Monique Nouailhetas Simon

Plasticidade fenotpica em relao

temperatura de larvas de Rhinella
(Anura:Bufonidae) da caatinga e da floresta
atlntica

So Paulo
2010
 Monique Nouailhetas Simon

Plasticidade fenotpica em relao

temperatura de larvas de Rhinella
(Anura:Bufonidae) da caatinga e da floresta
atlntica

Temperature-related phenotypic plasticity of

Rhinella tadpoles (Anura:Bufonidae) from the
Brazilian Caatinga and Atlantic rain forest

Dissertao apresentada ao Instituto

de Biocincias da Universidade de
So Paulo, para a obteno de Ttulo
de Mestre em Fisiologia Geral, na
rea de Cincias Biolgicas.

Orientador: Prof. Dr. Carlos A.

Navas Iannini

So Paulo
2010

2
Ficha Catalogrfica

Nouailhetas Simon, Monique

Plasticidade fenotpica em relao
temperatura de larvas de Rhinella
(Anura:Bufonidae) da caatinga e da floresta
atlntica
111 pginas

Dissertao (Mestrado) - Instituto de

Biocincias da Universidade de So Paulo.
Departamento de Fisiologia Geral.

1. Normas de reao de
desenvolvimento 2. Modulao fenotpica 3.
Variao da temperatura
I. Universidade de So Paulo. Instituto de
Biocincias. Departamento de Fisiologia
Geral.

Comisso Julgadora:

________________________ _______________________
Prof. Dr. Prof. Dr.

______________________
Prof. Dr. Carlos A. Navas Iannini
Orientador

3
Dedicatria

A Viviane Nouailhetas,
me e amiga desde meu nascimento,
exemplo para toda a minha vida.

4
Epgrafe

VERDADE

A porta da verdade estava aberta,

mas s deixava passar
meia pessoa de cada vez.

Assim no era possvel atingir toda a verdade,

porque a meia pessoa que entrava
s trazia o perfil de meia verdade.
E sua segunda metade
voltava igualmente com meio perfil.
E os meios perfis no coincidiam.

Arrebentaram a porta. Derrubaram a porta.

Chegaram ao lugar luminoso
onde a verdade esplendia seus fogos.
Era dividida em metades
diferentes uma da outra.

Chegou-se a discutir qual a metade mais bela.

Nenhuma das duas era totalmente bela.
E carecia optar. Cada um optou conforme
seu capricho, sua iluso, sua miopia.

Carlos Drummond de Andrade

5
Agradecimentos

Agradeo ao meu orientador, Prof. Carlos Navas, pelo apoio, pelas discusses
tericas e pela liberdade de traar meu prprio caminho no mestrado.
Agradeo a Francisco de Assis e sua famlia pela muito importante ajuda de
campo em So Miguel e por sempre me acolherem com carinho.
Agradeo aos amigos do laboratrio de Ecofisiologia e do departamento de
Fisiologia pela ajuda em campo e por discusses e avaliaes de apresentaes,
especialmente a Pedro Leite Ribeiro, pela colaborao na pesquisa (por vezes rdua),
pelas viagens de campo divertidas (e s vezes abruptas) e pelos emprstimos de carro.
Agradeo aos amigos que me ajudaram em campo: Maysa, Marcelo, Mauro,
Renato, Pedro, Joana e Fabiano.
Agradeo aos professores que colaboraram com meu amadurecimento
cientfico: Jos Eduardo de Carvalho, Fernando Gomes e Jos Guilherme.
Agradeo ao meu irmo, Ricardo, por revisar o ingls do resumo desta
dissertao, e minha me, Viviane, pelas discusses sobre o trabalho.
Agradeo aos motoristas do Instituto de Biocincias pelas viagens de campo.
Agradeo a Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo (FAPESP) pelo
suporte financeiro como bolsa e como auxlio pesquisa.
Agradeo ao Instituto de Biocincias e ao Departamento de Fisiologia pelo uso
de carros e infra-estrutura.
Agradeo direo e administrao da Estao Biolgica de Boracia por
autorizar a minha pesquisa e prover a minha estadia em campo.
Agradeo aos meus amigos pelo suporte e pela companhia agradvel que eles
sempre foram e sero: Maz, Talita, Camila, Chico, Joo, Caqui, Cris, Liss, Letcia,
Nina, Michele, End, Marcelo.
Finalmente, mas no de menos importncia, agradeo minha famlia por
compartilhar alegrias e tristezas, e pelos ensinamentos de vida que me passaram.

6
ndice

Introduo

1. Plasticidade fenotpica.......................................................................10
2. Plasticidade fenotpica e
Normas de reao de desenvolvimento...................................................14
3. Mudanas ambientais e Normas de reao.........................................16
4. A caatinga como um novo ambiente
e a Fauna de anfbios anuros..................................................................19
5. Plasticidade fenotpica em larvas de anfbios anuros..........................21
6. Abordagem comparativa de normas de reao....................................23
7. O fator temperatura na caatinga
e Normas de reao trmicas em larvas de anuros..................................25

Objetivos

1. Objetivo geral....................................................................................28
2. Objetivos especficos.........................................................................28

Materiais e Mtodos

1. Locais de estudo.................................................................................29
2. Espcies.............................................................................................29
3. Coleta de dados climticos em campo................................................32
4. Caracterizao dos microhabitats larvais............................................33
5. Distribuio natural de massa estgio-especfica................................33

7
6. Experimentos de campo.....................................................................34
6.1. Rhinella ornata e Rhinella ictrica..............................................34
6.2. Rhinella granulosa.......................................................................34
7. Experimentos de laboratrio...............................................................40
7.1. Normas de reao de variao trmica.........................................40
7.2. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima.....................47
8. Anlise Estatstica..............................................................................49

Resultados

1. Clima dos locais de estudo.................................................................50

2. Descrio dos microhabitats larvais de Rhinella.................................52
3. Distribuio natural de massa estgio-especfica................................56
4. Experimentos de campo.....................................................................57
4.1. Plasticidade de massa em R. icterica...........................................57
4.2. Curvas de sobrevivncia..............................................................58
4.3. Massa das fmeas e dos cordes de R. granulosa........................59
5. Experimentos de laboratrio...............................................................59
5.1. Desenvolvimento de R. ornata e R. ictrica................................59
5.1.1. Regimes trmicos simulados.............................................59
5.1.2. Curvas de sobrevivncia...................................................61
5.1.3. Normas de reao bivariadas............................................62
5.1.4. Efeitos da moda e da variao trmica..............................62
5.1.5. Normas de reao de variao trmica..............................68
5.2. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima...................68

8
Discusso

1. Heterogeneidade ambiental.................................................................71
2. Heterogeneidade ambiental e Plasticidade da massa larval..................74
3. Sobrevivncia.....................................................................................76
4. Normas de reao bivariadas das espcies de floresta atlntica...........77
5. Efeitos da moda e da variao trmica
nas espcies de floresta atlntica.............................................................79
6. Normas de reao de variao trmica
das espcies de floresta atlntica.............................................................82
7. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima............................87
8. Especulaes sobre a plasticidade de desenvolvimento
de R. granulosa e Consideraes finais..................................................89

Concluses............................................................................................91
Resumo.................................................................................................93
Abstract.................................................................................................94
Referncias Bibliogrficas...................................................................95
Anexos.................................................................................................103

9
Introduo

1. Plasticidade Fenotpica

O conceito de plasticidade fenotpica muito relevante em questes que

envolvem a interface entre ecologia e evoluo. Sua definio a habilidade de um
nico gentipo expressar formas alternativas de morfologia, estado fisiolgico e/ou
comportamento em resposta s condies ambientais (West-Eberhard, 1989). A
grande vantagem que um fentipo plstico teria sobre um fentipo fixo (especialista)
de poder se ajustar variao ambiental e no somente a um nico ambiente. A
importncia do ambiente na nova sntese da teoria evolutiva no foi explicitada em
toda sua magnitude (Schlicting e Pigliucci, 1998). Na viso tradicional, o ambiente
refletia simplesmente as presses de seleo atuando nos indivduos de uma populao.
A variao ambiental era considerada como rudo, uma fonte de erro que reduz a
preciso de estudos genticos, como escreveu Falconer em seu livro de gentica
quantitativa (Falconer e Mackay, 1996). Ou seja, a viso era de que o ambiente, por
ser um efeito no gentico, no contribui diretamente para a mudana evolutiva, uma
vez que evoluo seja definida como mudana de freqncia de genes de uma gerao
a outra (West-Eberhard, 1989). No entanto, ao pensarmos em plasticidade,
compreendemos que o ambiente, alm de selecionar variantes fenotpicos, produz os
variantes por meio de sua interao com a gentica. Ou seja, a variao ambiental
contribui para a variao fenotpica, o substrato da seleo natural.
A viso tradicional do processo evolutivo ignora fatos conhecidos de longa
data em biologia. Estmulos ambientais ao longo da ontogenia podem gerar alteraes
nas vias de desenvolvimento ou at mesmo ativao de vias distintas, formando
fentipos alternativos (West-Eberhard, 1989). Essa concepo de que eventos de
desenvolvimento podem gerar mudanas fenotpicas de importncia evolutiva remete
dcada de 1940, e inclui autores como Schmalhausen e Waddington. Fenmenos como
heterocronia (mudana no tempo relativo de eventos do desenvolvimento em relao
ao ancestral) e heterotopia (mudana no local de um determinado evento de
desenvolvimento em relao ao ancestral) so importantes causas de mudanas
fenotpicas entre populaes (Schlichting e Pigliucci, 1998). Essas mudanas no

10
desenvolvimento so irreversveis, pois h fixao da alterao da via de
desenvolvimento. Um exemplo dessa plasticidade irreversvel da metamorfose
facultativa em anfbios (Semlitsch, 1987). Porm, mudanas fenotpicas reversveis
durante a ontogenia tambm podem ser importantes em eventos evolutivos, como
sugerido no trabalho de (Gomez-Mestre e Buchholz, 2006).
Recentemente, o debate sobre a importncia do ambiente e da plasticidade
fenotpica em evoluo culminou em hipteses alternativas sobre a existncia de um
controle gentico para a plasticidade. Sara Via, uma geneticista, publicou um artigo em
1993 que defende que a plasticidade um sub-produto da seleo natural, e no um
carter em si, com base gentica (Via, 1993). Sua argumentao fundamentou-se na
idia de que cada ambiente possui um timo para determinado carter, e a seleo de
diferentes mdias desse carter nos diferentes ambientes produz uma resposta plstica.
Portanto, para Via, seleo na prpria plasticidade no necessria para a evoluo da
plasticidade adaptativa. Uma resposta direta a esse artigo foi elaborada por
(Schlichting e Pigliucci, 1993): o modelo de Via (1993) bastante plausvel para as
respostas plsticas que envolvem sensibilidade allica, mas para as respostas de limiar
(que envolvem vias alternativas de desenvolvimento), genes especficos que regulam
essas vias existem comprovadamente.
A discusso sobre plasticidade fenotpica e evoluo envolve respostas que
diferem em caractersticas importantes. Essas respostas foram categorizadas em
sensibilidade allica ou modulao fenotpica e resposta de limiar ou converso de
desenvolvimento (Smith-Gill, 1983). Assim, para entendermos o debate, as
caractersticas dessas duas respostas precisam ser contrastadas. Segundo Smith-Gill
(1983):

Modulao fenotpica
uma resposta a aspectos fisiolgicos;
Mantm a mesma via de desenvolvimento;
Ocorre em qualquer estgio do desenvolvimento;
Produz fentipos contnuos;
Pode ou no ser adaptativa.

11
Converso de desenvolvimento
uma resposta modulada por controle gentico especfico;
Ativa vias alternativas de desenvolvimento;
Ocorre em determinados estgios do desenvolvimento;
Produz fentipos discretos;
adaptativa.

A modulao fenotpica constituda de respostas individuais a fatores

principalmente fsicos devido sensibilidade de diferentes alelos de loci gnicos a esses
fatores. Os mesmos loci so expressos em todos os ambientes, sendo que sua
expresso regulada por esses fatores fsicos (Schlichting e Pigliucci, 1993). Fatores
esses como a temperatura, que pode regular tanto a quantidade como a atividade (no
caso de enzimas) dos produtos gnicos, gerando alteraes fsico-qumicas de
elementos celulares e teciduais (Schlichting e Pigliucci, 1998). J as respostas de
converso do desenvolvimento dependem da ativao de genes regulatrios distintos
em ambientes distintos, que por sua vez regulam outros conjuntos de genes, que levam
ativao de vias alternativas de desenvolvimento. Os casos de plasticidade fenotpica
que envolvem converso de desenvolvimento so os mais estudados por serem
respostas muito especficas ao ambiente e normalmente mais complexas, abarcando
vrios caracteres de uma vez. Entre os diversos exemplos, podemos citar: (1) a
resposta luz em angiospermas (shade-avoidance response) e os genes de
fitocromos (receptores de luz); (2) a resposta de choque trmico (heat-shock
response) e os genes de choque trmico (hsp genes- genes que expressam protenas
de choque trmico as chaperonas); (3) a resposta limitao de enxofre em
cianobactrias e os genes de ficocianina; e (4) a determinao do sexo dependente de
temperatura em rpteis e a ao da temperatura na atividade das enzimas aromatase e
redutase (Pigliucci, 1996). Com a descoberta desses genes de plasticidade, o debate foi
resolvido. As respostas plsticas de converso do desenvolvimento possuem base
gentica especfica, podendo a plasticidade ser considerada um carter sob ao da
seleo natural.
As respostas de modulao fenotpica, apesar de no possurem controle
gentico especfico, podem permitir a permanncia de uma populao diante de uma

12
mudana ambiental, e inclusive serem um passo intermedirio da evoluo de uma
resposta mais sofisticada, como a de converso do desenvolvimento (Schlichting e
Pigliucci, 1995). Existem teorias sobre as condies ambientais que favorecem a
plasticidade e sobre os requisitos para que essa resposta surja, lidando principalmente
com converso de desenvolvimento, que so as respostas com maior chance de serem
adaptativas (Smith-Gill, 1983).
Uma teoria bastante importante a Teoria da Aptido em Ambientes
Heterogneos, desenvolvida por Richard Levins (Levins, 1962; 1963). Levins utilizou
uma abordagem ecolgica para determinar a aptido (medida em nmero mdio de
filhotes) de uma espcie, considerando toda sua distribuio geogrfica,
compreendendo que os organismos distribuem-se em ambientes nos quais os fatores
ambientais variam, ou seja, nos quais h heterogeneidade/variao ambiental. A teoria
baseada na existncia de freqncias distintas de nichos ecolgicos disponveis para
uma populao e seu efeito na aptido da mesma. Para simplificar a modelagem,
Levins considerou apenas dois nichos (1 e 2), organizados em trs tipos de padres
ambientais:

1. Heterogeneidade espacial disponibilidade de dois nichos para a

populao, em propores fixas ao longo das geraes;
2. Heterogeneidade temporal disponibilidade de apenas um nicho (1 ou 2)
para a populao, mas em proporo varivel ao longo das geraes;
3. Heterogeneidade espacial e temporal disponibilidade de dois nichos em
propores variveis ao longo das geraes.

Em seu artigo de 1963, Levins considerou um fentipo influenciado pelo

ambiente de acordo com um coeficiente de plasticidade, que indica a capacidade de
resposta ao ambiente. Nesse novo contexto, a aptido de um indivduo derivada da
soma de sua homeostase fisiolgica (tolerncia do organismo a condies no-timas)
e sua plasticidade de desenvolvimento. Se os indivduos da populao so viveis em
mais de um nicho, o fentipo timo pode variar continuamente com o ambiente
(plasticidade em forma de modulao fenotpica) ou ser especfico de cada nicho, se
existir mais de uma via de desenvolvimento no indivduo (plasticidade em forma de

13
converso do desenvolvimento). Se os indivduos ou toleram um nicho ou toleram o
outro, o polimorfismo gentico poder surgir.
Entretanto, apesar da heterogeneidade ambiental, existem outros requisitos
para que uma resposta plstica adaptativa possa surgir e se manter (Newman, 1992):

Existncia de dicas ambientais: previsibilidade da mudana ambiental;

Capacidade de recepo e transduo dos sinais ambientais: converso das
dicas ambientais em ativao de respostas correspondentes;
Existncia de um compromisso de aptido em diferentes condies
ambientais: um mesmo fentipo no pode ter aptido semelhante em
diferentes condies ambientais, seno um fentipo fixo seria favorecido;
Ocorrncia de variao gentica para plasticidade: gentipos na populao
que possuam diferentes respostas plsticas ao mesmo ambiente;
Seleo natural atuando na plasticidade: os caracteres plsticos devem ter
uma relao com a aptido para serem sujeitos seleo.

A plasticidade fenotpica, portanto, pode ser a resposta mais vantajosa de um

indivduo diante de flutuaes ambientais, mas existem diversas restries, como a
ausncia de algum requisito acima ou mesmo a existncia de custos origem e/ou
manuteno da plasticidade (Dewitt, Sih et al., 1998; Relyea, 2002). Porm, respostas
plsticas so ubquas nos organismos, assim como variaes ambientais na natureza
(West-Eberhard, 1989), indicando que sua interao so de alta importncia para a
manuteno e evoluo da vida.

