Tesis - Maestria - Francisco Javier Luna - Prunus Serotina

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO
FACULTAD DE QUMICA
PROGRAMA DE POSGRADO EN ALIMENTOS DEL

CENTRO DE LA REPBLICA
Caracterizacin qumica y farmacolgica de

compuestos vasorrelajantes no polares presentes
en el fruto de Prunus serotina
TESIS
Que como parte de los requisitos para obtener el grado de:
Maestro en Ciencia y Tecnologa de Alimentos
Presenta:
Q.F.B. Francisco Javier Luna Vzquez
Dirigida por:
Dra. Alejandra Rojas Molina
Santiago de Quertaro, Qro. Octubre de 2009
i
ii
Resumen
Los frutos y las hojas de Prunus serotina (capuln) son utilizados en la
medicina tradicional para el tratamiento de la diarrea, la tos y la hipertensin. A la
fecha, no se cuenta con suficiente informacin fitoqumica y farmacolgica sobre
esta especie. Recientemente, se encontr que el aceite esencial y los extractos no
polares obtenidos del fruto presentaron un efecto vasorrelajante significativo,
sugiriendo la presencia de compuestos vasodilatadores no polares. En el presente
trabajo se realiz el estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano
obtenido a partir del fruto de esta especie, empleando tcnicas cromatogrficas.
Adicionalmente, se realiz el anlisis del aceite esencial, mediante cromatografa
de gases acoplada a espectrometra de masas. Los compuestos purificados se
analizaron por mtodos espectroscpicos y espectromtricos. El efecto
vasorrelajante se evalu en el modelo de aorta aislada de rata, empleando un
polgrafo Grass 7D. Las curvas concentracin-respuesta se ajustaron a una
ecuacin sigmoidal, utilizando el programa Prisma 5.0. Para determinar las
diferencias significativas entre las curvas se utiliz la prueba de Tukey. El estudio
fitoqumico condujo a la purificacin del -sitosterol, el cido urslico, el uvaol y el
aldehdo urslico. Este trabajo constituye el primer reporte de la presencia de
estos metabolitos en el fruto del capuln. Por otra parte, el anlisis del aceite
esencial indic la presencia de 58 compuestos, entre los que se encuentran el
alcohol benclico, el benzaldehdo, el cinamaldehdo y el alcohol cinmico como
componentes mayoritarios. La evaluacin farmacolgica indic que estos
metabolitos inducen una relajacin de la aorta aislada de rata. El alcohol cinmico
fue el compuesto ms potente. La caracterizacin del mecanismo de accin indic
que el alcohol benclico y el benzaldehdo inducen una vasorrelajacin,
independiente de endotelio, mediante la activacin de canales de potasio. El
cinamaldehdo presenta un mecanismo independiente de endotelio que involucra
una activacin de la guanilato ciclasa. El alcohol cinmico induce una
vasodilatacin dependiente e independiente de endotelio. Esta ltima, mediante la
estimulacin de la guanilato ciclasa y la activacin de los canales de potasio. Esta
tesis presenta la primera descripcin del mecanismo de accin vasorrelajante del
alcohol benclico, el benzaldehdo y el alcohol cinmico.
(Palabras clave: Prunus serotina, aorta de rata, vasorrelajante, cido

urslico, uvaol, benzaldehdo, alcohol benclico, alcohol cinmico, cinamaldehdo)
i
Summary
The fruits and the leaves of Prunus serotina (capulin) are used in
traditional medicine for treating diarrhea, cough, and hypertension. This species
has been the subject of few phytochemical and pharmacological studies. Previous
analysis indicated that non-polar extracts and the essential oil prepared from the
fruits exhibited a significant relaxation of arterial smooth muscle, suggesting the
presence of non-polar vasorelaxing compounds. In this research we carried out a
bioactivity guided fractionation of the dichloromethane extract prepared from P.
serotina fruits, employing chromatographic techniques. In addition, the essential oil
was analyzed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The
structures of the isolated compounds were elucidated by spectroscopic data
measurement. The vasorelaxant effect was evaluated in the isolated rat aorta
model, employing a 7D Grass polygraph. Concentration-response curves for the
tested were adjust to the sigmoidal concentration-response equation using the data
analysis and graphics program Prism 5.0. Statistical differences between the
concentration-response curves were analyzed by the Tukey test. The
phytochemical study led to the purification of -sitosterol, ursolic acid, ursolic
aldehyde and uvaol. These compounds are being reported from the fruits of P.
serotina for the first time. On the other hand, chromatographic analysis of the
essential oil allowed the detection of 58 compounds. The major compounds are
benzyl alcohol, benzaldehyde, cinnamyl alcohol, and cinnamaldehyde. The
pharmacological evaluation showed that those metabolites induced a
concentration-dependent relaxation of rat aorta. The most powerful vasorelaxant
effect was observed for cinnamyl alcohol. Benzaldehyde and benzyl alcohol
elicited an endothelium independent vasorelaxing effect that involves activation of
potassium channels. On the other hand, cinnamaldehyde evoked an endothelium
independent vasodilator effect, activating soluble guanylyl cyclase. Whereas,
cinnamyl alcohol induced an endothelium dependent and independent
vasorelaxing effect. The endothelium independent one implies guanylyl cyclase
stimulation and activation of potassium channels. This work shows the first
description of the mechanism of action vasorelaxant of benzyl alcohol,
benzaldehyde and cinnamyl alcohol.
(Key words: Prunus serotina, rat aorta, vasorelaxant, ursolic acid, ursolic
aldehyde, uvaol, benzyl alcohol, benzaldehyde, cinnamyl alcohol, cinnamaldehyde)
ii
Dedicatoria
A los compaeros de camino

que han permanecido conmigo a travs de los aos
iii
Agradecimientos
Al CONACyT, por la beca otorgada para la realizacin de este proyecto

de investigacin.
Al Dr. Fausto Rivero Cruz y a la Unidad de Servicios de Apoyo a la

Investigacin de la UNAM, por su valiosa colaboracin.
A los investigadores y personal del PROPAC que directa o indirectamente

participaron en llevar a trmino este trabajo; particularmente a la Dra. Sandra
Mendoza Daz y el Dr. Eduardo Castao Tostado.
A los miembros de mi comit de tesis, especialmente al Dr. Edmundo

Mercado Silva, por sus valiosas observaciones y sugerencias a este trabajo.
A la Dra. Alejandra Rojas Molina y el Dr. Csar Ibarra Alvarado, por

compartir este gran proyecto conmigo, por su entusiasmo y su confianza.
iv
ndice
Resumen ...................................................................................................................... i
Summary ...................................................................................................................... ii
Dedicatoria .................................................................................................................. iii
Agradecimientos .......................................................................................................... iv
ndice ........................................................................................................................... v
ndice de cuadros ...................................................................................................... viii
ndice de figuras .......................................................................................................... ix
I. INTRODUCCIN ...................................................................................................... 1
II. ANTECEDENTES ................................................................................................... 4
2.1 Estudios qumicos realizados sobre especies del gnero Prunus .............................. 4
2.2 Prunus serotina ......................................................................................................... 5
2.2.1 Taxonoma, caractersticas morfolgicas y distribucin ............................... 5
2.2.2 Usos de P. serotina en la Medicina Tradicional Mexicana ........................... 8
2.2.3 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos realizados sobre P. serotina por
otros grupos de trabajo ........................................................................................ 8
2.2.4 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos realizados sobre P. serotina por
nuestro grupo de trabajo .................................................................................... 12
2.3 Enfermedades cardiovasculares: incidencia y etiologa ........................................... 18
2.4 Fisiologa de los vasos sanguneos ........................................................................ 19
2.4.1 Estructura de la pared vascular ................................................................. 19
2.4.2 Endotelio .................................................................................................. 20
2.4.2.1 Estructura y funciones del endotelio vascular ......................................... 20
2.4.2.2 Factores relajantes derivados del endotelio............................................ 22
2.4.2.3 Mecanismo de relajacin de la musculatura lisa vascular ....................... 24
2.4.2.4 Factores vasoconstrictores derivados del endotelio ............................... 25
2.4.3 Msculo liso .............................................................................................. 27
2.4.3.1 Mecanismo de contraccin de la musculatura lisa vascular .................... 27
2.4.4 Matriz extracelular ..................................................................................... 28
2.4.5 Tnica adventicia ...................................................................................... 28
III. JUSTIFICACIN .................................................................................................. 29
IV. HIPTESIS .......................................................................................................... 31
v
V. OBJETIVOS .......................................................................................................... 31
5.1 Objetivo general ...................................................................................................... 31
5.2 Objetivos especficos ............................................................................................... 31
VI. MATERIALES Y MTODOS ................................................................................ 33
6.1 Especmenes biolgicos .......................................................................................... 33
6.1.1 Material vegetal ......................................................................................... 33
6.1.2 Animales ................................................................................................... 33
6.2 Compuestos qumicos y solventes........................................................................... 33
6.3 Recoleccin y preservacin del material vegetal ..................................................... 34
6.4 Evaluacin farmacolgica y anlisis cromatogrfico preliminar de los extractos de
diclorometano y hexnico del fruto de P. serotina .......................................... 34
6.4.1 Preparacin de los extractos no polares del fruto de P. serotina .............. 34
6.4.2 Evaluacin farmacolgica de los extractos de diclorometano y hexnico .. 34
6.4.3 Anlisis cromatogrfico preliminar de los extractos de diclorometano y
hexnico ............................................................................................................ 35
6.5 Estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano del fruto de P. serotina
........................................................................................................................ 35
6.5.1 Fraccionamiento biodirigido del extracto ................................................... 35
6.5.2 Anlisis cromatogrfico de las fracciones .................................................. 36
6.5.3 Evaluacin farmacolgica de las fracciones .............................................. 36
6.5.4 Purificacin de los compuestos bioactivos................................................. 36
6.6 Determinacin de la estructura qumica de los compuestos purificados .................. 37
6.7 Anlisis qumico del aceite esencial......................................................................... 37
6.7.1 Obtencin del aceite esencial .................................................................... 37
6.7.2 Anlisis del aceite esencial por cromatografa de gases acoplada a
espectrometra de masas ................................................................................... 38
6.8 Evaluacin farmacolgica: ensayo de aorta aislada de rata..................................... 38
6.8.1 Equipo ....................................................................................................... 38
6.8.2 Solucin fisiolgica empleada en el ensayo de aorta aislada de rata ........ 38
6.8.3 Preparacin de las muestras para el ensayo de aorta aislada de rata ....... 38
6.8.4 Ensayo de aorta aislada de rata ................................................................ 39
6.9 Elucidacin del mecanismo de accin vasorrelajante de los compuestos puros:
determinacin de la participacin de la va del NO/GMPc y la activacin de los
canales de potasio ........................................................................................... 40
vi
VII. ANLISIS ESTADSTICO ................................................................................... 43
VIII. RESULTADOS ................................................................................................... 44
8.1 Evaluacin farmacolgica y anlisis cromatogrfico preliminar de los extractos de
diclorometano y hexnico del fruto de P. serotina .......................................... 44
8.2 Estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano .................................. 45
8.2.1 Fraccionamiento secundario de la fraccin PD-III...................................... 47
8.2.2 Fraccionamiento secundario de la fraccin PD-IV ..................................... 49
8.2.3 Obtencin del -sitosterol a partir de la fraccin no activa PD-I ................. 49
8.3 Evaluacin farmacolgica de los compuestos purificados........................................ 51
8.4 Obtencin del aceite esencial de los frutos de P. serotina ....................................... 52
8.5 Identificacin de los componentes del aceite esencial del fruto de P. serotina......... 53
8.6 Evaluacin del efecto de los componentes del aceite esencial sobre el tono de la
aorta intacta aislada de rata ............................................................................. 55
8.7 Evaluacin del efecto del alcohol benclico, el benzaldehdo, el cinamaldehdo y el
alcohol cinmico sobre el tono de la aorta aislada de rata libre de endotelio ... 56
8.8 Evaluacin de la participacin de la va del NO/GMPc ............................................ 59
8.9 Evaluacin de la participacin de la activacin de los canales de potasio ............... 62
IX. DISCUSIN ........................................................................................................ 67
X. CONCLUSIONES ................................................................................................. 76
XI. BIBLIOGRAFA .................................................................................................... 78
ANEXO 1 ................................................................................................................... 89
vii
ndice de Cuadros
Cuadro Pgina
2.1 Clasificacin taxonmica de P. serotina 5
2.2 Principales metabolitos secundarios aislados e identificados en P. serotina 9
2.3 Valores de EC50 y Emax del efecto vasorrelajante inducido por los 13
compuestos purificados a partir de las hojas de P. serotina
8.1 Resumen del fraccionamiento primario del extracto de diclorometano por
cromatografa en columna al vaco en gel de slice 46
8.2 Porcentajes de relajacin inducidos por las fracciones primarias del
extracto de diclorometano obtenido a partir del fruto de P. serotina 47
8.3 Constantes espectroscpicas del uvaol 48
8.4 Constantes espectroscpicas del cido urslico 48
8.5 Constantes espectroscpicas del aldehdo urslico 49
8.6 Constituyentes del aceite esencial del fruto de P. serotina 54
8.7 Valores de EC50 y Emax del efecto vasorrelajante del alcohol cinmico,
cinamaldehdo, alcohol benclico, benzaldehdo y YC-1 sobre aorta intacta
aislada de rata 55
viii
ndice de Figuras
Figura Pgina
2.1 El rbol de P. serotina y su fruto 7
2.2 Efecto vasorrelajante sobre la aorta de rata de las fracciones de
metanol, acetato de etilo y diclorometano obtenidas de las hojas
de P. serotina 13
2.3 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador de la
acetilcolina, empleada como control positivo, el hipersido, la
prunina y el cido urslico en segmentos de aorta intactos de rata 14
2.4 Curvas-concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los
extractos de CH2Cl2 de las diferentes recolectas de los frutos de
P. serotina en segmentos de aorta intactos de rata 16
2.5 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los
aceites esenciales de las diferentes recolectas de los frutos de P.
serotina en segmentos de aorta intactos de rata 17
2.6 Mecanismos de transduccin iniciados por los factores relajantes
derivados de endotelio en la clula de msculo liso arterial 26
6.1 Esquema general del estudio fitoqumico biodirigido del extracto
de diclorometano obtenido a partir del fruto de P. serotina 41
6.2 Esquema general de trabajo para la obtencin, anlisis y
elucidacin del me8.15canismo de accin de los componentes
bioactivos del aceite esencial obtenido del fruto de P. serotina 42
8.1 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los
extractos de diclorometano y hexnico obtenidos a partir del fruto
de P. serotina 45
8.2 Efecto vasorrelajante de las fracciones primarias obtenidas a
partir del extracto de diclorometano del fruto de P. serotina 46
8.3 Estructuras de los compuestos 1- 4 50
8.4 Extraccin, fraccionamiento primario y purificacin de
compuestos a partir del extracto de diclorometano obtenido del
fruto de P. serotina 51
8.5 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante
inducido por el cido urslico y la Ach 52
ix
Figura Pgina
8.6 Cromatograma de gases obtenido del aceite esencial del fruto de
P. serotina 53
8.7 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante del
aceite esencial obtenido a partir del fruto de P. serotina, del
alcohol benclico, del benzaldehdo, del cinamaldehdo, del
alcohol cinmico y del YC-1 56
inducido por el alcohol benclico en ausencia (E-) y en presencia
de endotelio (E+) 57
inducido por el benzaldehdo en ausencia (E-) y en presencia de
endotelio (E+) 57
inducido por el cinamaldehdo en ausencia (E-) y en presencia de
endotelio (E+) 58
inducido por el alcohol cinmico en ausencia (E-) y en presencia
de endotelio (E+) 59
inducido por el alcohol benclico en ausencia de endotelio y en
presencia del bloqueador ODQ 60
inducido por el benzaldehdo en ausencia de endotelio y en
inducido por el cinamaldehdo en ausencia de endotelio y en
inducido por el alcohol cinmico en ausencia de endotelio y en
x
Figura Pgina
inducido por el alcohol benclico en ausencia de endotelio y en
presencia de los bloqueadores TEA y glibenclamida 63
inducido por el benzaldehdo en ausencia de endotelio y en
inducido por el cinamaldehdo en ausencia de endotelio y en
inducido por el alcohol cinmico en ausencia de endotelio y en
9.1 Ncleo ursano 68
xi
I. INTRODUCCIN
De acuerdo al Dr. Stephen DeFelice, quien acu este trmino en 1989

