucrado y de la gradiente de concentracin de los solutos.
Cuando cambia la composicin del lquido extracelular los riones excretan las sustancias presentes en
excesos o reabsorben las necesarias para lograr preservar la homeostasis.
Material
17 sapos
Beakers
Agua destilada
Solucin de NaCI 7.5%
Solucin de dextrosa al 15 %
Balanza
Urinmetro
Tubos de ensayo
Pipetas de Pasteur
Goteros
Pinzas mosquito
Mtodo
Experimento N 1: Preparacin del animal
Durante la noche previa al experimento se debe mantener a los sapos en un ambiente hmedo para que
estn adecuadamente hidratados.
Antes de la pruebas se vaca la vejiga de todos los animales y se liga la cloaca para analizar la orina
formada en condiciones experimentales. Si se coloca un sapo en una solucin de dextrosa y luego se
encuentra dextrosa en la orina, puede deducirse que fue absorbida a travs de la piel hasta alcanzar una
concentracin suficiente en liquido extracelular que obligase a los riones a excretar el exceso en la
orina. Los sapos son colocados en soluciones de diferente tonicidad y se les inyecta distintas soluciones
para producir cambios en la composicin de los lquidos corporales.
Los animales son pesados antes de realizar la prueba y despus de haber vaciado sus vejigas. Los cambios
de agua corporal se determinaran pesando a los sapos antes y despus de la exposicin a distintas
condiciones experimentales.
Para cerrar la papila cloacal se la toma con las pinzas mosquito y se liga con firmeza, sin llegar a cortar la
piel , pero lo suficientemente fuerte para prevenir el escape de orina .Despus de esto se pesa al sapo y se
registra su peso.
Experimento N2
Se inyecta a los sapos 4ml de una solucin en el saco linftico dorsal. Esta solucin puede ser hipotnica,
hipertnicas o isotnicas; de cloruro de sodio o dextrosa , tambin inyectaremos en algunos casos agua
destilada .Se vuelve a pesar para confirmar que todo el lquido inyectado se encuentre en el animal.
Se colocan 150 ml de lquido en un beaker de 250 ml y se pone al sapo dentro de l. El lquido debe
cubrir la mitad inferior del animal pero el punto de inyeccin debe permanecer por encima del nivel .Se
tapa el beaker Se pesa el sapo a intervalos de 30 minutos hasta por 8 horas. Se registra los cambios
obtenidos:
Saco Linftico
Bao (Inyectar 4ml)
Bao Saco Peso del Glucosa Peso al final Glucosa pos
externo linftico sapo al basal del experimento
(inyectar inicio del (inicial) experimento (final)
4 ml). experimento
1 NaCl Agua
0.68%
2 agua NaCl
0.68%
3 Dextrosa Agua
3.87%
4 Dextrosa Dextrosa
7.74% 3.87%
Experimento N 3
Despus de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vaca comprimiendo
el abdomen y se recolecta la orina.
Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la
ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso despus de recolectar la orina
del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento.
Se debe tomar en cuenta el peso despus de inyectar los 4ml.de solucin en los sacos dorsales .Se calcula
el porcentaje de variacin de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina
formada durante el experimento.
Material
Sapos grandes Tabla de fijacin para batracios
Alambre de cobre
Estimulador elctrico Alambre de zinc
Equipo de diseccin
Mtodo
Experimento N 1
Se anestesia al sapo por destruccin del cerebro y la mdula espinal.
Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la regin anterior homloga al tronco. Se contina la incisin
de la piel en cinturn. Una vez completado el cinturn, se desprende la piel de un tirn hacia abajo. En la
regin dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo.
Se levanta el urostilo con la pinza de diseccin y se seccionan los elementos paravertebralmente y en
direccin ceflica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso
transverso de la novena vrtebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen
por tres races ms arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios citicos. Por debajo se
observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones.
Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios
citicos.
Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios citicos y se realiza una ligadura lo ms proximal
posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reaccin muscular.
Se secciona el nervio proximalmente a la mdula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda
del hilo se puede efectuar la diseccin del nervio citico, no siendo necesario manipularlo con ningn
instrumento.
Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el msculo piriforme, despus se lo asla por diseccin
roma entre el semimembranoso por dentro y el bceps por fuera. A todo lo largo del nervio se ir
seccionando sus colaterales y se lo aislar hasta la rodilla, comprobando que exista conexin funcional
entre el nervio y el msculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se
seque humedecindolo constantemente en solucin fisiolgica.
Experimento N 3
Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrndola
fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la diseccin de la aponeurosis, que en
el sapo se contina hacia la pierna por el tendn de Aquiles que tiene un sesamoideo.
Se libera el tendn de Aquiles por diseccin roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su insercin
superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fmur un poco por encima
de esta. Se libera el fragmento de fmur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura.
Con cuidado se coloca el electrodo sobre el nervio y se procede a estimular la preparacin neuromuscular.
Con el estimulador elctrico se realiza el estmulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente
hasta obtener una contraccin muscular este es el nivel de umbral que genera la respuesta de contraccin.
Con el estmulo elctrico de esta misma intensidad se continuara la estimulacin durante todo el
experimento (estimulo superior al umbral).
Humedecer constantemente la preparacin con un gotero.
Experimento N 5: tetania
Se realizaran estimulaciones intensas, muy rpidas y/o continuas y se obtendr una serie de contracciones
sucesivas de modo que las estimulaciones no permitan que termine la sacudida anterior y continuaremos
as hasta obtener una contraccin sostenida, permanente, intensa y que es lo que denominamos tetania.
Discusin:
1. Introduccin
La placa mioneural media la transmisin de la seal de la fibra nerviosa motora a la clula muscular. Salvo
en el caso de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A
medida que el axn del nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una
fibra muscular. Ests ramas terminales son de poco dimetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad
de conduccin en ellas es baja. La placa mioneural es una discontinuidad entre la clulas nerviosa y la
muscular donde la transmisin del impulso de despolarizacin queda a cargo de un mediador qumico, la
acetilcolina.
La terminal presinptica posee vesculas sinpticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y
presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje.
La generacin del potencial de accin da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la
concentracin citoslica de calcio. Este incremento promueve la fusin de las vesculas sinpticas con la
membrana citoplasmtica del rafe sinptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina acta sobre receptores
nicotnico presentes en el miocito y produce despolarizacin de la membrana celular muscular. Este
fenmeno es denominado potencial de la placa terminal.
Este potencial de accin excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad
muscular existe adems una va inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentacin
negativa que mejora la resolucin espacial de la accin neural. Esta va inhibitoria provee un mecanismo
para evitar la contraccin muscular persistente.
El axn de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una
rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer ndulo de Ranvier,
permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Est rama forma sinapsis
con interneuronas que se encuentran en la regin ventromedial del asta anterior y son denominadas clulas
de Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas , tanto hacia aquella en la cual se origin la
primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas,
representadas como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisin de este sistema
inhibitorio est a cargo de la glicina.
Material
Sapos grandes Succinilcolina
Migrafo
Estimulador elctrico Vecuronio
Equipo de diseccin Neostigmina
Tabla de fijacin para batracios Atropina
Mtodo
Experimento N 1
Se l anestesia a un sapo por destruccin del encfalo. Se diseca y se expone el nervio citico en la cara
posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio.
En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del msculo y
de la arteria, dejando libre al nervio.
Se aplica estmulos de baja intensidad a los nervios citicos y se va incrementando su intensidad hasta
obtener la contraccin muscular.
Luego se estimula directamente al msculo gastrocnemio a travs de una incisin hecha en la piel.
Experimento N 2
Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos se
procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 3
Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a
estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Experimento N 4
Se administra 1 mL de solucin de atropina y neostigmina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de
unos minutos se procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos.
Discusin
La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la
acetilcolina, produciendo apertura de los canales inicos y despolarizacin persistente. Inicialmente puede
producir excitacin, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el
bloqueo de la transmisin neuromuscular y parlisis flcida.
La estricnina acta a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las clulas de
Renshaw sobre las motoneuronas , en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que
bloquea los efectos inhibitorios de la glicina.
La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las
tetnicas. Origina una contraccin muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular
persistente.
PRCTICA DE SHOCK ESPINAL PARA ESTUDIAR LOS
REFLEJOS EN EL SAPO
Leyes Pfluger, Turck, Sumacion Espacial, Sumacion Temporal y efecto de la ablacin medular.-
Material
Sapo
Beakers, estilete de acero,
Carrete de Runckford
Acido sulfrico diludo 0.1 %; 0.2%; 0.3 %; 0.4%; 0.5 %; 1% sol. acuosas.
Suero fisiolgico
Equipo de diseccin, guantes ltex descartables
Sol.Ringer para batracio.
Mtodo
Experimento N 1: PREPARACIN DEL SAPO ESPINAL
Observar la postura, los movimientos espontneos y respuesta a los diversos estmulos, movimientos
respiratorios, reflejos del salto, respuesta a la rotacin y posicin de espalda del sapo normal.
Se fija al animal con la mono izquierda y se determina lasa siguientes lneas: una lnea transversal a nivel
del lmite posterior de la membrana timpnica ( A-B), Una segunda lnea entre el ojo y la membrana
timpnica (X-Z). Se toma una tijera y se introduce uno de sus extremos en la boca del animal y se lo
decapita con un solo golpe, procurando que en este momento el sapo se encuentre con el dorso hacia
abajo, a lo largo de la lnea X-Z Realizar hemostasia por compresin y realizar las mismas observaciones
que en el sapo normal. Este es el sapo descerebrado. En este caso, el sapo puede realizar movimientos
complejos tales como saltar y si se coloca de espalda puede regresar a la posicin normal.
En otro sapo hacer las observaciones del tono y la respuesta a la estimulacin elctrica y luego realice el
corte a lo largo de la lnea A-B. Inmediatamente se observa el tono y la actitud postural del animal y se
efecta el pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar la depresin motora que constituye uno de los
componentes del shock espinal, ademasno se encuentra los resultados del sapo descerebrado.
Se espera unos minutos y se observa nuevamente el tono y la actitud postural del animal y se efecta el
pinzamiento de uno de sus dedos. Se objetivar las respuestas motoras.
Experimento N 6
Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la mdula. Despus se repite las mismas
estimulaciones hechas previamente.-
REFLEJOS OSTEOTENDINOSOS EN EL HOMBRE
Introduccin
Los mecanismos reflejos estn constituidos por un rgano receptor, un rgano efector y una red de
comunicaciones entre ambos. La accin refleja se inicia por un estmulo de entrada y tiene como resultado
una respuesta de salida. La accin refleja abarca el reflejo axnico sencillo hasta los reflejos complejos en
los que existe intervencin cerebral.
El sistema nervioso comprende un gran nmero de arcos reflejos. Cualquier estmulo produce una
respuesta. El estmulo puede originarse en los rganos internos y afectar la parte visceral del sistema
nervioso. El sistema puede originarse en el exterior y afectar la parte somtica del sistema nervioso. Un
mismo arco reflejo puede afectar tanto partes viscerales como somticas.