2. Plasticidade fenotpica e Normas de reao de desenvolvimento

Um marco terico apropriado para se estudar plasticidade fenotpica o

conceito de normas de reao de desenvolvimento (NRD). Estas se referem a um
conjunto de ontogenias ou trajetrias que podem ser produzidas por um gentipo ao
ser exposto a variao ambiental interna ou externa ao organismo (Schlichting e
Pigliucci, 1998). A norma de reao expressa a relao entre gentipo, ambiente e
fentipo de maneira conjunta (Lewontin, 1974). A idia de norma de reao abarca

14
todas as possibilidades de respostas plsticas, incluindo plasticidade zero (ou seja,
expresso de um fentipo fixo independente de alteraes do ambiente).
Uma concepo distinta de plasticidade a de tratar a expresso de um carter
em diferentes ambientes como caracteres distintos, relacionados por correlao
gentica (rae = coeficient of correlation among environments (Via, Gomulkiewicz et
al., 1995). Essas correlaes podem ocorrer devido ligao gnica, pleiotropia e/ou
epistasia de genes que regulam a resposta plstica. Essa abordagem foca nos
mecanismos genticos da plasticidade, sem considerar aspectos fisiolgicos ou
ecolgicos, e limitada para estudo em somente dois ambientes, restringindo a
quantidade de variao ambiental a ser estudada.
A NRD contextualiza os caracteres dos organismos, por levar em conta a
ecologia, e considera o fenmeno por meio do qual as variaes fenotpicas so
produzidas, o desenvolvimento. Sua concepo especialmente importante quando
notamos que a varincia ambiental depende da distribuio de gentipos, e a varincia
gentica depende da distribuio de ambientes (Lewontin, 1974). Alm disso, uma
NRD reflete a histria natural e o potencial futuro de um gentipo (Schlichting e
Pigliucci, 1998). As respostas de modulao fenotpica e converso de
desenvolvimento podem ser representadas como normas de reao contnuas e
discretas, respectivamente (Figura 1).
Por meio das NRD, o estudo da plasticidade torna-se mais detalhado, sendo
possvel analisar atributos como magnitude e padro da resposta plstica, atravs da
altura e da forma da norma de reao (Schlichting e Pigliucci, 1998). Outro aspecto
importante que pode ser visualizado pelas NRD a ocorrncia de canalizao diante
de uma faixa ampla de variao ambiental. A canalizao uma caracterstica do
sistema de desenvolvimento, mantida pela seleo natural, que limita a variao final
do fentipo diante de variaes ambientais, garantindo o fentipo timo (Waddington,
1942). Waddington (1960) visualizava a seleo estabilizadora (que elimina variaes
distantes demais do fentipo timo) em duas formas: a seleo normalizadora que
tende a eliminar alelos que produzem fentipos anormais em condies ambientais
normais, e a seleo canalizadora que tende a eliminar alelos que tornam o sistema de
desenvolvimento sensvel a estresses ambientais. Perante essas consideraes sobre as
NRD, consideramos seu uso como essencial para este estudo.

15
 Sensibilidade allica Regulao gnica

Controle gentico

Modulao fenotpica Converso do desenvolvimento

Mecanismo de
desenvolvimento

Normas de reao Normas de reao

contnuas de limiar
Resposta fenotpica
Fentipo

Fentipo

Fator ambiental Fator ambiental

Figura 1. Tipos de respostas plsticas e normas de reao correspondentes. As duas respostas
plsticas diferem em seu controle gentico e em seu mecanismo de desenvolvimento. Na modulao
fenotpica, os mesmos genes so expressos em todos os ambientes, mas com diferentes efeitos,
gerando respostas contnuas, que so as normas de reao contnuas. A linha vermelha representa
uma norma no plstica enquanto a linha preta representa uma norma plstica. Na converso de
desenvolvimento, diferentes conjuntos de genes so regulados nos diferentes ambientes, gerando
respostas descontnuas, representadas pelas normas de reao de limiar. A partir de um determinado
limiar do fator ambiental, uma via distinta de desenvolvimento ser ativada, produzindo um fentipo
discreto. Modificado de Schlichting e Pigliucci 1995.

3. Mudanas ambientais e Normas de reao

A relao entre plasticidade e ocupao de novos ambientes data desde 1896

com as idias de Baldwin. Seu modelo terico prediz que respostas plsticas
adaptativas de indivduos de uma populao aumentam sua chance de permanncia em
um novo ambiente (Baldwin, 1896). A plasticidade em alguns caracteres pode
contribuir para a constncia adaptativa de outros caracteres, diretamente relacionados
com a aptido, em diversas condies ambientais, permitindo a homeostase funcional
em novos ambientes (Lewontin, 1957; Sultan e Bazzaz, 1993).
Alguns testes do modelo de Baldwin foram feitos, principalmente com plantas.
Os trabalhos de Donohue, Pyle et al. (2001) e Etterson (2004) investigaram a

16
influncia da plasticidade de populaes de plantas em permanecerem em novas
condies ambientais de densidade e clima, respectivamente. Ambos os autores
realizaram experimentos de transplante de indivduos das populaes nativas de um
ambiente para outros ambientes e caracterizaram a plasticidade por mtodos de
gentica quantitativa, inclusive determinando valores de intensidade e direo de
seleo. As perguntas centrais foram: (1) A plasticidade que evolu em resposta
variao ambiental dentro de um ambiente pode influenciar a expresso fenotpica em
um novo ambiente? e (2) As respostas plsticas surgidas em novos ambientes so na
direo dos valores fenotpicos favorecidos pela seleo? Os dois autores concluram
que as respostas a essas perguntas so afirmativas, indicando que a plasticidade pode
mitigar perdas de aptido, e assim contribuir para a colonizao de novos ambientes.
Estudos com colonizaes de novos ambientes por animais so menos comuns,
talvez porque haja uma tradio de se estudar plasticidade fenotpica e invases
biolgicas em plantas. O trabalho de Yeh e Price (2004) ilustra como a plasticidade
possibilitou a permanncia de uma populao de aves nativas das montanhas em um
ambiente de costa ocenica. Os autores detectaram um aumento da temporada de
reproduo na populao da costa, que foi correlacionada com a aptido. A variao
do tempo de reproduo se deu por plasticidade das fmeas, e sem o aumento desse
carter a populao comearia a diminuir em tamanho.
Estudos como os citados acima apresentam evidncia forte de como a
plasticidade pode permitir a permanncia de uma populao em novas condies
ambientais. Entretanto, Richards, Bossdorf et al. (2006) apontaram que faltam
trabalhos em um contexto comparativo mais amplo para responder a pergunta Qual o
grau de diferena na plasticidade de espcies invasoras e no-invasoras?. Acreditamos
que essa pergunta pode ser parcialmente respondida ao compararmos normas de
reao de desenvolvimento de espcies com diferentes histrias naturais quanto
colonizao/permanncia em novas condies ambientais.
A concepo de normas de reao muito interessante para se estudar
plasticidade diante de novos ambientes, porm pouco utilizada nessa conjuntura (Lee,
Remfert et al., 2003; Richards, Bossdorf et al., 2006). Schmalhausen (1949), em seu
livro Factors in Evolution, levantou a idia de que a parte efetivamente expressa de
uma norma de reao depende do ambiente, mas que tambm existem partes de
potencial expresso (refletindo a potencialidade do sistema de desenvolvimento em

17
gerar novos fentipos em Pigliucci, 2001). Uma mudana do ambiente ou uma
migrao do organismo para outro ambiente podem resultar em partes da norma antiga
no mais expressas nem expostas seleo, enquanto outras novas partes sero
expostas, culminando em uma alterao da norma ancestral (Pigliucci, 2001). Essas
idias traduzem-se atualmente nos conceitos de normas de reao ocultas e
variao gentica crptica (Schlichting, 2008). Ou seja, haveria a possibilidade de
partes da norma que aparecem somente em novas condies ambientais, evidenciando
um potencial de desenvolvimento revelado em novas condies. A expresso de uma
norma oculta refere-se expresso de fentipos novos, em relao aos fentipos
ancestrais, e est relacionada com condies ambientais nunca experimentadas pela
aquela populao ou de baixa freqncia de ocorrncia naquele ambiente (Figura 2).

No
Varivel fenotpica

vo
fen
ti
po
Canalizao
Pla
stic
id ade

Novas/Raras Freqentes

Condies ambientais
Figura 2. Padres possveis de uma norma de reao. Esto representados trs padres de resposta
fenotpica em pores de uma norma de reao: norma oculta (em vermelho), norma canalizada e norma
plstica. Uma parte oculta de uma norma significa uma expresso fenotpica que somente se revela em
condies ambientais novas ou raras, gerando fentipos no produzidos anteriormente, ou seja, h
liberao de variao fenotpica escondida ou crptica. A parte canalizada de uma norma refere-se
poro no plstica, que no varia em seu valor fenotpico diante de variaes ambientais. Estas
provavelmente so variaes comumente encontradas pelos indivduos, mas as quais o organismo no
sensvel. Finalmente, a norma plstica expressa em condies freqentes porm que flutuam,
originando variao no valor fenotpico conforme sua aptido nas determinadas condies, se a
plasticidade for adaptativa. Modificado de Schlitching 2008.

No contexto da pergunta se espcies mais invasoras so mais plsticas,

esperamos que as invasoras sejam capazes de expressar esses novos fentipos ao
colonizarem ou permanecerem em um novo ambiente, enquanto que as espcies no-
invasoras no teriam a plasticidade de sua norma de desenvolvimento suficiente para
isso.

18
4. A caatinga como um novo ambiente e a Fauna de anfbios anuros

O bioma brasileiro da caatinga possu caractersticas nicas: clima semi-rido

com a mais alta radiao solar, a mais alta temperatura mdia anual, as mais baixas
taxas de umidade relativa, evapotranspirao potencial mais elevada e precipitaes
mais baixas e irregulares, limitadas a um perodo muito curto do ano, geralmente dois a
trs meses (Reis, 1976). A ocorrncia dos ciclos de chuva e seca e a precipitao
altamente imprevisvel tambm so aspectos nicos da caatinga como bioma brasileiro
(Nimer, 1972). No entanto, muitas evidncias sugerem que a caatinga no foi sempre
assim (Bigarella e Andrade-Lima, 1982; Hartwig e Cartelle, 1996; de Vivo, 1997;
Carnaval, 2001), e que seu clima atual foi resultado de um processo de aridificao
iniciado a aproximadamente 10.000 anos.
Segundo vrios estudos, antes da aridificao, a caatinga assemelhava-se a uma
floresta mida. Uma das evidncias mais contundentes foi o achado de um fssil de um
novo gnero de macaco (Caipora bambuiorum) na caatinga baiana, datado do
Pleistoceno tardio (cerca de 10.000 anos atrs), que foi estimado em ter um peso
muito acima dos macacos recentes da mesma famlia. Esse macaco foi considerado
como um mega-herbvoro, e os autores sugeriram que na poca em que viveu, a rea
deveria ser uma floresta para poder sustentar um animal como esse (Hartwig e
Cartelle, 1996). Outro autor que defende a origem recente da caatinga a partir de uma
floresta de Vivo (1997). Ele aponta como evidncias para isso a disjuno da
distribuio de populaes de conspecficos de mamferos das florestas atlntica e
amaznica (sugerindo que havia uma continuidade entre essas duas florestas por meio
da caatinga) e a falta de adaptaes fisiolgicas da fauna de mamferos s condies
semi-ridas.
Um estudo sobre filogeografia de quatro espcies de anfbios anuros em
remanescentes de floresta (brejos) na caatinga tambm suporta a hiptese desse bioma
ter sido uma floresta (Carnaval, 2002). A autora estudou populaes da mesma espcie
com distribuies separadas nos brejos da caatinga e na prpria mata atlntica, e
descobriu que as populaes so relacionadas geneticamente. Como muito
improvvel que as populaes de mata tenham atravessado a caatinga para manter o
fluxo gnico com as populaes dos brejos, a autora sugeriu que a mata foi conectada

19
 caatinga em um passado recente, j que a diferenciao gentica entre as populaes
da mesma espcie pequena.
Considerando todas essas evidncias, podemos caracterizar a caatinga como
um ambiente recente, e portanto muito interessante para se estudar a manuteno de
espcies representando diferentes linhagens, inclusive evidenciando adaptao s novas
condies climticas. A possibilidade da caatinga ter sido uma floresta mida, um
habitat to diferente do regime semi-rido atual, favorece ainda mais a escolha desse
bioma como um sistema de estudo. Neste contexto, muitos organismos poderiam ser
estudados. Contudo, escolhemos os anfbios anuros como modelo por diversas razes.
A fauna de anuros bem caracterizada para a caatinga. As famlias Hylidae,
Bufonidae, Microhylidae, Phyllomedusidae, Pipidae e Leptodactylinae (subfamlia da
antiga Leptodactylidae Lynch, 1971), possuem representantes nesse habitat, mas
apenas as duas primeiras so diversas, com mais de 15 espcies, sendo as demais
famlias representadas por apenas duas espcies. Um aspecto extremamente relevante
que no h anuros endmicos na caatinga (Trefaut-Rodrigues, 2003). Talvez a nica
exceo seja a espcie Corythomantis greeningi, um hildeo que possui co-ossificao
do crnio e se esconde em buracos em rvores (Jared, Antoniazzi et al., 2005).
Alm disso, algumas caractersticas climticas da caatinga pareceram-nos
adversas dada sua sazonalidade na disponibilidade de gua e suas altas temperaturas,
particularmente nos stios de reproduo das espcies de anuros. Parece-nos, portanto,
que a aridificao que ocorreu na regio da caatinga reduziu drasticamente a
diversidade de anuros. Porm, algumas espcies continuam l, e a sua presena leva a
perguntas sobre quais mecanismos permitiram essas espcies a se manterem nesse
novo ambiente.
5. Plasticidade fenotpica em larvas de anfbios anuros

Respostas como polimorfismo gentico, seleo de microhabitats e plasticidade

fenotpica podem contribuir para as populaes lidarem com a heterogeneidade
ambiental (Van Buskirk, Mccollum et al., 1997). Considerando como objeto de estudo
as larvas dos anfbios anuros, supusemos que as respostas de plasticidade de
desenvolvimento seriam mais relevantes para a sobrevivncia na caatinga que as
demais respostas citadas acima. Respostas como seleo de microhabitats ou estivao
parecem relevantes para os adultos de anuros. Essas estratgias foram reportadas para

20
algumas espcies que habitam a caatinga, como Corythomantis greeningii, que
seleciona microhabitats protegidos e midos (Jared, Antoniazzi et al., 1999), e
Pleurodema diplolistris, que permanece enterrado em areia ao longo da seca (Pereira,
2009). No entanto, bastante improvvel que as larvas de anuros da caatinga tenham
uma amplitude grande de escolha de microhabitats nas poas em que habitam (muitas
vezes pequenas e rasas), e uma estratgia como a estivao ocorre somente em fases
aps a metamorfose.
A hiptese de polimorfismo gentico poderia ser importante na caatinga, mas
somente se a tolerncia a fatores ambientais de uma parcela da populao de larvas
fosse distinta do resto (Levins, 1963). Essa resposta resultaria em variantes genticos
especficos para determinados ambientes, j que nesses casos um alelo favorecido em
um ambiente enquanto outro alelo favorecido em outro ambiente (Falconer e
Mackay, 1996). Contudo, no h uma razo forte para supormos que a tolerncia seria
diferente entre partes da populao de larvas de uma espcie, uma vez que a
sazonalidade de chuvas da caatinga favorece o uso de microhabitats temporrios por
todos os indivduos.
Larvas de anfbios anuros so muito estudadas quanto plasticidade fenotpica.
Existem diversos modelos na literatura criados para explicar a variabilidade no tempo
de desenvolvimento e no tamanho ou massa na metamorfose nesses organismos (por
exemplo, Wilbur e Collins, 1973; Smith-Gill e Berven, 1979; Werner, 1986). O modelo
de Wilbur e Collins (1973) prediz que o tempo de desenvolvimento regulado pela
taxa de crescimento e por presses ecolgicas. Os autores trabalharam com Rana
sylvatica e nveis de alimentao ou densidade, e notaram que os recm-
metamorfoseados possuam uma faixa limitada de massa em comparao com as
larvas. Eles propuseram que existiam um limite mnimo (denominado b) para a massa
na metamorfose, imposto evolutivamente pela pequena sobrevivncia de metamorfos
de pouca massa, e um limite mximo (denominado b + c), imposto pelo risco de
morte apresentado no habitat aqutico. Segundo Wilbur e Collins, a larva continua a
crescer se sua histria recente de crescimento maior que um determinado limiar de
taxa de crescimento (denominada g). Posteriormente, Werner (1986) expandiu o
modelo de Wilbur e Collins ao verificar que o potencial de crescimento na fase
terrestre influencia a seleo da massa na metamorfose. Um exemplo dado foi de
Rhinella (Bufo) marina, na qual 99,9% do crescimento total ocorre na fase terrestre.

21
Werner considerou que o tamanho timo na metamorfose depende da taxa de
crescimento e da mortalidade no habitat aqutico e no habitat terrestre, determinando
assim um compromisso entre taxa de crescimento e risco de mortalidade. O tempo
timo de desenvolvimento ocorreria quando o compromisso fosse o menor nos dois
habitats.
O modelo de Smith-Gill e Berven (1979) foi o primeiro em destacar a
relevncia da taxa de diferenciao na determinao do tempo at a metamorfose e da
massa na metamorfose. Esse modelo possu um carter mais fisiolgico diante dos
outros dois modelos citados, que so mais ecolgicos, por acessar as sensibilidades
trmicas dos fenmenos do desenvolvimento. Smith-Gill e Berven construram normas
de reao para as taxas de crescimento e diferenciao em trs espcies de Rana,
diante de quatro temperaturas. Essas normas so denominadas normas de reao
trmicas, e seus coeficientes angulares correspondem sensibilidade trmica das
espcies em fenmenos do desenvolvimento. Quanto mais inclinada a norma trmica,
maior a sensibilidade temperatura, pois o fentipo se altera mais com a temperatura.
Os autores verificaram que a sensibilidade trmica das taxas de crescimento menor
que a sensibilidade da diferenciao, indicando que a temperatura altera mais a
diferenciao das larvas de Rana que o crescimento. Essa regra de sensibilidade resulta
em menor massa na metamorfose em maiores temperaturas, pois a diferenciao mais
acelerada que o crescimento, gerando metamorfos de idades precoces e massa menor.
O modelo de Wilbur e Collins (1973) foi testado e confirmado empiricamente
por alguns autores (por exemplo, Morey e Reznick, 2000). A expanso de Werner
(1986), junto das consideraes dos argumentos de Smith-Gill e Berven (1979), foram
utilizados para a incluso de outros parmetros considerados importantes na ecologia e
fisiologia das larvas de anfbios anuros, como a possibilidade de fixao do tempo de
desenvolvimento (Hensley, 1993; Hentschel, 1999) e de taxas de mortalidade que
variam com o tempo (por exemplo, Rudolf e Rdel, 2007). Apesar das diferenas entre
os diversos modelos, todos os estudos apontam para uma alta plasticidade das larvas
de anfbios anuros. Diante disso, e das consideraes sobre os estudos que
confirmaram a ao da plasticidade na colonizao de novos ambientes, hipotetizamos
que as larvas das espcies que se mantm na caatinga possuem alta plasticidade de
desenvolvimento em comparao com larvas de espcies que no se mantiveram nessa
bioma.