(Kalra, 2003), un nutracutico puede ser definido como un alimento o parte de un
alimento que proporciona beneficios a la salud, incluyendo la prevencin o el
tratamiento de enfermedades. Por su parte, Robert E.C. Wildman (2001) maneja
este trmino como sustancia qumica que se encuentra como un componente
natural de los alimentos o de otros materiales comestibles que presentan un
beneficio a la salud, ya sea por prevencin o tratamiento de enfermedades o bien,
mejorando el desempeo fisiolgico del organismo.
Esto nos conduce a considerar que los nutracuticos son componentes de

los alimentos o sustancias relacionadas con stos. Desde esta perspectiva, el
concepto abarca un espectro muy amplio, desde alimentos completos y nutrientes
propiamente dichos, hasta metabolitos secundarios con propiedades
farmacolgicas bien definidas.
Las plantas han desempeado a lo largo del tiempo y en todas las culturas
un papel central, no slo como elementos alimenticios, sino tambin como
remedios para el tratamiento de diversas enfermedades, ya sea consumidas
enteras o en partes, o bien, mediante algn proceso de extraccin de sus
componentes. Evidentemente, los compuestos contenidos en dichas plantas,
denominados genricamente fitoqumicos, son los responsables de los efectos
farmacolgicos presentados por estas especies vegetales.
De manera particular, Mxico posee una gran tradicin en el empleo de

plantas medicinales, la cual se remonta hasta la poca prehispnica, en la que se
tena un profundo conocimiento de numerosas especies vegetales y sus
aplicaciones teraputicas, como lo pone en evidencia la informacin contenida en
1
escritos tan antiguos como el Libellus de Medicinalibus Indorum Herbis o Cdice
Badiano, escrito en 1552; o bien en la Historia General de las Cosas de la Nueva
Espaa de Fray Bernardino de Sahagn publicada en el siglo XVI.
Desafortunadamente, a pesar de esta gran tradicin en el empleo de

plantas medicinales y la abundante riqueza florstica que existe en nuestro pas, el
porcentaje de las especies vegetales medicinales estudiadas desde un punto de
vista cientfico es muy bajo. Por lo tanto, es necesario continuar realizando
investigaciones que, a partir de un criterio etnomdico, puedan conducir a la
caracterizacin qumica y farmacolgica de los compuestos responsables del
efecto teraputico que se les atribuye a las especies vegetales empleadas en la
Medicina Tradicional Mexicana y se pueda, con base en un criterio cientfico,
validar eventualmente su uso tradicional.
Dentro de este contexto, se encuentra el caso del capuln (Prunus

serotina), rbol cuya corteza, hojas, inflorescencias y frutos se utilizan en la
Medicina Tradicional Mexicana para tratar padecimientos cardiacos, pulmonares e
intestinales. Especficamente, el fruto es empleado, solo o preparado en jarabes y
licores, para tratar la tos y la diarrea.
Existen escasos estudios qumicos y farmacolgicos acerca de P.

serotina. De hecho, solo se ha reportado un estudio fitoqumico biodirigido
realizado con las hojas de esta especie por nuestro grupo de trabajo. Dicho
estudio permiti la obtencin de tres compuestos bioactivos con efecto
vasorrelajante.
Adicionalmente, nuestro grupo encontr evidencias que indicaron que los

frutos de esta especie contienen metabolitos secundarios no polares capaces de
producir relajacin de la musculatura lisa vascular. Este hallazgo sugiere que los
frutos del capuln tambin podran ser tiles para el tratamiento de enfermedades
cardiovasculares, tales como la hipertensin arterial.
2
Con base en estos antecedentes, se plantea el presente proyecto de
investigacin que tiene por objeto realizar la caracterizacin qumica y
farmacolgica de los metabolitos secundarios no polares que producen los efectos
vasorrelajantes inducidos por el extracto de diclorometano y el aceite esencial
obtenidos a partir de los frutos del capuln.
3
II. ANTECEDENTES
2.1 Estudios qumicos realizados sobre especies del gnero Prunus
El gnero Prunus pertenece a la familia Rosaceae e incluye alrededor de

400 especies de amplia distribucin en las regiones de clima caliente y templado,
mayormente en el hemisferio norte. Este gnero comprende rboles o arbustos
perennifolios o caducifolios, a veces espinosos; el fruto, en forma de drupa y a
veces carente de pulpa jugosa, posee hueso liso o rugoso y por lo general
contiene una sola semilla con endospermo escaso o ausente. Algunos ejemplos
de especies del gnero Prunus son P. persica (durazno), P. domestica (ciruelo), P.
armeniaca (chabacano) y P. serotina (capuln), entre otros (Caldern de
Rzedowski y Rzedowski, 2001; 2005).
Se han aislado e identificado diferentes metabolitos secundarios a partir

de las diferentes especies del gnero Prunus. Entre stos se encuentran:
flavonoides que incluyen glicsidos de camferol (Olszewska y Wolbis, 2001; Jung
et al., 2003) y de quercetina (Olszewska y Wolbis, 2001; Milbury et al., 2006), tales
como la hiperina (Olszewska, 2005; Wijeratine et al., 2006); antocianidinas, tales
como glicsidos de cianidina (Ordaz-Galindo et al.,1999; Deineka et al., 2004; Ruiz
et al., 2005); glicsidos cianognicos: prunasina y amigdalina (Santamour, 1998;
Yoshikawa et al., 2002; Lu et al., 2005); triterpenos como el cido urslico (Wolbis
et al., 2001; Shengmin et al., 2002; Amico et al., 2006); algunos compuestos
aromticos simples: cido procatquico (Shegmin et al., 2002; Kayano et al., 2004;
Milbury et al., 2006); cido vainllico (Kayano et al., 2004; Milbury et al., 2006) y
fenilpropanoides como el cido cafeico (Kayano et al., 2004), el cido p-cumrico
(Kayano et al., 2004) y un glicsido del cido ferlico (Kayano et al., 2004).
4
2.2 Prunus serotina
2.2.1 Taxonoma, caractersticas morfolgicas y distribucin
El capuln ha sido descrito por varios autores desde 1651, pero fue hasta
1788 en que Ehrhart le dio su denominacin cientfica como Prunus serotina
(McVaugh, 1951). Este nombre cientfico es el que emplea la Comisin Nacional
para el Conocimiento de la Biodiversidad (CONABIO), dentro del Sistema
Integrado de Informacin Taxonmica (SIIT) para establecer su clasificacin
taxonmica (SIIT, CONABIO, 2008), la cual se muestra en el Cuadro 2.1.
Cuadro 2.1 Clasificacin taxonmica de P. serotina

Nombre cientfico Prunus serotina Ehrh
Reino Plantae
Sub-reino Tracheobionta
Divisin Magnoliophyta
Clase Magnoliopsida
Sub-clase Rosidae
Orden Rosales
Familia Rosaceae
Gnero Prunus
Especie serotina
Variedades P. serotina var. eximia
P. serotina var. rufula
P. serotina var. serotina
P. serotina var. virens
Sin embargo, algunos autores afirman que Prunus serotina no es el

capuln de las tierras altas de Mxico y sugieren para este ltimo el nombre de
Prunus salicifolia Kunth o bien, Prunus serotina var. salicifolia (Morton, 1987).
5
Dejando a un lado esta divergencia, cuya resolucin escapa de los objetivos de
este trabajo, se emplear para fines prcticos el nombre de Prunus serotina tal
como lo propone la CONABIO.
Por otra parte, el capuln recibe en Mxico diversos nombres,

dependiendo de la regin y la lengua indgena predominante: Shencua, Shengua,
Xengua (l. tarasca, Mich.); Cusabi (l. tarahumara, Chih.); Uasiqui, Jeco (l. guarigia,
Chih.); Pakshumk (l. mixe,Oax.); T-nundaya (l. mixteca, Oax.); Tzu'uri (l. cora,
Nay.); Pat, Shimal-ma-lu (l. chontal, Oax.); Capulitaunday (l. zapoteco, Oax.);
Detze, Ghohto (l. Otom) (Comisin Nacional Forestal, 2008).
Las caractersticas morfolgicas de esta especie se enlistan a

continuacin (Comisin Nacional Forestal, 2008):
Forma: rbol o arbusto monopdico, perennifolio o caducifolio, de 5 a 15
m con dimetro a la altura del pecho de hasta 1.2 m.
Copa / Hojas: Copa ancha de forma ovoide que produce una sombra
densa. Hojas estipuladas, simples, alternas, cortamente pecioladas, ovaladas a
lanceoladas, de 5 a 16 cm de largo por 2 a 5 cm de ancho, margen aserrado; haz
verde oscuro y brillante.
Tronco: largo y recto en el bosque, pero en los claros es corto y ancho.
Ramas alternas, erguido-extendidas.
Corteza: caf o griscea casi lisa y glabra, exceptuando las ramas tiernas
que a veces son pubescentes.
Flores: numerosas, pequeas y blancas, agrupadas en racimos axilares
colgantes y largos, de 10 a 15 cm, con pedicelos de 5 a 10 mm de largo. Florece
en los meses de marzo y abril.
Fruto: de sabor agridulce y algo astringente, es una drupa globosa que
generalmente tiene un dimetro de 6 a 8 mm, sin embargo, en ocasiones puede
llegar a tener 1 cm de dimetro; la piel del fruto es de color negro rojizo y la carne
es verde translcida (Ordaz-Galindo et al., 1999; Caldern de Rzedowski y
Rzedowsky, 2001). Fructifica entre mayo y agosto.
6
Semilla: esfrica y rodeada por un endocarpio o hueso leoso (almendra)
de sabor amargo.
Como caractersticas notables de P. serotina se pueden mencionar su

baja necesidad de riego y su gran tolerancia a la contaminacin ambiental y a los
suelos cidos y pedregosos. Por este motivo esta especie suele emplearse para
rehabilitacin de suelos. Sin embargo, necesita luz abundante por lo que no se
desarrolla a la sombra (Comisin Nacional Forestal, 2008). En la Figura 2.1 se
muestra una imagen del rbol y de los frutos del capuln.
Figura 2.1 El rbol de P. serotina y su fruto
Esta especie es originaria de Amrica. Se extiende actualmente desde

Canad hasta Guatemala. Se le encuentra en las regiones montaosas,
usualmente en lugares templados o fros en altitudes de 2,500 metros o ms, en
los estados de Chihuahua, Chiapas, Durango, Guanajuato, Jalisco, Michoacn,
Morelos, Oaxaca, Puebla, San Luis Potos, Tamaulipas, Veracruz y el Distrito
Federal. El rbol del capuln es frecuente en el bosque de encino, bosque de pino
y en los bosques mesfilos de montaa (Comisin Nacional Forestal, 2008).
7
2.2.2 Usos de P. serotina en la Medicina Tradicional Mexicana
El rbol de P. serotina ha sido empleado tradicionalmente en nuestro pas

con fines medicinales. La corteza se usa como tnico, sedante, digestivo y para el
tratamiento de sntomas relacionados con procesos inflamatorios, tales como la
gripa, la fiebre y la garganta cerrada. La corteza se utiliza tambin para tratar
padecimientos pulmonares y cardiacos (Mills y Willoughby, 1996). Las hojas se
usan para el tratamiento del asma, la tos, la hipertensin y la diarrea. Por su parte,
el fruto se emplea para preparar remedios contra la diarrea y la tos (Martnez,
1991).
Adicionalmente a su uso medicinal, el fruto de P. serotina es muy
apreciado como complemento alimenticio por su agradable sabor; se come crudo
o en conserva, en tamales, licores y bebidas frescas (Martnez, 1991).
2.2.3 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos realizados sobre P. serotina

por otros grupos de trabajo
Se han realizado muy pocos estudios fitoqumicos sobre P. serotina y la

mayor parte de stos se han centrado en el estudio de las hojas. Biessels et al.
(1974) reportaron la purificacin del aldehdo urslico y un derivado del cido
urslico a partir de las hojas de esta planta. De manera adicional, se identific por
HPLC la presencia de cinco glicsidos de quercetina, tres glicsidos de camferol y
dos glicsidos de isoramnetina en las hojas e inflorescencias (Olszewska, 2005).
En las semillas se detect la presencia de la amigdalina y la prunasina
(Santamour, 1998).
Con relacin al fruto, slo se ha reportado un estudio realizado con la piel

de ste, en la cual se identific la presencia de antocianidinas que pueden tener
un posible uso comercial como colorante vegetal (Ordaz-Galindo et al., 1999). El
Cuadro 2.2 presenta un resumen de los principales metabolitos aislados a partir de
esta especie.
8
Cuadro 2.2 Principales metabolitos secundarios aislados e identificados en P.
serotina (Villa De la Torre, 2008)
COMPUESTOS REFERENCIA
OH OH
HO O
HO O
OH
HO OH
O OH OH
OH O
O O
H Olszewska , 2005
OH
OH O
camferol -3-O--D- O
CH2OH
glucopiransido camferol -3-O--L-
(astragalina) arabinofuransido
(juglanina)
OH OH
OH
HO O
HO O
OH
HO
Olszewska, 2005
O O
O OH
O OH O OH
OH O OH
OH
OH
camferol -3-O--D- quercetina -3-O-
xilopiransido galactsido
(hiperina)
OH OH
OH OH OH
OH
HO O
HO O
OH
O
O O
OH
HO Olszewska, 2005
OH O OH OH
OH O O
OH O O
HO
quercetina -3-O-(2-O-- quercetina -3-O--L-

L-ramnopiranosil)--D- arabinopiransido
glucopiransido (guaijaverina)
9
serotina (continuacin)
OH OH
OH OH
HO O
HO O
OH
OH
HO
O
O
OH
Olszewska, 2005
O
OH O OH
O OH
OH O
OH
quercetina -3-O--
quercetina -3-O--L-
glucopiransido
arabino furansido
(isoquercetrina)
(avicularina)
OH OH
OH HO
OH OH
HO O OH OH OH
OH HO O
HO
OH
O
O
O O OH
O O Olszewska, 2005
O OH
OH O
OH O O
OH
HO
quercetina -3-O-rutinsido quercetina -3-O-(2--L-

(rutina) ramnopiranosil)--D-
galactopiransido
OCH3 OCH3
OH OH
HO O
HO O
HO Olszewska, 2005
OH
O
O CH2OH OH
O O
OH O
OH O OH
O OH
H
OH O
OH OH
isoramnetina -3-O-- isoramnetina -3-O-

arabinofuransido rutinsido
10
serotina (continuacin)
OH
OH
OH
+
OH HO O
HO
+
O
OH
HO
OH
Ordaz-Galindo et al.,
HO O OH
OH
O O OH O 1999
OH O
OH
O
H3C
HO
HO OH
cianidina -3-O-glucsido
cianidina -3-O-rutinsido
OH OH
O
O HO
O
HO
O
HO
OH
HO
Santamour, 1998
HO
O
OH HO
NC H
O
H OH CN
prunasina amigdalina
H CHO
H
H COOM e
HO
H H
HO
H
H
Biessels et al., 1974
H
H
HO H
aldehdo urslico 2,3-dihidroxi-urs-12-en

