PRACTICA 7.

ESTERILIZACIN POR CALOR SECO Y CALOR

HMEDO.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA APLICADA

17-I
JUEVES, 09 DE FEBRERO DE 2017

CRUZ COLN MARA DEL ROCO

CRUZ LPEZ LUZ MARA

2142002660
DAZA PONCE YISEL
2133004049
GARCA DE LA CRUZ AGLAETTE
2143033123

EQUIPO 3
PRCTICA 7
ESTERILIZACIN POR CALOR SECO Y CALOR HMEDO.
I. OBJETIVO
Demostrar la diferencia del efecto del calor seco y hmedo, usando como indicar
la vialidad de una bacteria.
II. INTRODUCCIN
En todos los ambientes abiertos se puede encontrar una gran cantidad de
microorganismos (principalmente bacterias y virus). Estos microorganismos, si
tienen a su disposicin nutrientes y condiciones ambientales adecuadas pueden
crecer y multiplicarse como veremos en el prximo captulo.
En los ambientes naturales hay mezclas complejas de muchos tipos de
microorganismos que forman poblaciones que conviven. Con objeto de poder
utilizar los microorganismos con fines aplicados y para evitar sus efectos nocivos,
es necesario disponer de mtodos que permitan eliminarlos de manera que
podamos conseguir ambientes limpios sin contaminacin microbiana.
Se dice que un ambiente es estril cuando se han eliminado todos los
microorganismos del mismo. La esterilidad se puede alcanzar usando
procedimientos fsicos (calor, radiaciones), qumicos o mecnicos (filtracin). Sin
embargo, los procedimientos de esterilizacin son costosos y, en ciertas
ocasiones, desaconsejables. Por ejemplo, la esterilizacin completa de ciertos
alimentos no es posible sin destruir sus caractersticas nutritivas.
Se dice que un ambiente es asptico cuando se han eliminado todos los
microorganismos patgenos. Un ambiente asptico no tiene porqu ser estril. La
asepsia tambin se puede conseguir por procedimientos fsicos y qumicos.
Los microorganismos mueren rpidamente cuando son sometidos a temperaturas
superiores a su ptima de crecimiento. Esto permite utilizar altas temperaturas
para eliminar microorganismos por termodestruccin. Los mtodos basados en el
calor son quiz los ms utilizados para controlar el crecimiento microbiano.
La sensibilidad de los diferentes tipos de microorganismos a los tratamientos
trmicos es distinta. Las esporas son la formas ms termorresistentes y las clulas
vegetativas las ms sensibles. Por otro lado, los microorganismos Gram-positivos
tienden a ser ms resistentes que los Gram-negativos. Por consiguiente, desde un
punto de vista prctico, la esterilizacin por calor est destinada a matar las
esporas bacterianas.
El medio en el que se encuentra un microorganismo influye en su sensibilidad al
calor. Por lo general, los microorganismos son ms sensibles a las altas
temperaturas cuando se encuentran a pHs cidos, mientras que las
concentraciones altas de protenas o azcares en el medio disminuyen la
efectividad del calor y protegen a las bacterias.
Las altas concentraciones de sal tienen efectos variables segn el tipo de
microorganismo La esterilizacin por calor se puede hacer en medio hmedo
usando un autoclave o en medios secos mediante el horno Pasteur.
El autoclave esteriliza usando el calor hmero transmitido por vapor de agua
sobrecalentado debido al uso de altas presiones.
El efecto del vapor de agua es facilitar la transmisin del calor al objeto en
esterilizacin. El procedimiento usual es usar 121C para lo que es necesaria una
presin de 1.1 kg/cm2 . En estas condiciones un tratamiento de 15 min es
suficiente para eliminar las esporas de Gram-positivos.
En un horno Pasteur se usa calor seco transmitido por el aire al objeto en
esterilizacin. En este caso, la temperatura ms usual suele ser de 180-250C y el
tiempo de esterilizacin entre 30 min y varias horas. El uso del horno Pasteur est
limitado por las caractersticas del material a esterilizar. (Retther L. 2011)
III. RESULTADOS
Daza Ponce Yisel
El tubo de ensayo (1) que se meti en autoclave no tiene turbidez en el medio, y el
tubo de ensayo (2) que se meti al horno tiene turbidez en el medio.