22
6. Abordagem comparativa de normas de reao

Uma das maneiras de se determinar se as larvas dos anuros da caatinga

possuem alta plasticidade fenotpica de desenvolvimento por comparao com anuros
de outros biomas, para se ter uma referncia. Ns escolhemos o bioma da floresta
atlntica como o comparativo por trs razes principais: (1) Suas caractersticas
climticas atuais devem ser prximas de como era a caatinga antes da aridificao, (2)
Seu padro de heterogeneidade ambiental remete heterogeneidade anterior da
caatinga e (3) Existe sobreposio de gneros de anuros na floresta atlntica e na
caatinga, permitindo uma melhor separao entre os fatores filogenia e ecologia
(Harvey, 1996). A situao ideal para a nossa hiptese seria comparar a plasticidade da
populao de larvas de anuros antes, durante e depois do processo de aridificao, mas
essa condio impraticvel. A abordagem comparativa de espcies de um bioma
similar s condies prvias da caatinga, como a floresta atlntica, e da prpria
caatinga atual, uma opo vivel e interessante.
Estudos comparativos de plasticidade e normas de reao em larvas de anfbios
anuros foram bastante raros at a dcada de 90. Mais recentemente, o interesse pela
evoluo de normas de reao em anuros culminou no aumento de trabalhos com
vrias espcies e no uso de estatstica filogentica para anlise dos dados em alguns
estudos (Blouin, 1992; Morand, Joly et al., 1997; Morey e Reznick, 2000; Buchholz e
Hayes, 2002; Van Buskirk, 2002; Morey e Reznick, 2004; Gomez-Mestre e Buchholz,
2006). Com esses estudos, as respostas clssicas de plasticidade em larvas de anuros
puderam ser testadas em um contexto evolutivo, indicando a permissividade da relao
entre mudanas na variao de fatores ambientais e de plasticidade das espcies, alm
de se determinar o quanto a evoluo da plasticidade restringida por inrcia
filogentica.
Os trabalhos de Morey e Reznick (2000, 2004) so timos exemplos da
abordagem comparativa de normas de reao em larvas de trs espcies de
Scaphiopus, que diferem em seu grau de efemeridade de seus habitats aquticos. Os
autores concluram que as trs espcies possuem normas de reao no perodo larval
muito similares, quando as larvas foram expostas a oito nveis de alimentao. Esse
resultado era esperado, uma vez que as trs espcies possuem alto parentesco
filogentico. Contudo, a parte da norma do perodo larval expressa pela espcie de

23
habitat mais efmero na natureza, S. couchii, foi distinta das demais espcies. A parte
da norma de S. couchii expressa em seu ambiente natural a poro invarivel no
perodo larval, portanto essa espcie no apresenta plasticidade de desenvolvimento
em condies naturais de alimentao, sendo o perodo larval sempre curto, condizente
com um habitat que permanece por pouco tempo (Morey e Reznick, 2004). Porm, S.
couchii no perdeu o potencial de desenvolvimento (expresso como a parte oculta
na natureza da norma de reao) de expressar uma norma similar s outras espcies
que habitam ambientes diferentes.
Os achados de Morey e Reznick (2000, 2004) foram expandidos por Buchholz
e Hayes (2002), que estudaram dez espcies aparentadas filogeneticamente de quatro
gneros: Pelobates e Pelodytes, do velho mundo, e Scaphiopus e Spea, do novo
mundo. Buchholz e Hayes (2002) construram normas de reao de perodo larval e
tamanho na metamorfose diante de trs temperaturas, que representaram a variao na
mdia dos habitats naturais das espcies estudadas. As taxas de desenvolvimento foram
diferentes para as espcies do velho e novo mundo, mais rpidas nas ltimas, enquanto
que as taxas de crescimento foram mais similares entre todas as espcies. Os autores
sugeriram que os perodos larvais curtos em Scaphiopus e Spea evoluram aps a
divergncia de Pelobates e Pelodytes em resposta ao aumento da efemeridade dos
stios de reproduo dessas espcies, ao longo da desertificao de seu habitat. Esse
trabalho, em especial, mostra como a abordagem comparativa de normas de reao
pode esclarecer a evoluo de plasticidade de um grupo diante de mudanas
ambientais.

7. O fator temperatura na caatinga e

Normas de reao trmicas em larvas de anuros

O processo de aridificao da caatinga um fenmeno relacionado com a

gradual reduo da pluviosidade e com sua irregularidade sazonal (Nimer, 1972).
Porm, apesar da mudana no fator pluviosidade ser primordial na transio para uma
maior aridez, outros fatores tambm mudaram concomitantemente. No caso da
temperatura, a vegetao mais aberta caracterstica de regies semi-ridas, permite
uma maior incidncia de radiao solar, aumentando a temperatura mdia do ar. As
temperaturas da caatinga esto entre as mais altas do pas (Reis, 1976), sendo por

24
conseguinte um fator que representa a mudana ambiental que ocorreu e que ainda
ocorre nessa regio.
A temperatura do corpo um dos fatores ambientais mais influentes para
animais ectotermos devido sua interferncia em taxas enzimticas e bioqumicas
(Hochachka e Somero, 2002). Alm desse efeito direto nos processos bioqumicos, a
temperatura tambm afeta padres de atividade tipo e durao (Bellis, 1962) e
conseqentemente a taxa na qual energia e nutrientes podem ser obtidos e assimilados
(Berven, 1982). Pelos efeitos importantes da temperatura sobre o desempenho
comportamental, fisiolgico e ecolgico, muitos estudos com anfbios anuros
correlacionam a variao trmica com medidas de sobrevivncia e aptido. Esses
estudos salientam parmetros fisiolgicos com clara relevncia ecolgica, como curvas
de desempenho comportamental (Huey e Stevenson, 1979; Berven, 1982; Navas,
1996), mas tambm parmetros clssicos da fisiologia trmica, como tolerncia trmica
(Brattstrom, 1968; Sherman, 1980; Floyd, 1982). Finalmente, a relao da temperatura
com a variao na plasticidade, especialmente nas larvas, tambm culminou em muitos
trabalhos (por exemplo, Smith-Gill e Berven, 1979; Newman, 1989; 1998; Morey e
Reznick, 2000; Alvarez e Nicieza, 2002; Buchholz e Hayes, 2002; Olsson e Uller,
2002; Niehaus, Wilson et al., 2006).
As tolerncias trmicas mnima e mxima de uma espcie podem ser avaliadas
pelos parmetros denominados temperatura crtica mnima e mxima (TCMin e
TCMax, respectivamente). Esses parmetros, em teoria, representam as temperaturas
corpreas nas quais os indivduos no conseguem mais desempenhar atividades
ecolgicas (Huey e Stevenson, 1979; Figura 3), e podem ser medidos com referncia
ao controle motor ou sobrevivncia (Lowe e Vance, 1955).
Bayard H. Brattstrom (1968) mostrou que esses parmetros esto relacionados
com a distribuio geogrfica de vrias espcies de anuros. Brattstrom descreveu que
anuros tropicais no toleram temperaturas baixas, como entre 5oC e 15oC e que as
espcies habitantes de maior latitude so mais tolerantes ao frio. Navas, Antoniazzi et
al. (2007) verificaram que os juvenis de Rhinella granulosa, anuro presente na
caatinga, toleram at 44oC, a TCMax mais alta relatada para o gnero. Esses trabalhos
mostram que as espcies de anuros so capazes de ajustar evolutivamente suas
tolerncias trmicas em relao ao ambiente em que habitam.

25
 Temperatura tima

Temperatura Crtica Mnima

Temperatura Crtica Mxima

Desempenho relativo Faixa de desempenho

Faixa de tolerncia

Temperatura corprea
Figura 3. Curva de desempenho e faixa de tolerncia trmica. O esquema mostra
onde se inserem os parmetros temperatura crtica mxima e mnima na curva de
desempenho. Os limites trmicos determinam a faixa de tolerncia, fora da qual o
desempenho dos indivduos seriamente comprometido. Tambm est apresentada a
temperatura tima, na qual o desempenho mximo. Modificado de Huey e Stevenson
1979.

Entretanto, o processo plstico de aclimatao tambm pode contribuir para o

aumento da tolerncia trmica. A aclimatao corresponde a uma mudana contnua na
organizao fisiolgica em resposta direta a variaes de temperatura (Hutchison,
1961). O processo de aclimatao faz parte de um exemplo clssico de resposta
plstica do tipo converso de desenvolvimento, que se manifesta em espcies de todos
os reinos (Pigliucci, 1996). Os indivduos, aps permanecerem um certo perodo de
tempo em temperaturas mais elevadas, aclimatando-se, toleram por mais tempo ou
toleram temperaturas mais elevadas que antes de se aclimatar (Loeschcke, Krebs et al.,
1994). Em invertebrados e plantas, a base molecular e gentica para essa resposta
plstica bem conhecida: o aumento da expresso das protenas denominadas
chaperonas (heat-shock proteins ou hsp). As chaperonas interagem com outras
protenas minimizando a probabilidade destas realizarem interaes inapropriadas com
as demais protenas. Elas reconhecem conformaes no-nativas de protenas e podem
ajustar sua conformao ou marc-las para degradao (Feder e Hofmann, 1999).

Alm da reposta de converso de desenvolvimento da aclimatao, a

temperatura pode suscitar respostas de modulao fenotpica, atravs de seus efeitos
na sensibilidade trmica do aparato celular envolvido com o desenvolvimento das
larvas. O trabalho de Smith-Gill e Berven (1979), j citado anteriormente, foi um dos

26
pioneiros em determinar a sensibilidade trmica das taxas de crescimento e
diferenciao. Em outros trabalhos, Berven mostrou que a sensibilidade trmica do
desenvolvimento pode evoluir, tornando-se mais baixas em populaes de R. clamitans
da montanha que das terras baixas (Berven, Gill et al., 1979); e que as populaes de
montanha de R. sylvatica apresentam adaptaes a esse ambiente, como maior
tamanho de ovos e ninhos (Berven, 1981; Berven, 1982).

Apesar da grande quantidade de estudos com larvas de anuros e temperatura, o

efeito da variao da temperatura, alm do efeito da mdia, pouco esclarecido.
Recentemente, foi realizado um estudo direcionado a identificar diferenas no
crescimento, desenvolvimento, e no desempenho locomotor em Limnodynastes
peronii, diante de um regime trmico com flutuaes diurnas (atingindo temperaturas
mais elevadas) e outro constante, mas de igual mdia. As larvas do regime varivel
cresceram mais, tiveram menor perodo larval e menor massa. Os autores destacaram
que a variao trmica causou os mesmo efeitos de altas temperaturas constantes
(Niehaus, Wilson et al., 2006).

Considerando os microhabitats nos quais as larvas de anuros desenvolvem-se

na caatinga, supusemos que tanto os valores de mdia e moda de temperatura seriam
importantes e representativos da mudana ambiental nesse bioma, quanto os valores de
variao trmica. As poas temporrias devem ser mais utilizadas na caatinga que na
floresta atlntica, pois as primeiras chuvas na caatinga originam somente esse tipo de
microhabitat, que amplamente utilizado para reproduo por praticamente todas as
espcies de anuros (observaes pessoais). Hipotetizamos que esse tipo de
microhabitat, poas temporrias, deveria ter alta variao de temperatura ao longo do
dia, em comparao com os corpos de gua permanentes encontrados comumente na
floresta atlntica. Desse modo, a variao da temperatura seria um fator to relevante
quanto a tendncia central da mesma de ser estudado na comparao da plasticidade
fenotpica das larvas dos dois biomas. Escolhemos o gnero Rhinella como objeto de
estudo, pois sua distribuio muito ampla, abrangendo todos os biomas do Brasil
(Duellman e Sweet, 1999), e sua fisiologia trmica bastante verstil (Brattstrom,
1962; Navas, 2002). Alm disso, o uso de diversos tipos de corpos de gua pelas
espcies, incluindo poas temporrias (Heyer, 1990), torna o gnero um bom
candidato a exibir ajustes de carter fisiolgico ao longo de gradientes ambientais.

27
Objetivos

1. Objetivo geral

Diante de todo o exposto acima, tivemos como objetivo comparar a

plasticidade fenotpica de parmetros relevantes na sobrevivncia e no
desenvolvimento das larvas das espcies Rhinella ornata e Rhinella icterica, presentes
na floresta atlntica, e Rhinella granulosa, presente na caatinga, por meio da
abordagem de normas de reao trmicas. Como hiptese geral propusemos que R.
granulosa mais plstica nesses parmetros que R. ornata e R. icterica.

2. Objetivos especficos

Caracterizar a variao ambiental dos locais de estudo quanto ao clima geral e

quanto variao de fatores ambientais dos microhabitats larvais;

Descrever a variao natural de plasticidade na massa estgio-especfica das

espcies em estudo;

Analisar a sobrevivncia e a plasticidade da massa na metamorfose das espcies

em experimentos de campo;

Comparar as normas de reao bivariadas (relaes entre variveis

dependentes) e as normas de reao de variao trmica (quanto aos
parmetros de desenvolvimento) das espcies R. ornata e R. icterica;

Comparar as normas de reao de tolerncia trmica das larvas das trs

espcies.

28
Materiais e Mtodos

1. Locais de estudo

As coletas de cordes de ovos e os estudos de campo foram realizados na Fazenda

So Miguel (5o 39 43S, 36o 3618W), uma propriedade privada perto da cidade de
Angicos, no Rio Grande do Norte, e na Estao Biolgica de Boracia (EBB 28o 38S,
45o 52W administrada pelo Museu de Zoologia da USP), no litoral do estado de
So Paulo (Figura 4). A regio de Angicos insere-se no bioma da caatinga e apresenta
clima quente e semi-rido, do tipo tropical da zona equatorial, com temperatura mdia
anual de 260C e pluviosidade anual de 750 mm, concentrada nos meses de maro a
maio (Nimer, 1972). Angicos um local bem amostrado quanto herpetofauna,
havendo aproximadamente oito espcies de anfbios anuros, das famlias Hylidae,
Leptodactylinae, Bufonidae, Phyllomedusidae e Pipidae (Trefaut-Rodrigues, 2003).
A EBBoracia localiza-se a 80 km da cidade de So Paulo, a uma altitude
aproximada de 900 m do nvel do mar. A regio uma das mais chuvosas do Brasil,
com mdia anual nos anos entre 1925 e 1944 de 3058 mm. A vegetao tpica de
floresta atlntica, com abundncia de palmeiras (principalmente Euterpe edulis),
bromlias e bambus. A fauna de anuros de pelo menos 66 espcies pertencentes a
seis famlias, e existem muitos gneros, particularmente da sub-famlia Leptodactilynae,
endmicos da Floresta Atlntica (Bertoluci e Rodrigues, 2002). De 183 espcies de
floresta descritas no sudeste brasileiro, 168 (92%) so endmicas ao domnio atlntico
(Lynch, 1979). Muitos estudos foram e so realizados nessa estao sobre anfbios
anuros, como o de descrio da fauna no livro de Heyer (1988) e o de padres de
canto de vrias espcies no artigo de Bertoluci e Rodrigues (2002).

2. Espcies

Trs espcies de Rhinella foram estudadas: R. ornata e R. icterica, da floresta

atlntica, e R. granulosa, da caatinga (Figura 5). Esse gnero pertence famlia
Bufonidae, que possui em torno de 35 gneros e 481 espcies (Pramuk, Robertson et
al., 2008). No artigo de (Frost, Grant et al., 2006), o gnero Bufo foi repartido em 17

29
gneros distintos, considerados monofilticos, para resolver sua polifilia e parafilia.
Entre esses gneros, estava Rhinella, para o grupo de B. magaritifer, e o gnero
Chaunus, com a espcie-tipo de B. granulosus. Segundo Frost e col. (2006), as
espcies que ns estudamos pertenciam ao gnero Chaunus. Entretanto, com o artigo
de (Chaparro, Pramuk et al., 2007), todas as espcies do gnero Chaunus foram
mudadas para o gnero Rhinella. Apesar das mudanas de nomenclatura, as relaes
filogenticas entre as espcies estudadas continuaram as mesmas de quando ainda eram
do gnero Bufo.
A espcie R. ornata foi revalidada, ainda como B. ornata, na reviso de 2004
de Baldissera, Caramaschi et al., aps ter sido considerada uma sub-espcie de B.
crucifer. Sua distribuio abrange o sudeste do ES, RJ e SP, at o nordeste do PR. Os
adultos de R. ornata habitam diversos tipos de habitats terrestres: floresta primria e
secundria, clareiras e pastos, e esto sempre associados ao ambiente florestal (Heyer,
1990). A reproduo de R. ornata explosiva e restrita ao incio (junho- julho) e ao
fim (outubro novembro) da estao chuvosa (Bertoluci e Rodrigues, 2002).
R. icterica pertence ao grupo de R. marina e possui ampla distribuio
geogrfica, abrangendo Brasil, Paraguai e Argentina (Pramuk, 2006). Como R. ornata,
ocupa diferentes tipos de habitats: florestais, clareiras, bancos de areia e at mesmo
imediaes de estradas, quando vai reproduzir. Essa espcie possui reproduo ao
longo de diversos meses, concentrada em agosto a dezembro, e no-explosiva
(Bertoluci e Rodrigues, 2002).
Recentemente, Narvaes e Rodrigues (2009) publicaram uma reviso
taxonmica do grupo de R. granulosa, que possui doze espcies. A identificao das
espcies foi por comparaes da morfologia externa e de dados morfomtricos. Todas
as espcies so associadas a habitats abertos da Amrica do Sul e Panam, sendo que
no Brasil ocupam os domnios da caatinga, do cerrados e de restinga. R. granulosa
ocorre predominantemente na caatinga, nos estados de MG, BA, ES, AL, CE, PB, PE,
PI, RN e SE. Assim como R. ornata, tambm possui reproduo explosiva associada a
chuvas mais fortes, no entanto, a quantidade de indivduos reproduzindo por vez
muito maior em R. granulosa (observao pessoal).
As trs espcies so muito prximas filogeneticamente, sendo que os grupos de
R. marina (o qual pertence R. icterica) + R. crucifer (o qual pertence R. ornata)
considerado como grupo-irmo de R. granulosa (Pramuk, 2006; Chaparro, Pramuk et

30
al., 2007; Pramuk, Robertson et al., 2008). Essas relaes de parentesco so
consideradas bastante confiveis, uma vez que as filogenias foram construdas com
dados morfolgicos combinados com dados moleculares.