28-ato de metilo
11
2.2.4 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos realizados sobre P. serotina
por nuestro grupo de trabajo
En una investigacin previa, nuestro grupo de trabajo realiz el estudio de

diez plantas utilizadas en la Medicina Tradicional Mexicana para el tratamiento de
enfermedades cardiovasculares, con el objeto de determinar su actividad
farmacolgica y, eventualmente, validar cientficamente su uso tradicional. La
primera fase de este estudio consisti en la evaluacin de los extractos acuosos
preparados a partir de estas especies vegetales sobre el tono del msculo liso
arterial (Ibarra-Alvarado et al., 2009a).
Una de las especies seleccionadas a partir del estudio etnobotnico y

bibliogrfico preliminar fue P. serotina. La evaluacin farmacolgica indic que el
extracto acuoso preparado a partir de las ramas y hojas de esta especie produce
una relajacin, dependiente de la concentracin (EC50 190.4 g/ml; Emax 70.2%),
del msculo liso arterial (Ibarra-Alvarado et al., 2009a). En base a estos
resultados, se inici el estudio fitoqumico biodirigido de las hojas.
En ese estudio se prepar el extracto metanlico de las hojas de P.

serotina, el cual se someti a un fraccionamiento primario, mediante particiones
con acetato de etilo y diclorometano. Las fracciones resultantes fueron evaluadas
empleando el modelo de aorta aislada de rata (Figura 2.2). La fraccin de acetato
de etilo, la cual present el mayor porcentaje de relajacin, fue sometida a un
fraccionamiento cromatogrfico, el cual condujo a la purificacin de tres
compuestos conocidos, el hipersido, la prunina y el cido urslico (Ibarra-
Alvarado et al., 2009b).
12
80
Metanol acuoso (50%)
Acetato de etilo
Relajacin (%)
60 Diclorometano
40
20
0
1 3.16 10 31.6 100 316
g/ml
Figura 2.2 Efecto vasorrelajante sobre la aorta de rata de las fracciones de

metanol, acetato de etilo y diclorometano obtenidas de las hojas de P. serotina
La evaluacin farmacolgica de los compuestos purificados indic que el

hipersido (EC50 = 91.3 14.1 g/ml) y el cido urslico (EC50 = 154.4 7.5 g/ml)
indujeron una significativa relajacin, dependiente de la concentracin, de la aorta
aislada de rata (Cuadro 2.3). El compuesto que present el efecto mximo mayor
fue el cido urslico (Figura 2.3) (Ibarra-Alvarado et al., 2009b).
Cuadro 2.3 Valores de EC50 y Emax del efecto vasorrelajante inducido por los
compuestos purificados a partir de las hojas de P. serotina
Compuesto EC50 (g/ml) Emax (%)
Hipersido 91.3 14.1 92.3 7.7
Prunina 66.0 19.4 44.2 5.6
cido Urslico 154.4 7.5 94.1 5.9
13
100 ACh
Hipersido
cido urslico
Prunina
80
Relajacin (%)
60
40
20
0
-1 0 1 2 3
Log concentracin (g/ml)
Figura 2.3 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador de la

acetilcolina, empleada como control positivo, el hipersido, la prunina y el cido
urslico en segmentos de aorta intactos de rata
Nuestro grupo de trabajo tambin abord el estudio farmacolgico del fruto

de P. serotina, en el cual se evalu el efecto del aceite esencial y de los extractos
acuosos y orgnicos (etanlico y de diclorometano), preparados a partir de los
frutos de tres recolectas diferentes de capuln, sobre la musculatura lisa arterial y
bronquial.
La seleccin de los solventes empleados para la obtencin de los

extractos se hizo con base en las preparaciones que son empleadas
etnomdicamente con fines medicinales y que incluyen decocciones en agua y
licores. Adicionalmente, se decidi preparar extractos de CH2Cl2 y los aceites
esenciales. De tal manera, que con la seleccin de solventes polares (agua y
etanol), no polares (CH2Cl2) y la obtencin de los aceites esenciales, se
14
garantizara la extraccin de metabolitos secundarios de diferentes polaridades con
cierto grado de selectividad.
Las recolectas incluyeron muestras provenientes de Cholula, Puebla;

Huimilpan, Quertaro y Huejotzingo, Puebla. Se guardaron muestras de referencia
que se depositaron en la coleccin etnobotnica del Herbario Nacional, Instituto de
Biologa, UNAM.
La evaluacin demostr que los extractos acuosos de los frutos de capuln

provenientes de los tres sitios de recolecta inducen relajacin de la musculatura
lisa vascular. El extracto de la recolecta de Cholula relaj con mayor potencia
(EC50=17.2g/ml) la aorta de rata en comparacin con las recolectas de Huimilpan
(EC50= 85.7g/ml) y Huejotzingo (EC50= 23.2g/ml) (Villa De la Torre, 2008).
Con respecto a los extractos etanlicos, todos indujeron un efecto

vasorrelajante, el cual se increment de manera significativa a las concentraciones
de 316 y 1000 g/ml. En este caso, al igual que lo que sucedi con los extractos
acuosos, los extractos de las recolectas de Cholula y Huimilpan indujeron una
relajacin de aproximadamente 40% y 50%, respectivamente a la mxima
concentracin evaluada (1000 g/ml). El extracto de los frutos de Huejotzingo, por
otra parte indujo una vasorrelajacin menor del 30% a la mxima concentracin
evaluada (Villa De la Torre, 2008).
Por otra parte, de manera similar al efecto inducido por los extractos
polares, todos los extractos de CH2Cl2 produjeron un efecto vasodilatador que fue
ms evidente a las concentraciones de 316 y 1000 g/ml. En este caso, el
extracto proveniente de los frutos de Huejotzingo indujo la mayor relajacin de la
aorta a la concentracin de 1000 g/ml (Figura 2.4).
15
80 Cholula
Huimilpan
Huejotzingo
60
Relajacin (%)
40
20
0 1 2 3 4
Figura 2.4 Curvas-concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los

extractos de CH2Cl2 de las diferentes recolectas de los frutos de P. serotina en
segmentos de aorta intactos de rata (Villa De la Torre, 2008)
Finalmente, los aceites esenciales obtenidos de los frutos de las tres

recolectas tambin relajaron el msculo liso arterial, de una manera dependiente
de la concentracin (Figura 2.5). Este caso fue similar al anterior, los frutos de la
recolecta de Huejotzingo relajaron con mayor eficacia la aorta de rata, en
comparacin con las recolectas de Cholula y Huimilpan (Villa De la Torre, 2008).
Los resultados obtenidos a partir de la evaluacin farmacolgica de los

extractos y aceites esenciales de los frutos del capuln indican que los frutos
provenientes de las recolectas de Huimilpan y Cholula, contienen mayor cantidad
de metabolitos polares que pudieran ser los responsables del efecto vasorrelajante
inducido por los extractos acuosos y etanlicos preparados a partir de los frutos de
estas recolectas. Por otra parte, como lo pone en evidencia la mayor eficacia
mostrada por el extracto de CH2Cl2 y el aceite esencial preparado a partir de los
frutos de la recolecta de Huejotzingo, estos frutos tienen un mayor contenido de
metabolitos no polares que son los responsables del efecto vasodilatador.
16
80
Cholula
Huimilpan
60 Huejotzingo
Relajacin (%)
40
20
0 1 2
Figura 2.5 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los

aceites esenciales de las diferentes recolectas de los frutos de P. serotina en
segmentos de aorta intactos de rata (Villa De la Torre, 2008)
De acuerdo con los antecedentes quimiotaxnomicos del gnero Prunus,

es muy factible esperar que los frutos de esta planta contengan metabolitos
polares como glucsidos de flavonoides, pero tambin es evidente que la planta
produce otro tipo de compuestos vasorrelajantes no polares, cuya identidad se
desconoce a la fecha, tal como lo evidencian nuestros resultados.
17
2.3 Enfermedades cardiovasculares: incidencia y etiologa
Las enfermedades cardiovasculares constituyen una de las principales

causas de mortalidad y se han convertido en uno de los mayores riesgos de salud
a nivel mundial, ya que son las responsables de aproximadamente el 30% de
muertes ocurridas al ao (Ramaa, 2006). Esta cifra implica que los factores de
riesgo asociados con las enfermedades cardiovasculares, tales como la obesidad,
los hbitos alimenticios con altos contenidos en grasas saturadas y grasas trans,
el incremento del consumo de sodio, tabaco y alcohol, la falta de ejercicio fsico,
as como otros cambios relacionados con la urbanizacin e industrializacin no
han sido suficientemente controlados.
En nuestro pas, las enfermedades del corazn en conjunto constituyen la

primera causa de mortalidad general. Cuando se desagrupan como causa nica,
la ms prevalente de ellas, la cardiopata isqumica se convierte en la segunda
causa de mortalidad general, debajo de la diabetes mellitus cuya mortalidad es
originada principalmente por complicaciones cardiovasculares. Dentro de este
mbito, la hipertensin arterial es uno de los principales factores de riesgo para
enfermedad arterial coronaria y el accidente vascular cerebral (Velzquez et al.,
2002, 2007).
La hipertensin, definida como una elevacin de la presin sangunea

sistlica y diastlica arriba de 140/90 mm Hg, es la enfermedad cardiovascular
ms comn. En Mxico, en el ao 2001, de 441,004 muertes que fueron
registradas, 81,248 fueron provocadas por enfermedades relacionadas
directamente con la hipertensin (Aguirre-Crespo et al., 2005).
El tono vascular juega un papel importante en la regulacin de la presin

sangunea y existen numerosas evidencias que sugieren que alteraciones en la
funcin del endotelio vascular, el cual controla la relajacin del msculo liso
vascular, contribuyen a la patognesis y a la expresin clnica de varias
18
enfermedades cardiovasculares. El desarrollo y mantenimiento de la hipertensin
arterial involucra una produccin deficiente de factores vasorrelajantes derivados
de endotelio, lo cual resulta en una disminucin del tono vascular, lo que a su vez
provoca un incremento en la resistencia vascular y finalmente, contribuye a elevar
la presin sangunea (Kang et al., 2006).
Con base en estos antecedentes, resulta evidente que nuevas estrategias

teraputicas que involucren efectos relajantes de la musculatura lisa vascular
representan un gran potencial para la prevencin y el tratamiento de las
enfermedades arteriosclerticas vasculares.
2.4 Fisiologa de los vasos sanguneos
2.4.1 Estructura de la pared vascular
La pared vascular es un rgano activo, flexible e integrado por

componentes celulares (clulas endoteliales, musculares lisas y fibroblastos) y
componentes no celulares, como la matriz extracelular. En forma dinmica estos
componentes modifican su forma, aumentan, disminuyen o se reorganizan, en
respuesta a estmulos fisiolgicos y patolgicos, manteniendo as la integridad del
vaso en condiciones fisiolgicas o participando en la alteracin vascular que
aparece en enfermedades como la hipertensin y la aterosclerosis (Risler et al.,
2002).
En todos los tipos de arterias se pueden distinguir tres capas concntricas:

a) una capa interna, la tnica ntima, constituida por clulas endoteliales con su eje
mayor orientado longitudinalmente; b) una capa media tnica media, compuesta
fundamentalmente por clulas musculares lisas, dispuestas circularmente, y c) una
capa externa, la tnica adventicia, constituida por fibroblastos y fibras de colgeno
que estn orientadas longitudinalmente. La capa ntima y la media estn
19
separadas por la lmina elstica interna, y la media y la adventicia estn
separadas por la lmina elstica externa (Navarro-Cid et al., 1999).
La tnica ntima de las arterias elsticas est constituida por el endotelio y

un espacio sub-endotelial compuesto por una matriz extracelular. En las arterias
musculares la ntima es ms fina que en las arterias elsticas, y en las arterias de
pequeo calibre y arteriolas est constituida bsicamente por endotelio y una capa
sub-endotelial muy estrecha (Ganong, 2000).
El principal componente de la tnica media en las arterias elsticas es la

elastina, que proporciona al vaso la elasticidad necesaria para adaptarse a los
cambios de presin originados por el flujo pulstil del corazn y dota a estas
arterias de una capacidad de amortiguacin que permite mantener un flujo
sanguneo continuo (Navarro-Cid et al., 1999).
La tnica adventicia est constituida por fibroblastos incluidos en una matriz

extracelular compuesta de grandes haces de fibras de colgeno y una red laxa de
fibras elsticas. En la tnica adventicia se observan las terminaciones nerviosas y
pequeos capilares que penetran ligeramente en la media (Navarro-Cid et al.,
1999; Ganong, 2000).
2.4.2 Endotelio
2.4.2.1 Estructura y funciones del endotelio vascular
El endotelio vascular, est situado en una posicin anatmica estratgica

entre la sangre y la pared vascular, lo cual le permite actuar como receptor y
transmisor de seales. Las clulas endoteliales son capaces de registrar cambios
hemodinmicos y responder a mensajeros qumicos circulantes o procedentes de
clulas vecinas y, en consecuencia, reaccionar a dichos cambios, mediante la
20
liberacin de numerosos factores vasoactivos (Dejana et al., 1995; Navarro-Cid et
al.,1999; Ganong, 2000).
El endotelio es considerado as, el principal rgano de regulacin vascular

con accin exocrina, paracrina y autocrina, que est implicado en diversos
procesos vasoactivos, metablicos e inmunitarios. Entre los factores
biolgicamente activos sintetizados y liberados por las clulas endoteliales caben
destacar: la prostaciclina (PGI2), el xido ntrico (NO), el factor hiperpolarizante
derivado del endotelio (EDHF), la endotelina (ET), la prostaglandina H 2 (PGH2), el
tromboxano A2 (TXA2), los heparinoides, el factor de crecimiento transformante
(TGF), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de
crecimiento de fibroblastos bsicos (bFGF), el factor derivado de plaquetas
(PDGF), el activador tisular del plasmingeno (t-PA), el inhibidor del activador del
plasmingeno-1 (PAI-1), especies reactivas de oxgeno (radicales superxido e
hidroxilo, perxido de hidrgeno), interleucinas, quimiocinas, molculas de
adhesin de monocitos, entre otros (Dejana et al., 1995).
El endotelio tambin regula la homeostasis y la trombosis mediante sus

funciones antiplaquetarias, anticoagulantes y fibrinolticas, as como la inflamacin,
a travs de la expresin de molculas quimiotcticas y de adhesin. Ello hace del
endotelio un verdadero sistema receptor y emisor de seales, que explica la razn
por la que una hormona o la hemodinmica sangunea pueden modificar la funcin
vascular (Navarro-Cid et al., 1999; Ganong, 2000).
En condiciones normales, el endotelio presenta una importante actividad

antitrombgena que involucra las acciones del NO y la PGI2, mensajeros que
inhiben la adhesin y la agregacin plaquetaria mediante aumentos respectivos de
la concentracin intraplaquetaria de GMPc y AMPc. En condiciones fisiolgicas
predominan las acciones antiagregantes y anticoagulantes, mientras que en
pacientes hipertensos, dislipidmicos o diabticos sucede lo contrario, por lo que
21
el endotelio participa en las complicaciones trombticas de estos trastornos
(Navarro-Cid et al., 1999).
2.4.2.2 Factores relajantes derivados del endotelio
El mantenimiento del tono vasomotor depende de forma decisiva del

equilibrio entre las acciones relajantes del msculo liso vascular mediadas por el
NO, la PGI2 y el EDHF, y las acciones constrictoras de la ET-1 y el TXA2. Los
factores relajantes derivados del endotelio y en especial el NO, adems de
equilibrar las acciones constrictoras mencionadas, tambin equilibran las de
agentes con accin sistmica como la angiotensina II, las catecolaminas y la
vasopresina (Moncada y Higgs, 1991).
La PGI2 se sintetiza predominantemente en las clulas endoteliales

vasculares a partir del cido araquidnico, mediante la accin del complejo
enzimtico ciclooxigenasa-PGI2 sintasa. Sus principales acciones son: inhibicin
de la agregacin plaquetaria y relajacin de las clulas musculares lisas (Moncada
y Higgs, 1991).
Sin embargo, no parece probable que la PGI2 este ejerciendo un efecto