(1) No se observa desarrollo de

Bacillus subtilis en el medio del
tubo.
(2) Se observa el desarrollo de
Bacillus subtilis, por la turbidez
que tiene el medio en el tubo.
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS
Daza Ponce Yisel

Ambos medios en los tubos tenan inoculada la bacteria Bacillus subtilis; al ser
sometidos a esterilizacin, se observ desarrollo bacteriano en el tubo esterilizado
en el horno con calor seco y no se observ desarrollo bacteriano en el tubo que
se esterilizo con calor hmedo. Esto demuestra que tiene mayor penetrabilidad el
calor hmedo que el calor seco. Para haber obtenido con calor seco un medio sin
desarrollo bacteriano se tuvo que dejar el tubo ms tiempo en el horno, ya que
ambos tubos en esta prctica se esterilizaron por 15 minutos.
CONCLUSIONES
Daza Ponce Yisel
La bacteria Bacillus subtilis se desarroll en el tubo que se esterilizo en el horno
porque se observa turbidez en el medio del tubo; y no se desarroll en el tubo que
se esterilizo en el autoclave porque el medio del tubo no presento turbidez. Esto
se debe a que el calor hmedo del autoclave es ms efectivo que el calor seco
del horno, porque el calor hmedo tiene mayor penetrabilidad y destruye en menor
tiempo los microorganismos.
RESULTADOS
Cruz Lpez Luz Mara

Imagen 2 Tubo contaminado Imagen 1 Tubo contaminado con

con bacillus subtilis colocado bacillus subtilis colocado en
en Horno. Autoclave
Se presentan opacidad turbulenta y traslucida en el tubo 1 y tubo 2
respectivamente.

Diferencias muy aparentes a la vista en cada uno de los tubos.

ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

Cruz Lpez Luz Mara

En el tubo 1 representado como Imagen 1. Tubo colocado en Horno se observa
con mucha turbulencia de biomasa bacillus subtilis. As como la dispersin de la
misma en todo el caldo. El tubo presenta un color blanco suave con amarillo y se
ve opaco.

En el tubo 2 representado como Imagen 2 Tubo colocado en Autoclave se

observa que no hay presencia de biomasa bacillus subtilis esparcida en el caldo.
El tubo presenta un color amarillo claro y con mucha transparencia.

CONCLUSIONES

El poder de la penetrabilidad del Autoclave con referencia al Horno en seco es

mucho mayor, ya que trabajar con calor hmedo y vapor de agua aumenta la
presin y mata cualquier existencia de vida en un microorganismo.

El horno trabaja con la temperatura del ambiente y a mayor tiempo mayor

precisin, Por lo que es necesario ms tiempo para mejor eficacia

El Autoclave con menor tiempo, a una temperatura y presin adecuados su

eficacia es mucho mejor.

RESULTADOS

Aglaette Garca de la Cruz.

Despus de que los tubos de ensaye fueron contaminados con bacillus subtilis,
uno se introdujo en el autoclave y otro al horno de calor seco.

El tubo de ensaye puesto a esterilizar en el autoclave y despus metido en la

incubadora no present presencia de turbidez.

En el caso del que fue metido en el horno de calor seco y despus metido a la
incubadora, este present turbidez, con ello se dedujo que haba presencia de
microorganismos.
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS

Aglaette Garca de la Cruz

Se debe tener un cuidado especial con el manejo del autoclave, en especial para
el cerrado hermtico, cuidando que este selle bien y de que la vlvula de vapor se
abra a continuacin para que vaya dejando salir el vapor hmedo. Claro tomando
en cuenta las condiciones de temperatura (121C), presin (de 130 kPa aprox.) y
tiempo (15 min. y su tiempo de precalentado).

Para una esterilizacin en autoclave ms rpida se puede precalentar para evitar

perder tiempo, y esto se puede hacer mientras se preparan los medios de cultivo.
Pero siempre recordando y revisando que tuviera la cantidad de agua necesaria
para un buen funcionamiento.

En el caso del Horno de calor seco se toman en cuenta las mismas condiciones de
temperatura (121C) pero hay una ligera gran diferencia, el tiempo que deben
pasar los agares y caldos dentro de este son de entre 24 y 48 horas. A diferencia
del autoclave el horno no necesita agua y tampoco la necesidad de resistir altas
temperaturas. Pero no debe abrirse si no hasta despus de apagar la mquina y
que los objetos, medios de cultivo o cultivos, alcancen una temperatura ambiente,
de no ser as no se cumple el proceso completo.

El poder de permeabilidad permitir que en los tubos de ensaye se muestre o no

presencia de microorganismos (turbidez).
CONCLUSIONES

Aglaette Garca de la Cruz.