Angicos, RN

So Paulo, SP

Figura 4. Mapa do Brasil de biomas e as regies de estudo. As coletas e

estudos de campo foram realizados nos marcos em vermelho no mapa: Angicos,
RN bioma da caatinga e So Paulo, SP bioma da mata atlntica. Mapa
modificado do site do IBGE.

Figura 5. Espcies estudadas e suas larvas. A) Rhinella granulosa -

caatinga. B) Rhinella ornata mata atlntica.C) Rhinella icterica mata
atlntica. D) Larvas das trs espcies. Note como as larvas de R. ornata e R.
icterica so indistinguveis.

31
3. Coleta de dados climticos em campo

Para a caracterizao do clima especfico dos locais de estudo, instalamos

micro-estaes climticas (Onset Computer Corporations, MA USA Figura 6) em
So Miguel (RN) e em Boracia (SP), nos dias 09 de fevereiro e 01 de maro de 2009,
respectivamente. Em cada local, os dados foram coletados por cerca de 1 ano. Cada
micro-estao possui sensores para pluviosidade, radiao solar, temperatura e
umidade relativa do ar. Os dados foram coletados a cada 10 minutos para cada varivel
e registrados em um carregador de dados. Criamos os grficos de variao climtica
com o uso da interface HOBOwarePro.

Figura 6. Fotos das micro-estaes climticas em So Miguel RN (A) e em Boracia

SP (B). As estaes possuem sensores de pluviosidade, umidade relativa do ar, temperatura e
radiao solar. Os dados foram registrados a cada 30 minutos para todos esses parmetros,
em So Miguel, na caatinga, e em Boracia, na mata atlntica.

4. Caracterizao dos microhabitats larvais

Os microhabitats onde se encontraram larvas de Rhinella foram caracterizados

quanto temperatura e ao pH. Essas medidas foram feitas nos meses de novembro e
dezembro de 2007 na EBB, e em maro e abril de 2008 e maro de 2009 em S.
Miguel, seguindo a fase de chuvas dos locais. Medimos a temperatura em intervalos de

32
uma hora com registradores de dados de 1,0oC de preciso (ibuttons Maxim),
protegidos da gua com luvas de borracha. Os ibuttons foram posicionados no fundo
dos corpos de gua. A coleta dos dados de temperatura durou em torno de trinta dias
nos microhabitats da EEB, 20 dias nos microhabitats maiores de S. Miguel e oito dias
nos menores e mais efmeros (poas nas rochas ou na vegetao).
As medidas de pH foram feitas com um analisador bioqumico (HACH) em
intervalos de 3 horas, das 6:00 s 18:00. As medidas destes parmetros foram sempre
associadas a uma rea onde havia um ibutton e os eletrodos foram posicionados na
mesma profundidade que os registradores quando possvel (em casos de grande
profundidade, o eletrodo ficou acima do registrador), na maioria das vezes
correspondendo profundidade mxima do microhabitat. Cada microhabitat foi
amostrado no mnimo 3 dias, com exceo do microhabitat Pedreira de Boracia, que
foi amostrado somente um dia, devido falta de gel de KCl para medir o pH na
ocasio. Apresentamos os dados como mdia diria e variao diria mdia. .

Alm dessas medidas, a maioria dos microhabitats foi descrita quanto ao tipo
de substrato, exposio ao sol e quanto ao tamanho e profundidade mxima. Em
relao aos fatores biticos, somente se identificou outros gneros de anuros
coexistindo nos mesmos microhabitats de Rhinella, e a ocorrncia de potenciais
predadores das larvas.

5. Distribuio natural da massa estgio-especfica

Com a finalidade de se descrever o peso das larvas em relao aos estgios em

condies naturais, coletamos 5 amostras de 15 indivduos de diferentes microhabitats,
em intervalos de dois dias. A coleta seqencial foi feita para aumentarmos a extenso
de estgios amostrados. As coletas foram em novembro e dezembro de 2007 para as
larvas de Boracia e em maro de 2008 para as larvas de S. Miguel.
Pesamos as larvas com uma balana de preciso 0,01 g, e determinamos o
estgio de desenvolvimento com o uso de uma tabela de identificao (Gosner, 1960),
na qual os estgios foram determinados por marcos morfolgicos externos. Essa tabela
foi adequada para se determinar os estgios, j que foi construda com o mesmo
gnero que o estudado no projeto (antigo Bufo). Para se realizar as medies, os

33
girinos foram anestesiados com uma soluo de uretana a 3 g/L, e os indivduos foram
levemente secos em papel toalha (para retirar o excesso de gua) para a determinao
do peso. Para identificar os estgios, usou-se uma lupa. Ao final, as larvas foram
fixadas em formol 10%.
Em Boracia, no foi possvel diferenciar as espcies R. ornata e R. icterica. As
distribuies de massa estgio-especfica so para o gnero, portanto. Em S. Miguel, a
identificao de R. granulosa foi possvel, pelas larvas serem claramente distinguveis
de outras espcies presentes no mesmo microhabitat.

6. Experimentos de campo

Os experimentos de campo foram executados para a anlise de variveis do

desenvolvimento nas condies as mais prximas possveis das naturais. A fim de se
acompanhar o desenvolvimento das mesmas larvas de uma mesma desova, optamos
por utilizar gaiolas dispostas em diferentes microhabitats. As gaiolas foram construdas
com bacias plsticas, abertas lateralmente e sem o fundo, recobertas com tela (Figura
7A).

6.1. Rhinella ornata e Rhinella icterica

Em Boracia, conduzimos os experimentos nos meses de setembro a dezembro

de 2008. Quando uma desova era encontrada, marcvamos o local, e no dia em que as
larvas atingiam o estgio 26 (primeiro estgio larval, reconhecvel por ser quando as
larvas internalizam as brnquias), os indivduos eram coletados e aleatoriamente (por
sorteio) distribudos em gaiolas distintas, at o total de 30 indivduos por gaiola. Em
seguida, as gaiolas eram sorteadas em microhabitats sabidamente diferentes (pelo
monitoramento da temperatura no ano anterior), sendo que uma das gaiolas sempre
ficava no local onde a desova foi encontrada. Como o intuito foi dispor as gaiolas em
microhabitats os mais distintos possveis, desovas encontradas na Pedreira eram
distribudas em gaiolas localizadas na prpria Pedreira e outras gaiolas eram
translocadas Cachoeira. No caso da desova ter sido encontrada na Cachoeira,
procedamos da mesma maneira, portanto algumas gaiolas eram translocadas
Pedreira. Antes de fechar as gaiolas, colocvamos um medidor de temperatura

34
(registro de hora em hora) em cada uma e uma grande quantidade de alga para
alimentao das larvas.
As larvas eram monitoradas em cada gaiola semanalmente. Aps a abertura das
gaiolas, as larvas eram postas em sacos plsticos e levadas ao laboratrio da EBB. L,
10 larvas por gaiola eram sorteadas para serem analisadas. Cada indivduo era
colocado em um mini-aqurio (construdo com lminas de microscopia e com uma
escala de 1,0 mm ao fundo Figura 7B) e sua foto era tirada. Esse procedimento foi
adotado para minimizar o tempo em que a larva era mantida fora da gua. As fotos
foram analisadas com o software ImageJ para a identificao dos estgios, j que era
possvel aumentar o tamanho da imagem sem distorc-la, e verificar os caracteres
morfolgicos marcantes, como indicado na tabela de identificao de Gosner (1960).

Figura 7. Fotos
representativas da gaiola
(A) e do mini-aqurio (B)
utilizados nos
experimentos de campo.
A) As gaiolas foram
confeccionadas com o uso
de cestos de plstico com
aberturas laterais e sem
fundo, recobertas por uma
tela. Periodicamente, as
gaiolas eram abertas e as
larvas coletadas para serem
pesadas e estagiadas. B)
Mini-aqurio construdo
com lminas de
microscpio e borrachas de
paredes. As fotos eram
tiradas nesse aparato,
permanecendo as larvas em
posio lateral e em gua.

35
 Em seguida as larvas eram pesadas em balana de 0,01 g de preciso, aps
serem rapidamente secas em papel toalha. Ao final, contvamos o nmero de larvas
remanescentes em cada gaiola, para a posterior criao de curvas de sobrevivncia
pelo tempo. Terminadas as medies, descarregvamos os dados de temperatura de
cada gaiola e as larvas eram recolocadas nos sacos plsticos e devolvidas sua gaiola
de origem. Esse procedimento era repetido a cada semana at a maioria das larvas
atingir os estgios 41/42, que representam o final do desenvolvimento larval.
Os metamorfos sobreviventes de cada gaiola foram levados ao laboratrio e
criados com alimentao de drosfilas at crescerem o suficiente para serem
identificados. Com tamanhos de aproximadamente 1,0 cm, os juvenis de R. ornata j
so distinguveis dos juvenis de R. icterica, pelo formato do corpo, tamanho dos
membros posteriores e padro de manchas no dorso.

6.2. Rhinella granulosa

No dia 12 de maro de 2009, coletamos 20 casais em amplexo de R. granulosa

em sacos plsticos contendo um pouco de gua. Os machos foram facilmente
localizados, atravs de seus cantos, e estavam em poas prximas de ou no meio do
aude. Coletamos parte dos casais de madrugada, com auxlio de lanternas, e parte no
incio da manh (por volta de 06:00), quando a visibilidade foi bem maior, facilitando a
coleta. Aps o transporte para a casa de campo, cada casal foi numerado e colocado
em uma bacia plstica (de 5L ou 20L) com aproximadamente 10 cm de gua do aude
e um carregador de dados de temperatura medindo a cada 30 minutos. Os adultos da
espcie R. granulosa, por terem um tamanho rostro-anal mdio relativamente pequeno
(aproximadamente 10 cm) e por apresentarem reproduo explosiva, so ideais para a
coleta de amplexos e desova em condies semi-naturais.
Nesse mesmo dia, dezoito casais desovaram cordes de ovos nas bacias (Figuras
8A e 8B). Os cordes, o macho e a fmea de cada casal foram pesados, para a
posterior verificao de relaes entre essas variveis. O macho claramente
distinguvel da fmea por possuir cor amarelada na regio do saco vocal. Dois dos
cordes de ovos foram descartados por estarem muito aquosos e portanto
inapropriados para serem pesados.

36
 Aps cinco dias de desenvolvimento, os embries j haviam se tornado larvas, nos
estgios 25-26 (Figuras 8C e 8D), segundo a tabela de Gosner (1960), com as
brnquias externas atrofiadas e o oprculo fechado. Nessa fase, mais seis cordes de
ovos foram descartados por no apresentarem desenvolvimento adequado dos
embries. Como a maioria dos cordes inviveis estava nas bacias menores,
especulamos que o fator espao seja relevante para o sucesso do desenvolvimento das
larvas em condies semi-artificiais. O experimento estava programado para ter incio
quando as larvas atingissem o estgio 26, mas como as larvas ainda estavam muito
pequenas e frgeis para a manipulao, o experimento teve incio aps sete dias de
desenvolvimento. Nos dois dias anteriores ao incio, foram ofertados 20 g de
alface/dia, para que as larvas crescessem o suficiente para o incio das manipulaes.
No sendo possvel encontrar e manter nove poas temporrias naturais,
optamos por simul-las com o uso de recipientes de plstico alocados em buracos de 5
cm de profundidade na terra (Figura 9). Cada recipiente possuiu dois buracos a essa
mesma altura para evitar que se enchessem alm desse nvel com eventuais chuvas.
Trinta larvas de cada famlia foram sorteadas para serem postas em gaiolas e
distribudas aleatoriamente em uma das poas artificialmente construdas. Trs famlias
por dia foram distribudas nos microhabitats semi-naturais, sendo que as trs ltimas e
as trs primeiras famlias possuram dois dias de diferena no desenvolvimento.
Diariamente, o nvel de gua era conferido e completado quando necessrio com gua
de chuva provinda de cisternas. Cada gaiola foi suprida com 20 g de alface fervido. As
poas temporrias foram os microhabitats de maior variao trmica e de altas
temperaturas, sendo muito interessantes de serem estudados em campo.
Aps a distribuio das gaiolas, a cada dois dias de intervalo, as gaiolas eram
abertas, as larvas sobreviventes coletadas, contabilizadas, e trazidas casa de campo
para serem fotografadas e pesadas individualmente, com o mesmo procedimento que
as larvas de R. ornata e R. icterica. A cada dia, os dados de trs famlias eram
coletados, e as larvas permaneceram fora de seus microhabitats por aproximadamente
4 horas enquanto as manipulaes eram feitas.
Finalizada as manipulaes, as larvas eram devolvidas s suas gaiolas em seus
microhabitats iniciais, adicionadas de 20 g de alface fervido. Esse procedimento foi
repetido at que o ltimo grupo de larvas atingisse o ltimo estgio larval (Gosner 42,

37
quando os membros anteriores surgem) ou at a morte total das larvas em alguns
casos.

Figura 8. Fotos representativas das fases reprodutivas e de desenvolvimento de Rhinella

granulosa. A) Casal de R. granulosa coletado em amplexo; B) Casal desovando um cordo de
ovos; C) Embries de R. granulosa nos estgios Gosner 20-21, aps 2 dias de desenvolvimento; D)
Larvas de R. granulosa nos estgios Gosner 25-26, aps 5 dias de desenvolvimento.O objeto branco
um carregador de temperatura envolto em um dedo de luva.

38
Figura 9. Gaiolas e microhabitats semi-naturais do experimento de campo
com Rhinella granulosa. A) Gaiola utilizada nas poas semi-naturais o controle
do nvel da gua foi possvel com o uso de recipientes plsticos com furos nas
laterais (5 cm de altura); B) Distribuio das poas semi-naturais cada recipiente
foi alocado em um buraco na terra e as gaiolas foram inseridas no interior dos
recipientes, tendo suas posies sorteadas.

39
7. Experimentos de laboratrio

7.1. Normas de reao de variao trmica

A fim de se isolar a varivel temperatura e averiguar seus efeitos na

sobrevivncia, no crescimento e na diferenciao das larvas de R. ornata e R. icterica,
realizamos experimentos de laboratrio nos quais os fatores moda da temperatura e
variao trmica foram manipuladas. A escolha desses fatores como tratamentos se
deu pela anlise dos dados de temperatura coletados em campo dos microhabitats
larvais nos quais ocorrem as espcies de Rhinella, tanto em Boracia quanto em S.
Miguel. Notamos que as modas das temperaturas dos microhabitats de Boracia so
muito similares entre si (em torno de 18oC), mas muito diferentes dos microhabitats de
S. Miguel, que ficaram em torno de 27oC. O mesmo ocorre com as temperaturas
mdias mnimas (aproximadamente 16oC para Boracia e 25oC para S. Miguel). J os
valores de variao trmica diria so bem diversos dentro do mesmo bioma, mas
similares entre os biomas. A diversidade na amplitude trmica devida diversidade
de temperaturas mximas atingidas em cada microhabitat (ver Figuras 15 e 16 dos
Resultados).
Considerando, portanto, que a diferena principal entre os microhabitats
medidos em Boracia e em S. Miguel a regio de variao na escala de temperatura
(sendo mais elevada para os microhabitats de S. Miguel), resolvemos simular em
laboratrio regimes trmicos que variassem similarmente, mas ao redor de modas
distintas. Seis tratamentos foram determinados, com trs magnitudes de variao
trmica ao redor de duas modas de temperatura (Figura 10):

(1) 20oC constante;

(2) Moda de 20oC e variao de 4oC;
Regimes simulados da Floresta Atlntica
o o
(3) Moda de 20 C e variao de 8 C;
(4) 27oC constante;
(5) Moda de 27oC e variao de 4oC; Regimes simulados da Caatinga

(6) Moda de 27oC e variao de 8oC.

40
 1 4

(oC) 40 40

(oC)
Temperatura (oC)

Temperatura (oC)
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10

2 5

40 40
Temperatura (oC)

Temperatura (oC)
(oC)

(oC)
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10

3 6
Temperatura (oC)

40
( oC)

( oC)
Temperatura (oC) 40
35 35
30 30
25 25
20 20
15 15
10 10
Dias Dias

Figura 10. Regimes trmicos simulados em laboratrio. Os regimes trmicos foram

obtidos com o uso de aquecedores ligados a temporizadores. As temperaturas foram
medidas a cada 10 minutos, ao longo de no mnimo 2 semanas, por meio de carregadores
de dados. Os regimes 1 e 4 so os constantes a 20 C e 27 C, respectivamente; os regimes 2
e 5 so os que variaram por volta de 4 C, nas modas de 20 C e 27 C; e os regimes 3 e 6
foram os de maior variao, 8 C, ao redor das mesmas modas.