tnico vasodilatador importante sobre el msculo liso, y por tanto, su participacin
en el control de la presin arterial en condiciones normales aparentemente no es
relevante. Su mecanismo de accin celular depende de la activacin de la
adenilato ciclasa (AC) y se inactiva mediante una degradacin enzimtica. Los
principales factores capaces de estimular la sntesis y la liberacin de la PGI 2 son
la angiotensina II, la acetilcolina (Ach) o la bradiquina (BK), as como productos
liberados de las plaquetas como la serotonina y el PDGF (Navarro-Cid et al.,
1999).
Por otra parte, el NO se sintetiza a partir de la arginina en una reaccin

catalizada por la xido ntrico sintasa (NOS) (Schmidt et al., 1993). Se han
22
identificado actualmente tres isoformas: NOSe, forma constitutiva en las clulas
endoteliales; NOSi, isoforma inducible presente en macrfagos y clulas
musculares lisas; NOSn, forma neuronal constitutiva presente en el tejido nervioso
y en estructuras medulares renales. Las NOSn y NOSi se activan por los agentes
que incrementan la concentracin del Ca2+ intracelular, entre los cuales se
incluyen los vasodilatadores Ach y BK. Sin embargo, la NOS en las clulas
inmaduras no se induce por el Ca2+ sino que se activa por las citocinas (Schmidt et
al., 1993; Fostermann et al., 1994; Li y Fostermann, 2000). El NO formado por el
endotelio difunde hacia las clulas del msculo liso, en donde activa a la
guanilatociclasa soluble (GCs) para producir cGMP; ste, a su vez, media la
relajacin del msculo liso vascular (Kamisaki et al.,1986; Humbert et al., 1990;
Ignarro, 1990).
El NO es un radical con un electrn desapareado, que ocupa un orbital

anti-enlazante, y que por lo tanto es muy inestable, actuando como una hormona
paracrina. La accin fundamental del NO es la relajacin del msculo liso de la
capa media de las arterias y las venas, la inhibicin de la agregacin plaquetaria,
la inhibicin del crecimiento y la proliferacin de las clulas del msculo liso, y la
inhibicin de la adhesin de monocitos y leucocitos del endotelio (Moncada y
Higgs, 1991).
Como consecuencia, el NO desempea un papel fundamental en el

mantenimiento de la funcin, la estructura y la integridad vasculares. Los
defectos en la produccin de NO contribuyen a la patognesis de la hipertensin,
la trombosis vascular, la aterognesis, la reestenosis y la lesin prostangioplstica
(Pfeifer et al., 1999; Hofmann et al., 2000).
El NO se libera de las clulas endoteliales en respuesta a numerosos

factores, tanto fsicos como de tipo humoral. El principal factor fsico responsable
de la liberacin del NO por las clulas endoteliales son las llamadas fuerzas de
cizallamiento o la presin ejercida por la sangre sobre el endotelio vascular
23
(Navarro-Cid y col., 1999). Debido a su accin de antiagregante plaquetario, el NO
participa junto con la PGI2 en la inhibicin de la agregacin plaquetaria (Murad,
1996).
La degradacin del NO se produce como consecuencia de la reaccin con

el radical superxido (O2-) que da lugar al peroxinitrito (ONOO-), el cual a su vez
se degrada a otro agente oxidante, el radical hidroxilo, y nitrato (Beckman et al.,
1994; Rubbo et al., 1996).
Otra sustancia qumica liberada por el endotelio es el factor hiperpolarizante

del endotelio (EDHF). Este factor produce relajacin del msculo liso vascular al
inducir hiperpolarizacin de su membrana celular. La hiperpolarizacin y la
relajacin inducidas por el EDHF parecen ser debidas a un incremento en la
conductancia al K+ a travs de canales de potasio que son dependientes de calcio
y ATP, los cuales se encuentran localizados en el msculo liso vascular. Respecto
a su papel fisiolgico o fisiopatolgico, parece ser un mediador importante en la
relajacin, dependiente del endotelio, en las arterias mesentricas de resistencia
(Navarro-Cid et al., 1999).
2.4.2.3 Mecanismo de relajacin de la musculatura lisa vascular
La relajacin de los vasos sanguneos depende en gran medida de las

vas de sealizacin iniciadas por los factores vasorrelajantes liberados por el
endotelio: NO, PGI2 y EDHF.
Las vas del NO y de la prostaciclina son iniciadas por la estimulacin

provocada por ligandos como la acetilcolina (ACh), la 5-hidroxitriptamina (5-HT) o
la histidina (His) sobre el receptor acoplado a protena G (RAPG), de la clula
endotelial.
24
En el caso de la va del NO, la estimulacin de los RAPG activa la
fosfolipasa C (PLC), la cual induce la produccin de diacilglicerol (DAG) y de
inositol trifosfato (IP3); este ltimo induce la liberacin de Ca2+ en el citoplasma de
la clula endotelial. El Ca2+ activa la calmodulina (CaM) y este complejo activa la
xido ntrico sintasa (NOS) para que se produzca NO a partir de la arginina (Arg).
ste difunde a las clulas del msculo liso arterial estimulando la guanilato ciclasa
soluble (sGC). La estimulacin de esta enzima provoca un aumento en la
produccin de GMPc, el cual a su vez provoca la activacin de una protena
cinasa G (PKG) que dar como resultado la disminucin del Ca2+ citoplasmtico
provocando con ello la relajacin.
Por otra parte, la estimulacin de los RAPG puede activar la fosfolipasa A2
(PLA2) provocando la produccin de cido araquidnico (AA) que ser el sustrato
de la ciclooxigenasa (COX) para formar la prostaciclina (PGI2). La PGI2 llega a la
clula muscular y mediante la estimulacin de su receptor (RPGI) inicia la
activacin de la adenilato ciclasa (AC) para aumentar la produccin de AMPc que
a su vez activar una protena cinasa A (PKA) que actuar provocando la
disminucin de Ca2+ y con ello la relajacin.
Finalmente, el EDHF proveniente de la clula endotelial activa los canales

de K voltaje dependientes con lo que genera una hiperpolarizacin que conduce a
una eventual relajacin de la clula muscular.
La Figura 2.6 muestra las cascadas de sealizacin que conducen a la

relajacin de la musculatura lisa vascular inducida por los factores endoteliales
NO, PGI2 y EDHF.
2.4.2.4 Factores vasoconstrictores derivados del endotelio
Las clulas endoteliales tambin producen endotelina-1, que es el

vasoconstrictor ms potente conocido hasta la fecha. La endotelina-1 (ET-1), la
endotelina-2 (ET-2) y la endotelina-3 (ET-3) constituyen los miembros de una
25
familia de polipptidos similares de 21 aminocidos, los cuales provocan una
vasoconstriccin intensa de las arterias coronarias y tienen efectos inotrpicos y
cronotrpicos positivos en el miocardio (Liu et al., 1997; Miwa et al., 1999).
ACh
5-HT
PLC Ca+2
RAPG
His DAG PI
IP3
PLA2
2+
Ca Ca2+ CaM
AA
CaM
RE Cit
2+
COX Ca NOS
Ca+2
NO Clula endotelial
Arg
PGI2
NO EDHF
Clula muscular RPGI

GTP
sGC
ATP
AC GMPc K+ K+ Ch K+
AMPc PKG Hiperpolarizacin
2+
PKA Ca Relajacin
Figura 2.6 Mecanismos de transduccin iniciados por los factores relajantes

derivados de endotelio en la clula de msculo liso arterial
Las endotelinas, como otros mediadores derivados del endotelio, se

producen bajo condiciones basales, as como por estimulacin mecnica, qumica
y humoral. Entre los estmulos ms importantes para la produccin de estos
26
vasoconstrictores se encuentran la trombina, la angiotensina II, la adrenalina, la
vasopresina, el TGF, los steres de forbol y la interleucina-1 (Navarro-Cid et al.,
1999).
2.4.3 Msculo liso
La capa media y la tnica media estn compuestas fundamentalmente por

clulas musculares lisas, algunos fibroblastos, fibras de colgeno y otros
componentes de la matriz intersticial. Las clulas musculares lisas se encuentran
en la pared de todos los vasos sanguneos, a excepcin de los capilares, y son las
responsables de que los vasos puedan modificar su dimetro de acuerdo con las
necesidades de aporte sanguneo de cada tejido. Estas clulas son fusiformes y
presentan un nico ncleo en posicin central. Su disposicin es circular, formado
varias capas alrededor de la circunferencia del vaso.
El msculo liso contiene filamentos de actina y de miosina, de

caractersticas qumicas similares a las del msculo estriado; sin embargo, las
clulas musculares lisas contienen una gran cantidad de una protena reguladora
denominada calmodulina. Las clulas musculares lisas y estriadas difieren en la
manera en que se inicia la contraccin (Christ y Brink, 2000).
2.4.3.1 Mecanismo de contraccin de la musculatura lisa vascular
El acontecimiento iniciador de la contraccin del msculo liso es un

aumento de calcio intracelular. Este aumento puede ser causado por estimulacin
nerviosa de la fibra lisa, por estimulacin hormonal, por distensin de la fibra, o
incluso por cambios en el ambiente qumico de la fibra (Guyton y Hall, 2001).
El calcio se une a la calmodulina, la cual activa la formacin de los puentes

transversales entre la miosina y la actina, lo cual provoca la contraccin. Esta
27
activacin, y la contraccin subsiguiente, se producen segn la siguiente
secuencia:
1) Los iones de calcio se unen a la calmodulina.
2) El complejo de calmodulina y calcio se une y activa a la miosina cinasa, una
enzima fosforiladora (Kamm y Stull, 1985; Somlyo y Somlyo, 1994; Heller et
al., 2003).
3) Una de las cadenas ligeras de cada cabeza de miosina, denominada cadena
reguladora, se fosforila por la accin de la miosina cinasa. Cuando esta
cadena no esta fosforilada, no se produce el ciclo de enlace-separacin de la
cabeza con el filamento de actina. Cuando la cadena reguladora est
fosforilada, la cabeza tiene la capacidad de unirse al filamento de actina y
seguir todo el proceso de los ciclos, de la misma manera que en el msculo
esqueltico, causando as la contraccin muscular (Guyton y Hall, 2001;
Heller et al., 2003).
2.4.4 Matriz extracelular

La estructura de la pared vascular, as como sus propiedades
biomecnicas, dependen en gran medida de la matriz extracelular, que est
compuesta por fibras elsticas y de colgeno incluidas en un gel compuesto por
proteoglucanos, cido hialurnico, glucoprotenas y agua. Un equilibrio adecuado
entre los componentes de la matriz permite mantener la integridad de la pared y la
resistencia a roturas y hemorragias (Navarro-Cid et al., 1999).
2.4.5 Tnica adventicia

Es una capa poco definida de tejido conectivo constituida por fibroblastos y
haces de colgeno orientados longitudinalmente, as como por una red laxa de
fibras elsticas delgadas y numerosas terminaciones nerviosas. Funcionalmente,
se puede decir que la tnica adventicia asla el vaso de otros tejidos y proporciona
el soporte de nervios y vasos que penetran en la pared de los vasos (Navarro-Cid
et al., 1999).
28
III. JUSTIFICACIN
A lo largo del tiempo, y como elementos asociados a todas las culturas,

las plantas han sido objeto de atencin, tanto por sus propiedades organolpticas
y alimenticias, como por sus efectos medicinales. En el caso particular de Mxico,
es bien conocido el hecho de que nuestro pas posee una gran tradicin en el
empleo de plantas medicinales, cuyo uso se remonta a la poca prehispnica, en
la que numerosas plantas eran empleadas para tratar diversos padecimientos. Sin
embargo, a pesar de este hecho y de que la biodiversidad de nuestro pas se
encuentra entre las tres primeras a nivel mundial, existen pocos estudios
multidisciplinarios que involucren investigaciones etnomdicas, qumicas y
farmacolgicas de especies vegetales valiosas por sus propiedades medicinales y
nutraceticas.
Dentro de este contexto nuestro grupo de trabajo realiz un rastreo

farmacolgico de varias plantas, cuyos antecedentes etnobotnicos justificaban su
anlisis preliminar. En ese estudio se encontr que P. serotina presentaba una
actividad farmacolgica relevante: el extracto acuoso preparado a partir de las
hojas y las ramas induca un efecto relajante significativo de la musculatura lisa
vascular. Adicionalmente, se demostr que los principios activos responsables de
dicho efecto eran el cido urslico y el hipersido.
Con respecto al fruto, nuestro grupo encontr evidencias experimentales

que indicaban que ste tambin contiene metabolitos secundarios capaces de
producir relajacin de la musculatura lisa vascular. Este hallazgo es novedoso y
relevante. Novedoso en el sentido de que indica una nueva aplicacin teraputica
para los frutos del capuln, los cuales son empleados en la Medicina Tradicional
Mexicana para tratar la tos y desrdenes gastrointestinales, de tal manera que
estos resultados sugieren que los frutos tambin podran ser tiles para el
tratamiento de enfermedades cardiovasculares, tales como la hipertensin arterial.
Relevante, considerando por una parte, que estudios epidemiolgicos realizados
29
durante la ltima dcada han demostrado que las enfermedades cardiovasculares
representan la principal causa de mortalidad en Mxico y por otra parte, existen
numerosas evidencias que sugieren que alteraciones en la funcin del endotelio
vascular, el cual controla la relajacin del msculo liso vascular, contribuyen a la
patognesis y a la expresin clnica de varias enfermedades cardiovasculares. Por
lo tanto, nuevas estrategias teraputicas que involucren efectos relajantes de la
musculatura lisa vascular representan un gran potencial para la prevencin y el
tratamiento de las enfermedades arteriosclerticas vasculares.
Se ha reportado ampliamente que los compuestos fenlicos, incluyendo

los flavonoides, presentan efectos protectores sobre la pared de los vasos
sanguneos. Este grupo de compuestos se encuentran presentes en los frutos de
P. serotina. Sin embargo, los ltimos resultados obtenidos por nuestro grupo de
trabajo sugieren que adems de este tipo de metabolitos secundarios, los frutos
de P. serotina contienen metabolitos no polares que contribuyen al efecto
vasorrelajante.
Con base en las consideraciones anteriores, se plante el presente

proyecto de investigacin con el objeto de purificar e identificar los metabolitos
secundarios no polares presentes en los frutos de P. serotina que inducen el
efecto vasorrelajante, as como caracterizar su mecanismo de accin.
30
IV. HIPTESIS
Los frutos de P. serotina contienen metabolitos secundarios no polares

que inducen relajacin de la musculatura lisa vascular, mediante mecanismos que
involucran la activacin de la va del NO/GMPc y/o la activacin de canales de
potasio.
V. OBJETIVOS
5.1 Objetivo general
Purificar, elucidar la estructura qumica y caracterizar el mecanismo de

accin de los principales compuestos vasorrelajantes no polares contenidos en los
frutos de P. serotina.
5.2 Objetivos especficos
1. Realizar el estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano

preparado a partir de los frutos de P. serotina con el objeto de purificar los
principios activos vasorrelajantes.
2. Determinar la estructura qumica de los compuestos purificados a partir del

extracto de diclorometano, mediante el empleo de metodologas
espectroscpicas y espectromtricas.
3. Obtener el aceite esencial de los frutos de P. serotina mediante el mtodo de

hidrodestilacin.
31
4. Realizar el anlisis del aceite esencial de los frutos de P. serotina, mediante
cromatografa de gases acoplada a masas, con el objeto de conocer su
composicin e identificar los compuestos mayoritarios contenidos en el aceite.
5. Determinar, mediante ensayos farmacolgicos en aorta aislada de rata, la

potencia del efecto relajante de los principios activos no polares obtenidos de
los frutos de P. serotina y si stos actan mediante un mecanismo dependiente
y/o independiente de endotelio.
6. Caracterizar, mediante ensayos farmacolgicos, la participacin de la va del

NO/GMPc y la activacin de canales de potasio en el mecanismo
vasorrelajante inducido por los principios activos obtenidos.
32
VI. MATERIALES Y MTODOS
6.1 Especmenes biolgicos
6.1.1 Material vegetal
Los frutos de P. serotina en estado maduro se obtuvieron directamente de

huertos localizados en San Miguel Teanguizolco, municipio de Huejotzingo,
Estado de Puebla, a una altitud de 2340 m sobre el nivel del mar. Los
especmenes fueron identificados y autentificados por el Dr. Robert Bye,
guardndose muestras de referencia que se depositaron en la coleccin
etnobotnica del Herbario Nacional del Instituto de Biologa de la UNAM.
6.1.2 Animales
Ratas de la cepa Wistar, machos (250-300 g), proporcionadas por el

Instituto de Neurobiologa, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Campus
Juriquilla.
6.2 Compuestos qumicos y solventes
La fenilefrina (Phe), la acetilcolina (ACh), el 1H-[1,2,4]oxadiazolo-[4,3-a]-

quinoxa 1 in-1-ona (ODQ), el cloruro de tetraetilamonio (TEA), la glibenclamida, el
benzaldehdo, el alcohol benclico, el alcohol cinmico y el cinamaldehdo fueron
obtenidos de Sigma (St. Louis, MO, USA). Todas las sales, el hexano, el acetato
de etilo (AcOEt), el diclorometano (CH2Cl2), el hexano, el metanol (MeOH), la
acetona, otros reactivos y solventes se obtuvieron de J.T. Baker (Phillipsburg, NJ,
USA) o Sigma.
33
6.3 Recoleccin y preservacin del material vegetal
Los frutos recolectados se colocaron en bolsas de plstico debidamente

etiquetadas con la fecha y el origen, transportndose de inmediato a las
instalaciones de la Facultad de Qumica de la UAQ. A su llegada a la Facultad de
Qumica, se lavaron con agua destilada abundante y se secaron perfectamente
evitando la presencia de residuos. Los frutos se conservaron almacenados en
congelacin a -70 C hasta su utilizacin.
6.4 Evaluacin farmacolgica y anlisis cromatogrfico preliminar de los

extractos de diclorometano y hexnico del fruto de P. serotina
Con el objeto de seleccionar el extracto no polar de trabajo para este

estudio, se realiz la evaluacin farmacolgica y el anlisis cromatogrfico de los
extractos de diclorometano y hexnico preparados a partir del fruto liofilizado de P.
serotina.
6.4.1 Preparacin de los extractos no polares del fruto de P. serotina
El fruto entero se segment y se le retir la semilla para ser liofilizado.