Los reflejos viscerales no suelen alcanzar la conciencia, mientras que los reflejos somticos pueden ser
percibidos concientemente. Muchos reflejos pueden considerarse como parte de un programa, puesto que
la respuesta adecuada parece estar prevista dentro del sistema nervioso.
Los reflejos espinales, que requieren transmisin del estmulo desde la periferia hasta la mdula y de all
regresar al rgano efector, son de este tipo. Los reflejos espinales no requieren de intervencin del sistema
nervioso central y funcionan igualmente bien en un animal cuya mdula se ha seccionado por encima de la
localizacin de las neuronas de los nervios correspondientes.
Las inserciones tendinosas de los msculos poseen receptores sensitivos especiales que responden a ala
distensin y envan la informacin al sistema nervioso central sobre la posicin de un msculo o de un
miembro. Cuando estos receptores tendinosos son estimulados por una distensin rpida y brusca, mandan
impulsos a la mdula espinal y, a travs de una sinapsis a la motoneurona anterior que inerva el msculo.
Esta neurona manda impulsos al msculo y produce una sacudida rpida.
La respuesta de los reflejos espinales puede incrementarse elevando el nivel de excitacin de la mdula
espinal. Esta facilitacin puede conseguirse haciendo que el sujeto enganche sus manos y tire con fuerza.
Material
Sujeto de prueba Martillo de reflejos
Mtodo
Experimento N 1: reflejo rotuliano
Se sienta al sujeto en una posicin cmoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por
palpacin, se localiza el tendn rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta
adecuada es la contraccin del cuadriceps, lo que produce extensin de la pierna.
Discusin
EVALUACIN DE LA PERCEPCIN SENSORIAL Y SENSACIONES
NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR.
Introduccin
La estimulacin de un receptor tctil de la piel es transmitida por la va del asta posterior (sensitiva) hasta
la corteza somestsica. En esta la excitacin del receptor activa un determinado nmero de neuronas que
constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma
magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma mxima y las de la
periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulacin.
Las capacidades tctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos
de estimulacin sobre la piel.
Las diferencias en las capacidades de discriminacin en las diferentes zonas del cuerpo se deben al
nmero de receptores que exista en esa zona y a la representacin cortical que stos poseen. Los dedos
estn profusamente poblados de receptores y el rea de corteza a que llega la informacin proveniente de
ellos es amplia, de ah su mayor posibilidad de discriminacin. Otras zonas del cuerpo tienen menor
densidad de receptores siendo ste uno de los factores que conlleva a que la informacin que llega al rea
de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminacin.
Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitar de forma mxima al centro de su
campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante ser una excitacin
mayor, aunque se mantienen los mximos de excitacin separados.
El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y fro, que pasan del fro glacial, al fro, al fresco,
a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante.
Objetivos
1. Discriminar procesos y modalidades de percepcin sensorial en el ser humano de tal manera que
pueda sistematizarlos.
2. Comprobar la distribucin anatmica de los receptores cutneos y la importancia fisiolgica de
dicha distribucin.
3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad.
4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas observaciones debern ser
correlacionadas con sus conocimientos neuroanatmicos y neurofisiolgicos.
Materiales
- Sello especial
- Hoja de papel
- Pelo de cerda (pelo de Von Frey)
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento
1. Por medio de un sello especial marcar un rea en la piel de un compaero: cara, dorso del cuello,
antebrazo, dorso de la mano.
3. Luego el sujeto experimental deber cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento
sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presin en cada uno de los cuadrantes del
rea delimitada por el sello.
4. El sujeto experimental deber reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de
cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros).
6. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.
Resultados
Materiales
- Comps de doble punto.
- Regla.
- Sujeto experimental (alumno 1).
- Sujeto experimentador (alumno 2).
Procedimientos
Para la realizacin de estos experimentos los estudiantes se dividirn por parejas, actuando cada uno como
sujeto experimental y como experimentador.
1. Indique a su compaero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir.
2. Aplique los dos extremos del comps de forma tal que lleguen simultneamente al rea de piel
estimulada. Se deber estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca.
3. En cada paso la separacin de las puntas del comps se aplicarn de forma tal que la diferencia
entre ellas sea diferente y, alternante, mantenindose constante para cada zona corporal esto es
0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm.
4. Durante la aplicacin de las agujas, pregunte al compaero cuantos puntos discrimina y anote su
respuesta.
5. Analice el comportamiento de los receptores.
Resultados
Area de la Piel Distancia de separacin de las puntas del comps ( cm )
Estimulada 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
Yema de los dedos
Antebrazo
Cara
Dorso del Cuello
Dorso de mano
SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACIN
DEL UMBRAL DEL DOLOR
Introduccin
El dolor es un mecanismo de proteccin y por tanto puede definirse como una respuesta de defensa
corporal, el cual aparece siempre que un tejido est siendo lesionado y obliga al individuo a reaccionar
para suprimir el estmulo nocivo.
Si colocamos inadvertidamente el brazo sobre una plancha caliente sentimos dolor e inmediatamente
retiramos el brazo para evitar un mayor dao tisular.
La respuesta al dolor puede expresarse en trminos conductuales, tales como el retiro de la fuente del
estmulo o la fuga; puede haber una respuesta verbal, como el quejido y la expresin del dolor; y puede
haber una respuesta fisiolgica como cambios en la presin sangunea, sudoracin y taquicardia.
El dolor es una respuesta sensorial medible, su magnitud vara con la intensidad del estmulo. Todo ser
viviente presenta una tolerancia al dolor hasta determinado nivel, denominado umbral, en que el dolor es
insoportable. El dolor puede tambin ser socialmente determinado, se dice que hay grupos tnicos ms
sensibles al dolor que otro, y el sexo femenino es ms resistente al dolor que el sexo masculino.
El dolor se ha clasificado en dos tipos fundamentales: 1) Dolor Rpido, que aparece en menos de una
dcima de segundo, no se percibe en los tejidos ms profundos del cuerpo, se transmite a travs de fibras
de tipo A y la seal dolorosa llega al sistema nervioso central va el haz neoespinotalmico. 2) Dolor
Lento, aparece despus de un segundo o ms y aumenta lentamente en el curso de varios segundos o
minutos, suele ir acompaado de destruccin tisular, se percibe en la piel como en cualquier rgano o
tejido profundo, se transmite a travs de fibras tipo C y las seales dolorosas llegan al sistema nervioso
central va el haz palioespinotalmico.
El dolor como todo tipo de sensibilidad tiene receptores y vas neurales especficas.
Los receptores para el dolor son terminaciones libres y se diferencian por el tipo de estmulo al cual
responden y bsicamente son de tres clases:
1) Los mecanociceptores responden a estmulos mecnicos muy intensos de la piel como apretar,
pellizcar, pinchar, etc. Tambin pueden responder a estmulos trmicos repetitivos, entre 45 y
55C.
2) Los termociceptores responden a bajas temperaturas, menos de 10C, y altas temperaturas, por
encima de 42-45C, y asimismo responden a estmulos mecnicos intensos.
3) Los nociceptores polimodales responden a estmulos dolorosos mecnicos, trmicos y qumicos.
El estmulo doloroso (E) acta sobre un terminal nervioso que lleva su axn hacia la neurona sensorial
primaria (1) en las astas posteriores de la mdula espinal. El mediador excitatorio de esta informacin
dolorosa es la sustancia P, aunque tambin pueden participar otras sustancias como el cido glutmico, la
somatostatina y el polipptido intestinal vasoactivo (VIP).
Los axones de las segundas neuronas del sistema de transmisin del dolor (2) ascienden en dos tractos
diferenciables tanto anatmica como funcionalmente; el tracto Pleo-espino-talmico con proyecciones
amplias y difusas; y el tracto Neo-espino-talmico con proyecciones menores y circunscritas. La va
neuronal del neo-espino-talmico es responsable de la localizacin certera en la superficie corporal de los
dolores agudos, siendo pequeo el nmero de las fibras que la componen. Los axones del Pleo-espino-
talmico se enlazan sinpticamente con neuronas del tronco enceflico en especial con la informacin
reticular tegmental y los cuadrigminos (Tracto espino-tectal), mientras que otras de sus fibras alcanzan
directamente a los ncleos talmicos intramamilares. Hasta este nivel no hay participacin de la corteza
cerebral en las sensaciones del dolor.
En el tlamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los ncleos
intramamilares del tlamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza
cerebral. Igualmente existen neuronas de tercer orden en el ncleo ventro-basal y grupo posterior del
tlamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Es aqu, donde ocurre la
modulacin del dolor, y donde socioculturalmente puede variar la expresin del dolor
EXPERIMENTO N 1: SENSACIONES TRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR
Materiales: Hervidor elctrico con agua ,termmetro y gotero.
Procedimiento
1. Introducir el termmetro en el hervidor elctrico y registrar la temperatura del agua.
2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro elctrico.
3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas
en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentacin perciba un cambio en la
temperatura del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto.
4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano
sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs. Temperatura y determine el umbral del dolor.
Resultados
TIEMPO (MIN) TEMPERATURA C DOLOR
Materiales
- Tensimetro.
- Cronmetro.
- Sujeto Experimental (alumno 1).
- Sujeto Experimentador (alumno 2).
Procedimiento
1. El sujeto de experimentacin deber sentarse cmodamente, colocando el brazo sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn.
2. Coloque el manguito del esfigmomanmetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de
manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presin de 200 mm
Hg.
4. Solicitar al sujeto de experimentacin que abra y cierre rtmicamente ambas manos.
5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el
dolor se torna insoportable.
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema, abriendo la vlvula de la pera insufladora.
7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor.
8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda.
Resultados
BRAZO
Derecho Izquierdo
Inicia el dolor
Dolor insoportable
Desaparece el dolor
Marco Terico.
Anatoma.
Rol Fisiolgico.
Vestibulocerebelo
Espinocerebelo.
Cerebrocerebelo.
La Prueba del taln rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocar
con el taln de un pi la rodilla del la otra pierna, lo debe hacer en forma precisa, exacta,
enseguida se le pide que descienda el taln bordeando la tibia de la pierna opuesta y no
debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pi. Si tiembla, duda zigzaguea el
taln , es anormal.
Con los dedos de la mano contrados se le pide que con el ndice extendido se toque la
punta de la nariz y luego el lbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados.
Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la
distancia.
La investigaremos con un voluntario de pi, con los pies juntos y las palmas de las
manos adosadas al cuerpo(en actitud de firme).
Evaluar Disimetra
Evaluar Disdiadococinesia
En esta practica evaluaremos solamente la funcin de la rama coclear del VIII Par craneal (mediante test
Weber, Rinne y Schwabach) y evaluar hipoacusia solamente, pues la rama vestibular ser evaluada de
modo diferencial conjuntamente con el estudio del cerebelo en su oportunidad.