Os regimes trmicos foram obtidos com o uso de aquecedores de aqurio de

100 W, com termostato (Vigoar ou Atman, So Paulo SP, Brasil), alocados em
bacias plsticas de 20 L. Todas as bacias foram alojadas em uma sala climatizada
temperatura de 17oC e fotoperodo de 12 horas de claro e 12 horas de escuro. Os
regimes 1 e 4, os constantes, foram obtidos pelo uso de aquecedores programados
para as temperaturas de 20oC e 27oC, respectivamente. Para simular os regimes 2 e 3,
utilizamos dois aquecedores conectados a temporizadores (Megaforth, Blumenau
SC, Brasil). O da temperatura mxima (22oC e 26oC, respectivamente) permaneceu
ligado das 06:00 s 11:00, e o da moda (20oC) permaneceu ligado das 11:00 s 22:00.
Das 22:00 s 06:00 a gua das bacias foi resfriada at a temperatura da sala, por volta
de 17 oC. Para os regimes 5 e 6 utilizamos trs aquecedores: o da temperatura mxima
(29oC e 34oC, respectivamente) ficou ligado por um temporizador das 08:00 s 11:00;
o da moda (27oC), das 11:00 s 24:00; e o da temperatura mnima (25oC) permaneceu
ligado constantemente. As bacias foram cobertas com tampas de acrlico para que as

41
temperaturas mximas pudessem ser atingidas. A gua foi oxigenada constantemente
por meio de bombas de ar (Acqua Flux, Master Ind. De Equip. para Piscicultura, So
Paulo-SP, Brasil), cada duas bacias com uma bomba de duas sadas. Cada bacia
conteve um carregador de temperatura medindo a cada dez minutos, por um perodo
de no mnimo duas semanas de experimento.
Com o intuito de calcularmos taxas de crescimento e tempos de
desenvolvimento individuais, optamos por manter as larvas separadas entre si, na
mesma bacia, com o uso de redinhas de aqurio. Estas permaneceram apoiadas em um
suporte de isopor, e cada bacia conteve 12 redinhas, com um volume aproximado de
0,5 L para cada redinha (Figura 11). Pelo fato da sala climatizada ser heterognea,
devido posio do equipamento de resfriamento, utilizamos um delineamento em
blocos, com todos os tratamentos em cada bloco. Foram 3 blocos A, B e C
organizados sistematicamente na sala, na tentativa de se distribuir entre os tratamentos
os possveis efeitos da heterogeneidade da sala (Figura 12). A posio dos blocos ficou
limitada pela distribuio das tomadas na sala, sendo que no foi possvel manter o
bloco A todo junto em frente ao equipamento de resfriamento.

Figura 11. Montagem do experimento de laboratrio com R. ornata e R. icterica. A) Bacias

de 20L distribuidas na sala climatizada, com suporte de isopor para 12 redinhas e tampa de
acrlico. B) Redinhas para isolamento das larvas cada bacia conteve 12 redinhas no mximo,
de aproximadamente 0,5 L de volume. C) Aumento de uma redinha, mostrando o cdigo de
identificao da larva.

42
 PORTA A6 A3
PIA
A5 A2
A4 A1
VENTO

B3 B2

C5 C6

B6 B5 B1 B4 C3 C2
C4 C1

RESFRIAMENTO

Figura 12. Esquema do delineamento do experimento de laboratrio com R. ornata e R. icterica. O

esquema mostra a distribuio das bacias na sala climatizada. O delineamento foi em blocos, sendo 6
tratamentos em cada bloco e 3 blocos (A, B e C) sistematicamente organizados na sala, totalizando 18 bacias.
Esse delineamento foi escolhido devido heterogeneidade presente na sala por conta do vento originado do
aparelho de resfriamento.

No dia 5 de setembro de 2009, seis cordes de ovos de R. ornata foram

encontrados na pedreira, dentro da Estao Biolgica de Boracia; e no dia 15 de
novembro, um cordo de R. icterica foi encontrado em uma poa na cachoeira. Alm
de serem vistos dois casais em amplexo de R. ornata na noite do dia 4 de setembro, os
cordes de R. ornata so facilmente distinguveis dos de R. icterica, uma vez que os
primeiros so menores em comprimento total, menos espessos e com ovos menores
que os de R. icterica (ver Figura 13). Fragmentos de aproximadamente cem ovos
foram cortados de cada cordo e postos em potes de plstico com gua do
microhabitat original. Um desses potes (no caso de R. ornata e o nico no caso de R.
icterica) conteve um carregador de temperatura, medindo a cada 30 minutos. No
mesmo dia de coleta, transportamos os cordes em uma bolsa trmica at o laboratrio
na USP, uma viagem de aproximadamente quatro horas.

43
 Figura 13. Amplexo e cordes de ovos de R. ornata e R. icterica em Boracia. A)
Amplexo de um casal de R. ornata na pedreira. B) Cordo de ovos de R. ornata. C)
Cordo de ovos de R. icterica. D) Cordes de R. ornata, direita, e R. icterica, em
potes de coleta. Note a diferena de tamanho dos ovos das duas espcies.

No laboratrio, cada cordo de R. ornata foi dividido em 3 bacias, duas

alocadas na sala climatizada a 24oC e a terceira permaneceu no biotrio a 23oC. Essa
diviso foi estabelecida para se evitar a perda de um cordo inteiro caso a bacia se
contaminasse. No caso do cordo de R. icterica, dividimo-lo em duas bacias que
permaneceram na sala climatizada a 23-24oC. Todas as bacias continham bombas de ar.
Ao longo dos dias, os ovos que no desenvolveram, assim como os embries que
morreram, foram retirados das bacias a fim de se evitar contaminao da gua.
Aps trs dias de desenvolvimento, a gua das bacias foi trocada. Depois de
seis dias, as larvas de R. ornata e R. icterica atingiram os estgios Gosner 25-26, nos
quais as brnquias so atrofiadas e o oprculo fica fechado. A distribuio das larvas
de R. ornata em seus tratamentos no foi possvel nesses estgios porque elas ainda
estavam muito pequenas para a malha das redinhas, conseguindo atravess-las.
Optamos ento por aliment-las com alface fervido at atingirem um tamanho

44
suficiente. Para manter o mesmo padro com R. icterica, suas larvas tambm foram
alimentadas antes do incio do experimento, mesmo sendo as larvas nos estgios 25-26
de tamanho suficiente para se manterem nas redinhas.
A diviso das larvas nos diversos tratamentos foi feito por sorteio aps oito
dias de desenvolvimento. Um indivduo era pego do conjunto inicial de larvas de cada
famlia e atribudo a um tratamento (1 a 6) e a um bloco (A, B ou C). Em seguida, sua
posio na bacia (1 a 12) era sorteada. Quando a posio j estava ocupada por outra
larva, a prxima posio livre era selecionada. Cada tratamento possuiu duas larvas de
cada famlia (que no caso de R. ornata, totalizou doze larvas por bacia, e para R.
icterica somente duas larvas por bacia, pois houve apenas uma famlia no
experimento). Cada indivduo possuiu um cdigo de trs nmeros, que representava a
famlia, o tratamento e a rplica, respectivamente. De cada famlia, trinta e seis larvas
foram distribudas nos tratamentos, sendo que cada tratamento teve 6
rplicas/indivduos por famlia, totalizando 216 larvas no experimento todo para R.
ornata, e 36 mesmo para R. icterica. Posteriormente ao sorteio, cada larva recebeu
alface fervido ad libitum.
Somente para as larvas de R. icterica foi possvel tirar fotos e pesar no dia do
sorteio, pois no caso de R. ornata, as larvas foram muitas para ser feito o mesmo. As
fotos e a pesagem de cada larva foram efetuados a cada dois dias de intervalo, com o
uso do mini-aqurio e balana de 0,01 g de preciso. A balana foi calibrada em todos
os dias nas quais foi usada. As larvas eram retiradas das redinhas, postas no mini-
aqurio, a foto tirada, e aps a larva ser rapidamente seca com papel-toalha, era
finalmente pesada, em um pote com gua. Em seguida, a larva era devolvida bacia
original. Todo esse procedimento levou em torno de dois minutos por larva. As mortes
eram registradas no dia da ocorrncia, e os cadveres retirados das bacias. Essas
medies foram repetidas at que todas as larvas atingissem o estgio Gosner 42,
finalizando o desenvolvimento larval.
Ao longo do experimento, a gua foi trocada semanalmente (3/4 do total), um
bloco inteiro por dia. A gua era retirada das bacias com um sifo feito de mangueira
plstica e depositada em um balde, para ser descartada em seguida. Como as fezes das
larvas ficavam depositadas no fundo das bacias, esse mtodo de troca de gua foi
eficiente para sugar a sujeira. Usamos reservatrios de gua de torneira, descansada
por um dia (para evaporao do cloro), um com um aquecedor a 20oC e o outro com

45
aquecedor a 27oC, para a reposio da gua nos tratamentos 1-3 e 4-6,
respectivamente. Essa prtica permitiu que as temperaturas corretas fossem mantidas
nos tratamentos aps a troca da gua, que sempre era feita aps as 16:00, quando
todos os tratamentos j estavam na moda da temperatura. No momento da troca, o
suporte de isopor com as redinhas foi translocado para uma bacia de troca, na qual a
gua estava na moda da temperatura do tratamento original. Depois da troca, o
suporte de isopor era devolvido bacia original. A alimentao de alface fervido foi
conferida a cada um dia de intervalo. Quando as larvas chegaram em estgios mais
avanados de desenvolvimento (33-35 para frente), elas passaram a se alimentar mais,
e houve ocasies nas quais se notou falta de comida (que ocorreu somente nos
tratamentos quentes). Aps a deteco desse fato, a comida era reposta
imediatamente.
Ao atingirem o estgio Gosner 42, o incio da metamorfose, as larvas foram
retiradas das bacias e postas em aqurios, e a data registrada para posterior clculo do
tempo de desenvolvimento. Tanto o experimento de R. ornata quanto o de R. icterica
terminaram aps 40 dias.
A partir dos dados coletados de massa a cada dois dias, foram calculadas
curvas de regresso para cada indivduo que sobreviveu at a metamorfose, a fim de se
usar o coeficiente angular como indicador da taxa de crescimento. A grande maioria
das regresses foi linear (87% para R. icterica e 91% para R. ornata) e somente
aquelas com bom ajuste dos dados (r2 > 0,85) foram consideradas para o clculo das
taxas de crescimento e construo de normas de reao de variao trmica. Normas
de reao de massa na metamorfose (massa nos estgios Gosner 41/42) e de tempo de
desenvolvimento tambm foram construdas a partir dos dados de laboratrio; alm de
normas de reao bivariadas, ou seja, das relaes entre estas trs variveis. Com os
dados de contagem das larvas, construmos curvas de sobrevivncia cumulativa, com o
mtodo Kaplan-Meier.

7.2. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima

Nos dias 24 e 27 de outubro de 2009, um trecho de dois cordes de ovos de R.

ornata foram coletados; e no dia 15 de novembro de 2009, um trecho de cordo de R.
icterica foi coletado, todos na EBBoracia (SP), e transportados ao laboratrio. Em

46
seguida, os cordes foram divididos em duas bacias com gua filtrada, na sala
climatizada com fotoperodo controlado 12C : 12E. As bacias possuram bomba de ar,
aquecedor a 24oC e um carregador de temperatura medindo a cada 30 minutos. Aps
alguns dias da coleta, as larvas de um dos cordes de R. ornata foram descartadas, por
morte em excesso de anestsico (uretana a 3 g/L), pois apresentaram um
desenvolvimento inadequado.
Aps uma semana de desenvolvimento, 96 larvas foram pegas e sorteadas em
quatro grupos (24 larvas em cada): aclimatao a 20oC, por 3 dias; aclimatao a
20oC, por 6 dias; aclimatao a 30oC por 3 dias; ou aclimatao a 30oC por 6 dias; em
bacias de 15 L, com aquecedores, bombas de ar e tampadas com tampas plsticas, no
interior da sala climatizada a 17oC. Os perodos de aclimatao correspondem a 1/4 e
1/2 da durao mdia do desenvolvimento das larvas de R. granulosa em seus
microhabitats naturais em S. Miguel. A durao do desenvolvimento larval de R.
granulosa foi utilizada como referncia para os perodos de aclimatao para no
haver o risco das larvas desta espcie ultrapassarem o tempo de desenvolvimento ao
longo da aclimatao, tornando-se juvenis e inviabilizando o experimento. A
alimentao foi de alface fervido ad libitum.
Os experimentos de temperatura crtica mxima (TCMax) foram realizados em
um banho-maria, no qual as larvas eram colocadas em dois recipientes plsticos com
fundo de tela, 2 larvas por recipiente (Figura 14). As larvas permaneciam dez minutos
nesses recipientes temperatura de seu grupo original (20oC ou 30oC), para se
acostumarem com o novo ambiente. Aps os dez minutos, inicivamos o aumento da
temperatura uma taxa de aproximadamente 1oC por minuto (a taxa variou de 0,88oC
a 0,93oC). Os testes de aclimatao a 20oC e 30oC foram feitos no mesmo dia,
intercaladamente, para uma mesma famlia (desova) e mesmo tempo de aclimatao em
dias. Depois de um teste, toda a gua do banho era retirada por um sifo feito com
uma mangueira, e gelo era adicionado nova gua do banho (mantendo-se sempre um
mesmo nvel de gua, que era marcado com fitas adesivas nos potes ver na Figura
14), na quantidade suficiente, at a mesma atingir a temperatura de 20oC ou 30oC,
dependendo de qual teste iria ser o prximo. Em seguida, mais quatro larvas de
determinado grupo de aclimatao eram postas nos potes (duas em cada), e passados
os dez minutos, um novo teste era iniciado. Esse procedimento de intercalao dos

47
testes a 20oC ou 30oC evitou uma correlao de horrio do teste com temperatura de
aclimatao.
Ao redor dos 38oC, as larvas eram levemente tocadas na cauda com
termmetros para estimular o movimento. O experimento foi finalizado quando as
larvas no respondiam mais a cinco toques. Nesse momento, a temperatura
considerada como a TCMax era registrada com o termmetro e a larva transferida para
gua a temperatura ambiente, em potinhos de plstico, sendo que a ordem de teste das
larvas foi mantida para posterior identificao de cada indivduo. Testamos entre dez e
dezesseis larvas para cada temperatura de aclimatao, por famlia, sendo que o
experimento teve durao mdia de cinco horas. No dia seguinte, as larvas eram
conferidas em seus potinhos quanto sobrevivncia, e o dados de TCMax eram
considerados vlidos somente se a larva estivesse viva.

Figura 14. Montagem dos experimentos de Temperatura Crtica Mxima. A) Banho-

maria com as duas caixas de plstico contendo duas larvas cada e um termmetro. B)
Aumento de uma caixa plstica, mostrando o fundo de tela e a marca com fita do nvel de
gua, garantindo uma taxa de aquecimento similar a cada teste.

48
8. Anlise Estatstica

Todos os dados foram testados quanto normalidade de seus resduos com

testes de Kolmogorov-Smirnov e quanto homogeneidade de varincia dos grupos a
serem comparados com testes de Levene. Os dados que no se ajustaram s premissas
dos testes paramtricos foram testados com testes no-paramtricos. Os dados das
distribuies de massa estgio-especfica foram analisados com o teste Kolgomorov-
Smirnov Z, somente para os estgios de maior nmero amostral. Os resultados de
massa do experimento de campo com R. icterica foram analisados com uma ANOVA
hierrquica, sendo o fator gaiola aninhado no fator ambiente. As curvas de
sobrevivncia foram comparadas com testes Log-Rank. Os resultados dos
experimentos de laboratrio foram testados por ANOVA de duas vias (seguido de
teste de Tuckey HSD), Mann-Whitney, se foram dois grupos a serem comparados, ou
Kruskal-Wallis, se mais de dois grupos foram comparados. O nvel de significncia
adotado foi de 0,05, mesmo em casos de comparaes mltiplas. As tabelas de testes
estatsticos considerados relevantes de serem mostradas (Tabelas 2 a 10) esto
apresentadas nos anexos.

49
Resultados

1. Clima dos locais de estudo

Os parmetros pluviosidade, temperatura e radiao solar diria esto

apresentados na Figura 15:
A
20
Pluviosidade (mm)

10

3/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10 5/10

Ms do ano
B 20
Pluviosidade (mm)

10

0
3/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10
Ms do ano
C 40
Temperatura (oC)

30

20
03/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10 5/10
Ms do ano

50
D
30

Temperatura (oC)
20

10

0
3/09 5/09 7/09 9/09 11/09 1/10 3/10

Ms do ano

E
50000
Radiao solar diria (W/m2)

40000

30000

20000

10000

0
10/2/2009
3/09 23/3/2009 7/09
4/5/2009 15/6/2009
11/09 26/7/2009 3/10
6/9/2009

Ms do ano

F
50000
Radiao solar diria (W/m)
2

40000

30000

20000

10000

0
11/8/093/09 7/09
10/10/09 11/09
9/12/09 3/10
7/2/10
Ms
Msdo
doano
ano
Figura 15. Parmetros climticos de S. Miguel (A,C,E) e de Boracia (B,D,F). Os
parmetros mostrados foram medidos com o uso de estaes microclimticas instaladas
nos locais de estudo. O registro foi de um ano para Boracia e um ano e cinco meses para
S. Miguel. A,B) A distribuio de chuva mais homognea em Boracia que em Miguel,
e no segundo ano de medidas neste ltimo local houve uma seca; C,D) As temperaturas
so mais elevadas no geral em S. Miguel, porm a variao grande nos dois locais; E,F)
A radiao solar diria no geral maior em S. Miguel. Esses grficos demonstram a
grande diferena de clima entre os locais, indicando que S. Miguel tem caracterstica de
serto.

51
 As diferenas entre os locais so bastante grandes: em Boracia a pluviosidade
anual foi de 3.427 mm, com chuvas relativamente bem distribudas pelos meses (menos
chuva nos meses de abril a setembro), enquanto que nos dois anos em S. Miguel foi de
898 e 228 mm, respectivamente, com chuvas concentradas nos meses de fevereiro a
abril; a temperatura em Boracia variou em mdia entre 14,0oC e 23,7oC (com
variaes sazonais perceptveis) e teve mdia de 17,8oC, ao passo que em S. Miguel,
variou em mdia entre 22,0oC e 35,0oC e teve como mdia 27,4oC; finalmente, a
radiao solar diria mdia foi de 19.206 W/m2 em Boracia, e de 31.935 W/m2 em S.
Miguel. Os dados de clima demonstram que S. Miguel um local tipicamente
caracterizado como serto semi-rido.