Posteriormente, se someti a maceracin durante una semana con el
correspondiente solvente de extraccin (diclorometano o hexano) en una
proporcin 1:3 (w/v) para obtener el extracto correspondiente. Al trmino del
tiempo indicado, el extracto se filtr y se le retir el solvente a travs del empleo
de un rotaevaporador. El extracto resultante fue almacenado a -20 C.
6.4.2 Evaluacin farmacolgica de los extractos de diclorometano y hexnico
La evaluacin farmacolgica de los extractos de diclorometano y hexnico

se llev a cabo mediante el ensayo de aorta aislada de rata, el cual se describe en
el apartado 6.8 de esta seccin.
34
6.4.3 Anlisis cromatogrfico preliminar de los extractos de diclorometano y
hexnico
Los extractos de diclorometano y hexnico fueron evaluados por

cromatografa en capa fina con el objeto de determinar el extracto con mayor
nmero de compuestos y el sistema que permitiera una mejor resolucin de los
mismos. Se emplearon 3 diferentes tipos de fase mvil: hexano-diclorometano
partiendo de la proporcin 7:3 y aumentando la polaridad hasta la proporcin 3:7,
hexano-acetato de etilo partiendo de 9:1 y aumentando la polaridad hasta 5:5 y
hexano-acetona comenzando con la proporcin 9:1 y posteriormente aumentando
la polaridad hasta 5:5. Los cromatofolios empleados y los agentes reveladores se
indican en el apartado 6.5.2.
6.5 Estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano del fruto

de P. serotina
En base a los resultados obtenidos en los ensayos preliminares se

seleccion el extracto de diclorometano para llevar a cabo el estudio fitoqumico
biodirigido.
6.5.1 Fraccionamiento biodirigido del extracto
El extracto de diclorometano (3.7 g), obtenido a partir de 1.8 kg de fruto

liofilizado, se someti a un fraccionamiento inicial mediante cromatografa en
columna en fase normal; empleando en este caso, una columna al vaco con gel
de slice (100 g, Kiesegel 60 Merck 70-230 mesh, tamao de partcula 0.063-0.200
mm) y como eluyentes hexano y acetona en diversas proporciones para generar
fracciones, las cuales se reunieron de acuerdo a su similitud cromatogrfica al ser
evaluadas por cromatografa de capa fina (Martnez, 2007).
35
6.5.2 Anlisis cromatogrfico de las fracciones
Los anlisis cromatogrficos en capa fina se efectuaron, utilizando

cromatofolios de aluminio recubiertos con gel de slice (slica gel 60 GF 254 Merck).
Los compuestos se visualizaron con luz UV de longitud de onda corta (254 nm) y
larga (365 nm) y se revelaron utilizando como agentes cromgenos sulfato crico
al 1% y anisaldehdo cido al 0.5% (Wagner et al., 2001).
6.5.3 Evaluacin farmacolgica de las fracciones
Las fracciones resultantes se sometieron a la evaluacin farmacolgica,

mediante el ensayo de aorta aislada de rata, para identificar las fracciones
bioactivas. La actividad de cada fraccin se evalu a una concentracin igual a la
concentracin efectiva media (EC50) del extracto de diclorometano.
6.5.4 Purificacin de los compuestos bioactivos
La purificacin de los constituyentes individuales de las fracciones

bioactivas se realiz mediante cromatografa en columna en fase normal;
empleando en este caso, columnas abiertas con gel de slice (16 g, Kiesegel 60
Merck 70-230 mesh, tamao de partcula 0.063-0.200 mm) y como eluyentes
hexano y acetona en diversas proporciones para generar fracciones, las cuales se
reunieron de acuerdo a su similitud cromatogrfica al ser evaluadas por
cromatografa de capa fina.
La pureza de los compuestos, obtenidos a partir de las diversas

fracciones, se verific mediante cromatografa en capa fina y determinacin de su
punto de fusin.
36
6.6 Determinacin de la estructura qumica de los compuestos purificados
La elucidacin estructural de los compuestos purificados se realiz,

mediante el empleo de metodologas espectroscpicas y espectromtricas.
Para obtener los espectros de resonancia magntica nuclear protnica

(RMN 1H) y de carbono 13 (RMN 13C) se utiliz un equipo de 400 MHz,
empleando DMSO-d6 o CDCl3 como disolvente. Reportando los desplazamientos
qumicos en partes por milln (ppm) con referencia al tetrametilsilano (TSM). Los
anlisis de cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas se
realizaron mediante un cromatgrafo de gases acoplado a un espectrmetro de
masas (CG-EM-TOF) LECO Pegasus 4D.
Los estudios de espectroscopa y espectrometra se realizaron en la

Unidad de Servicios de Apoyo a la Investigacin (USAI) edificio B de la Facultad
de Qumica de la UNAM.
6.7 Anlisis qumico del aceite esencial
6.7.1 Obtencin del aceite esencial
El fruto entero se segment y se le retir la semilla para realizar una

hidrodestilacin. A partir de la mezcla acuosa obtenida del destilado se extrajo el
aceite esencial con diclorometano por el mtodo de particin. El extracto obtenido
fue secado con sulfato de sodio anhidro. Posteriormente, se evapor el CH2Cl2 por
rotaevaporacin a 35 C y a presin reducida, a fin de obtener el aceite esencial.
El producto obtenido se almacen en viales mbar a -20C.
37
6.7.2 Anlisis del aceite esencial por cromatografa de gases acoplada a
espectrometra de masas
Este estudio se realiz en la Unidad de Servicios de Apoyo a la

Investigacin (USAI) edificio B de la Facultad de Qumica de la UNAM. El
cromatograma del aceite esencial se obtuvo en un cromatgrafo de gases marca
Agilent 7683B, acoplado a un espectrmetro de masas (CG-EM-TOF) LECO
Pegasus 4D. Se emple una columna capilar de 10 m de largo, dimetro interno
180 m y espesor de pelcula de 0.18 m marca HP-5MS, utilizando helio de alta
pureza como gas acarreador.
6.8 Evaluacin farmacolgica: ensayo de aorta aislada de rata
6.8.1 Equipo
La tensin originada por la contraccin del msculo liso arterial se registr

por medio de un transductor de fuerza Grass modelo FT03 unido a un polgrafo
Grass de 6 canales Modelo 7D (Astro-Med, Inc. West Warwick, RI. USA).
6.8.2 Solucin fisiolgica empleada en el ensayo de aorta aislada de rata
Solucin de Krebs-Heinseleit para aorta: pH 7.4; 126.8 mM NaCl, 5.9 mM

KCl, 2.5 mM CaCl2, 1.2 mM MgCl2, 30 mM NaHCO3, 1.2 mM NaH2PO4 y 5 mM
D-glucosa (Forstermann et al., 1994; Feelisch et al., 1999).
6.8.3 Preparacin de las muestras para el ensayo de aorta aislada de rata
Se prepararon soluciones stock del extracto (16.6 mg/ml), el aceite

esencial (16.6 mg/ml), y los compuestos puros (166.6 mg/ml), a partir de los
cuales se hicieron las disoluciones correspondientes a las concentraciones a
evaluar en las cmaras de tejido aislado (1 a 1,000 g/mL para los extractos y el
38
aceite esencial; 1 a 10,000 g/mL para los compuestos puros). Las fracciones se
evaluaron preparando una nica solucin de 0.28 mg/mL. Para preparar las
soluciones stock del extracto, del aceite esencial y de las fracciones, se emple el
agente tensoactivo Tween 80 con el objeto de solubilizar las muestras en el medio
acuoso. Es pertinente mencionar que la ms alta concentracin de Tween 80 que
se emple en las evaluaciones fue de 0.20% v/v. En el caso de los compuestos
puros identificados en el aceite esencial, las soluciones stock se prepararon
directamente en agua, considerando que estos compuestos eran lquidos. Las
subsiguientes diluciones de todas las sustancias de prueba se prepararon en agua
desionizada.
6.8.4 Ensayo de aorta aislada de rata
Las ratas fueron anestesiadas con cloroformo y sacrificadas por

decapitacin. Se extrajo la aorta torcica descendente y se coloc en una solucin
fra de Krebs-Heinseleit, se cort en anillos de 4 a 5 mm. Estos anillos fueron
montados en cmaras de incubacin de 7 ml con solucin de Krebs-Heinseleit a
37 C y burbujeo constante de una mezcla de 95% 02 / 5% CO2. Las contracciones
mecnicas se registraron por medio de los transductores de fuerza acoplados al
polgrafo. El tejido se someti a una tensin de reposo (basal) de 1.5 g y se dej
estabilizar por 60 min. Una vez que el tejido alcanz el equilibrio, los segmentos se
pre-contrajeron con una solucin de KCl 100 mM durante 15 min, para estimular el
msculo arterial. A continuacin, se elimin el KCl, lavando de 3 a 8 veces cada
una de las cmaras. La aorta se dej reposar hasta alcanzar nuevamente su
tensin basal de 1.5 g. Una vez estabilizado el tejido, los segmentos de aorta se
contrajeron con fenilefrina (1 M). Las diferentes sustancias de prueba obtenidas
de los frutos de P. serotina se evaluaron en un intervalo de concentraciones de 1 a
1,000 g/ml. Las diferentes concentraciones de las muestras se adicionaron a las
cmaras de tejido aislado, 20 min despus de haber inducido la contraccin de la
aorta con la fenilefrina. La respuesta provocada por cada una de las
concentraciones de las sustancias de prueba en la aorta se registr durante un
39
perodo de 10 min y los cambios en la tensin producidos por las sustancias se
detectaron mediante los transductores de fuerza. Las respuestas se expresaron
como el porcentaje de relajacin tomando como base la contraccin alcanzada al
adicionar la fenilefrina (Feelisch et al., 1999; Ibarra-Alvarado et al., 2007).
6.9 Elucidacin del mecanismo de accin vasorrelajante de los compuestos

puros: determinacin de la participacin de la va del NO/GMPc y la
activacin de los canales de potasio
Se realizaron experimentos, mediante el ensayo de aorta aislada de rata,

para obtener informacin acerca del mecanismo mediante el cual los principios
activos purificados de P. serotina podran estar ejerciendo su efecto vasodilatador.
Los experimentos con segmentos de aorta libres de endotelio se realizaron
mediante la remocin mecnica suave de la capa de clulas endoteliales. Los
experimentos en los que fue necesario inhibir enzimas importantes de las vas del
NO/GMPc y la activacin de canales de potasio se realizaron incubando los tejidos
durante 20 minutos en presencia de los siguientes inhibidores, antes de agregar
los principios activos: a) ODQ (10 M) para inhibir la va del NO/GMPc, b) TEA
(1 mM) y c) glibenclamida (1 M) para inhibir la activacin de los canales de
potasio (Galle et al., 1999; Ibarra-Alvarado et al., 2002).
La estrategia experimental antes descrita, tanto para el estudio fitoqumico

biodirigido como para el anlisis del aceite esencial, se resume en las Figuras 6.1
y 6.2
40
Fruto liofilizado
Maceracin con
Hexano y CH2Cl2
Extracto hexnico Extracto de CH2Cl2
Evaluacin Cromatografa en
Farmacolgica capa fina (ccf)
Eleccin del extracto Purificacin de los

de trabajo compuestos de las
fracciones bioactivas
(cromatografa en
columna)
Extracto de CH2Cl2
Fraccionamiento Compuestos bioactivos

(cromatografa en
columna) Determinacin de la
pureza de los
compuestos obtenidos
Fracciones (ccf y punto de fusin)
obtenidas
Evaluacin
Evaluacin
farmacolgica
farmacolgica
Elucidacin estructural de
Identificacin de las los compuestos aislados
fracciones bioactivas
Figura 6.1 Esquema general del estudio fitoqumico biodirigido del extracto de
diclorometano obtenido a partir del fruto de P. serotina
41
Fruto fresco
Hidrodestilacin
Extraccin con CH2Cl2
Aceite esencial
Evaluacin Anlisis por

farmacolgica cromatografa de
gases/masas
Identificacin de los
principales componentes
Compuestos identificados
Evaluacin
farmacolgica
Elucidacin del mecanismo de accin de los

componentes bioactivos
Figura 6.2 Esquema general de trabajo para la obtencin, anlisis y elucidacin

del mecanismo de accin de los componentes bioactivos del aceite esencial
obtenido del fruto de P. serotina
42
VII. ANLISIS ESTADSTICO
Se realizaron de 4 a 6 evaluaciones para cada una de las concentraciones

de las sustancias de prueba. Los resultados son expresados como el promedio
el error estndar del promedio (S.E.M.).
Los datos experimentales generados en cada evaluacin se ajustaron a

una ecuacin sigmoidal y graficaron mediante el programa PRISMA 5.0 Graph
Pad ( Graph Pad Software Inc., San Diego, CA USA) para la obtencin de las
curvas concentracin-respuesta. En cada caso se calcul la EC50.
La EC50, definida como la concentracin de sustancia de prueba (g/mL)

necesaria para producir el 50% de la relajacin mxima sobre el tejido
precontrado con fenilefrina, fue utilizada para evaluar la variacin del efecto
relajante en las diferentes condiciones de valoracin de las curvas concentracin
respuesta.
Estos resultados fueron sometidos a un anlisis de varianza (ANOVA)

mediante el programa estadstico J.M.P. 5.0.1., seguido por la prueba de Tukey
para la evaluar la diferencia significativa entre las medias. Se consideraron
estadsticamente significativas aquellas diferencias con p 0.05.
43
VIII. RESULTADOS
8.1 Evaluacin farmacolgica y anlisis cromatogrfico preliminar de los

extractos de diclorometano y hexnico del fruto de P. serotina
Considerando que tanto el diclorometano y el hexano son solventes que

permiten la extraccin de compuestos no polares, con el objeto de seleccionar
cul de estos dos solventes resultaba ser el ms adecuado para abordar el estudio
fitoqumico biodirigido del fruto de P. serotina se prepararon ambos extractos a
pequea escala, se evaluaron en el ensayo de aorta y se analizaron en
cromatografa en capa fina
Ambos extractos relajaron, de manera dependiente de la concentracin, la

aorta aislada de rata (Figura 8.1). De acuerdo a estos resultados, el extracto de
diclorometano present una EC50 de 282.3 19.2 g/ml y una Emax de 73.6
6.6%, mientras que el extracto hexnico tuvo una EC50 de 222.6 29.3 g/ml y
una Emax de 65.5 5.4%.
Por lo que respecta al anlisis cromatogrfico preliminar, ste mostr que

el extracto de diclorometano contena un mayor nmero de compuestos que el
hexnico. De manera adicional, se observ que en todos los sistemas de elucin
utilizados hubo una mejor separacin de los componentes en las muestras del
extracto de diclorometano. La mejor resolucin fue observada en el sistema
hexano:acetona 9:1.
44
80
Extracto de diclorometano
60
Extracto hexnico
Relajacin (%)
40
20
0 1 2 3
Figura 8.1 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los

extractos de diclorometano y hexnico obtenidos a partir del fruto de P. serotina
8.2 Estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano
A partir del fraccionamiento cromatogrfico del extracto de diclorometano

se obtuvieron 20 fracciones de 500 ml cada una, las cuales se reunieron de
acuerdo a su similitud cromatogrfica generando un conjunto de 8 fracciones
primarias. En el Cuadro 8.1 se resume el fraccionamiento primario del extracto de
diclorometano.
Se evalu el efecto de las fracciones primarias sobre la musculatura lisa

arterial a la EC50 (282.3 g/ml) del extracto total. Este monitoreo dio como
resultado una mayor relajacin de la aorta para las fracciones PD-III, PD-IV, PD-V
y PD-VI (Figura 8.2 y Cuadro 8.2).
45
Cuadro 8.1 Resumen del fraccionamiento primario del extracto de diclorometano
por cromatografa en columna al vaco en gel de slice
Eluyente Proporcin Fracciones Fracciones combinadas Clave