Exploracin de la rama coclear del Nervio acstico VIII par;nervio vestbulo coclear)
El nervio coclear conduce los estmulos auditivos inducidos por las vibraciones
sonoras ,recogidas por el receptor: rgano de Corti ,de los estmulos auditivos.
No nos olvidemos que el nervio vestibular conduce los estmulos especficos del sentido del
equilibrio que traduce las sensaciones de posicin o movimientos del cuerpo en relacin al
espacio.
Para la evaluacin fisiolgica de la percepcin del sonido evaluaremos la transmisin area y la
transmisin sea.
La hipoacusia POR ALTERACIN EN LA TRANSMISION CONDUCCION AREA
(HIPOACUSIA DE CONDUCCIN) : en AFECCIONES DEL OIDO EXTERNO O MEDIO
acumulo de cerumen o perforacin timpnica.
Y LAS AFECCIONES DE HIPOACUSIA POR ALTERACIONES EN LA CONDUCCIN
SEA EN LOS TRANSTORNOR DEL NERVIO AUDITIVO)RAMA COCLEAR DEL
LABERINTO(Hipoacusia sensorial, nerviosa o de Percepcin .
Las pruebas de audicin constituyen lo que se llama: Acumetra Puede ser Fnica o
Instrumental.
PRUEBAS DE AUDICION
RESULTADO
Si el sonido se lateraliza hacia el lado sano, entonces es hipoacusia Neuro sensorial Derecha. Si
se lateraliza hacia el odo que escucha mejor, el odo Derecho enfermo peor prcticamente no
escuchara.
Si el odo Derecho (enfermo) escucha mejor, el sonido lateraliza hacia la izquierda, ser
hipoacusia de transmisin o de conduccin.
TEST DE RINNE
Compara la calidad de la Percepcin Auditiva por medio de 2 Vas:
AEREA OSEA
Transmisin Apfisis mastoides
Conduccin
(Investigamos un solo odo cada vez ; es monoaural)
PARA COMPARAR AEREA Y OSEA SE TOMA EL TIEMPO DE DURACION DEL
SONIDO CON CRONMETRO DESDE EL INSTANTE EN QUE COLOCAMOS EL
MANFGO DEL DIAPASON VIBRANTE EN HUESO MASTOIDES (INICIO) HASTA QUE
DES APARECE EL SONIDO
Metodo para exploracin de Rinne
Va area
2. De inmediato acercar el diapasn a la oreja
del mismo lado.
3. Preguntar al paciente Cundo escucho
mejor?, Dnde con mayor intensidad?
RESULTADO
Si se escucha mejor por va sea, Hipoacusia de
Transmisin conduccin RINNE NEGATIVO.
TEST DE RINNE:
Tiene por objeto comparar la audicin de un sonido transmitido por va sea(mastoidces), con la audicin
del mismo sonido transmitido por va area ( delante oreja ) tomando los tiempos de duracin del sonido
en segundos con el diapason en mastoides y luego con el mismo estmulo tomar tiempo delante de la
oreja.
Al poner un diapasn vibrante en la mastoides de un individuo sano, ste oir el sonido generado hasta que
la magnitud de la vibracin no se se escuche pues se hace insuficiente para vencer la impedancia acstica
que le ofrecen los tejidos que se interponen en su transmisin hasta la cclea, el sonido en regin
mastoidea normalmente se percibe durante 20 segundos.
Una vez que el diapasn deja de ser audible por va sea si se lo coloca INMEDIATAMENTE frente al
conducto auditivo externo (sin tocar la oreja) reaparece la sensacin auditiva por va area 40 segundos
ms, ya que la impedancia a vencer por esta va es mucho menor que por va sea. En este caso que es el
normal se dice que el RINNE es POSITIVO.
En las hipoacusias conductivas la percepcin se mantiene durante un tiempo mayor por va sea que por
va area, por ejemplo 35 segundos por va sea y 20 segundos por va area, esto constituye el RINNE
NEGATIVO.
En las hipoacusias neurosensoriales se hayan disminuidas ambas fases, las proporciones se mantienen pero
los tiempos estn disminuidos y se habla de RINNE POSITIVO ACORTADO. Los valores podran ser 10
segundos por va sea y 20 segundos por va area.
TEST DE SCHWABACH
Consiste en comparar el tiempo de audicin de un diapasn vibrante colocado en el vrtex del paciente
con el tiempo que oye un sujeto normal. Se aplica el diapasn vibrante en el vrtex del paciente hasta que
deja de orlo.
Si el examinador o testigo normal oye, se habla de SCHWABACH CORTO y orienta a una sordera
neurosensorial;
en el caso contrario SCHWABACH LARGO orienta hacia una lesin de tipo conductivo, por ejemplo una
otoesclerosis.
Si los tiempos son semejantes se dice que el SCHAWABACH es normal.
Instrumental
Conduccin sea 20 segundos 10 segundos
Conduccin area 40 segundos 20 segundos
Weber Sin lateralizacin Lateralizacion (al mejor odo)
Rinne Positivo (normal) Positivo (corto)
Schwabach Igual al examinador Menor que el examinador normal
Resumen :
En la hipoacusia de conduccin (Trastorno de la conduccin area , afecciones del odo externo
y/o medio) tenemos:
El Weber se lateraliza hacia el odo afectado el odo peor
El Rinne es negativo en el odo afectado
El Schwabach es normal o ms prolongado en el lado afectado
En la hipoacusia de percepcin o nerviosa(trastorno de la transmisin sea , afecciones del odo
interno laberinto u nervio auditivo) tenemos:
Weber lateralizado hacia el lado sano
Rinne es positivo en el odo afectado
El Schwabach s acorta en el odo afectado.
Sistema Nervioso Autonmico
EFECTOS SIMPTICOS Y PARASIMPTICOS
Introduccin
El sistema nervioso autnomo comprende dos grandes divisiones antagnicas: sistema simptico y
parasimptico, relacionados a respuesta de stress y antiestrs.
Se emplea el sapo para observar los efectos simpticos y parasimpticos en la actividad cardiaca.
Material
Sapos grandes Algodn
Conejos Jeringas descartables
Adrenalina Suero fisiolgico
Acetilcolina Electrocardigrafo con juego de agujas de metal
Atropina Atenolol
Tabla de fijacin para batracios
Pilocarpina Solucin de Ringer para batracios
Equipo de diseccin
Mtodo
Experimento N 1
Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y la medula espinal. Colocar al animal en la tabla de
fijacin. Abrir el peto esternal y exponer el corazn. Humedecer peridicamente con la solucin de Ringer
para batracios. Conectar el electrocardigrafo por medio de las agujas de metal y obtener un trazado
electrocardiogrfico basal. Instilar una gota de solucin de Acetilcolina al 1/5000 y obtener un nuevo
trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar por al
menos 2 minutos.
Experimento N 2
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al
1/2000 y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N 3
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atenolol y
obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Adrenalina al 1/2000 y obtener
un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla reposar
por al menos 2 minutos.
Experimento N 4
Emplear la preparacin descrita en el experimento anterior. Instilar una gota de solucin de Atropina al
0.1% y obtener un trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos. A continuacin instilar dos gotas de solucin de Acetilcolina 1/5000 y
obtener un nuevo trazado electrocardiogrfico. Lavar la preparacin con la solucin de Ringer y dejarla
reposar por al menos 2 minutos.
Experimento N 5
Instilar 1 gota de Pilocarpina en el ojo derecho de un conejo y una gota de solucin de Adrenalina en el
ojo izquierdo.
Discusin
FISIOLOGA
CARDIOVASCULAR
1.- Fundamento
El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad
que le permite al corazn trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo.
Tiene inervacin autnoma y sistema de conduccin elctrica organizada.
La actividad elctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y
graficarse en ondas por medio del Electrocardigrafo. Existe una correlacin entre la actividad elctrica y
el ciclo cardiaco.
2.-Objetivos
a. Reconocer la anatoma del corazn y vasos
b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-caractersticas del msculo cardiaco
c. Detectar la actividad elctrica del corazn (Electrocardiograma)
d. Relacionar la actividad elctrica y el ciclo cardiaco
e. Demostrar los efectos de estmulos fsicos y qumicos (adrenrgicos y colinrgicos) sobre el
corazn
f. Conocer el efecto vagal
3.-Materiales
- Animal para experimentar- sapo - Tablilla de fijacin
- Electrocardigrafo - Tubos de ensayo (03)
- Quimgrafo - Agua caliente (40), fra (80)
- Migrafo para cardiografa por suspensin - Sol. Ringer.
- Carrete de estimulacin elctrica - Adrenalina 1/2000
- Equipo de diseccin y 2 pares de guantes) - Acetilcolina 1/5000
- Sol. CIK 1% - Sol. C12Ca 1%
- Propranolol 1/1000 - Atenolol 1/1000
4.-Experimentos
4.1 N 1: Exposicin del corazn-anatoma- ciclo cardiaco
- Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal
- Colocar al sapo en la tablilla en decbito dorsal-fijarlo con alfileres
- Cortar la piel del trax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porcin media
del abdomen
- Humedecer permanentemente las vsceras y tejidos con Sol. Ringer
- Reconocer la punta del esternn y cortar por su lado izquierdo
- Con tijera cortar el esternn en su lnea media
- Exponer al corazn e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazn y vasos-
reconocer las fases del ciclo cardiaco
- Colocar el Electrocardigrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco
4.2 N 2. Experimento de Gaskel- Estmulo fsico (temperatura) al corazn
- Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared
posterior del corazn.
- Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurculas y Ventrculo)
- Con tubo de ensayo (agua fra) tocar el Seno venoso y observar los latidos
- Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente;
observar latidos
- Interpretar los eventos que acontecen
4.3 N 3. Cardiografa directa por suspensin- Efecto Vagal y Farmacolgico
Fase A: Disecar el nervio vago derecho:
- Cortar piel y subcutneo hasta llegar al ngulo externo del maxilar
- Identificar y cortar y transversalmente al msculo cutneo pectoral derecho
- Colocar el brazo derecho a 45 con respecto al eje del cuerpo
- Observar debajo de la mandbula a dos nervios :glosofarngeo(lateral) y el hipogloso (medial),
individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la lnea media , en donde cambian de direccin y
se dirigen al piso de la boca
- Entre los dos nervios, reconocer la arteria cartida primitiva (en el ngulo externo de la
mandbula). Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho.
- Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer
Fase B: Proceder a los siguientes experimentos:
4.3.A: Cardiografa directa- Efectos del vago en el corazn
- Colocar el clamp del Cardigrafo en al punta del ventrculo ; Aproximar el Quimgrafo a la
palanca y obtener un trazado
- Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con el ciclo cardiaco
- Dibujar un grfico, sealando sus caractersticas
- Desconectar Electrocardigrafo.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de
induccin ), observar los cambios en el latido (Durante/estimulacin desconectar /
Electrocardigrafo)
- Estimular con una aguja a las aurculas y al ventrculo y reconocer la contraccin prematura
morfologa y la pausa compensadora.