2. Descrio dos microhabitats larvais de Rhinella

As caractersticas principais dos microhabitats larvais estudados em So Miguel

e em Boracia esto apresentadas na Tabela 1. Os microhabitats diferem em relao a
tamanho, substrato e profundidade, alm de serem distintos tanto em fatores abiticos
quanto biticos. Todos os microhabitats de S. Miguel foram temporrios, porm
diferiram na permanncia por causa das diferenas de tamanho. Os microhabitats
maiores foram os audes (Figura 16A), e os menores e menos permanentes, as poas
nas rochas (Figura 16B).
A maioria dos microhabitats de Boracia analisados estavam distribudos em dois
grandes habitats: o Poo verde - uma cachoeira localizada em uma clareira no
interior da mata e abastecida pelo Rio Claro e a Pedreira uma rea aberta cercada
por paredes rochosas e de estrutura de charco (Figura 16C e 16D). A cachoeira um
local muito utilizado para reproduo de Rhinella, praticamente de uso exclusivo desse
gnero e com poucos predadores; diferentemente da pedreira, que um local de co-
existncia de muitas espcies de anuros e de alta presso de predao. Em Boracia, as
espcies de Rhinella tambm desovaram em microhabitats pequenos (poas na
cachoeira e na vegetao).
Quanto temperatura, notamos que as modas das temperaturas dos
microhabitats de Boracia so muito similares entre si (em torno de 18oC), mas muito
diferentes dos microhabitats de S. Miguel, que ficaram em torno de 27oC. O mesmo
ocorre com as temperaturas mdias mnimas (aproximadamente 16oC para Boracia e

52
25oC para S. Miguel). J os valores de variao trmica diria so bem diversos dentro
do mesmo bioma, mas apresenta uma parcela de similaridade entre os biomas
(magnitudes de 3oC a 12oC), apesar de S. Miguel apresentar microhabitats temporrios
de maior variao (14oC a 17,5oC, Figuras 17 e 18). A amplitude trmica mdia de
cada microhabitat apresentou uma correlao de 0,93 e 0,96 com a temperatura
mxima mdia para Boracia e S. Miguel, respectivamente (Figura 18A testes de
correlao de Pearson p < 0,001 para ambas). Essa relao forte entre as variveis
amplitude de variao e temperatura mxima mostra que a diversidade dos
microhabitats dentro de um mesmo bioma causada pela diversidade de temperaturas
mximas atingidas. Boracia mostrou-se mais heterognea espacialmente que o
esperado, mesmo sem apresentar variao trmica to grande quanto S. Miguel.

Figura 16. Habitats e microhabitats estudados em So Miguel (RN) e em Boracia (SP).

A) Maior aude em S. Miguel, cheio aps uma seqncia de chuvas. B) Poa nas rochas em
S. Miguel, de aproximadamente 1,5 X 1,0 m, com ninhos de espuma. C) Cachoeira em
Boracia, com vrias poas nas rochas. D) Pedreira em Boracia, com o paredo de rocha ao
fundo e aspecto de charco.

53
 Legenda
Mxima
Mnima

(oC)
Moda

Figura 17. Regimes trmicos dos microhabitats larvais em S. Miguel (Caatinga RN) e
em Boracia (Floresta Atlntica SP). As temperaturas foram registradas a cada 30
minutos, com uso de carregadores de dados depositados no fundo dos microhabitats, ao longo
de vrios dias. Esto representados como barras as amplitudes trmicas mdias, que so a
variao entre as temperaturas mnimas e as mximas mdias, considerando-se todos os dias
medidos. Os pontos so as modas de temperatura.

B
A
(oC)

(oC)
C

(oC)

(oC)

Figura 18. Relao entre amplitude trmica mdia e temperatura mxima mdia (A) e distribuies de
desvios padro das temperaturas mdias mnimas (B) e mximas (C) dos microhabitats de Boracia
(azul) e So Miguel (vermelho). A temperatura dos microhabitats foi medida com o uso de carregadores de
dados depositados no fundo de cada microhabitat, a cada 30 minutos. Cada ponto ou barra nos grficos
correspondem a um microhabitat particular. (A) A reta representa a correlao entre as variveis (Teste de
correlao de Pearson r = 0,93 e r = 0,96, para Boracia e S. Miguel, respectivamente). (B), (C) As
distribuies dos microhabitats de Boracia so mais direita que os de S. Miguel, mostrando que existe
maior variao dia a dia nesses primeiros.

54
 As distribuies de desvios padro das temperaturas mdias mnimas (Figura 18B)
e mximas (Figura 18C) dos microhabitats de Boracia so mais deslocadas direita
que as distribuies de S. Miguel. Isso demonstra que os microhabitats de Boracia
variam mais dia a dia nas suas temperaturas mnimas e mximas, sendo por conseguinte
mais imprevisveis.

Tabela 1. Caractersticas fsicas e biticas dos microhabitats larvais de Rhinella

em So Miguel (RN) e Boracia (SP).

* Grande parcela das espcies do local: S. Miguel- Pleurodema diplolistris, Physalaemus sp., Scinax,
Phyllomedusa hypochondrialis; Boracia - Hypsiboas polytaenia, Hypsiboas faber, Hypsiboas
microps, Hypsiboas pardalis, Hypsiboas multilineata, Physalaemus cuvieri.

** Possivelmente tambm h insetos e larvas.

55
3. Distribuio natural de massa estgio-especfica

Encontramos uma maior variao de massa estgio-especfica para as larvas

livres de R. granulosa (Figura 19). No houve diferena na mdia da massa para os
estgios com maior nmero amostral (34 n=19 para ambos os microhabitats, 35 n=11
para ambos e 37 n=10, n=8) entre os microhabitats Poo da cachoeira e Poa
cachoeira de Boracia (testes Kolmogorov-Smirnov Z p=0,15; p=0,28 e p=0,36;
respectivamente), porm para os estgios 35 e 41 (n=16 para ambos os microhabitats,
n=15 para ambos, respectivamente), a massa mdia dos microhabitats Aude menor
e Aude maior foram diferentes (testes Kolmogorov-Smirnov Z p<0,05 e p<0,01,
respectivamente). Comparaes com os microhabitats Pedreira e Poa no foram
feitas pelo pequeno nmero amostral de peso por estgios. Esse resultado sugere uma
mior plasticidade na massa de R. granulosa diante das larvas de R. icterica e R.
ornata, porm ele pode estar atrelado somente aos microhabitats estudados, e no
representar um padro geral.

A Figura 19. Distribuio

massa estgio-
especfica de larvas
livres de Rhinella nos
microhabitats de
Boracia (A) e So
Miguel (B). As larvas
foram coletadas ao longo
de vrios dias, pesadas e
estagiadas com o uso da
tabela de identificao de
Gosner (1960). Esto
B representados a massa
mdia e os respectivos
desvios padro. A
variao da massa
maior nos microhabitats
de S. Miguel, porm a
sequncia para o
microhabitat
Pedreirade Boracia
est incompleta devida
alta mortalidade das
larvas no perodo
analisado.

56
4. Experimentos de campo

4.1. Plasticidade da massa em R. icterica

Houve uma diferena muito maior na massa final que nos estgios de
desenvolvimento das larvas de R. icterica submetidas ao experimento de campo
(Figura 20). A mediana da massa final das larvas distribudas na cachoeira foi
praticamente duas vezes maior que das larvas na pedreira, e tambm houve diferena
entre as duas gaiolas na cachoeira (Figura 20B). O fator ambiente explicou 99% da
variao dos dados, e o sub-fator gaiola explicou 21% da variao dos dados dentro
do ambiente cachoeira (Tabela 2). Os regimes trmicos das gaiolas possuram modas
bastante similares (19,7oC; 20,1oC - cachoeira; 21,1oC e 21,3oC pedreira), porm as
amplitudes trmicas foram maiores para as gaiolas na pedreira (13oC contra 4oC). As
diferenas na massa mostram que as larvas de uma mesma famlia de R. icterica
possuem plasticidade na massa em condies prximas das naturais, tanto dentro de
um mesmo ambiente (diferena na mdia da massa nas gaiolas da cachoeira, Tabela 3)
quanto entre ambientes.

A
Figura 20. Estgios de
desenvolvimento (A) e massa final
(B) das larvas de R. icterica
submetidas a experimento de campo
com gaiolas. Uma desova de R. icterica
foi distribuda em quatro gaiolas
dispostas duas a duas em dois
ambientes distintos: cachoeira e
pedreira. Cada gaiola teve 30 larvas no
incio do experimento. A cada semana,
o nmero de larvas era contabilizado e
a massa e estgio das larvas
B a determinados. Os boxplots representam
b a mediana (trao), 50% (retngulo) e
95% da distribuio dos dados. (A) O
experimento foi finalizado quando a
Massa final (g)

maioria das larvas restantes em cada

c c gaiola atingiu os estgios Gosner 39/40.
(B) A mediana da massa foi
aproximadamente duas vezes maior
para o ambiente cachoeira. As letras
indicam as diferenas entre as mdias
dos grupos (ANOVA hierrquica
seguido de teste de Tukey).

57
4.2. Curvas de sobrevivncia

O nico parmetro em campo que pde ser comparado entre as trs espcies de
Rhinella foram as curvas de sobrevivncia (Figura 21). Observando-se as quedas das
curvas, notamos trs padres correspondentes a cada espcie: as mortes nas larvas de
R. granulosa somente ocorrem aps 2/3 do desenvolvimento, com uma queda brusca
na maioria dos casos (Figura 21A); em R. icterica, a queda bem gradual, para os dois
ambientes, havendo uma mesma proporo de morte ao longo de todo o
desenvolvimento (Figura 21B); e finalmente, em R. ornata, a queda mais brusca ocorre
logo no incio do desenvolvimento, e depois passa a ser gradual (Figura 21C). Os
regimes trmicos das gaiolas de R. icterica foram os descritos no item anterior, e os de
R. ornata tiveram moda e amplitude de 22,3 oC e 7,4 oC ; e 22oC e 5,4oC. As nicas
curvas que diferiram dentro de uma mesma espcie foram as de R. granulosa (Tabela
4), indicando que h variao na sobrevivncia entre famlias dessa espcie para
microhabitats similares, que foi uma simulao de poa temporria bem rasa. Os
regimes trmicos obtidos foram correspondentes com poas pequenas naturais,
atingindo uma temperatura mxima mdia de 37oC, e por vezes chegando a 40oC
(Figura 21D).

A B

C D
(oC)

Figura 21. Curvas de sobrevivncia cumulativa obtidas em campo para R. granulosa (A), R.
icterica (B) e R. ornata (C); e regimes trmicos simulados em campo para R. granulosa (D). As
gaiolas inciaram com 30 larvas cada, no estgio Gosner 27, e foram dispostas nos microhabitats
indicados nas legendas. A cada 3 dias (R. granulosa) ou a cada 7 dias (R. icterica e R. ornata) as
larvas em cada gaiola eram contabilizadas. Em D esto mostrados os regimes trmicos obtidos na
simulao de poas temporrias.

58
4.3. Massa das fmeas e dos cordes de Rhinella granulosa

Existe uma clara relao linear positiva entre a massa das fmeas de R.
granulosa e a massa de seus respectivos cordes de ovos (Figura 22, teste de
regresso linear F = 38,93 p<0,001), mostrando que quanto maior a fmea, maior o
cordo de ovos. A variao da massa da fmea explicou 73% da variao da massa do
cordo.

Figura 22. Relao entre massa do

cordo de ovos e massa da fmea de R.
granulosa. Os dados apresentados no
grfico referem-se a 15 casais de R.
granulosa coletados em amplexo para o
experimento de campo. Estes foram
postos em bacias com gua, onde
desovaram cordes de ovos. As fmeas e
seus respectivos cordes foram pesados
com uso de uma balana de 0,01 g de
preciso. Est representada a reta de
regresso e os intervalos de confiana.
que descrevem a relao: Massa cordo =
0,26 + 2,5 (Massa da fmea).

5. Experimentos de laboratrio

5.1. Desenvolvimento de R. ornata e R. icterica

5.1.1. Regimes trmicos simulados

Os regimes trmicos simulados em laboratrio para R. ornata e R. icterica

esto apresentados na Figura 23. Houve alguma variao nas modas dentro dos
tratamentos mais frios (1,2 e 3) para R. ornata (18,5oC a 21oC), assim como para R.
icterica (17oC a 18,5oC), mostrando que as larvas de R. icterica desenvolveram em
regimes mais frios no geral. Quanto aos tratamentos mais quentes (4, 5 e 6), tambm
houve uma variao nas modas, de 26,5oC a 28oC para R. ornata, e de 26oC a 28,5oC,
para R. icterica. Essas variaes ocorreram devido heterogeneidade da sala
climatizada e dos prprios aquecedores. Entretanto, a grande diferena nas modas dos
tratamentos frios em relao aos quentes foi presente para ambas as espcies, ficando

59
em torno de 8oC, um valor bastante similar diferena natural dos locais de estudo
(ver a diferena nas modas da figura 17). Apesar dos tratamentos terem sido
delineados segundo as modas (20oC para os tratamentos 1,2 e 3; e 27oC para os
tratamentos 4,5 e 6), achamos importante tambm verificar as mdias dos mesmos. As
mdias dos regimes, em geral, no diferiram por mais de 1,5oC das modas do mesmo
regime, embora em alguns tratamentos tanto a moda quanto a mdia diferiram por
mais de 1oC da moda prevista.
Quanto amplitude trmica mdia, notamos que os tratamentos A3, C3, C5 e
A6 de R. ornata ficaram aqum do programado, devido a falhas nos aquecedores ao
longo do tempo (Figura 23A). Para R. icterica, somente o regime B3 teve variao
menor que a esperada (Figura 23B).
A
Legenda

Mxima
Mnima
(oC)

Moda

B
(oC)

Figura 23. Regimes trmicos simulados em laboratrio para experimento

de desenvolvimento com R. ornata (A) e R. icterica (B). Os regimes foram
obtidos com o uso de aquecedores ligados a temporizadores, em bacias
plsticas de 15 L. Os tratamentos 1 a 3 foram programados para moda de
20oC e os 4 a 6, moda de 27oC. As barras so a amplitude trmica mdia e os
pontos so as modas.

60
5.1.2.Curvas de sobrevivncia

As curvas de sobrevivncia cumulativa das larvas de R. ornata foram diferentes

entre os tratamentos (Figura 24A, Tabela 5), enquanto as de R. icterica foram
similares (teste Log-Rank 2 = 6,96 e p = 0,22) e de alta sobrevivncia em geral
(Figura 24B). Todos os tratamentos mais frios (1 a 3) diferiram de dois dos mais
quentes (4 e 6), para R. ornata. A grande diferena nas curvas de sobrevivncia pode
ser verificada no dcimo dia de experimento, no qual as quedas de sobrevivncia para
os tratamentos frios foram mais acentuadas.

Figura 24. Sobrevivncia

A
cumulativa das larvas de R.
ornata (A) e R. icterica (B)
expostas aos regimes
trmicos simulados em
laboratrio. Em cada bacia,
as larvas foram contabilizadas
a cada 2 dias. As curvas
mostram a frao de
indivduos sobreviventes do
total, ao longo dos dias, para
cada tratamento. A) Todas as
famlias foram consideradas
juntamente. H uma grande
B mortalidade por volta do
dcimo dia de experimento,
(oC)
principalmente nos
tratamentos mais frios (em
azul). B) Curvas para somente
uma famlia. A mortalidade
tambm acentuada por volta
do dcimo dia, mas
relativamente, R. icterica teve
menos morte.

61
5.1.3. Normas de reao bivariadas

As relaes entre as trs variveis dependentes foram analisadas para R. ornata

(Figura 25, Tabela 6) e R. icterica (dados no mostrados) por meio de correlaes. Ao
plotarmos todo o conjunto de dados, percebemos que existe uma separao clara entre
os pontos correspondentes a moda de 20oC e os de moda 27oC. A taxa de crescimento
apresentou uma correlao negativa com o tempo de desenvolvimento para as duas
modas, sendo que as taxas de crescimento variaram mais com o tempo de
desenvolvimento para os dados de moda 27oC, ou seja, houve uma maior plasticidade
para essa relao nessa moda (Figura 25A). Alm disso, as maiores taxas de
crescimento foram obtidas na moda mais quente. O padro oposto observado para as
duas modas nas correlaes entre massa na metamorfose e tempo de desenvolvimento
indica que prolongar o desenvolvimento na moda mais fria acarretou em maior massa,
enquanto que na moda mais quente, prolongar o desenvolvimento acabou por reduzir a
massa (Figura 25B). A massa na metamorfose aumentou com a taxa de crescimento
para ambas as temperaturas, sendo a plasticidade similar (inclinaes das retas
similares). Porm, para uma mesma taxa de crescimento, a massa a 27oC foi sempre
menor (Figura 25C). Os padres foram semelhantes para R. icterica, mas somente a
correlao entre taxa de crescimento e tempo de desenvolvimento a moda de 20oC foi
significativa.

5.1.4. Efeitos da moda e da variao trmica

As variveis taxa de crescimento, tempo de desenvolvimento e massa na

metamorfose foram analisadas separadamente, pois como foi mostrado no item
anterior, no h uma dependncia dessas variveis para o conjunto completo dos
dados. Para R. ornata, o fator famlia, analisado como aleatrio, no teve efeito em
nenhuma das variveis (ANOVA F = 0,37 p = 0,82 para taxa de crescimento; F = 0,14
p = 0,96 para tempo de desenvolvimento e F = 0,41 p = 0,80 para massa na
metamorfose; Figura 12). J o fator bloco, tambm analisado como aleatrio, teve
efeito sobre a taxa de crescimento (ANOVA F = 4,9 p = 0,09) e sobre o tempo de
desenvolvimento (Kruskal-Wallis 2 = 8,35 p = 0,015). Para ambas as variveis, o
bloco 3 foi diferente dos demais. Essa diferena pode ter se dado pela maior morte em

62
geral das larvas que desenvolveram no bloco 3 (n = 24, enquanto que para os blocos 2
e 3, n = 34 e n = 42, respectivamente).