Hexano 100 1-3 1-2 PD-I
Hexano-Acetona 95:5 4-5 3-6 PD-II
90:10 6-8 7-8 PD-III
85:15 9-10
80:20 11-12 9-13 PD-IV
75:25 13-14 14 PD-V
70:30 15-16 15 PD-VI
1:1 17-18 16-17 PD-VII
Acetona 100 19-20 18-20 PD-VIII
50
40
% Relajacin
30
20
10
0
PD-I PD-II PD-III PD-IV PD-V PD-VI PD-VII PD-VIII
Fraccin
Figura 8.2 Efecto vasorrelajante de las fracciones primarias obtenidas a partir del
extracto de diclorometano del fruto de P. serotina
46
Cuadro 8.2 Porcentajes de relajacin inducidos por las fracciones primarias del
extracto de diclorometano obtenido a partir del fruto de P. serotina
Fraccin evaluada % Relajacin
PD-I 3.9 1.4
PD-II 4.11.7
PD-III 41.1 3.5
PD-IV 40.5 3.6
PD-V 38.3 3.1
PD-VI 27.5 5.7
PD-VII 15.0 1.2
PD-VIII 22.9 4.0
Con base en estos resultados, se decidi realizar el anlisis

cromatogrfico de las fracciones primarias que mostraron el mayor efecto
vasorrelajante: PD-III y PD-IV.
8.2.1 Fraccionamiento secundario de la fraccin PD-III
La fraccin primaria PD-III se someti a cromatografa en una columna

abierta de slica gel, con este procedimiento se obtuvieron 140 fracciones de 6 ml
cada una, las cuales se reunieron de acuerdo a su similitud cromatogrfica
generando un conjunto de 13 fracciones secundarias (PD-III-1 a PD-III-13).
A partir de la fraccin secundaria PD-III-2 se obtuvieron 4.5 mg de un

slido blanco, soluble en diclorometano cuyo punto de fusin fue 216-218C, el
cual fue identificado, por comparacin de sus constantes fsicas y
espectroscpicas con las reportadas en la literatura (Mallavadhani et al., 2001),
como el uvaol (1). El rendimiento en peso seco con relacin al material vegetal fue
de 0.00025%. En el Cuadro 8.3 se muestran las constantes espectroscpicas de
este compuesto.
47
Cuadro 8.3 Constantes espectroscpicas del uvaol
RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6) (ppm) H 5.13 (1H, t, J= 3.5, H-12), 3.80 (1H, d,
J= 10.8 Hz, H-20a), 3.38 (1H, d, J= 10.8
Hz, H-28b), 3.20 (1H, J= 10.5 y 5.4, H-3),
1.05 (3H, s, CH3), 0.98 (3H, s, CH3), 0.97
(3H, s, CH3), 0.96 (3H, s, CH3), 0.93 (3H, d,
J=5.4 Hz, CH3), 0.83 (3H, d, J=6.5 Hz,
CH3), 0.80 (3H, s, CH3).
13
RMN- C (100 MHz, DMSO-d6) (ppm) C 177.8 (C-28),138.7 (C-13), 125.1 (C-12),
77.1 (C-3), 58.7 (C-18), 52.3 (C-5), 41.5 (C-
14).17.9 (C-29), 15.9 (C-23).
A partir de la fraccin secundaria PD-III-11 se obtuvieron 40.2 mg de un

polvo blanco amorfo con punto de fusin 259-260C; soluble en acetona. Este
compuesto fue identificado, por comparacin directa con una muestra autntica y
de sus constantes espectroscpicas y espectromtricas reportadas en la literatura
(Sang et al., 2002), como cido urslico (2). El rendimiento obtenido fue de
0.0022% Las constantes espectroscpicas de este compuesto se muestran en el
Cuadro 8.4
Cuadro 8.4 Constantes espectroscpicas del cido urslico

1
RMN- H (400 MHz, DMSO-d6) (ppm) H 4.65 (1H, m, H-12), 3.84 (1H, m, H-3),
3.58 (1H, d, J=11.25 Hz, H-18), 0.53 (3H, s,
CH3), 0.31 (3H, d, J=6.4 Hz, CH3), 0.24
(3H, s, CH3), 0.35 (3H, s, CH3), 0.16 (3H, d,
J=6.4 Hz, CH3)
13
RMN- C (100 MHz, DMSO-d6) (ppm) C 178.8 (C-28), 138.1 (C-13), 125.1 (C-
12), 79.2 (C-3), 54.3 (C-18), 55.3 (C-5),
42.7 (C-14),16.5 (C-29), 15.9 (C-23).
EMIE (m/z) 456 [M]+ (5), 248 (100), 219 (6), 207 (23),
203 (33), 190 (11), 189 (13), 133 (23), 119
(10), 85 (10), 71 (14), 69 (10), 57 (19)
48
8.2.2 Fraccionamiento secundario de la fraccin PD-IV
La fraccin primaria PD-IV se someti a cromatografa en una columna

abierta de silica gel, con este procedimiento se obtuvieron 160 fracciones de 8 ml,
las cuales se reunieron por similitud cromatogrfica dando un total de 6 fracciones
(PD-IV-1 a PD-IV-6).
A partir de la fraccin secundaria PD-IV-3 precipitaron de manera

espontnea 15 mg de un slido blanco cristalino, soluble en diclorometano, cuyo
punto de fusin fue de 217-219C. Este compuesto fue identificado, por
comparacin de sus constantes fsicas y espectroscpicas con las reportadas en
la literatura (Kim et al., 2005), como el aldehdo urslico (3).El rendimiento
obtenido fue de 0.00083%. Las constantes espectroscpicas de este compuesto
se muestran en el Cuadro 8.5.
Cuadro 8.5 Constantes espectroscpicas del aldehdo urslico

1
RMN- H (Piridina-d5, 400 MHz,) (ppm) H 9.52 (1H, s, CHO), 5.50 (1H, s, H-12),
3.44 (1H, dd, J = 6.8 Hz, H-3), 3.29 (1H, m,
H-18), 0.73 (3H, s, CH3), 0.51 (3H, d, J=6.0
Hz, CH3), 0.44 (3H, s, CH3), 0.38 (3H, s,
CH3), 0.26 (3H, d, J=6.0 Hz, CH3).
13
RMN- C (100 MHz, CDCl3) (ppm) C 207.3(C-28), 137.7 (C-13), 126.1 (C-12),
79.0 (C-3), 52.6 (C-18), 55.2 (C-5), 42.2 (C-
14),16.7 (C-29), 15.7 (C-23)
FABMS m/z 463 [M + Na]+
8.2.3 Obtencin del -sitosterol a partir de la fraccin no activa PD-I
A partir de la fraccin no activa PD-I precipitaron de manera espontnea

30 mg de un slido blanco cristalino de punto de fusin 140-141C, el cual fue
identificado por sus constantes fsicas y espectroscpicas como -sitosterol (4).
49
En la Figura 8.3 se presentan las estructuras de los compuestos
purificados a partir de las fracciones bioactivas. En la Figura 8.4 se muestra un
resumen del estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano del fruto
de P. serotina
30
30
29 20
29 20
21
21 19
19 12
12 13 18
13 18 11 22
11 22
25 26 17
25 26 17 1 COOH
1 14
14 CH2OH
28 2 9 16 28
2 9 16 8
8 10 15
10 15 3 5
3 5 4 27
4 27 7
7 OH
OH 6
6
23 24
23 24
1 2
30
29
28
29 20
21 22
21 26
19
12 18 24
13 18 12 20 25
22 23
11
25 11 17
26 17 27
19 13
1 14 CHO 1 16
9 14
2 16 28
9 2
10 8 15 8 15
10
3 5 27
4
7 7
HO 3 5
OH 6 4 6
23 24
3 4
Figura 8.3 Estructuras de los compuestos 1- 4
50
Fruto liofilizado de P. serotina
(1.8 kg)
Extraccin con CH2Cl2 , va maceracin por 1 semana
Filtrado y concentrado al vaco
Residuo Vegetal Extracto de CH2Cl2

(EC50 =282.3 g/ml)
Cromatografa en columna al vaco de slica gel
Hexano: Acetona (1:00:1)
PD-I PD-II PD-III PD-IV PD-V PD-VI PD-VII PD-VIII
Cromatografa en columna abierta de

-sitosterol slica gel
Hexano:Acetona (1:00:1)
PD-III-1 PD-III-13 PD-IV-1 PD-IV-6
PD-IV-3
PD-III-2 PD-III-11
Aldehdo
Uvaol cido urslico
urslico
Figura 8.4 Extraccin, fraccionamiento primario y purificacin de compuestos a

partir del extracto de diclorometano obtenido del fruto de P. serotina
8.3 Evaluacin farmacolgica de los compuestos purificados
Se realiz la evaluacin farmacolgica del cido urslico, purificado a

partir de la fraccin PD-III-11. La evaluacin de los otros dos compuestos
purificados, el uvaol y el aldehdo urslico, no fue posible debido a la mnima
cantidad obtenida en el proceso de purificacin.
51
El cido urslico present una relajacin significativa de la aorta,
dependiente de la concentracin (Figura 8.5), con una EC50 de 154.4 7.5 g/ml
y una Emx de 94.1 5.9 %. El efecto de este compuesto se compar con el de la
ACh (EC50 = 8.7 0.8 g/ml; Emx = 69.5 5.7 %), la cual se utiliz como control
positivo.
100
ACh
cido urslico
80
Relajacin (%)
60
40
20
0
-1 0 1 2 3
Log concentracin ( g/ ml)
Figura 8.5 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante inducido por

el cido urslico y la Ach
8.4 Obtencin del aceite esencial de los frutos de P. serotina
Se obtuvieron 20 mg de aceite esencial a partir de 2 kg de fruto fresco lo

cual implic un rendimiento del 0.001%.
52
8.5 Identificacin de los componentes del aceite esencial del fruto de P.
serotina
El anlisis por cromatografa de gases masas indic que el aceite esencial

obtenido del fruto del capuln contiene 58 componentes en la esencia (Figura 8.6).
A la fecha se han identificado siete productos mayoritarios mediante la
comparacin de sus espectros de masas con los de la biblioteca del equipo y los
que se encuentran en el sitio de internet de la National Institute of Standards and
Technology (NIST) [http://webbook.nist.gov/chemistry/]. Estos siete compuestos
representan el 50.34 % del porcentaje total de componentes presentes en la
esencia. En el Cuadro 8.6 se resumen los tiempos de retencin y la proporcin en
la esencia de cada uno de estos componentes.
900000
800000
700000
6
600000
5
500000 7
8 9
400000
11
300000
200000 10
100000
0
Time (s) 100 200 300 400 500 600
AIC
Figura 8.6 Cromatograma de gases obtenido del aceite esencial del fruto de
P.serotina
53
Cuadro 8.6 Constituyentes del aceite esencial del fruto de P. serotina
Compuesto Nombre Cantidad (%) tR (seg) Frmula
benzaldehdo 8.25 52 C7H6O

O
(5)
alcohol benclico 14.76 150 C7H8O

OH
(6)
-metoxytolueno 13.50 155 C8H10O

O
(7)
bencil-etil ter 5.80 220 C9H12O

O
(8)
alcohol cinmico 3.40 260 C9H10O

OH
(9)
Cinamaldehdo 2.67 347 C9H10O

O
(10)
bencil-butil ter 1.96 405 C11H16O

O
(11)
54
8.6 Evaluacin del efecto de los componentes del aceite esencial sobre el
tono de la aorta intacta aislada de rata
El alcohol benclico, el benzaldehdo, el cinamaldehdo y el alcohol

cinmico, compuestos identificados en el anlisis del aceite esencial del fruto de P.
serotina, fueron evaluados para determinar su participacin en el efecto
vasorrelajante del aceite esencial.
El Cuadro 8.7 muestra los valores de Emax y de EC50 de estos cuatro

componentes, del aceite esencial del fruto y del YC-1, un activador de la guanilato
ciclasa (GC), como control positivo. Los resultados muestran que los cuatro
compuestos, al igual que la esencia, inducen una relajacin, dependiente de la
concentracin, de la aorta aislada de rata. En todos los casos el efecto mximo
inducido por estas sustancias de prueba fue mayor a 97%. Las EC50 de los cuatro
componentes estudiados resultaron menores a la del aceite esencial, siendo el
alcohol cinmico el compuesto que produjo el efecto vasorrelajante ms potente
(EC50= 48.1 5.4 g/ml).
Las curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador de estos
compuestos se muestran en la Figura 8.7.
Cuadro 8.7 Valores de EC50 y Emax del efecto vasorrelajante del aceite esencial, el
alcohol cinmico, el cinamaldehdo, el alcohol benclico, el benzaldehdo y el YC-1
sobre aorta intacta aislada de rata
Compuesto EC50 (g/ml) Emax (%)