4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina
- Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer
- Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar
- Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar
4.3.C Ligadura de Stannius- Conduccin elctrica automatismo
- En el surco en el Seno venoso y las aurculas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar.
Observar efectos en el ECG. Analizar
- Una segunda ligadura entre las aurculas y el ventrculo ; ligar y observar ECG
- Observar la frecuencia de contraccin de aurcula y el ventrculo (Bloqueo aurculo- ventricular)
1. Fundamento
Los potenciales de membrana de la clula cardiaca tienen relacin directa con la concentracin de los
iones dentro y fuera de la clula. El potencial de accin es consecuencia de la entrada y salida de los iones,
de la clula. Algunos iones INTERVIENEN en la despolarizacin y otros en la repolarizacin celular.
La perfusin del corazn con soluciones que tienen mayor concentracin de iones van a
alterar los potenciales de la clula y se expresaran en la contraccin del miocardio.
2. Objetivos
a. Reconocer y analizar los cambios de la actividad cardaca cuando se le expone a soluciones con
Potasio, Calcio y Magnesio
b. Esquematizar los lugares de accin de dichos cationes en el potencial de Accin
c. El alumno ser competente para entender los conceptos :
- Relaciones espaciales de las Cavidades cardiacas: (aplicacin en el ECG, auscultacin cardiaca)
- Diferenciar entre el msculo auricular y ventricular: relacin con presiones que manejan.
- Sistema de conduccin: automatismo, conduccin, velocidad de conduccin, excitabilidad
- Diferencias del potencial de accin entre N. Sinusal y fibra ventricular: Canales inicos en la
despolarizacin y repolarizacin, efectos y su fundamento de administracin de Potasio, calcio-
cambios en el ECG. Por que el N. sinusal comanda el inicio de la despolarizacin cardiaca?
- Periodo refractario absoluto y relativo :consecuencias ante estmulos
- Innervacin cardiaca: efectos en las propiedades del msculo cardiaco
- Irrigacin cardiaca: a. coronarias y venas cardiacas- relacin de la sstole y distole con la
irrigacin coronaria.
3. MATERIAL
- Animal de experimento: sapo - Sol. Ringer (Sol A)
- Tablilla de fijacin y alfileres - Sol. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol.B)
- Catteres EV - Sol. Ringer con CIK (0.3 g/lt)(Sol.C)
- Frascos de perfusin de 125 ml - Sol. Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D)
- Anzuelos - Quimgrafo
- Cera - equipo de diseccin
4. EXPERIMENTOS:
1. Introduccin
El corazn tiene la capacidad de generar su propio potencial de accin , el que es transmitido a travs del
sistema de conduccin a las aurculas y los ventrculos. Es transmitido a travs del volumen conductor a la
superficie del cuerpo. Donde es captado por los electrodos del electrocardigrafo.
La electrocardiografa puede realizarse en reposo (electrocardiografa clnica de reposo) o en actividad
(prueba de esfuerzo).
En la presente prctica se realizara la electrocardiografa de reposo.
2. Material
Sujetos de prueba varones y mujeres, Electrocardigrafo, leptosmicos y pcnicos
3. Mtodo
3.1. Experimento N. 1
Colocar al sujeto en decbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convencin internacional.
Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud; la
velocidad de registro del aparato deber ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros
y 6 trazados de de derivaciones precordiales.
Informar de acuerdo al siguiente protocolo:
Nombre: Fecha:
Edad: Talla:
Peso: Tipo constitucional:
Informe electrocardiogrfico:
Ritmo: Frecuencia cardiaca:
Intervalo PR: Complejo QRS: Intervalo Q-T: Q-Tc:
Eje QRS
Morfologa de P
Morfologa de QRS:
Morfologa de T:
Conclusiones:
Comentario:
4. Discusin
1.-FUNDAMENTO
El volumen sistlico produce en la circulacin perifrica cambios en el flujo y presiones intravasculares;
presin arterial, presin venosa. Estas presiones estn relacionadas con la longitud y radio del vaso y con
la viscosidad de la sangre; factores que producen resistencia al flujo. La presin arterial tiene un pico
mayor denominado presin sistlica y un nivel inferior denominado presin diastlica. La presin
promedio se denomina presin arterial media. La presin arterial puede determinarse en forma indirecta
por medios de un aparato Esfigmomanmetro de mercurio o aneroide.
1. OBJETIVOS
a. Determinar la presin arterial sistlica, diastlica, en forma indirecta
b. Determinar los cambios de la presin arterial cuando se expone factores, fsicos (temperatura),
cambios de posicin y de actividad fsica
c. Calcular la presin arterial media-El alumno tendr competencia para saber:
- Cuales son los factores mecnicos y humorales que determinan la presin arterial?
- Relacionar presin hidrosttica y onctica con la PA
- Mencionar tres sustancias que sean vasoconstrictoras y tres que sean vasodilatoras
cmo actan? Cmo se regulan?
- Relacione los cambios de PA y FC en relacin con el ejercicio y la postura corporal
- Qu importancia tiene la PAM? Cmo la determina?
- Relacionar gasto cardiaco, resistencia vascular, vol. Sistlico, frecuencia cardiaca,
Inotropismo, precarga, volumen sanguneo, capacidad venosa, presin venosa central,
regulacin de agua y sodio por el rin
2. MATERIAL
- Sujeto de prueba: alumnos
- Tensiometro de mercurio o anaeroide
- Estetoscopio
- Beakers
- Agua fra (5 C)
3. EXPERIMENTO
Experimento 1: Determinar la presin arterial
- Sujeto de prueba en posicin sentada, brazo descubierto a la altura del corazn
- Esperar 5 minutos
- Colocar el brazalete por encima del pliegue del codo
- Colocar la campana del estetoscopio sobre la arterial humeral
- Inflar el manguito hasta que desaparezca el pulso arterial
- Desinflar el manguito lentamente y
- Registrar la presin sistlica con el primer ruido de Korotkoff
- Registrar la presin diastlica con el quinto ruido de Korotkoff
- Recordar: 1mmHg = 0.13 Kpa = 13.6 cm. H2O
- Bibliografa
1. Introduccin
La medicin de los volmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometra. Este procedimiento
permite determinar todos lo volmenes pulmonares, excepto el volumen residual, cuya medicin se realiza
por mtodos indirectos. Emplearemos el Espirmetro Pneumotacmetro Fleich Datospir 120
En esta prctica el alumno adquirir competencia para entender:
2. Equipo
Pinza Nasal
Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar
EQUIPO ESPIRMETRO NEUMOTACMETRO FLEICH DATOSPIR
3. Mtodo
Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacmetro. Constatar
que no haya fugas de aire por la boca, borde de los labios, ni nariz.
Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para que se acostumbre a ella. Una
vez que la frecuencia respiratoria se ha vuelto constante y la profundidad de la respiracin uniforme,
conectar al espirmetro para obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). A continuacin
solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras segn instrucciones del profesolr de Practicas.:
a) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima y luego respirar
normalmente. .
b) Al final de una espiracin normal (FEN) realizar una inspiracin mxima y luego respirar
normalmente.
c) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima seguida de una
inspiracin mxima, luego respirar normalmente.
Introduccin
En los seres humanos como en todos los mamferos, la hemoglobina, constituye el principal componente
del eritrocito y normalmente es responsable del transporte del 99.2% de oxigeno presente en la sangre.
Tambin juega un papel importante en el transporte de di6xido de carbono (C02) y del ion hidr6geno
(H+).
La globina constituye el 96% de la molcula de hemoglobina y est compuesta por cuatro cadenas
polipeptdicas que aparecen como dos pares no idnticos. La hemoglobina A, la principal hemoglobina en
los adultos, consta de dos cadenas y dos cadenas siendo su estructura 2 y 2 , y representa el 90%
del total de la hemoglobina. Una segunda especie de hemoglobina es la HbA2, y representa el 2.5% del
total, y contiene dos cadenas alfa y dos cadenas delta (2 y 2 ) Adems de estas dos hemoglobinas, otras
seis formas adicionales se encuentran en pequeas cantidades y cuyo significado fisiolgico aun falta
precisar.
1) Cada atomo de, hierro de los grupos "hemo" reacciona directamente con el oxigeno molecular
(Oz) y logra fijar una molcula de oxigeno por cada tomo de hierro, de lo que podemos deducir que una
molecula de hemoglobina puede transportar cuatro moleculas de oxigeno.
Para que esta reaccin ocurra, el hierro debe encontrarse en la forma divalente (Fe2+o ferroso).
Este estado no se modifica cuando el hierro reacciona con la hemoglobina: existe oxigenacin y no
oxidacin de la hemoglobina. Cuando el tomo de hierro es oxidado a su forma trivalente (frrico), como
ocurre en la metahemoglobina, no reacciona con el oxigeno, perdiendo la hemoglobina la capacidad de
transportarlo. En condiciones normales in vivo, el sistema metahemoglobina reductasa del eritrocito
mantiene al hierro de la molcula en estado ferroso.
Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de monxido de carbono, compuesto producido
por la combustin incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosin). El
monxido de carbono se combina ms fcilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el
oxigeno. El peligro de la intoxicacin con monxido de carbono radica en el hecho de que la
carboxihemoglobina no tranporta oxigeno. Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta
ocupada con monxido de carbono aparecen las cefaleas y vmitos; si lo esta un 50 %, la vida peligra; si
lo est un 60-70 %, se produce la muerte por asfixia.
Entre los factores que ocasionan una acumulacin excesiva de metahemoglobina se encuentra: a)
La metahemoglobinemia hereditaria, por disminucin de la actividad de la diaforasa o bien por sntesis
de hemoglobinas anormales, y b) La metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai
ingesta de frmacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende
la administracin de las drogas.
Los oxmetros de pulso (figura 1) basicamente estn constituidos por dos diodos que emiten luz
en forma intermitente, y una clula fotosensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la
luz transmitida a travs de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que
emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en
ambas longitudes de onda, son cuantificadas y cornparadas por la clula fotosensitiva para determinar el
porcentaje de la saturacin arterial de oxgeno.
La saturacin arterial de oxgeno normalmente vara entre 95 a 100% en sujetos de nivel del mar
y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recin nacidos vara entre
85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio fsico y la altitud de residencia.