A B
(oC)

Figura 25. Relaes entre taxa de crescimento, tempo de desenvolvimento e massa na

metamorfose para as larvas de R. ornata submetidas ao experimento de desenvolvimento.
As larvas foram submetidas a seis regimes trmicos distintos, sendo trs deles de moda de 20oC e
variao de 0, 4 e 8oC (pontos azuis) e trs deles de moda 27oC e as mesmas variaes (pontos
vermelhos). A cada dois dias, as larvas eram pesadas, e as taxas de crescimento correspondem
aos coeficientes angulares de regresses entre massa e tempo. Quando as larvas atingiram os
estgios Gosner 41-42, a massa na metamorfose foi determinada e o tempo de desenvolvimento
desde o incio do experimento foi contabilizado. As retas cheias representam correlaes
significativas e as curvas so os intervalos de confiana. A) Taxa de crescimento e tempo de
desenvolvimento. B) Massa na metamorfose e tempo de desenvolvimento. C) Massa na
metamorfose e taxa de crcescimento.

63
 A

Figura 26. Taxa de

crescimento (A), tempo de
desenvolvimento (B) e
massa na metamorfose (C)
das famlias de R. ornata
submetidas ao experimento
de desenvolvimento. As
larvas foram submetidas a
B seis regimes trmicos nos
quais se variou a moda (20oC
ou 27oC) e a magnitude de
variao trmica (0oC, 4oC ou
8oC). As taxas de
crescimento so coeficientes
angulares de regresses entre
massa e tempo. O tempo de
desenvolvimento e a massa
na metamorfose foram
registrados assim que
C atingiram os estgios Gosner
41-42. Os boxplots
representam a mediana
(trao), 50% (retngulos) e
95% (barras) da variao dos
dados. Nenhuma famlia
diferiu para as variveis
apresentadas.

As taxas de crescimento de R. ornata foram maiores (teste de Mann-Whitney

U = 542,5 p < 0,001) e de maior varincia a 27oC de moda (teste de Levene p < 0,001;
Figura 27A), enquanto que os tempos de desenvolvimento foram menores nessa
mesma moda (teste de Mann-Whitney U = 85,5 p < 0,001; Figura 27B). Quanto aos
efeitos da variao trmica, as taxas de crescimento foram menores nas maiores
variaes de temperatura (teste de Kruskal-Wallis 2 = 11,2 p = 0,04; Figura 27D) e
no houve diferena nos ranks dos grupos para o tempo de desenvolvimento (teste
de Kruskal-Wallis 2 = 2,11 p = 0,34; Figura 27E), apesar da varincia dos tempos de
desenvolvimento ser menor na variao de 8oC (teste de Levene p < 0,001). A
ANOVA de duas vias para a massa na metamorfose (nica varivel que teve
distribuio normal dos resduos e homogeneidade de varincia) das larvas de R.
ornata, considerados os fatores moda e variao da temperatura como fixos, foi

64
significativa para ambos os fatores isolados e para a interao entre eles (Figuras 27C e
27F, Tabela 7). A massa foi menor na moda correspondente ao tratamento de maior
temperatura e nos maiores valores de variao trmica. A interao entre moda e
variao trmica amenizou o efeito da moda, sendo que nas variaes de 4oC e 8oC a
massa na metamorfose a 20oC e a 27oC de moda foram as mesmas (Figura 29C).

A # D a b
b

E
B #

F
C * c
dc
d

(oC) (oC)

Figura 27. Efeitos independentes dos fatores moda e variao da temperatura nas variveis taxa de
crescimento(A e D), tempo de desenvolvimento (B e E) e massa na metamorfose (C e F) em R. ornata.
As trs variveis foram medidas nas larvas de R. ornata que foram submetidas ao experimento de
desenvolvimento, no qual testou-se os efeitos da moda da temperatura e de sua variao. As taxas de
crescimento foram obtidas pelos coeficientes angulares de regresses massa por tempo, e a massa na
metamorfose e o tempo de desenvolvimento foram determinados quando as larvas atingiram os estgios
Gosner 41/42. Os boxplots representam a mediana (trao), 50% (retngulos) e 95% (barras) da variao dos
dados. * p < 0,001 ANOVA; # p < 0,001 Mann-Whitney; a, b Kruskal-Wallis, seguido de Dunnett T3 p <
0,05; c,d ANOVA seguido de Tuckey p < 0,01.

65
 Para R. icterica, no houve a possibilidade de avaliar efeito de famlia, pois
somente uma foi testada. Houve efeito de bloco somente para o tempo de
desenvolvimento (Kruskal-Wallis 2 = 8,35 p = 0,015), e assim como para R. ornata,
o bloco distinto foi o 3. Os efeitos da moda nas variveis de R. icterica foram
similares aos de R. ornata. A taxa de crescimento mdia foi maior para a moda de
27oC, e houve interao entre moda e variao da temperatura (Figura 28A, Tabela 8)
e o tempo de desenvolvimento foi menor nessa moda (teste de Mann-Whitney U = 2,0
p < 0,001; Figura 28B).

A *# D

B # E

C F

(oC) (oC)

Figura 28. Efeitos independentes dos fatores moda e variao da temperatura nas variveis taxa de
crescimento (A e D), tempo de desenvolvimento (B e E) e massa na metamorfose (C e F) em R. icterica.
Os procedimentos para obteno das variveis foram os mesmos descritos na figura anterior. Os boxplots
representam a mediana (trao), 50% (retngulos) e 95% (barras) da variao dos dados. * p < 0,001 ANOVA;
# p < 0,001 Mann-Whitney.

66
 Nenhum fator foi significativo para a massa na metamorfose das larvas de R.
icterica, apesar do modelo ter sido significativo (Figura 28C e 28F, Tabela 9). Esse
resultado foi distinto de R. ornata. Alm disso, a variao da temperatura no causou
efeitos significativos em nenhuma das variveis de R. icterica (Figuras 28D, 28E e
28F), sendo esse padro bastante diferente de R. ornata. Porm, uma semelhana entre
as espcies so os efeitos de interao entre moda e variao da temperatura (Figura
29). No geral, maiores variaes trmicas causam uma maior igualdade entre os
valores mdios das variveis dependentes para as duas modas. Ou seja, a interao
entre moda e variao ameniza os efeitos isolados da moda.

A D

B E
Variao da
temperatura (oC)
0
4
8

C F

(oC) (oC)

Figura 29. Efeitos de interao entre moda e variao da temperatura nas larvas de R. ornata (A, B e
C) e de R. icterica (D, E e F) submetidas ao experimento de desenvolvimento. As retas so a mdia e o
desvio padro. Os efeitos de interao so perceptveis quando uma ou mais retas no so paralelas s
demais. Para a taxa mdia de crescimento (A, D) e para o tempo mdio de desenvolvimento (B, E) as retas
correspondentes variao de 8oC foram as mais distintas das demais variaes, indicando que nessa
magnitude de variao o efeito isolado da moda amenizado. Para a massa na metamorfose (C e F), a
variao de 4oC foi a mais distinta para as duas espcies, tambm amenizando o efeito isolado da moda.
Porm, em R. icterica, a variao de 8oC tambm causou o mesmo efeito.

67
5.1.5. Normas de reao de variao trmica

No geral, as formas das normas de reao de variao trmica de R. ornata e

R. icterica so muito similares entre si para as trs variveis consideradas (Figura 30).
Nenhuma das normas foi totalmente linear, ocorrendo mudanas de direo para
ambas as espcies. A plasticidade nas variveis taxa de crescimento e tempo de
desenvolvimento foi muito grande, sendo que as larvas foram capazes de aumentar a
primeira em duas vezes e reduzir a ltima em aproximadamente trs vezes. Todavia,
notamos que as normas de taxa mdia de crescimento e tempo mdio de
desenvolvimento de R. icterica possuem um regime trmico timo distinto do de R.
ornata (Figuras 30A e 30B). Consideramos como o timo o tratamento que causou a
maior taxa mdia de crescimento e o menor tempo de desenvolvimento (27oC
constante em R. ornata e 25 29oC em R. icterica), ou seja, o tratamento que
otimizou o desenvolvimento das larvas. As normas de massa mdia na metamorfose
apresentaram um padro de intensa canalizao da massa na maior parte da variao
de regimes trmicos imposta (Figura 30C). O valor canalizado o mesmo para ambas
as espcies, por volta de 0,25 g. O valor mximo de massa na metamorfose foi maior
para R. ornata, apesar de o regime trmico de 20oC constante ser o timo para a massa
em ambas as espcies. Uma ltima diferena a ser destacada foi a perda da canalizao
da massa em R. ornata no regime trmico de 25 - 34oC, que no ocorreu em R.
icterica.

5.2. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima

A tolerncia trmica mxima das larvas das trs espcies foi determinada pela
temperatura crtica mxima (TCMax). Os fatores espcie, temperatura de aclimatao,
e a interao entre eles foram significativos (Tabela 10). A 20oC de aclimatao, as
TCMax de R. ornata, R. icterica e R. granulosa foram 39,6oC; 41,2oC e 43oC,
respectivamente; enquanto que a 30oC de aclimatao, foram de 42,5oC; 42,5oC e
44,4oC, respectivamente (Figura 31). Observando a figura, percebemos que R.
granulosa possu maior TCMax nas duas temperaturas de aclimatao, com uma

68
norma de mesma inclinao que R. icterica, mas deslocada para cima. A norma de R.
ornata a mais plstica, porm a de menor tolerncia a 20oC de aclimatao.

B
Espcie
R. ornata
R. icterica

(oC)
Figura 30. Normas de reao de variao trmica de variveis do desenvolvimento
das larvas de R. ornata R. icterica. As retas so a mdia e o desvio padro. As larvas
de ambas as espcies foram submetidas aos seis regimes trmicos mostrados no eixo
das abscissas, e as variveis taxa de crescimento (A), tempo de desenvolvimento (B) e
massa na metamorfose (C) foram determinadas para cada indivduo. As normas so
muito similares para ambas as espcies, apesar do timo fisiolgico (maior taxa mdia
de crescimento e menor tempo mdio de desenvolvimento) ser diferente. Observe a
intensa canalizao da massa mdia na metamorfose por volta de 0,25g para ambas as
espcies.

69
 Temperatura crtica mxima (oC)

Temperatura de aclimatao (oC)

Figura 31. Normas de reao de temperatura crtica mxima das
larvas de R. ornata, R. icterica e R. granulosa. As retas so a mdia e
o desvio padro. As larvas das trs espcies foram aclimatadas a 20oC
ou 30oC por trs dias, e posteriormente aquecidas a 1oC/min at
atingirem sua temperatura crtica mxima (imobilidade). R. granulosa
a espcie de maior tolerncia. R. ornata e R. icterica diferiram na
tolerncia a 20oC de aclimatao. R. ornata foi a espcie de maior
plasticidade na temperatura crtica mxima.

70
Discusso

1. Heterogeneidade ambiental

A histria ecolgica e o clima peculiar da caatinga configuram um timo

contexto para o estudo de fenmenos evolutivos relacionados com mudanas
ambientais, como plasticidade fenotpica e adaptao. O processo de aridificao que
ocorreu e ainda ocorre na caatinga caracteriza um tipo de mudana ambiental recente,
considerando a escala evolutiva, porm gradual se compararmos com processos como
fragmentao de habitats (Tilman, May et al., 1994). Para se especular sobre a
magnitude da alterao ambiental que se passou na caatinga, os vrios trabalhos que
sugerem que esse bioma era similar a uma mata mida so de muita relevncia
(Bigarella e Andrade-Lima, 1982; Hartwig e Cartelle, 1996; de Vivo, 1997; Carnaval,
2002), pois conferem uma referncia de caractersticas ambientais a qual podemos
comparar com a caatinga em seu estado atual.
A referncia de mata mida que selecionamos para comparar com a caatinga
foi a floresta atlntica, e a varivel representativa da mudana foi a temperatura. No
entanto, supusemos que considerar somente a moda ou a mdia da temperatura seria
muito simplista, ento outra varivel selecionada foi a variao da temperatura. certo
que um processo complexo como a aridificao de uma regio presume um conjunto
de diversas alteraes ambientais correlatas. Como mostramos com os dados de clima
dos locais de estudo, outros fatores ambientais tambm foram alterados, alm da
temperatura. A pluviosidade e a radiao solar diria foram bastante distintas entre os
dois locais, e indicam que S. Miguel tem um clima tpico de serto. Outros fatores no
analisados nesse estudo, como a dieta e a disponibilidade de recursos, inclusive a
direo ou fora de interaes biticas, tambm devem ter sofrido alteraes que
atuam nos processos fisiolgicos e no desenvolvimento das larvas das espcies que
habitam a caatinga. Todavia, para uma primeira anlise dessa mudana ambiental na
fisiologia das larvas, a temperatura e sua variao pareceram-nos de grande relevncia
pelo alcance de seus efeitos, j descritos em diversos processos fisiolgicos
(Hochachka e Somero, 2002) e em variveis ligadas ao desenvolvimento de larvas de

71
anfbios anuros (por exemplo, (Smith-Gill e Berven, 1979; Olsson e Uller, 2002;
Arendt, 2006; Niehaus, Wilson et al., 2006).
Detectamos uma diferena grande entre as modas de temperatura dos
microhabitats de So Miguel (caatinga) e os de Boracia (floresta atlntica), em torno
de 7oC; e essa diferena foi suficiente para deflagrar diversos efeitos na plasticidade de
desenvolvimento e na tolerncia trmica das espcies em estudo. Porm, notamos uma
sobreposio de magnitudes de variao trmica entre os locais de estudo, indicando
que tanto S. Miguel quanto Boracia apresentam heterogeneidade espacial de
microhabitats de desenvolvimento. Ainda assim, em S. Miguel, encontramos
microhabitats temporrios que apresentaram uma variao de temperatura diria maior
que os de Boracia, como o esperado.
Segundo a Teoria da Aptido em Ambientes Heterogneos (Levins, 1962;
1963), a heterogeneidade ambiental uma condio necessria para o surgimento e
manuteno de plasticidade fenotpica. Portanto, a heterogeneidade espacial observada
para ambos os locais estudados pode ter contribudo para a plasticidade das larvas. Os
dados de tolerncia trmica das trs espcies esto de acordo com essa suposio.
Sendo as temperaturas crticas mximas (TCMax) das espcies superiores s
temperaturas mximas ambientais (Tmax), os indivduos possuem a capacidade
fisiolgica de se desenvolver em diversos microhabitats (considerando apenas a
temperatura), uma vez que toleram a diversidade de temperaturas mximas. Essa
tolerncia permite que as larvas desenvolvam-se em microhabitats trmicos diversos,
favorecendo o surgimento e a manuteno de plasticidade nas variveis de
desenvolvimento.
Contudo, alm da heterogeneidade espacial, ambos os locais possuem
heterogeneidade temporal, que pode ser decomposta em duas escalas: grossa o
indivduo experimenta o mesmo ambiente ao longo da ontogenia, e fina o indivduo
experimenta variao ambiental ao longo da ontogenia (Schlichting e Pigliucci, 1998).
A escala fina facilita o surgimento de uma plasticidade de modulao fenotpica,
enquanto que a grossa facilita o surgimento de fentipos especialistas de cada
ambiente. As distribuies de desvios padro das temperaturas mdias mnimas e
mximas construdas para os microhabitats de Boracia e de S. Miguel indicam o
quanto estes variam dia a dia, ou seja, o quanto variam ao longo do desenvolvimento
de um indivduo (variao em escala fina). Os microhabitats de Boracia so mais

72
heterogneos temporalmente em escala fina que os de S. Miguel, significando que em
Boracia existem condies mais favorveis para a ocorrncia de modulao
fenotpica. Os dados de desenvolvimento em laboratrio com as espcies de floresta
atlntica R. ornata e R. icterica so concordantes com uma alta plasticidade de larvas
provindas de microhabitats com variao de temperatura em escala fina.
bastante interessante notar que apesar dos microhabitats de Boracia serem
mais heterogneos temporalmente, o que facilita o surgimento de plasticidade, eles
tambm so mais imprevisveis, o que dificulta a manuteno de plasticidade
adaptativa. O fato de vrios microhabitats de Boracia apresentarem altos desvios
padro ao redor da mdia de temperatura indica que as mnimas e mximas no so as
mesmas ao longo dos dias. Diferente dos microhabitats de S. Miguel, que possuem
desvios pequenos, indicando que as temperaturas mnimas e mximas so bem
similares entre si, dia a dia. A previsibilidade da variao ambiental um requisito
muito importante para que uma resposta plstica adaptativa possa surgir (Newman,
1992). As larvas somente podero apresentar um fentipo mais vantajoso em
determinada condio se esta condio for possvel de ser detectada, ou seja, se ela for
previsvel de alguma forma. possvel, por conseguinte, que as larvas da floresta
atlntica estejam em condies ambientais que favoream maior plasticidade de
desenvolvimento, mas esta no ser necessariamente adaptativa.
Alm da heterogeneidade temporal ontogentica, ambos os locais apresentam
heterogeneidade temporal entre geraes. A disponibilidade de microhabitats pode
variar em S. Miguel diante dos ciclos de chuva e seca ao longo dos anos. Nos anos de
seca, como o de 2010, a chuva ainda mais escassa, e somente poas temporrias
pequenas se formam (observaes pessoais). Nesse ano, at o ms de abril, os adultos
de R. granulosa no reproduziram. O comportamento reprodutivo dessa espcie,
apesar de explosivo, no idntico ao de outras espcies que habitam a caatinga, como
Physalaemus sp e Pleurodema diplolistris, que se reproduzem mesmo em anos de
chuvas bastante escassas. Aparentemente, a reproduo de R. granulosa ocorre
somente em poas maiores, que se formam quando h mais chuva no ano. Portanto,
pode ser que essa espcie no experimente a heterogeneidade temporal entre geraes
como outras espcies da caatinga.
Devido grande extenso da poca reprodutiva das espcies R. ornata e R.
icterica, que se reproduzem desde o inverno (junho/julho) at o vero

73
(novembro/dezembro para R. ornata e at fevereiro/maro para R. icterica; Bertoluci e
Rodrigues, 2002), as populaes de larvas dessas espcies experimentam uma ampla
variao sazonal de temperatura, que se reflete na variao dos microhabitats. Logo,
considerando todo o conjunto de heterogeneidade ambiental, parece que as populaes
de larvas das espcies da floresta atlntica presenciam maior variao de temperatura
que R. granulosa. Essa sugesto dos dados vai contra a nossa previso de que a
caatinga seria mais heterognea que a floresta atlntica.