Aceite esencial 297.3 24.7 97.2 0.7
Alcohol cinmico 48.1 5.4 98.7 0.8
Cinamaldehdo 71.8 9.4 100.0 0.1
Alcohol benclico 303.9 28.8 100.0 0.1
Benzaldehdo 73.5 3.7 100.0 0.1
YC-1 1.6 0.2 100.0 0.1
55
100
80
YC-1
Relajacin (%)
Aceite esencial
60
Alcohol cinmico
Cinamaldehdo
40
Benzaldehdo
20 Alcohol benclico
0
-2 -1 0 1 2 3 4
Figura 8.7 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante del aceite

esencial obtenido a partir del fruto de P. serotina, del alcohol benclico, del
benzaldehdo, del cinamaldehdo, del alcohol cinmico y del YC-1
8.7 Evaluacin del efecto del alcohol benclico, el benzaldehdo, el

cinamaldehdo y el alcohol cinmico sobre el tono de la aorta aislada de rata
libre de endotelio
Considerando que los compuestos analizados presentan una relajacin

significativa de la aorta aislada de rata, el primer paso en la secuencia
metodolgica para determinar su mecanismo de accin consisti en evaluar la
participacin del endotelio en la relajacin de la musculatura lisa arterial.
Como se observa en las Figuras 8.8 a 8.10, la ausencia de endotelio no

modific la respuesta vasorrelajante del alcohol benclico, el benzaldehdo y el
cinamaldehdo, de acuerdo a la comparacin hecha de las curvas concentracin-
respuesta sin endotelio y con endotelio intacto.
56
100
80
Relajacin (%)
60 E+
E-
40
20
0
0 1 2 3 4

el alcohol benclico en ausencia (E-) y en presencia de endotelio (E+)
100
80
Relajacin (%)
60 E+
E-
40
20
0
0 1 2 3 4

el benzaldehdo en ausencia (E-) y en presencia de endotelio (E+)
57
100
80
Relajacin (%)
60 E+
E-
40
20
0
0 1 2 3 4
Figura 8.10 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante inducido

por el cinamaldehdo en ausencia (E-) y en presencia de endotelio (E+)
En contraste, la curva concentracin-respuesta del efecto vasodilatador

inducido por el alcohol cinmico se desplaz hacia la derecha, sugiriendo la
participacin de factores endoteliales tales como el NO, en el mecanismo de
accin de este compuesto (Figura 8.11). En una curva concentracin-respuesta,
un desplazamiento hacia la derecha implica una disminucin de la potencia de la
sustancia de prueba debido principalmente al bloqueo de los receptores
involucrados en la respuesta biolgica. En este caso, el desplazamiento sealado
en ausencia de endotelio sugiere un abatimiento en la respuesta debido
probablemente a la ausencia y/o disminucin en la liberacin de algn factor
endotelial vasorrelajante.
58
100
80
Relajacin (%)
60 E+
E-
40
20
0
0 1 2 3 4

por el alcohol cinmico en ausencia (E-) y en presencia de endotelio (E+)
8.8 Evaluacin de la participacin de la va del NO/GMPc
Con el objeto de evaluar si el efecto vasorrelajante producido por los

cuatro compuestos involucraba la activacin de la va del NO/GMPc a nivel del
musculo liso arterial, especficamente activando a la GC, receptor intracelular del
NO, se evalu el efecto de los compuestos en presencia de ODQ, un inhibidor de
la GC
Los resultados obtenidos para el alcohol benclico se muestran en la

Figura 8.12. Puede observarse que la presencia del bloqueador no modific la
actividad vasorrelajante de este compuesto. Resultados similares se obtuvieron
para el benzaldehdo, cuyas curvas concentracin-respuesta, en ausencia y en
presencia de ODQ, no presentan una diferencia estadsticamente significativa
(Figura 8.13).
59
100
80
Relajacin (%)
60 ODQ
Control
40
20
0
0 1 2 3 4

por el alcohol benclico en ausencia de endotelio y en presencia del bloqueador
ODQ
100
80
% Relajacin
60
ODQ
40 Control
20
0
1 2 3 4

por el benzaldehdo en ausencia de endotelio y en presencia del bloqueador ODQ
60
Por otra parte el anlisis estadstico, utilizando la prueba de Tukey, indic
una diferencia significativa entre las curvas concentracin-respuesta en ausencia y
en presencia del ODQ para el cinamaldehdo (Figura 8.14). Este mismo
comportamiento se observ en el caso del alcohol cinmico, cuya curva
concentracin-respuesta en presencia de ODQ present un desplazamiento hacia
la derecha ms significativo que el observado para la respectiva curva del
cinamaldehdo (Figura 8.13).
100
80
Relajacin (%)
60
ODQ
40 Control
20
0 1 2 3 4

por el cinamaldehdo en ausencia de endotelio y en presencia del bloqueador
ODQ
61
100
80
Relajacin (%)
60
40 ODQ
Control
20
0
0 1 2 3 4

por el alcohol cinmico en ausencia de endotelio y en presencia del bloqueador
ODQ
8.9 Evaluacin de la participacin de la activacin de los canales de potasio
Con el objeto de determinar la participacin de la activacin de los canales

de potasio en el mecanismo vasorrelajante inducido por los compuestos de prueba
se evalu su efecto en presencia de glibenclamida, un bloqueador de canales de
potasio dependientes de ATP (KATP) y de cloruro de tetraetilamonio, TEA, un
bloqueador de canales de potasio voltaje dependientes (BKCa).
Los resultados obtenidos para el alcohol benclico y el benzaldehdo se

presentan en las Figuras 8.16 y 8.17, respectivamente. Estas grficas muestran el
desplazamiento significativo de las curvas concentracin-respuesta en presencia
de los dos bloqueadores. En el caso del alcohol benclico observamos un
desplazamiento de la EC50 de 303.9 52.3 hasta una EC50 de 851.2 125.8 y de
62
1170 120.8 en presencia de TEA y glibenclamida, respectivamente. De igual
manera, ambos bloqueadores indujeron un desplazamiento hacia la derecha de la
curva concentracin-respuesta del benzaldehdo. En este caso la EC50 que
present un valor de 116.5 13.6 en ausencia de los bloqueadores se desplaz
hasta valores de 231.5 24.5 en el caso del TEA y 342.0 31.5 en presencia de
glibenclamida.
100
80
Control
Relajacin (%)
60 TEA
Glibenclamida
40
20
0 1 2 3 4

por el alcohol benclico en ausencia de endotelio y en presencia de los
bloqueadores TEA y glibenclamida
63
100
80
Relajacin (%)
60
Control
TEA
40
Glibenclamida
20
0 1 2 3 4

por el benzaldehdo en ausencia de endotelio y en presencia de los bloqueadores
TEA y glibenclamida
Con respecto al cinamaldehdo, no se observ una variacin significativa

en la curva concentracin-respuesta en presencia de glibenclamida. En el caso de
la curva concentracin-respuesta del compuesto en presencia del TEA se observa
que la EC50 modific su valor de 45.5 5.6 a 78.2 7.3 en presencia del
bloqueador. Sin embargo, el anlisis estadstico realizado mediante la prueba de
Tukey indic que esta variacin no es estadsticamente significativa (Figura 8.18).
64
100
80
Relajacin (%)
60 Control
TEA
40
Glibenclamida
20
0 1 2 3 4

por el cinamaldehdo en ausencia de endotelio y en presencia de los bloqueadores
TEA y glibenclamida
Finalmente, la curva concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante

inducido por el alcohol cinmico present un desplazamiento significativo en
presencia de glibenclamida y del TEA. Las grficas de los resultados de este
compuesto muestran que para ambos bloqueadores de canales de potasio, las
curvas concentracin-respuesta presentan desplazamiento significativo hacia la
derecha. La EC50 aument de 128.8 14.0 en el control a 382.5 46.1 para el
TEA y a 272.8 33.0 para la glibenclamida (Figura 8.19)
65
100
80
Relajacin (%)
Control
60
TEA
Glibenclamida
40
20
0 1 2 3 4

por el alcohol cinmico en ausencia de endotelio y en presencia de los
bloqueadores TEA y glibenclamida
66
IX. DISCUSIN
Considerando como antecedente, la capacidad de inducir relajacin de la

musculatura lisa vascular de los extractos orgnicos y el aceite esencial obtenidos
a partir del fruto de P. serotina (Villa de la Torre, 2008), el presente estudio abord
la caracterizacin qumica y farmacolgica de los compuestos no polares que
pudieran ser responsables de este efecto vasoactivo.
La seleccin del solvente empleado para la obtencin de los extractos se

realiz con base en los resultados obtenidos en el ensayo farmacolgico y el
anlisis cromatogrfico preliminar. Las curvas concentracin-respuesta obtenidas
para los extractos de diclorometano (EC50 de 282.3 19.2 g/mL) y hexnico
(EC50 de 222.6 29.3 g/mL) mostraron que ambos tienen un efecto relajante de
la aorta aislada de rata similar. Sin embargo, el anlisis cromatogrfico mostr que
el extracto de diclorometano extrajo un mayor nmero de componentes que el
extracto hexnico y adems, presentaba una mayor resolucin en los diferentes
sistemas de elucin evaluados.
Por tanto, en el presente trabajo se decidi realizar el estudio fitoqumico

biodirigido del extracto de diclorometano, preparado a partir del fruto P.serotina,
con el objeto de purificar y caracterizar los compuestos no polares bioactivos
presentes. Adicionalmente, el aceite esencial se analiz por cromatografa de
gases acoplada a espectrometra de masas, a fin de identificar sus principales
componentes y evaluar el efecto farmacolgico de algunos de los compuestos
mayoritarios. El abordar ambos estudios se realiz para considerar un amplio
rango de metabolitos secundarios no polares que pudieran ser los responsables
de la actividad farmacolgica.
El estudio fitoqumico biodirigido consisti en la obtencin a gran escala

del extracto de diclorometano del fruto de P. serotina, su fraccionamiento por
cromatografa en columna y la purificacin de los compuestos bioactivos por
67
tcnicas cromatogrficas. En la etapa del fraccionamiento la actividad
farmacolgica se monitore mediante el ensayo de aorta aislada de rata. Este
ensayo mostr que la actividad relajante de la musculatura lisa vascular se
concentr en las fracciones primarias PD-III, PD-IV y PD-V y en menor medida en
la fraccin PD-VI. A partir de estos resultados, se decidi enfocar el anlisis en las
fracciones con mayor actividad, PD-III y PD-IV. Las fracciones PD-V y PD-VII
sern abordadas en un estudio posterior.
El anlisis de las fracciones PD-III y PD-IV, utilizando tcnicas

cromatogrficas, permiti el aislamiento y la purificacin de tres triterpenos
pentacclicos de tipo ursano. En la figura 9.1 se muestra el ncleo ursano. En
todos los casos, los metabolitos aislados fueron identificados por comparacin de
sus datos espectroscpicos y espectromtricos con los previamente descritos en
la literatura. A partir de la fraccin PD-III se obtuvieron el cido urslico y el uvaol
de las sub-fracciones 2 y 11 respectivamente. De la fraccin PD-IV se purific el
aldehdo urslico.
Figura 9.1 Ncleo ursano
El cido urslico, ya se haba identificado en otras especies del gnero

Prunus (Wolbis et al., 2001; Shegmin et al., 2002; Amico et al., 2006) y
especficamente en P. serotina, nuestro grupo de trabajo ya lo haba purificado a
partir de las hojas (Ibarra-Alvarado et al., 2009b). Por otra parte, el aldehdo
68
urslico, tambin haba sido aislado previamente de las hojas de P. serotina
(Biessels et al., 1974). Sin embargo, este trabajo constituye el primer reporte de la
presencia del cido urslico y del aldehdo urslico en el fruto del capuln. Por otra
parte en la literatura no existe ningn reporte de la presencia del uvaol en alguna
especie del gnero Prunus.
Desde el punto de vista farmacolgico se ha reportado que el cido

urslico y el uvaol poseen diversas propiedades farmacolgicas, entre las que se
encuentran su capacidad antiinflamatoria (Vasconcelos et al., 2006; Natarauyu et
al., 2007), protectora en dao heptico (Liu et al.,1994; Herrera et al.,2006) y
antiproliferativa en algunos tipos de cncer (Trumbull et al.,1976;; Martin et
al.,2009). Adicionalmente, estudios previos demostraron que tanto el uvaol
(Rodrguez-Rodrguez et al., 2006) como el cido urslico (Aguirre-Crespo et al.,
2006) inducen una relajacin de la musculatura lisa arterial y poseen efecto
cardiotnico (Somova et al., 2004). Con respecto al aldehdo urslico, slo existe
un trabajo en el que se reporta que este triterpeno inhibe la actividad de la acil-
CoA-colesterol acil transferasa (ACAT) (Kim et al., 2005). En la presente
investigacin, considerando la cantidad de muestra disponible, solo fue posible
evaluar el efecto farmacolgico del cido urslico. Nuestros resultados
corroboraron el efecto vasorrelajante de este compuesto demostrado con
anterioridad por el grupo de Aguirre-Crespo (2006). Las evidencias experimentales
y los datos reportados en la literatura indican que el cido urslico y el uvaol
constituyen unos de los principios activos vasorrelajantes contenidos en el fruto
del capuln.
Adicionalmente, a partir de la fraccin no activa PD-I, se obtuvo el -

sitosterol, un esterol que aunque se encuentra ampliamente distribuido en el reino
vegetal, no se haba detectado previamente en P. serotina. Diversos estudios han
mostrado que este compuesto, al igual que otros fitosteroles, es capaz de
disminuir los niveles de colesterol srico (Beveridge et al., 2002; Fierro, 2004).
69
Esta accin hipocolesterolemiante podra contribuir al efecto benfico del fruto del
capuln en el tratamiento de las enfermedades cardiovasculares.
Por otra parte, el estudio de los aceites esenciales obtenidos a partir de

diversas plantas alimenticias y medicinales actualmente tiene un gran auge debido
a que se ha demostrado que las esencias constituyen un gran reservorio de
compuestos bioactivos.
Los aceites esenciales son lquidos oleosos aromticos que se obtienen

generalmente por hidrodestilacin a partir de la corteza, las ramas, las races, las
hojas o los frutos de las plantas. Estos aceites representan una mezcla compleja
de metabolitos secundarios voltiles, entre los que se encuentran mono y
sesquiterpenos, alcoholes, teres, aldehdos y cetonas, responsables no slo de
las caractersticas aromticas, sino tambin de las propiedades medicinales que
se les han atribuido a muchas esencias (Kalemba y Kunicka, 2003).
Los estudios realizados sobre la actividad biolgica de los aceites

esenciales se han centrado principalmente en la determinacin de su actividad
antimicrobiana e insecticida (Daferera et al., 2000; Burt, 2004). Aunque tambin se
ha demostrado que diversos aceites esenciales y/o sus componentes poseen
propiedades antiinflamatorias (Iscan et al., 2006), antioxidantes (Sacchetti et al.,
2004; Singh y Marimuthu, 2006; El-Massry et al., 2009), antitumorales (Kalemba y
Kunicka, 2003) y vasorrelajantes (Yanaga et al.,2006; Caldas-Magalhaes et
al.,2008; Pinto et al.,2009), lo que ha contribuido a incrementar el inters en las
propiedades funcionales de las esencias y su posible aplicacin medicinal.
Especficamente, en cuanto a aceites esenciales obtenidos de especies

del gnero Prunus con actividad biolgica, slo se ha reportado la actividad
antifngica del aceite de la hoja de P. persica (Tripathi et al., 2008).
Recientemente, nuestro grupo de trabajo report que el aceite esencial obtenido a
70
partir de las hojas de P. serotina presenta una actividad vasorrelajante (Ibarra-
Alvarado et al., 2009b).
En el presente trabajo, el anlisis del aceite esencial del fruto de P.