Respecto a los tubos contaminados con cultivo Bacillus Subtilis, el que fue
colocado en el Autoclave no presento turbidez alguna, por otra parte el que fue
puesto en el Horno de Calor Seco presento una turbidez visible a simple vista lo
cual indica que haba presencia de microorganismos, dicho suceso puede pasar
gracias a su poder de permeabilidad de la bacteria y al diferente mtodo al que fue
sometida para su esterilizacin.

Despus de la esterilizacin, los cultivos deben meterse al refrigerador ya que esto

les har conservar su esterilidad. O en su caso desecharse cuidando de hacerlo
en el lugar debido ya que al contener microorganismos, el desecharlos
directamente al drenaje, estos pueden ocasionar una fuerte reaccin.

CUESTIONARIO

1. Describir un autoclave y un horno de calor seco.

Autoclave:

El autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios de cultivo in vitro. En

esencia, un autoclave es un recipiente en el que se consigue exponer el material a
esterilizar a temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias a
aumentar la presin.

El proceso completo de esterilizacin en un autoclave se compone de diferentes

fases:

* Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del
caldern, se va produciendo vapor que desplaza el aire, hacindolo salir por la
vlvula de purgado que est abierta. Esta fase termina cuando se alcanza la
temperatura de esterilizacin.

* Fase de esterilizacin: Una vez cerrada la vlvula de purgado y alcanzada la

temperatura de esterilizacin previamente seleccionada se inicia el proceso de
esterilizacin.

* Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilizacin, deja de funcionar la

resistencia calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presin y
temperatura del caldern empieza a bajar poco a poco.(QuimiNet, 2007)
Horno de calor seco:

La estufa de secado es un equipo que se utiliza para secar y esterilizar recipientes

de vidrio y metal en el laboratorio. Se identifica tambin con el nombre de Horno
de secado.

Los fabricantes han desarrollado bsicamente dos tipos de estufa: las que operan
mediante conveccin natural y las que operan mediante conveccin forzada. Las
estufas operan, por lo general entre la temperatura ambiente y los 350C. Se
conocen tambin con el nombre de Poupinel o pupinel.

Importancia de la Estufa de Secado.

La estufa de secado se emplea para esterilizar o secar el material de vidrio y metal

utilizado en los exmenes o prueba, que realiza el laboratorio y que proviene de la
seccin de lavado, donde se envia luego de ser usado en algn procedimiento.

La esterilizacin que se efecta en la estufa se denomina de calor seco y se

realiza a 180C durante 2 horas; la cristalera, al ser calentada por aire a alta
temperatura, absorbe humedad y elimina la posibilidad de que se mantenga
cualquier actividad biolgica debido a las elevadas temperaturas y a los tiempos
utilizados.(Paz C., 2013)

2. Qu tipo de material se puede esterilizar en el horno de calor seco y en el

autoclave? Dar ejemplos.

Horno: Esteriliza material de vidrio, equipo de laboratorio de metal o acero; y

algodn y papel a ms de 160.

Autoclave: Materiales hmedos y secos. Vidrio, plstico. (Seminario de

Esterilizacin, 2017)

3. Cul es la temperatura y el tiempo que se requieren para lograr la

esterilizacin en el horno de calor seco?

La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de

exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras
que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin. (Seminario de
Esterilizacin, 2017)

Respecto a la prctica se utilizaron de 24 a 48 hrs a una temperatura de 121

aproximadamente.
4. Por qu es necesario ajustar el tiempo y la temperatura para lograr la
esterilizacin?

Para destruir organismos formadores de esporas, as como otros organismos que

daan al cultivo. (Seminario de Esterilizacin, 2017)

Algunos de ellos no resisten una presin y temperatura altas, y menos a un

periodo largo de tiempo.

5. En qu consisten los mtodos de arnoldizacin y pasteurizacin?

Pasteurizacin:

La pasteurizacin es un mtodo en que se usa el calor para matar todas las

bacterias que producen enfermedades y casi todas las que descomponen los
productos lcteos. Estas bacterias comienzan a morirse cuando la leche es
calentada a los 63C.

Existen 3 mtodos de pasteurizacin que podemos aplicar:

a) La pasteurizacin lenta es la ms usada en quesera porque se obtienen

quesos con mejor calidad y no se produce ningn sabor a cocido, sin
embargo si est muy contaminada por bacterias resistentes al calor, stas
se siguen desarrollando. Cuide que su leche no se contamine con alimentos
ensilados, en donde abundan esas bacterias.

Para esta pasteurizacin se requieren 63C durante 30 minutos. Esto es, cuando
la leche haya llegado a los 63C, mantngala as durante 30 minutos.