Experimento N 1:
MEDIDA DE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO
Materiales:
- Oxmetro de pulso
- Sensores de Oxgeno (Fig. 2)
- Algodn
- Alcohol
Procedimiento:
1. Encender el oxmetro de pulso.
2. Limpiar y secar el dedo ndice, con algodn y alcohol.
3. Colocar el sensor de oxgeno en el dedo ndice.
4. Leer y registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, tres veces.
Resultados:
Saturacin (%) Fr. Cardiaca
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
Promedio
5. Determinar si la saturacin arterial de oxgeno vara en los diferentes dedos de la mano derecha e
izquierda
Saturacin (%) Fr. Cardiaca
Derecha Izquierda Derecha Izquierda
Dedo Pulgar
Dedo ndice
Dedo Cardinal
Dedo Anular
Dedo Meique
Materiales:
- Oxmetro de pulso
- Sensor de oxgeno
- Algodn
- Alcohol
- Sujeto experimental (alumno 1)
- Sujeto experimentador (alumno 2)
Procedimiento:
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin
7ma. Medicin
8va. Medicin
9na. Medicin
10ma. Medicin
Materiales:
- Tensimetro
- Cronmetro.
- Oxmetro de pulso.
- Sensor de oxgeno.
Procedimiento:
1. El sujeto experimental deber sentarse cmodamente, colocando los brazos sobre la mesa de
modo que quede a nivel del corazn, medir la saturacin arterial de oxigeno en el dedo ndice de
ambas manos (1ra. Medicin).
2. Coloque el manguito del tensimetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de
manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo.
3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presin de 200 mmHg.
4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente la mano derecha hasta que el
sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturacin arterial en el dedo ndice de
la mano derecha y luego en el dedo ndice de la mano izquierda (2da. Medicin).
5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rtmicamente la mano derecha hasta
el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturacin arterial en ambas
manos (3ra. Medicin).
6. Disminuir rpidamente la presin del sistema abriendo la vlvula de la pera isuflora y retirar el
tensimetro.
7. Medir y registrar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min.
hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medicin).
Resultados:
Saturacin (%) Frecuencia Cardiaca
ndice Derecho ndice Izquierdo ndice Derecho ndice Izquierdo
1ra. Medicin
2da. Medicin
3ra. Medicin
4ta. Medicin
5ta. Medicin
6ta. Medicin
SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO
INFORME DE PRACTICA
Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../......
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
ANTECEDENTES PERSONALES:
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............aos
Peso:............Kg Talla:.............. mts Peso Ideal:...............Kg
Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:.......................
Actividad Fsica: 1) Sedentaria: ..........
2) Ocasional: ..........
3) Frecuente: ..........
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
Pre-Ejercicio
Post-Ejercicio
BRAZO DERECHO:
Basal
Iniciar Dolor
Dolor Soportable
BRAZO IZQUIERDO:
Basal
Inicia Dolor
Dolor Soportable
HEMATOCRITO
Es la relacin porcentual entre la cantidad de glbulos rojos y el plasma sanguneo en relacin a la sangre total. Esta
determinacin es muy til para del diagnstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.
Reactivos , Material de Vidrio y Equipos
Anticoagulante de Wintrobe: Oxalato de potasio 0.8 gm y oxalato de amonio 1.2 gm y agua dest. csp. 100 ml.)
Colocar 0.5 ml en cada frasquito de vidrio y desecarlos en estufa a 56 C. Cada frasco as preparado servir para
anticoagular 5 ml de sangre.
Sangre venosa anticoagulada .
Pipetas Pasteur y Tubo de Wintrobe
Tubos capilares para microhematocrito con y sin heparina.
Jeringas y agujas descartables.
Desinfectante para piel..
Guantes descartables
Centrfuga Clnica
Centrfuga para Microhematocrito
Existen 2 mtodos: Macro y Micromtodo para determinar el Hematocrito.
Procedimiento: Macromtodo de Wintrobe.
Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca 100.
Evitar formacin de burbujas.
Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos.
Lectura en la escala ascendente en el lmite del paquete globular, excluyendo los glbulos blancos y
plaquetas.
Expresar el Hematocrito en valor porcentual.
Valores Normales:
Hematocrito Valores
Referenciales
%
Recin Nacidos 60
Infantes 35 a 44
Varones Adultos 41 a 52
Mujeres Adultos 38 a 46
------------------------------
Procedimiento: Mtodo MICROHEMATOCRITO.
Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con plastilina.
Centrifugar a 12,000 rpm en la centrfuga para microhematocrito, durante 10 min. Lectura en la tabla Ad-
hoc para este efecto. Expresar el valor porcentual.
------------------------------
HEMOGLOBINA
Es una molcula de estructura cuaternaria, tetramrica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxgeno
de los hemates. Est formada por un ncleo Hem y una protena llamada Globina.
MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Materiales:
Jeringa y agujas descartables.
Desinfectante.
Algodn.
Ligadura.
Alcohol.
Anticoagulante de Wintrobe.
Pipeta de Sahl de 0.02 ml
Tubos de prueba.
Solucin de HCl 0.1 N
Espectrofotmetro.
Procedimiento
Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahl (0.02 ml).
Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta.
Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N
Mezclar, por inversin, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotmetro, en Long.
Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotmetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la
lectura de Absorbancia.
CALCULOS:
Absorbancia del Problema X Factor de Calibracin = gm Hb %
Valores Referenciales:
Hemoglobina Valores
Referenciales
gm %
Recien Nacidos 17 a 25
Infantes 10 a 15
Hombre Adulto l4a17
Mujer Adulto 12 a 16
Hombre de Altura 16.4 a 18.8
Los ndices hematolgicos, son elementos de juicio muy importantes para clasificar las anemias, en
relacin a su contenido de hemoglobina, volumen globular y valor porcentual de la concentracin de
hemoglobina en cada uno de los glbulos en promedio.
VOLUMEN GLOBULAR MEDIO
Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe ",. Lea Febiger. Phila USA 9 Edition. 1993
Medical Laboratory Technology. Lynch.Raphael Saunders USA 1989.
Manual of Clinical Hematology. Joseph Mazza. Little Brown 1998.
Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulacin excepto en los primeros
pasos de la va intrnseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se
coagular por ninguna de las dos vas.
EVALUACION DE LA HEMOSTASIA
Y LA COAGULACION DE LA SANGRE
TIEMPO DE COAGULACIN
Se denomina as al tiempo que transcurre desde que la sangre es extrada hasta que pasa al estado de gel.
Esta prueba mide el tiempo tomado por la sangre para coagular en ausencia de factores provenientes de los
tejidos (factor tisular). El trauma que significa la obtencin de sangre venosa marca el inicio, y el intervalo
de tiempo entre la obtencin de la muestra y su coagulacin es lo que se denomina Tiempo de
Coagulacin. Esta es en trminos generales una prueba grosera de la coagulacin. Sirve para detectar
groseramente alteraciones de la coagulacin que puedan alargarla. La prolongacin del Tiempo de
Coagulacin puede deberse a varias causas;:
1.- Disminucin de la Tromboplastina,
2.- Disminucin de la Protrombina,
3.- Disminucin del Fibrigeno
4.- A la presencia en la sangre de algn anticoagulante.
Tiempo de Sangra
El tiempo de sangra depende de la elasticidad de la pared vasos sanguneos y de la cantidad y capacidad
funcional de las plaquetas.
El tiempo de sangra es el tiempo transcurrido desde el momento en que se hace una puncin standard
profunda en la oreja o en el pulpejo del dedo y aqul en que la sangre deja de brotar de la herida.
METODO DE DUKE
Reactivos y Aparatos:
Cronmetro, lancetas descartables, desinfectante de piel, papel de filtro.
Procedimiento:
Desinfectar la yema de un dedo (anular) el lbulo de una oreja y punzar con la lanceta descartable
standard de manera que la sangre fluya libremente, gota a gota, sin necesidad de exprimir la piel. Anotar el
tiempo de aparicin de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30
segundos sin tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido.
Valores Referenciales:
1 a 3 MINUTOS.
TIEMPO DE PROTROMBINA Y TIEMPO DE
TROMBOPLASTINA PARCIAL
Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y
colocar en BM a 37 C por 3 min. (No pre incubar mas de 10 min.).
Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y aadir rpidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de
Soluplastin, disparando simultneamente el cronmetro.
Valores Referenciales:
11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal
El control Normal estar entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS.
Con estos valores en segundos a travs de una curva de calibracin podemos expresarlos en porcentaje de
actividad protrombinica en relacin a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra
los valores porcentuales:
11 - 12.5 100 %
13.5 60 %
15 50 %
17 40
19.5 30
22 25
24 36 20
37 40 10
55 65 5
En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines:
1.- Para la evaluacin de los desrdenes de la Coagulacin: para investigar la anormalidad de los
factores involucrados en la va Extrnseca V, VII, X, Protrombina y Fibringeno. Y debe ser
usada junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados
indanedionas.
3.- Evaluacin de la funcin heptica: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas tiles para
evaluar la capacidad del hgado en la sntesis de los factores del complejo Protrombnico: II, VII,
yX .
DETERMINACIN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO.
(TTPA APTT PTT).
El TTPA es un mtodo de investigacin de la VA INTRNSECA de forma global XII, XI, IX, X, VIII, V,
II y I. En esta prueba APPT se usa un activador especfico de la Va Intrnseca (del Factor XII) y es un
Fosfolpido CEFALINA activado con caoln slice micronizado. El test de TTPA consiste en la
recalcificacin del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolpido, (que es un sustituto de las
plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaoln
tamponado. Esta prueba usa este activador especfico de la va intrnseca que es el Factor plaquetario -3
sustituido por la cefalina fosfolpido de cerebro de conejo y que tiene adems un activador kaoln en
finsimas partculas slice micronizado (activador para el Factor XII) de la va intrnseca solamente y un
tampon de piperazida estanolsulfnico. Adems este reactivo tiene una especial reactividad con la
presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la teraputica con heparina.
Emplearemos en esta practica el mtodo de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolpido y que se
llama reactivo APTTEST
A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l)
B. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado, aadir el volumen de agua indicado en el rasco
que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversin, queda as listo el
homogenizado.
C. Obtencipn de la muestra de sangre:
A 4.5 cc de sangre venosa aadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. Centrifugar para
separar el plasma.
D. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de
dimetro o 13 x 100 ml:
TUBO 1 TUBO 2
Tambin podemos emplear los reactivos de cefalina con caoln de la casa francesa que vemos a
continuacin.
Equipos, reactivos y materiales .-(idem que TP).-
Procedimiento para APTT:
Emplearemos CK Prest activado (Cefalina con Kaolin) (APTT) (Diagnostica Stago-Francia).
Reactivo N 1: Cefalina
Reactivo N 2: Kaoln tamponado :
Agitar el contenido del frasco N2 y transferido completamente dentro del frasco N1. Dejar
que repose 30 min. para embeber el gel. Y despus de la imbibicin, agitar
suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura.