serotina indic la presencia de 58 compuestos, de los cuales pudieron ser
identificados 7 que representan el 50.34 % del total de componentes presentes en
la esencia. Cuatro de estos compuestos se identificaron como el alcohol benclico
(14.76 %), el benzaldehdo (8.25 %), el alcohol cinmico (3.40 %) y el
cinamaldehdo (2.67 %). Estos compuestos tambin son componentes
mayoritarios, aunque en diferente proporcin, del aceite esencial de las hojas
(Ibarra-Alvarado et al., 2009b).
Estos metabolitos secundarios se han detectado en una gran variedad de

aceites esenciales de diversas especies vegetales. Sin embargo, los estudios
farmacolgicos realizados sobre stos son escasos. Se ha demostrado, por
ejemplo, que aceites esenciales que contienen alcohol benclico poseen actividad
antibacteriana (Thangadurai et al, 2002; Al-Reza et al.,2009). Este mismo tipo de
actividad se ha encontrado para el benzaldehdo (Bowles y Juneja, 1998) y el
cinamaldehdo (Burt, 2004), el cual posee adems, efectos antioxidantes
(Sivakumar, 2006), antiinflamatorios y quimioprotectores (Liao et al., 2008). Por
otra parte, en la literatura no existe ningn reporte acerca de la actividad
farmacolgica del alcohol cinmico. Con respecto a estudios relacionados con el
efecto de estos compuestos sobre el sistema cardiovascular, existe un trabajo
realizado hace mas de 80 aos en el que se reporta que el benzaldehdo induce
una relajacin de la musculatura lisa arterial (Macht,1922), sin embargo este
estudio no hace ninguna referencia acerca del mecanismo de accin involucrado
en el efecto vasorrelajante. Recientemente, Yanaga et al. (2006) demostraron que
el cinamaldehdo relaja la musculatura lisa arterial, mediante mecanismos
dependientes e independientes de endotelio. Considerando que no existen
estudios previos que aborden el efecto del alcohol benclico y el alcohol cinmico
sobre la musculatura lisa arterial, y tomando en cuenta que el estudio realizado en
71
este sentido sobre el benzaldehdo, adems de ser muy antiguo no proporciona
ninguna informacin sobre el mecanismo de accin, se decidi realizar la
evaluacin farmacolgica de los cuatro compuestos identificados en el aceite
esencial del fruto de P. serotina, empleando el modelo de aorta aislada de rata.
El aceite esencial del fruto y los cuatro componentes analizados indujeron

una vasorrelajacin significativa, dependiente de la concentracin, de la aorta
aislada de rata. El mayor efecto vasodilatador fue observado para el alcohol
cinmico (48.1 5.4 g/ ml), el cual fue aproximadamente 30 veces menos
potente que el YC-1, empleado como control positivo. El cinamaldehdo y el
benzaldehdo fueron 45 veces menos potentes que este control, mientras que la
potencia del alcohol benclico fue aproximadamente 200 veces menor que la del
control. Finalmente, el aceite esencial result ser 180 veces menos potente que el
YC-1. Sin embargo, tanto los cuatro compuestos de prueba como la esencia
presentaron un efecto mximo comparable al del control.
Respecto a la elucidacin del mecanismo de accin involucrado en el

efecto vasorrelajante de los cuatro compuestos, el primer paso del diseo
experimental consisti en determinar si estos metabolitos actuaban a nivel de las
clulas endoteliales o a nivel de las clulas del msculo liso arterial. Con este
objeto se realizaron experimentos en ausencia de endotelio, los cuales indicaron
que .el alcohol benclico, el benzaldehdo y el cinamaldehdo presentan un
mecanismo vasodilatador independiente de endotelio.
A diferencia de los compuestos anteriores, las curvas concentracin-

respuesta para el alcohol cinmico, en ausencia y presencia de endotelio,
muestran una diferencia significativa, lo cual sugiere que este metabolito acta, en
parte, sobre las clulas endoteliales.
Los resultados obtenidos en los experimentos realizados en ausencia de

endotelio sugieren que el alcohol benclico, el benzaldehdo y el cinamaldehdo
72
actan en las clulas del msculo liso, bien sea activando alguno de los pasos del
mecanismo de transduccin iniciado por factores endoteliales que inducen
vasorrelajacin, tales como el NO y/o la PGI2, o activando canales de potasio
localizados en las membranas de las clulas musculares. En tanto que el alcohol
cinmico, posiblemente est promoviendo la liberacin de factores endoteliales,
aunque tambin es muy probable que est actuando en las clulas musculares
mediante alguno de los mecanismos recin descritos. Vale la pena mencionar que
los resultados obtenidos en la presente investigacin con relacin al
cinamaldehdo difieren de lo reportado anteriormente por Yanaga et al. (2006),
quienes propusieron que este compuesto posee un mecanismo vasodilatador que
depende, al menos en parte, de la liberacin de factores endoteliales.
El siguiente paso en la elucidacin del mecanismo de accin de los

compuestos objeto de estudio, consisti en determinar si stos activaban al
receptor intracelular del NO, la guanilato ciclasa (GC), o bien actuaban sobre
canales de potasio activados por ATP o voltaje dependientes, localizados en la
membrana muscular. En el primer caso, se realizaron experimentos en presencia
de ODQ, un inhibidor especfico de la GC. Los resultados derivados de estos
experimentos mostraron que el efecto vasodilatador producido por el benzaldehdo
y el alcohol benclico no involucra la activacin de la GC. En contraste, el
desplazamiento hacia la derecha de las curvas concentracin-efecto
vasorrelajante del cinamaldehdo y del alcohol cinmico, en presencia del ODQ,
sugieren que ambos compuestos relajan la musculatura lisa arterial, mediante un
mecanismo que involucra al menos en parte, la activacin del receptor intracelular
del NO. Los resultados obtenidos en estos ensayos para el cinamaldehdo, en este
caso s concuerdan con los reportados por Yanaga et al. (2006).
Finalmente, a fin de determinar si los compuestos activaban canales de

potasio, se evalu su efecto en presencia de TEA, un bloqueador de canales de
potasio voltaje dependientes, y de glibenclamida, un bloqueador de canales de
potasio activados por ATP. Las curvas concentracin-respuesta del alcohol
73
cinmico, del alcohol benclico y del benzaldehdo mostraron un desplazamiento
hacia la derecha, en presencia de los dos bloqueadores de canales de potasio.
Por lo tanto, estos compuestos deben en parte su efecto vasorrelajante a la
activacin de los canales de potasio activados por ATP y voltaje dependientes. A
diferencia de lo encontrado para los dos alcoholes y el benzaldehdo, la curvas
concentracin-efecto vasodilatador del cinamaldehdo no se modificaron en
presencia del TEA ni de la glibenclamida, indicando que su mecanismo de accin
no involucra la activacin de canales de potasio. Estos resultados coinciden con
las observaciones previamente hechas por Yanaga et al. (2006).
En resumen, los experimentos realizados para determinar el mecanismo

de accin de los compuestos objeto de estudio indicaron que el efecto
vasodilatador del alcohol benclico y del benzaldehdo es inducido mediante un
mecanismo independiente de endotelio, relacionado, al menos en parte, con la
activacin de los canales de potasio voltaje dependientes y activados por ATP. En
contraste, el alcohol cinmico provoca una vasorrelajacin que involucra la
liberacin de factores endoteliales y la accin directa sobre la musculatura lisa
arterial. En este ltimo caso, estimulando la GC y activando ambos tipos de
canales de potasio. Finalmente, el cinamaldehdo presenta un mecanismo
independiente de endotelio, relacionado con la activacin tanto de la GC, como de
los canales de potasio activados por ATP y voltaje dependientes.
En este estudio se reporta por primera vez el efecto vasorrelajante del

alcohol benclico y del alcohol cinmico y su mecanismo de accin, as como el
mecanismo de accin del benzaldehdo. Nuestro trabajo confirma algunos de los
resultados obtenidos previamente por el grupo de Yanaga con relacin al
mecanismo de accin del cinamaldehdo. Sin embargo, se encontraron
discrepancias con los reportes de dichos investigadores, quienes propusieron que
este compuesto tambin promueve la liberacin de factores endoteliales.
Indudablemente es necesario realizar ms experimentos a fin de descartar
completamente la participacin de dichos factores.
74
Estos hallazgos son relevantes ya que estos compuestos, adems de
tener una amplia distribucin en diferentes especies vegetales (Macht, 1922;
Feron et al.,1991; Bickers et al, 2005) y de emplearse de manera ordinaria como
ingredientes de fragancias en la industria cosmtica y como aditivos en alimentos
(Krings y Berger,1998; Bickers et al., 2005), presentan un bajo nivel de toxicidad
(Nair 2001; Adams et al, 2004; Anderson 2006; Bickers et al, 2005), lo cual,
aunado a su efecto vasodilatador abre la perspectiva de su posible utilizacin
como molculas prototipo para el desarrollo de frmacos tiles en el tratamiento
de la hipertensin arterial.
Los resultados obtenidos en el presente trabajo constituyen una slida

evidencia del potencial nutracetico que posee el fruto de P. serotina. Desde el
punto de vista nutricional, este fruto representa una fuente importante de
carbohidratos y adems brinda un mayor aporte de protenas con relacin a otros
frutos provenientes de otras especies del gnero Prunus (Villa De la Torre, 2008).
Adems de estas propiedades nutricionales, el fruto del capuln constituye una
fuente de compuestos vasorrelajantes no polares. La actividad farmacolgica
demostrada para los compuestos identificados en el presente trabajo, sugiere que
el fruto del capuln puede emplearse para el tratamiento de las enfermedades
cardiovasculares. Esta nueva aplicacin nutracutica del fruto representa un
beneficio adicional que se suma a los efectos curativos que se le atribuyen en la
medicina tradicional para tratar enfermedades respiratorias y gastrointestinales.
75
X. CONCLUSIONES
- El estudio fitoqumico biodirigido del extracto de diclorometano obtenido

a partir del fruto de P. serotina condujo al aislamiento de tres triterpenos
pentacclicos de tipo ursano: el uvaol, el cido urslico y el aldehdo urslico.
Adicionalmente, se obtuvo el -sitosterol . Este trabajo constituye el primer reporte
de la presencia del uvaol y del -sitosterol en P. serotina. Por otra parte, aunque el
cido urslico y el aldehdo urslico ya se haban aislado de las hojas de esta
especie, no se haba reportado su presencia en el fruto.
- Considerando la cantidad de muestra disponible, slo fue posible evaluar

el efecto farmacolgico del cido urslico. Este metabolito presenta una relajacin
significativa de la aorta, dependiente de la concentracin. Esta evidencia
experimental y los datos reportados en la literatura indican que el cido urslico y
el uvaol constituyen unos de los principios activos vasorrelajantes contenidos en el
fruto del capuln.
- El anlisis del aceite esencial del fruto de P. serotina indic la presencia

de 58 compuestos, de los cuales pudieron ser identificados 7 que representan el
50.34% del total de componentes presentes en la esencia. Cuatro de estos
compuestos se identificaron como el alcohol benclico, el benzaldehdo, el
cinamaldehdo y el alcohol cinmico.
- La evaluacin farmacolgica del alcohol benclico, el benzaldehdo, el

cinamaldehdo y el alcohol cinmico indica que los cuatro compuestos inducen
una vasorrelajacin significativa, dependiente de la concentracin, de la aorta
aislada de rata. El compuesto con la mayor potencia vasodilatadora fue el alcohol
cinmico.
76
- El efecto relajante de la musculatura lisa arterial inducido por el alcohol
benclico y el benzaldehdo involucra un mecanismo independiente de endotelio,
relacionado, al menos en parte, con la activacin de los canales de potasio voltaje
dependientes y activados por ATP. Por otra parte, en la vasorrelajacin inducida
por el alcohol cinmico intervienen la activacin de la GC y la activacin de ambos
tipos de canales de potasio. Finalmente, el cinamaldehdo presenta un mecanismo
independiente de endotelio, relacionado con la activacin, tanto de la GC como de
los canales de potasio activados por ATP y voltaje dependientes.
- Este trabajo constituye el primer reporte acerca del efecto vasorrelajante

y la elucidacin del mecanismo de accin del alcohol benclico, el benzaldehdo y
el alcohol cinmico. Considerando su amplia distribucin en diferentes especies
vegetales y su bajo nivel de toxicidad, estos compuestos pueden proponerse como
molculas prototipo para el desarrollo de frmacos tiles en el tratamiento de
enfermedades cardiovasculares, tales como la hipertensin arterial.
77
XI. BIBLIOGRAFA
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from the flowers of Prunus mume. J. Nat. Prod. 65: 1151-1155.
88
ANEXO 1
Espectro 1. Espectro de RMN1H del cido urslico.
89
Espectro 2. Espectro de RMN1H del uvaol.
90
Espectro 3. Espectro de RMN1H del aldehdo urslico.
91

Tesis - Maestria - Francisco Javier Luna - Prunus Serotina

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UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO

PROGRAMA DE POSGRADO EN ALIMENTOS DEL

Caracterizacin qumica y farmacolgica de

Que como parte de los requisitos para obtener el grado de:

Maestro en Ciencia y Tecnologa de Alimentos

Q.F.B. Francisco Javier Luna Vzquez

Dra. Alejandra Rojas Molina

Santiago de Quertaro, Qro. Octubre de 2009

(Palabras clave: Prunus serotina, aorta de rata, vasorrelajante, cido

A los compaeros de camino

Al CONACyT, por la beca otorgada para la realizacin de este proyecto

Al Dr. Fausto Rivero Cruz y a la Unidad de Servicios de Apoyo a la

A los investigadores y personal del PROPAC que directa o indirectamente

A los miembros de mi comit de tesis, especialmente al Dr. Edmundo

A la Dra. Alejandra Rojas Molina y el Dr. Csar Ibarra Alvarado, por

De acuerdo al Dr. Stephen DeFelice, quien acu este trmino en 1989

Esto nos conduce a considerar que los nutracuticos son componentes de

De manera particular, Mxico posee una gran tradicin en el empleo de

Desafortunadamente, a pesar de esta gran tradicin en el empleo de

Dentro de este contexto, se encuentra el caso del capuln (Prunus

Existen escasos estudios qumicos y farmacolgicos acerca de P.

Adicionalmente, nuestro grupo encontr evidencias que indicaron que los

2.1 Estudios qumicos realizados sobre especies del gnero Prunus

El gnero Prunus pertenece a la familia Rosaceae e incluye alrededor de

Se han aislado e identificado diferentes metabolitos secundarios a partir

2.2.1 Taxonoma, caractersticas morfolgicas y distribucin

Cuadro 2.1 Clasificacin taxonmica de P. serotina

Sin embargo, algunos autores afirman que Prunus serotina no es el

Por otra parte, el capuln recibe en Mxico diversos nombres,

Las caractersticas morfolgicas de esta especie se enlistan a

Como caractersticas notables de P. serotina se pueden mencionar su

Figura 2.1 El rbol de P. serotina y su fruto

Esta especie es originaria de Amrica. Se extiende actualmente desde

El rbol de P. serotina ha sido empleado tradicionalmente en nuestro pas

2.2.3 Estudios fitoqumicos y farmacolgicos realizados sobre P. serotina

Se han realizado muy pocos estudios fitoqumicos sobre P. serotina y la

Con relacin al fruto, slo se ha reportado un estudio realizado con la piel

glucopiransido camferol -3-O--L-

camferol -3-O--D- quercetina -3-O-

quercetina -3-O-(2-O-- quercetina -3-O--L-

quercetina -3-O-rutinsido quercetina -3-O-(2--L-

isoramnetina -3-O-- isoramnetina -3-O-

aldehdo urslico 2,3-dihidroxi-urs-12-en

En una investigacin previa, nuestro grupo de trabajo realiz el estudio de

Una de las especies seleccionadas a partir del estudio etnobotnico y

En ese estudio se prepar el extracto metanlico de las hojas de P.

Figura 2.2 Efecto vasorrelajante sobre la aorta de rata de las fracciones de

La evaluacin farmacolgica de los compuestos purificados indic que el

Figura 2.3 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasodilatador de la

Nuestro grupo de trabajo tambin abord el estudio farmacolgico del fruto

La seleccin de los solventes empleados para la obtencin de los

Las recolectas incluyeron muestras provenientes de Cholula, Puebla;

La evaluacin demostr que los extractos acuosos de los frutos de capuln

Con respecto a los extractos etanlicos, todos indujeron un efecto

Figura 2.4 Curvas-concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los

Finalmente, los aceites esenciales obtenidos de los frutos de las tres

Los resultados obtenidos a partir de la evaluacin farmacolgica de los

Figura 2.5 Curvas concentracin-respuesta del efecto vasorrelajante de los

De acuerdo con los antecedentes quimiotaxnomicos del gnero Prunus,

Las enfermedades cardiovasculares constituyen una de las principales

En nuestro pas, las enfermedades del corazn en conjunto constituyen la

La hipertensin, definida como una elevacin de la presin sangunea

El tono vascular juega un papel importante en la regulacin de la presin

Con base en estos antecedentes, resulta evidente que nuevas estrategias