En la prctica con 20 o 40 litros, puede usted calentarla a bao Mara, hasta que
alcance los 65C, y apagar la hornilla, tapar la olla y esperar media hora, al cabo
de ese tiempo tendr 62C y con eso queda pasteurizada. Inmediatamente
despus, introduzca esa olla en una pila con agua fra.

b) La pasteurizacin rpida es menos usada (a nivel casero) y se emplea

cuando se cuenta con un quemador muy potente y se tiene mucha prisa.

Con este mtodo no es fcil usar el bao Mara para calentar la leche porque tarda
ms en calentarse la leche. Con este mtodo a veces se quema la leche en el
fondo dando un ligero sabor a cocido.
Para esta pasteurizacin se requieren calentar la leche a 73C y mantenerla as
durante 15 segundos. Como se observa, se requiere de poco tiempo, pero en
ocasiones para llegar de los 63C a los 73C es posible que transcurran ms de
20 minutos, pero se puede hacer en menos tiempo si despus de alcanzar los
63C se tarda 15 minutos en llegar a los 68C, ese tiempo y esa temperatura es
suficiente para pasteurizar la leche.

Para lograr una buena pasteurizacin rpida, puede usted calentar la leche de los
63C a los 73C en diez minutos o menos. Cuando haya llegado a esa
temperatura 73C) espere los 15 minutos y enfrela como ya se explic.

c) Pasteurizacin alta. Este proceso es poco empleado por la accin trmica

tan enrgica y slo se recurre a ella cuando no se tiene la certeza del buen
ordeo, al encontrarse muchas suciedades en el pao con el que se filtr la
leche. Con este mtodo el sabor a cocido es ms perceptible.

Para esta pasteurizacin se requiere 82C durante 15 segundos. Esta alta

temperatura es para matar la mayora de los bacterias resistentes al calor, de los
73C a los 82C, no debe transcurrir ms de 5 minutos, si en esos minutos ha
alcanzado los 76C, no contine cal entando la leche para evitar que tome olor a
cocido. (ConocimientosWeb.net, 2012)

Arnoldizacin:

La esterilizacin de vapor fluyente o Arnoldizacin, consiste esencialmente en

exponer el material que queremos esterilizar, no en agua hirviendo, sino a los
vapores del agua hirviendo. Este proceso se puede llevar a cabo en el autoclave
solo dejando las vlvulas de escape abiertas. Este proceso puede ser continuo, o
bien intermitente en varios das consecutivos, o en el esterilizador de Arnold.

Esta tcnica es aplicable a medios bacteriolgicos y sustancias qumicas que no

pueden calentarse a ms de 100C sin que resulten daados; sin embargo, esos
materiales pueden resistir esa misma temperatura del vapor solo y as es posible
esterilizarlos por medio de esterilizacin fraccionada o tyndalizacin y hubiera
esporas resistentes y germinaran en la siguiente exposicin son destruidas y si
persisten se sigue exponiendo por periodos de incubacin y exposicin al calor.
(ITSM, 2015)
REFERENCIAS
Retther L. (2011). Tcnicas de eliminacin y de conservacin de microorganismos.
Cap. 11 de la 8 edicin de Brock: Biologa de los microorganismos. Recuperado el
02 de febrero de 2017, de http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2003.-
%20Eliminacion%20y%20conservacion.pdf
QuimiNet. (8 de Octubre de 2007). Cmo funciona el autoclave?. 5 de Febrero de
2017, de QuimiNet.com. Sitio web: https://www.quiminet.com/articulos/como-
funciona-el-autoclave-22563.htm

Paz C.. (2013). Estufa de Secado u Horno de Secado. 5 de Febrero de 2017, de

Instrumentos de laboratorio.Net Sitio web:
http://www.instrumentosdelaboratorio.net/

Seminario de Esterilizacin. (2017). Esterilizacin. Generalidades. 5 de Febrero de

2017, de Microbiologa (outside). Sitio web:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm

Bedri.es. (2014). Pasterizacin. 5 de Febrero de 2017, de La pgina de Bedri. Sitio

web: http://www.bedri.es/Comer_y_beber/Conservas_caseras/Pasteurizacion.htm

ConocimientosWeb.net. (29 de Octubre de 2012). Mtodos de Pasteurizacin. 5

de febrero de 2017, de TareasUniversitarias.com Sitio web:
http://tareasuniversitarias.com/metodos-de-pasteurizacion.html

ITSM. (2015). Esterilizacin por calor hmedo y seco. 5 de Febrero de 2017, de

JIMDO Sitio web: https://delitsmparaelmundo.jimdo.com/