Los valores referenciales varan de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relacin a un control normal
Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial est prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos
indica un a alteracin de alguno de los factores de la va intrnseca de tipo congnito: VIII, IX
(Hemofilias), XI, XII. Si todos estos factores estn normales, puede haber una deficiencia de HMWK
kiningeno (Factor Fritgerald). Tambin se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas
condiciones anormales como: Enfermedades hepticas, Coagulopata por consumo, anticoagulantes
circulantes, en la terapia anticoagulante oral, o en la heparizacin. en el tratamiento con inhibidores de
la trombina como hirudina, argatroban., etc
Va Intrnseca Va Extrnseca
XII FACTOR
Pre K TISULAR
Tiempo
HMWK
Protrombina
Tromboplastinas
VII
XI Tisulares:
Simplastin
Soluplastin
IX
VIII
VA FINAL
COMUN
X
V
PF -3
Protrombina Trombina
Fibriongeno Fibrina
XIII
Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical Hematology Simmons. Lippincott. 1999.
Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999.
The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993
Fisiologa Mdica W Ganong El Manual Moderno 2002
An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997
Materiales y Reactivos:
Suero monoclonal Anti A
Suero monoclonal Anti B
Suero monoclonal Anti AB
Lmina excavada o lmina portaobjetos
Lancetas descartables
Muestra de sangre
Algodn y desinfectante
2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinacin macroscpica. La
aglutinacin se producir en unos pocos segundos. La lectura deber hacerse antes de que se seque la
mezcla. El tiempo mximo habitual es de tres minutos.
Fisher-Race Wiener
Dce Rho
DCe Rh1
DcE Rh2
Dce rh (hr)
dCe rh
dcE rh
dCE Rhy
DCE Rhz
Procedimiento:
En una lmina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema.
Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh. Mezclar bien. Observar
inmediatamente para ver si existe o no aglutinacin.
INTERPRETACIN:
Sangre total paciente + RESULTADO
Suero Anti- Rh (D)
Resultado:
La presencia de aglutinacin indica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA, demostrando que los
eritrocitos estn sensibilizados.
Ausencia de Aglutinacin: Test de Coombs Directo: NEGATIVO.
Interpretacin:
Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de:
Eritroblastosis Fetal ,Anemias Hemolticas Autoinmunes y sirve tambin para el diagnstico de
reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sangunea.
MUESTRAS Y
TUBO A TUBO B
REACTIVOS
Suero del Paciente
2 gotas 2 gotas
Receptor
Hemates del Dador
Suspensin al 2 % 2 gotas 2 gotas
En salina
Albmina Bovina
22%
---------- 2 gotas
Centrifugar (serofuga
s s
a 1000 rpm) 1 minuto
EXAMINAR ambos tubos por aglutinacin hemlisis.
Luego INCUBAR ambos tubos A y B, en BM a 37 C por 15 minutos
CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM. Lectura del tubo B por aglutinacin hemlisis.
Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0.9 %
Aadir suero de Coombs 2 gotas
Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min
Lectura por aglutinacin hemlisis
Interpretacin de Anticuerpos:
TUBO "A": detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO , MN, P, Lewis
TUBO "B": detecta incompatibilidad: Antic. Rh, Duffy, Kidd, Cellano y Antic.calientes.
PRCTICA SOBRE LA FISOLOGA DEL APARATO INMUNE
FUNDAMENTOS.-
La definicin contempornea del trmino inmunidad incluye todos aquellos mecanismos que le dan al
animal la capacidad de reconocer tanto los materiales extraos a su propio organismo para neutralizarlos,
eliminarlos o metabolizarlos sin injuria a sus propios tejidos.
Las respuestas inmunes pueden ser clasificadas en dos categoras:
a) Respuestas inmunolgicas especficas:
Estas respuestas dependen de la exposicin a una partcula o sustancia de configuracin extraa,
el subsecuente reconocimiento y la reaccin hacia ella.
b) Respuestas inmunolgicas no especficas:
Se producen siguiendo a una exposicin inicial y subsiguiente exposicin a una configuracin
extraa.
La seleccin en diferenciar lo propio de lo no propio no depende de un reconocimiento
especfico.
En la actualidad se consideran que las respuestas inmunolgicas sirven a tres funciones:
Defensa, sostenimiento de la homeostasis celular y vigilancia celular.
Funcin Naturaleza del Ejemplo Aberraciones
estmulo Hiper Hipo
Inmunolgico
Defensa Exgeno Microorganismos Alergia Deficiencia
Polen inmune
Homeostasis Endgena Remocin de clulas Enfermedad
celular Exgena viejas o daadas autoinmune:
Formacin de auto
anticuerpos
Artritis
reumatoidea, lupus.
Vigilancia Endgena Remocin de clulas Enfermedad
celular Exgena mutantes. maligna
La primera evidencia de la inmunidad especfica apareci en los vertebrados primitivos que presentan un
sistema linfoide diseminado (elasmobrnquios) que generan inmunoglobulinas M. posteriormente en los
anfibios apareci la inmunoglobulina G, en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se aaden la Ig D y
E.
Con la evolucin filogentico tambin aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificacin y
reforzamiento de la eficiencia de la resistencia como el sistema complemento.
Invertebrados Vertebrados
Amebas En lampreas, ciclstomos, peces de rio, etc. Anfibios Mamferos Ser humano
Fagocitosis Ig M Ig M Ig M Ig M
Ig G Ig G Ig G
IG A Ig A
Ig D
Ig E
Sistemas de Sistemas de
amplificacin amplificacin
biolgicas biolgicas
El rol fisiolgico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del husped es la sntesis de
anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infeccin y esto lo hace por medio de varios
mecanismos: opsonizacin, antitoxicidad, activacin del complemento, neutralizacin de los antgenos,
unindose al antgeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su accin ganndole la entrada a la
clula husped.
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
En la presente prctica tiene por objeto determinar la respuesta bursal en personas normales y en
pacientes con inmunodeficiencia por desnutricin, a travs de la determinacin cuantitativa de Ig A, Ig M,
Ig G empleando anticuerpos especficos que formen inmunocomplejos insolubles, turbios, y su medicin
espectrofotomtrica.
MATRIALES Y REACTIVOS.
PROCEDIMIENTO.-
Se repartir el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo:
Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A
Mesa 2: determinar en un suero normal la IgM
Mesa 3. determinar en un suero normal la Ig G
Mesa 4: determinar en la sangre de un sapo la Ig A (puncin intracardiaca con anticoagulante).
Mesa 5: determinar en el suero de un paciente desnutrido la Ig G.
Distribuir las muestras y reactivos segn los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina.
Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina debern ser diludas al 1/10 antes
de empezar a trabajar:
Suero problema: ----------------------------- -------------- 0.1 ml
Solucin salina fisiolgica: (9 por mil) ------------------ 0.9. ml
DOSAJE DE Ig A
Suero diludo 1/10 : 50 ul
Buffer IgA 900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig A 80 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.
Calcular la diferencia de absorbancia DO2 - DO1 correspondiente a cada muestra analizada. Interpolar el
valor de esta diferencia en la curva de calibracin para determinar la concentracin en mg/100 ml
correspondiente o multiplicar por el factor de calibracin .
DOSAJE DE LA Ig G
Suero diludo 1/10 : 40 ul
Buffer IgG 900 ul
Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego
agregar:
Antisuero anti Ig G 160 ul
Mezclar e incubar a temperatura ambiente
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.
El rin trata, dentro de ciertos lmites, de mantener una presin de filtracin eficiente mediante
mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente.
En 24 horas se filtran 180 litros de lquido por los glomrulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de
orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas.
No solamente hay reabsorcin de agua a nivel tubular sino tambin de muchas otras sustancias del filtrado
glomerular y que son tiles al organismo como glucosa, aminocidos, sodio, potasio, cloro, etc.
El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporcin que en el plasma sanguneo
exceptuando las protenas.
La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40.
Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la accin tubular el organismo perdera grandes cantidades
de agua, sales, elementos tiles como glucosa, aminocidos, etc. Junto con los productos finales del
metabolismo de las protenas como la urea, creatinina, cido rico, y otros.
Concepto de Clearance:
El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuracin o
limpieza y se entiende por Clearance o Depuracin renal de una sustancia al nmero de centmetros
cbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el rin. Si
una sustancia es nicamente filtrada por el glomrulo, y no reabsorbida, ni secretada por el tbuli, su
depuracin medir el nmero de ml que los glomrulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el
manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomrulo, pero no se reabsorben ni secretan por los
tbulis renales.
La depuracin de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina
en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en un ml de plasma.
Llamemos V el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recoleccin en minutos (cc/min.))
U a la concertacin de una sustancia x en orina mg/ml y
P a la concentracin de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml
SI MULTIPLICAMOS U x V , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1
min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIN SER: C=UxV
P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas.
Se escoge la CREATININA para medir la filtracin glomerular porque el manejo renal de este metabolito
es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuracin es una medida muy aproximada de la
filtracin glomerular, y se usa como ndice de funcin glomerular.
Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomrulo han sido liberados de toda su creatinina en 1
minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA: 1.65 m. le corresponde una ASC.
de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma segn la formula de Du Bois.
Procedimiento
Recolectar muestra de orina de 12 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si se recolecta en frasco
estril, la muestra guardada en refrigeracin puede durar 4 das. Medir exacto el volumen y tiempo de
recoleccin. Anotar
El mismo da de la recoleccin de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina srica.
4.- Clculos.
Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica
ademas por 100 (factor de dilucin de la orina).
Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los clculos
Por ejemplo:
U = CrO en mg/ml
V = Vol. Min ml/min
P = Crs mg/ml
Valores Referenciales
Depuracin de Creatinina endgena:
Definiciones previas.-
Posm: Es la concentracin osmolar plasmtica, normalmente puede variar desde 280 a 290 mOsm/Kg
agua, es la concentracin de solutos en el plasma.
Uosm: Es la concentracin Osmolar urinaria concentracin de solutos en la Orina u osmolaridad
Urinaria. Generalmente la orina es tres veces ms concentrada que el plasma. El rin reabsorbe agua
hasta concentrar el filtrado glomerular unas tres veces ms que osmolaridad plasmtica. Los valores
normales pueden variar desde 50 hasta casi 1200 mOsm/Kg. agua.
Uosm x V: Es la excrecin de solutos por minuto, es la cantidad de solutos osmticos activos excretados
por minuto.
Cosm: Depuracin Osmolar: Uosm x V / Posm
Es el volumen de plasma que es depurado de sus solutos en la unidad de tiempo.
Representa la tasa a la cual las sustancias osmticas activas son aclaradas depuradas del plasma. La
depuracin basal endgena en el hombre tiene un rango del 1 al 3 % del filtrado glomerular.
CH2O: Es depuracin de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto.
Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar:
CH2O = V Cosm
La depuracin de agua libre es ese ncleo de agua en la orina en exceso de su depuracin osmolar.
Durante la diuresis de agua caracterizada por la excrecin de gran volumen de orina diluida debido a la
gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la inhibicin de la hormona antidiurtica de la neurohipfisis.
Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duracin magnitud, la orina consiste de una mezcla de
agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuracin osmolar,
mas un vol. de agua osmticamente libre, es agua libre de solutos, literalmente es agua qumicamente
pura, representada por CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos trminos:
V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V Cosm
CONCEN
Prueba TRACIN
Supres
De lquidos
30 30 3a 18 295 ------
25 55 4a 200 ----
20 75 5a 190 ----
22 97 6a 209 294 ----
20 117 7a 140 ----
18 135 8a 126 ----
15 150 9a 38 290 ----
EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el rin es la EXCRECION DEL H+ EN LA
FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGNESIS, a partir del NH3 de la glutamina o los
aminocidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lo tanto proviene de las
clulas del tbuli renal. Sin embargo su excrecin no es rpida sino tarda y solo empieza a funcionar
despus de un lapso prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por
medio de la excrecin del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual con el NH3
proveniente de la desaminacin de aminocidos o de la glutamina, se excreta como NH4+.
AMONIOGNESIS:
El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias cidas: NH3 + H+ NH4
Se conserva sodio por medio de la excrecin de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+
EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4)
TEST DE SOBRE CARGA CIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres das)
Un da antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulacin Basal. Luego se le prescribe
una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres das consecutivos y se va
recolectando la orina de 24 horas cada da, durante tres das. En cada una de las muestras de orina se
medir el volumen y el pH, Acidez de titulacin fosftica y acidez amoniacal. Se determinar el pH
sanguneo basal y al final del test.
Na2HPO4 + H+ NaH2PO4
Sal ms cida y baja el pH hasta
menos de pH 5.4 en la orina.
En nuestra prctica solamente haremos una prueba de corta duracin (2 horas) del siguiente modo:
Procedimiento
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 400 ml de una solucin de Cloruro de amonio al 0.5% en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante dos
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento con
formol taponado:
Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta rosado.
Anotar gasto.
Corresponde a la acidez del Fosfato cido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+
Luego aadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal.
Hacer la sumatoria de acidez fosftica + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol
/ litro. Calcular la Depuracin de Hidrogeniones.
Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior
sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fra por kilo de peso corporal
as:
Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de
orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba.
Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos.
Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante 2
horas.
Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas.
Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal
urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la
acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los clculos tambin se harn
exactamente iguales al caso anterior.
CLCULOS:
En la prctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuracin de una sustancia, entonces si
hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen
minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y adems se conocemos el pH
sanguneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuracin
del in Hidrgeno.
CONCLUSIONES:
En la condicin Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min
En la Acidosis como la concentracin de H+ urinaria es mucho mayor que la sangunea
tendremos: Dep H+ ser > Vol. min.
en la Alcalosis ser la inversa: Vol. min. > Dep H+
Para estos clculos recordar que: D=UxV/P
y pH = -log (H+)
(H+) = antilog pH
-pH
(H+) = 10
INVESTIGACIN DE GLUCOSA
Reaccin de Benedict Cualitativa: Por reduccin del cobre el solucin alcalina y calor.
Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Aadir 0.3 ml orina
Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min.
Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo
Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado.
Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas.
Referencias Bibliogrficas:
Libro: Fisiologa Renal, Autores Manuel y Carlos Ramrez Velasco
Editorial Escomel. Arequipa. Per. 1a Ed. 1988.
Libro: Fisiologa Medica Guyton 1996
Physiology and Kidney Diseases, Brow, Londiniun EdCo.2002. First Ed.
ROL FISIOLGICO DE LA PTIALINA (DIGESTIN DEL ALMIDN)
Fundamento Fisiolgico
El alimento en la boca se mezcla con la saliva lo cual se favorece por la masticacin que fragmenta las
partculas grandes de alimentos y mezcla a ste con las secreciones de las glndulas salivales. En las
glndulas salivales los grnulos secretorios (cimgeno) que contienen las enzimas salivales se descargan
en los conductos a partir de las clulas acinosas. Diariamente se secretan 1500 ml. de saliva y el pH es
ligeramente menor de 7.0, pero se aproxima a 8.0 durante la secrecin activa. La saliva contiene dos
enzimas digestivas: la lipasa lingual, secretada por la glndula de la lengua, y la alfa amilasa salival
(ptialina) secretada por las glndulas salivales. La saliva tambin contiene mucinas, que son
glucoprotenas lubricantes del alimento y protectoras de la mucosa oral. Adems contiene IgA,
inmunoglobulina que viene a ser la primera defensa inmunitaria contra bacterias y virus. La alfa amilasa
salival ataca al almidn. Sin embargo, el pH ptimo para esta enzima es de 6,7 y su accin es inhibida por
el jugo gstrico cido en el momento del ingreso del alimento al estmago. El activador de la amilasa
salival es el cloro; siendo su substrato el almidn hidroliza los enlaces alfa 1 - 4 para producir dextrinas,
alfa-limitantes, maltotriosas y maltosa, siendo esta funcin hidroltica la accin cataltica que
estudiaremos en la presente prctica. El almidn, polmero de la glucosa da color azul con la solucin de
yodo. El almidn est constituido por un 15% - 20% de amilosa y un 80% - 85% de amilopectinas.
Objetivo
Estudiar la accin de la amilasa sobre el almidn y determinar los substratos y productos de la actividad
alfa-amilsica salival y el efecto del pH y activador enzimtico sobre esta reaccin enzimtica digestin
hidroltica.
Procedimiento
Digestin del substrato por la alfa-milasa salival:
Tubo No. 1 2 3 4
Sol. almidn 1 % ml. 2,0 2,0 2,0 2,0
Tampn fosfato pH 6,8 ml. 1,0 1,0 1,0 ----
HCI 0,3 N ml. ---- ---- ---- 3,4
CIN a 0,9% ml. 3,0 2,4 ---- ----
Agua destil. ml. ---- ---- 2,4 ---
Bao Mara 37 C x 5'(Pre-
incubacin,no aadir saliva si si si si
todava
Despus de los 5 minutos,recin aadir: ----
Sol. amilasa salival ( diluda 1/20) ml. 0,6 0,6 0,6
Bao Mara 37C x 20' si si si si
Luego se determinarn los substratos remanentes y los productos de degradacin intermedia del almidn
en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.
A. DETERMINACION DEL SUSTRATO
TUBOS N 5 6 7 8
DIGERIDO DEL TUBO 1:ml 0.5 - - -
DIGERIDO DEL TUBO 2:ml - 0.5 - -
DIGERIDO DEL TUBO 3:ml - - 0.5 -
DIGERIDO DEL TUBO 4:ml - - - 0.5
HCl 0.05 N : mI 5 5 5 5
Sol. De Lugol: mI 0.5 0.5 0.5 0.5
TUBOS N 9 10 11 12 13
Procedimiento
Identificacin de las Muestras I II III IV V
Descripcin de los tiempos Primera Inyectar 0 a 15 15 a 30 30 a 45 45 a 60
Muestra Antihistamnico y min. min. min. min.
(Basal) luego Histamina
Pentagastrina
CALCULOS:
Ejemplo: Se gast 2.40 ml en la titulacin de una de las muestras
Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulacin indica 0.1 mEq. H+
2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarn ------------ X mEq. H+
En este caso hemos calculado la concentracin cida expresada en mEq.H+/cada litro de jugo gstrico,
estas son unidades de expresin qumica en rigor. Pero en fisiologa expresamos la acidez en dbito acido
Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado, por ejemplo cada 24 horas.
En el ejemplo anterior encontramos 0.24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gstrico usado, si en los
primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gstrico tendremos:
Esto se llama debito acido. Y es el dbito acido de los primeros 15 minutos, asi continuaremos en la
misma forma calculando el dbito acido para los 30, 45 y 60 minutos. La sumatoria de estos 4 valores ser
por consiguiente el dbito acido/ hora o gasto acido de la clula parietal.
Valores Referenciales
1. Introduccin
El esfago, el estmago y los intestinos tienen inervacin parasimptica predominante. La acetilcolina es
el neurotransmisor de este sistema y acta como un agonista de la motilidad intestinal.
2. Material
Equipo para rganos aislados
Conejo Algodn embebido en aceite
Quimgrafo Acetilcolina
Equipo de diseccin Pilocarpina
Solucin de Ringer para mamiferos Adrenalina
Suero fisiolgico Atropina
Baomara a 40 C Tesmostato
Baln de oxgeno
3. Mtodo
3.1. Experimento No. 1
Se sacrifica al animal y se realiza una laparotoma para resecar una segmento de intestino delgado de unos
20 centmetros. Se marca el extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiolgico, se le
sumerge en un bao de solucin de Ringer a 40 C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimgrafo. Se
mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante.
Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1.
.
3.2. Experimento No. 2
Se aade unas gotas de acetilcolina en el baornara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo.
4. Discusin
MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL
Objetivo
El objeto de esta prctica es estudiar los movimientos peristlticos rtmicos del aparato gastrointestinal y el
control que el Sistema Nervioso Autonmico tanto Simptico como Parasimptico ejercen sobre la
motilidad gstrica e intestinal; adems demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y
adrenalina sobre las funciones de contraccin y relajacin de la musculatura lisa gastrointestinal.
Introduccin
La actividad motora del estmago est gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervacin redes
de fibras nerviosas: una intrnseca a la va gastrointestinal y otra extrnseca.
a.-La inervacin intrnseca del estmago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientrico de
Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a travs de toda
la va intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como
este sistema es continuo entre el estmago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del
bulbo duodenal.
b.- La inervacin extrnseca es autonmica dual y proviene del Sistema Nervioso Autnomo: la Simptica
de actividad noradrenrgica inhibidora, va plexo celaco; y la Parasimptica de actividad colinrgica
excitatoria, va del Nervio Vago.
La inervacin simptica inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfnteres; y la parasimptica estimula la
contraccin de la fibra m. lisa pero relaja los esfnteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad
motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrnseco.
Existe adems un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estmago dentro de la capa
muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gstricas
y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo elctrico basal (REB) de una frecuencia de 3/min. y una
velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estmago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando
pasa por el antro.
El sistema nervioso entrico se conecta con el SNC mediante fibras simpticas y parasimpticas, pero es
capaz de funcionar de manera autnoma sin estas conexiones. El plexo mientrico inerva las capas de
msculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo
submucoso inerva el epitelio glandular, las clulas intestinales endocrinas y los vasos sanguneos de la
submucosa y adems est involucrado sobre todo en el control de la secrecin intestinal. Los
neurotransmisores en el sistema nervioso entrico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina,
Gaba, ATP, Oxido ntrico, CO y numerosos pptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropptido Y,
VIP, etc.
El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el
contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la va gastrointestinal desde el esfago hasta el
recto. Esta elongacin inicia una onda de contraccin circular detrs del estmulo y una de relajacin en el
frente de ste. Esta onda de contraccin se mueve en direccin oral-caudal para impulsar hacia adelante
los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg.
Aunque la actividad peristltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autnoma del
intestino, su presencia es independiente de la inervacin extrnseca.
El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo
mientrico. Las neuronas colinrgicas que pasan en direccin retrgrada en este plexo mientrico activan a
las neuronas liberadoras de la sustancia P, as como de acetilcolina y dan lugar a la contraccin del
msculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en direccin antergrada activan a las neuronas
secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajacin que precede al estmulo.
El REB del msculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este
REB se inicia en las clulas intersticiales de Cajal, que son clulas mesenquimatosas estrelladas similares
al msculo liso y actan como marcapasos, estas clulas de Cajal envan mltiples prolongaciones hacia el
msculo liso intestinal. .El REB por s solo rara vez produce contraccin muscular, pero los potenciales de
espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la
tensin (contraccin) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las
repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo
elctrico basal por ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensin (contraccin de la
F m lisa) en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensin. En el estmago la
frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol
fisiolgico del REB es coordinar la actividad peristltica y otras actividades motoras gastrointestinales.
Las contracciones se producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una
vagotoma el peristaltismo estomacal de hace irregular a veces catico. La motilidad gastrointestinal y la
secrecin es regulada tambin por polipptidos biolgicamente activos que son segregados por las clulas
nerviosas y las clulas glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama
hormonas gastrointestinales, aunque sus efectos fisiolgicos son discretos, sin embargo sus alteraciones
pueden producir enfermedades del trnsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras).
Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos:
Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK ( CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina)
Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona.
Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.
Materiales, equipos, animales de experimentacin y reactivos.- Para cada mesa de trabajos prcticos:
Materiales: Reactivos:
01 sapo vivo Solucin de Ringer para anfibio fresca a 30 C
Tabla de corcho para soporte y fijacin anfibio Col. Azul de metileno
Alfileres para sujecin extremidades Sol. Acetilcolina 1%
01 par guantes descantables Sol. Adrenalina 1%
Equipo de diseccin quirrgico Sol. Atropina 1%
Estilete para seccin medular y tijera, algodn Prostigmine (Neostigmina): 0.5 mg / 1ml ampolla
04 jeringas descartables de 3 ml parasimpticomimtrico.
01 Aguja descartable de 18 G x 1
01 Aguja descart. doblada en 90
3 hilos blancos de 15 cm. largo N 50 para las
ligaduras
Cnula de vidrio 2mm dim. ad-hoc
Procedimiento
l.- El alumno realizar la preparacin de sapo espinal segn lo aprendido para producir el shock espinal en
el sapo (Ver prctica de reflejos en animal espinal) y realizar la hemostasia con algodn por compresin.
2.- Diseccin: Sujetar luego el animal en posicin decbito dorsal en la tabla de fijacin con los alfileres y
realizar un corte en toda la lnea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo.
3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estmago cardias, estmago, ploro e
intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristlticos espontneos del
estmago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos
mecnicamente.
4.- Con un algodn mojado en Ringer-Batracio a 30 mantener en todo momento la preparacin bien
hmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer.
5.- Aplicar sobre el estmago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en
el orden: a, b, c, d, e siguiente:
a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer
e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer.
Graduar las observaciones visuales de relajacin o contraccin con cruces, comparando con los
movimientos peristlticos espontneos del inicio del experimento.
Conclusiones y Comentario
EFECTOS DE LA HORMONA TIROIDE EN RATONES
Introduccin
EI trabajo biolgico tiene como fuente de energa a los enlaces intramoleculares y puede ser medido en
condiciones de actividad o reposo. A esta ltima condicin se le denomina METABOLISMO
BASAL, que puede ser medido directamente por el mtodo calorimtrico o indirectamente por el
consumo de oxgeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxgeno por los tejidos y
la produccin de calor por el organismo. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares.
En humanos, extirpacin de la glndula tiroidea disminuye el consumo de oxgeno a cifras inferiores, del
30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxgeno.
EI aumento o disminucin del metabolismo basal a partir de la determinacin del consumo de oxgeno se
emple como un mtodo diagnstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. En los sujetos
hipertiroideos con sintomatologa definida el metabolismo basal est incrementado en 40 a 60% y puede
superar ms del 100%. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea
grasas para cubrir las necesidades metablicas. Este produce prdida de peso y aumento de la temperatura
corporal. Debido a que los mecanismos de disipacin de calor estn sobrecargados, los sujetos
hipertiroideos toleran muy mal los ambientes clidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia
cardiaca y la presin arterial sistlica.
EI sujeto hipotiroideo presenta sntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura inferior a la normal,
depsito de grasa y reacciones lentas.
En la presente prctica se comparar los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con
ratones eutiroideos ( normales).
Diez a quince das antes del experimento se toma ratones machos adultos jvenes, de la misma edad y
similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los
ratones sern pesados todos los das.
EI ratn hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratn hipotiroideo recibe diariamente
1.25 g de metimazol.
Material
Ratones
Jaulas
Jaulas cmaras
metab1icas
Cal sodada
Metimazol
Levotiroxina
Termmetro
Plastilina
Mtodo
Experimento N 1
Se coloca en tres jaulas metab1icas a un ratn eutiroideo, uno hipertiroideo y uno hipotiroideo.
Las jaulas o cmaras metab1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los animales reciban
luz, ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los
movimientos bruscos.
Se coloca un termmetro dentro de cada jaula metablica. Se espera cinco minutos para que se equilibre la
temperatura dentro de la jaula y se registra.
Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa.
Se coloca una pelcula de espuma de jabn al final de la pipeta y se observara como, a que medida que el
animal va consumiendo el oxgeno, la pelcula de jabn va moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO2
producido ser absorbido por la cal sodada.
Con un cronmetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los
segundos en fraccin centesimal.
A continuacin se calcula en consumo de oxgeno por minuto del animal y se convierte litros por hora.
Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de
acuerdo a la siguiente frmula:
o
Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)]
Donde:
Vol = L/h
Pb= presin baromtrica.
PH2O= presin de vapor de agua Ts= temperatura del aparto
EI valor cal6rico del oxigeno varia segn el cociente respiratorio. Con una dieta promedio el cociente
respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxgeno es 4.8 Kcal/l, por 1o que el nmero de caloras
por hora ser:
S=K x W 2/3
o
S = K x logW X 2/3
Donde:
S = superficie corporal
K = constante de von Muralt
Hombre 12.3
Conejo 11.2
Caballo 8.5
Ratn 11.4
EI metabolismo es igual:
Metabolismo = (cal/h) / S en m2
o
Metabolismo = cal/m2/h
(60 seg ) (1 ml de O2 )
xml O2 1,5 ml de O2 / min
40 seg
2) Consumo de O2, en ml/h , en condiciones ATPS
El ratn consume 1,5 ml de oxgeno en 1 min
El ratn consumir x ml de oxgeno en 60 min
(0,376Kcal ) (1m 2 )
X Kcal/m2/h= N2
37,6 Kcal / mm m 2 / h (RESPUESTA)
0,01m
Luego viene la IMPLANTACION del blastocisto en mucosa uterina a los 6 das de la fecundacin;
Luego numerosas clulas del citotrofoblasto se convertirn en sincitio trofoblasto y ste en el Corion
Liso y otras corion frondoso o velocidades , es el Corion velloso.. As la Placenta tendr dos partes Fetal
(Corion ) y Materna (mucosa uterina). Veamos pues las figuras para mejor repasar la embriologa del
CORION , antes de entrar a la Fisiologa de la hormona hCGH: Son 4 figuras de la Embriologa :
Fig N 1
FIG N 1
Fig N 2
FIG N 2
Figura N3
Fig N
3
Fig N 4
El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA, hCG , Relaxina,
Somatotrofina o Lactgeno placentario humano (HPL)
Fig.
4
TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Introduccin
La glicemia en condiciones basales, vara entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes
mellitus se presenta elevacin de la glicemia en ayunas
En la prctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de
Tolerancia a la glucosa..
Material
Sujeto de prueba en ayunas.
Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua ms zumo de tres limones.
Glucmetro "Glucotrend" con las cintas reactivas.
Balanza.
Tallmetro.
Tubos de prueba.
Pipetas.
1 fiola de 100 ml.
Matraz de 1000 ml.
Reactivos para anlisis de glucosa en orina:
Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g
Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato
de sodio (cristalizado) 200.0 g
Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml
Peso previo:
Colocar el chip del glucmetro.
Encender y ver el nmero de cinta reactiva que reconoce para su uso.
Colocar la tira reactiva en el glucmetro para su reconocimiento.
Mtodo
Experimento N 1
Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas.
Hacer una determinacin de glicemia en ayunas y despus administrar una solucin de 75 gr de glucosa.
Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultnea buscar
presencia de glucosa en orina. Construir el grfico correspondiente.
Introduccin
En la prctica la Diabetes Mellitus se presenta en dos modalidades. Insulina Dependiente (tipo 1) e
Insulina No Dependiente (tipo 2). Estudiaremos la Diabetes de Tipo I por medio de la destruccin
experimental de las clulas beta del pncreas por medio de la administracin intraperitoneal de una
sustancia txica Alloxan en la rata , es la Diabetes experimental. Diferenciaremos la glucosuria diabtica
de la glucosuria renal y para ello emplearemos adems, en esta prctica otra sustancia txica, el Phlorizin
(Floricina) que es un glucsido que provoca glucosuria en el mamfero . La floricina es un veneno
enzimtico que disminuye la cantidad de energa disponible para el transporte activo de la glucosa desde la
luz del tbuli proximal al interior de la clula tubular y desde sta a la sangre y disminuye la reabsorcin
tubular de glucosa., es decir, intoxica al tbul renal produciendo glucosuria renal, (que es una afeccin
tubular en la cual aparece glucosa en la orina con niveles normales de glucosa en la sangre). Sabemos que
los estudios con micropuncin han demostrado que la glucosa es reabsorbida completamente en el tubo
proximal y su depuracin es cero. La administracin del txico floricina produce aclaramiento de la
glucosa y esta tasa de aclaramiento de la glucosa va aumentando hasta igualar a la inulina, esto
demuestra que la floricina disminuye la reabsorcin tubular de glucosa y puede llegar a producir un
bloqueo completo de la reabsorcin tubular de la glucosa y as se explica presencia de glucosuria renal
por floricina. En la Diabetes Mellitus el orgen de la glucosuria es diferente siendo el mecanismo primario
la hiperglicemia y cuando la glucosa en el plasma va incrementando hasta llegar a un nivel en que las
clulas tubulares proximales alcanzan su mxima capacidad de reabsorcin de la glucosa; y es cuando la
carga de glucosa filtrada por los glomrulos rebasa la capacidad mxima de reabsorcin de los tbulis que
aparece glucosa en la orina. El valor medio de la TmG es de 375 mg/min/1.73 m2 para los hombres y 303
mg/min/1.73 m2 para las mujeres.
En la Diabetes Mellitus existe un nivel elevado previo de glucosa en la sangre antes de que aparezca
glucosuria.