2. Heterogeneidade ambiental e Plasticidade da massa larval

Para entendermos se a alta heterogeneidade ambiental encontrada na floresta

atlntica realmente resulta em uma alta plasticidade das larvas desse ambiente,
precisamos analisar se existe uma relao positiva entre essas duas variveis. A
heterogeneidade dos microhabitats encontrada em S. Miguel refletiu-se na massa
estgio-especfica de larvas livres de R. granulosa. A maior diferena na massa se deu
entre o aude maior e o aude menor, que possuram regimes trmicos bastante
distintos. O aude maior tem a menor moda e a menor variao de temperatura,
comparado com os demais microhabitats de S. Miguel estudados, e a massa das larvas
foram menores nesse microhabitat. No obstante, existem outras diferenas entre os
dois audes alm dos regimes trmicos, como os tipos de predadores, a densidade total
de larvas, a dieta, entre outros. O padro encontrado pode ser fruto da ao conjunta
de vrias variveis, inclusive de interaes com a prpria temperatura.
Contrrio s larvas de R. granulosa, as larvas livres das espcies de Boracia
no apresentaram variao natural na massa estgio-especfica diante de microhabitats
diferentes como o poo da cachoeira e uma poa temporria do mesmo habitat. Assim
como para R. granulosa, outros fatores devem ter agido no desenvolvimento das
larvas livres alm da temperatura. Alm disso, a impossibilidade de distino entre as
larvas de R. icterica e R. ornata na natureza pode ter mascarado possveis variaes na
massa. Em contraponto, a grande plasticidade na massa ao final do desenvolvimento,
encontrada para R. icterica no experimento de campo, favorece o argumento de que a
heterogeneidade de variao trmica produz variao na massa nessa espcie. Os
microhabitats escolhidos para esse experimento pedreira e poo da cachoeira
apresentaram as mesmas moda e mdia de temperatura (em torno de 20oC), mas

74
amplitudes trmicas muito distintas, sendo trs vezes mais varivel na pedreira (por
ocorrerem temperaturas mximas bem maiores que no poo da cachoeira). O uso das
gaiolas, permitindo o acompanhamento das mesmas larvas e impedindo a ao de
potenciais predadores; a alimentao idntica (alga) e o uso de larvas provindas de
uma mesma desova reduziram as diferenas entre os microhabitats de outros fatores
alm da temperatura, promovendo maior confiana na ao desse fator no
desenvolvimento. A diferena de praticamente duas vezes na massa das larvas que
desenvolveram na pedreira e das que desenvolveram no poo da cachoeira, alm da
diferena menor encontrada entre as gaiolas dentro do habitat cachoeira, sugerem que
as diferenas de variao trmica so efetivas em suscitar plasticidade fenotpica em R.
icterica.
Essa sugesto final est de acordo com a teoria de Levins (1962, 1963) e com
estudos experimentais, tanto intra-populacional quanto interespecfico, com larvas de
anuros (Van Buskirk, 2002; Lind e Johansson, 2007), de que a heterogeneidade
ambiental correlacionada com o grau de plasticidade fenotpica. Lind e Johansson
(2007) trabalharam com 14 populaes de Rana temporaria distribudas em diferentes
ilhas na Sucia, que diferiam na disponibilidade de habitats quanto permanncia
(durao antes de secarem). Os autores encontraram uma correlao positiva entre a
plasticidade no tempo de desenvolvimento das larvas e a variao de regimes de
permanncia (risco de secagem) dos habitats de uma mesma ilha. Van Buskirk (2002)
estudou a plasticidade morfolgica e comportamental em 16 espcies de anuros diante
de dois ambientes distintos: presena ou ausncia de predador (larva de liblula). As
espcies diferiam no uso de habitats, sendo mais ou menos permanentes, e portanto
com mais ou menos predadores. Ele utilizou estatstica filogentica para anlise dos
resultados e mostrou que maiores variaes na predao dos ambientes das espcies
(ou seja, ambientes com alta diversidade de permanncia de habitats) foram
acompanhadas de aumentos evolutivos na plasticidade de resposta predao. Esses
estudos indicam que a plasticidade fenotpica pode evoluir como resposta
heterogeneidade ambiental.
3. Sobrevivncia

R. ornata parece ser mais sensvel morte nos estgios mais iniciais de
desenvolvimento, apresentando queda na sobrevivncia cumulativa logo no incio do

75
experimento de campo, enquanto R. icterica e R. granulosa apresentaram uma queda
mais gradual na sobrevivncia. possvel que essas ltimas espcies sofram com a
exposio mais prolongada a possveis fatores de morte, enquanto R. ornata sofre j
com a exposio aguda. Esse argumento parece bastante plausvel para R. granulosa,
pois o regime trmico obtido nas gaiolas distribudas no campo foram similares aos de
poas temporrias, que apresentam maior risco de picos elevados de temperatura. Os
mximos de temperatura nessas gaiolas chegaram a 39,5oC/40 oC, temperaturas
bastante elevadas. Apesar disso, a sobrevivncia das larvas de R. granulosa por 2/3 do
experimento foi de aproximadamente 90%, havendo quedas somente bem ao final. Isso
mostra que as larvas toleraram altas temperaturas por relativamente um longo tempo
de desenvolvimento, mas que talvez essa exposio crnica as tenha fragilizado ou que
os estgios mais tardios (acima de Gosner 41) tenham sido mais sensveis a altas
temperaturas, como j reportado em algumas espcies de bufondeos (Sherman, 1979;
Floyd, 1982).
O padro de sobrevivncia ao longo da ontogenia das larvas de R. ornata em
laboratrio foi similar ao do campo. No experimento de desenvolvimento, houve maior
mortalidade nos regimes trmicos mais frios no incio do desenvolvimento, ao redor do
dcimo dia. Porm, esse padro no se repetiu para os regimes mais quentes, nos quais
a morte das larvas de R. ornata foi menor em geral e mais gradual. A maior
sobrevivncia nos regimes mais quentes, que so incomuns na floresta atlntica, foi
inesperada. A alta sobrevivncia em laboratrio das larvas de R. icterica tanto nos
regimes mais frios quanto mais quentes tambm foi inesperada, apesar de em campo a
sobrevivncia em distintos microhabitats de Boracia no ter sido diferente. Esse
resultado mostra que as espcies de floresta atlntica sobrevivem bem em novas ou
raras condies de temperatura, como os regimes tpicos da caatinga. Como
detectamos alta sobrevivncia em regimes mais quentes para as trs espcies,
possvel que essa varivel no limite a permanncia de espcies na caatinga, ao menos
na fase larval. Contudo, quanto s larvas das espcies de floresta, um possvel limite da
sobrevivncia em altas temperaturas pode existir, uma vez que no experimento de
desenvolvimento no foi possvel submeter as larvas a temperaturas to elevadas
quanto 40oC, mais comuns na caatinga.

4. Normas de reao bivariadas das espcies de floresta atlntica

76
 Os tratamentos impostos s larvas de R. ornata e R. icterica foram efetivos em
deflagrar distintos padres de relao entre as variveis taxa de crescimento, tempo de
desenvolvimento e massa na metamorfose. A alterao dos padres se deu
especialmente devido aos efeitos suscitados pelas distintas modas de temperatura, que
foi a grande diferena observada entre os microhabitats de Boracia e S. Miguel. Essas
relaes entre variveis dependentes podem ser consideradas como normas de reao
bivariadas e analisadas dessa forma quanto plasticidade.
A taxa de crescimento a 27oC mudou mais com o tempo de desenvolvimento
do que a 20oC. Isso significa que a sensibilidade trmica das larvas na moda mais
quente maior, e que a relao entre taxa de crescimento e tempo de desenvolvimento
temperatura-dependente. Esse resultado est de acordo com os resultados de Smith-
Gill e Berven (1979) para Rana pipiens, nas correlaes entre tempo de
desenvolvimento e taxa de crescimento a 18oC, 23oC e 28oC (Figura 4 de Smith-Gill e
Berven, 1979). Apesar da correlao a 18oC no ter sido significativa, seu padro foi
inverso quando comparado a 23oC e 28oC, sendo positivo na primeira temperatura (ou
seja, taxas de crescimento maiores foram acompanhadas de tempos de
desenvolvimento maiores) e negativo nas duas outras. Portanto, uma diferena entre
5oC e 10oC na temperatura de desenvolvimento das larvas pode causar uma alterao
de sensibilidade trmica das mesmas ou at mesmo uma inverso nos padres de
normas bivariadas de taxa de crescimento e tempo de desenvolvimento, assim como
visto por Smith-Gill e Berven (1979).
As correlaes negativas que ns obtivemos para essas normas (ou seja, quanto
mais rpido o crescimento, menos tempo de desenvolvimento) esto de acordo com os
resultados de Newman (1989) para Scaphiopus couchii, que desenvolveram em menor
densidade ou maior disponibilidade de comida, e apresentaram desenvolvimento mais
rpido junto de crescimento mais rpido. Contudo, em Discoglossus galgonoi, Alvarez
e Nicieza (2002) no encontraram perodos larvais mais curtos diante de crescimento
mais rpido, associado com uma dieta protica diante de uma herbvora. Percebemos
ento que, para alguns fatores ecolgicos como densidade e quantidade de alimento,
assim como para algumas temperaturas, o desenvolvimento mais rpido est
correlacionado com um crescimento mais rpido. Mas, para outros fatores, como a
qualidade da dieta, esse padro no visto.

77
 A correlao positiva entre massa na metamorfose e tempo de desenvolvimento
encontrada na moda de 20oC um resultado previsto pelas teorias ecolgicas
relacionadas com massa na metamorfose. A teoria de Wilbur e Collins (1973) prev
que larvas de crescimento mais lento (condizente com as menores taxas de crescimento
que obtivemos a 20oC) permanecero mais tempo no habitat aqutico at atingirem sua
massa tima na metamorfose (uma massa maior). Werner (1986), que expandiu a
teoria de Wilbur e Collins (1973) incluindo um compromisso entre mortalidade e taxa
de crescimento, previu que a extenso do tempo de desenvolvimento no habitat
aqutico seria vantajosa enquanto a oportunidade de crescer superasse o risco de
mortalidade. Finalmente, Rudolf e Rdel (2007) previram que em habitats
permanentes, o risco de mortalidade no varia com o tempo (pois no h risco de
secagem do habitat), no havendo portanto uma seleo para acelerao da
metamorfose. Deste modo, a resposta na moda mais fria est de acordo com todas as
teorias ecolgicas.
O padro inverso obtido para a norma bivariada de massa na metamorfose e
tempo de desenvolvimento na moda de 27oC mostra que essa relao tambm
temperatura-dependente. A correlao negativa indica que prolongar o tempo de
desenvolvimento no resulta em maior massa. Observando-se as normas de massa na
metamorfose e taxa de crescimento, que so correlaes positivas para ambas as
modas, notamos que as larvas a 27oC que atingiram a mesma faixa de massa que as
larvas a 20oC (entre 0,20 e 0,30g) foram as que atingiram taxas de crescimento
superiores (entre 20 e 30 mg/dia). Desse modo, apesar dessas larvas terem reduzido
seu tempo de desenvolvimento diante das larvas a 20oC, a maior acelerao nas taxas
de crescimento compensou a massa na metamorfose. Porm, existiram larvas na moda
mais quente que obtiveram as mesmas taxas de crescimento que as larvas a 20oC (entre
5 e 20 mg/dia), mas tambm reduziram o tempo de desenvolvimento. Ou seja, a
acelerao do desenvolvimento no foi acompanhada na mesma proporo por uma
acelerao do crescimento, e assim a massa na metamorfose ficou menor. Essas larvas
a 27oC que possuram massa menor, foram mais sensveis temperatura no tempo de
desenvolvimento que na taxa de crescimento. Esse resultado condizente com a regra
de Smith-Gill e Berven (1979), de que a sensibilidade trmica da taxa de diferenciao
maior que a de crescimento. No entanto, essa regra no foi vlida para todas as

78
larvas, uma vez que observamos acelerao do crescimento e do desenvolvimento na
mesma proporo.
O grande resultado dessas normas bivariadas que existem diferenas
individuais na sensibilidade trmica das larvas. A regulao do desenvolvimento diante
da temperatura pode ser modulada no nvel individual, indicando que existe substrato
para atuao da seleo natural na sensibilidade trmica individual. Esse resultado
suporta os achados de Berven, Gill et al. 1979, que encontrou diferentes sensibilidades
trmicas do desenvolvimento nas populaes de plancie e montanha de Rana
clamitans, no sentido de mostrar que existem diferenas individuais na sensibilidade
das larvas capazes de serem selecionadas em distintos ambientes, e resultarem em
populaes de sensibilidades distintas.

5. Efeitos da moda e da variao trmica nas espcies de floresta atlntica

No encontramos variao nas respostas das famlias de R. ornata perante os

efeitos da temperatura no experimento de desenvolvimento, j que no houve nenhum
efeito significativo desse fator nas variveis analisadas, nem interao desse fator com
a moda ou com a variao trmica, indicando que no observamos variao gentica
entre famlias para a plasticidade. Esse tipo de interao importante para a
possibilidade de evoluo da plasticidade (Newman, 1992; Dewitt, Sih et al., 1998;
Relyea, 2002), porm como encontramos variao individual nas respostas
temperatura, acreditamos que essa possibilidade realmente exista nas larvas de R.
ornata. Variao gentica na plasticidade fenotpica em famlias de larvas de anuros foi
encontrada para Scaphiopus couchii (Newman, 1988) e para Rana temporaria (Olsson
e Uller, 2002).
Os efeitos isolados de aumentar a moda de temperatura levando ao aumento
das taxas de crescimento, reduo dos tempos de desenvolvimento e reduo das
massas na metamorfose (o ltimo somente para R. ornata) eram esperados e condizem
com vrios outros estudos de temperatura e desenvolvimento em larvas de anuros (por
exemplo, Smith-Gill e Berven, 1979; Blouin, 1992; Morand, Joly et al., 1997; Alvarez
e Nicieza, 2002; Buchholz e Hayes, 2002). A espcie Hyla squirella, estudada por
Blouin (1992), tambm no apresentou massa reduzida na temperatura de 30oC em
comparao com a de 25oC (apesar de seu tempo de desenvolvimento ter sido menor a

79
30oC), assim como R. icterica, quando comparamos a moda de 20oC com 27oC.
Provavelmente o aumento da taxa de crescimento de R. icterica compensou a reduo
do tempo de desenvolvimento, enquanto isso no ocorreu com R. ornata. Esse
resultado aponta para uma sensibilidade trmica do crescimento similar ao do
desenvolvimento em R. icterica, sendo um padro diferente do observado por Smith-
Gill e Berven (1979).
Os efeitos isolados da variao trmica revelaram que R. ornata mais sensvel
que R. icterica, j que nesta ltima espcie no houve nenhum efeito da variao da
temperatura. Em R. ornata, a maior variao trmica causou reduo da taxa de
crescimento com a conseqente reduo da massa na metamorfose. Esses resultados
diferem parcialmente do que foi encontrado em larvas de Limnodynastes peronii que
desenvolveram em um regime de mdia de 24oC constante e outro de mesma mdia,
mas que variou 14oC no dia (Niehaus, Wilson et al., 2006). As larvas de L. peronii
apresentaram maior taxa mdia de crescimento e menor tempo mdio de
desenvolvimento e massa na metamorfose no regime de variao trmica. Ou seja, os
efeitos da variao trmica nas taxas de crescimento foram opostos nas duas espcies e
similares na massa na metamorfose. Niehaus, Wilson et al. (2006) afirmaram que os
efeitos da variao trmica foram os mesmos dos efeitos de altas temperaturas
constantes reportados na literatura, e inclusive vistos nesse estudo para a moda de
27oC. As larvas aceleraram a metamorfose, mas no aceleraram as taxas de
crescimento na mesma proporo, havendo uma reduo da massa quando
comparados com o regime constante.
Sob uma perspectiva fisiolgica, a queda observada nas taxas de crescimento
em R. ornata diante de altas variaes trmicas intrigante. A grande diferena entre
os regimes constantes e os regimes variveis, dentro de uma mesma moda, foi a
magnitude dos picos de temperatura, pois a mnima diferiu muito pouco das modas
(18oC para 20oC nos frios e 25oC para 27oC nos quentes). Em temperaturas mais altas
o metabolismo basal dos ectotermos maior, e menos energia canalizada para o
crescimento (Hochachka e Somero, 2002). Porm, se as larvas aumentam sua captao
e assimilao de alimento, o crescimento ainda poderia ser mantido inalterado.
Aparentemente, as larvas de R. ornata em regimes variveis no aumentam seu ganho
de energia na mesma proporo que aumentam seu metabolismo diante de
temperaturas mais altas, gerando um compromisso de alocao. Uma maior parte da

80
energia assimilada foi alocada para a manuteno do metabolismo, restando menos
energia para o crescimento. Os compromissos ecolgicos, como de alocao, aquisio
e generalista-especialista, foram considerados por Angilletta, Wilson et al. (2003)
como moduladores da evoluo de normas de reao. O compromisso de alocao
pode ter ocorrido devido a uma menor captao de alimento ou a uma menor
assimilao da energia, se a digesto e a absoro forem menores em maiores picos de
temperatura. Esses processos fisiolgicos normalmente apresentam uma faixa de
temperatura tima, que determinada pelos timos de atividade enzimtica
(Hochachka e Somero, 2002). Com o compromisso, as larvas de R. ornata cresceram
menos e acabaram por ter uma massa menor nos regimes mais variveis.
As diferenas ecolgicas entre R. ornata, R. icterica e L. peronii tambm
podem ter contribudo para o efeito distinto da variao trmica nessas espcies. As
larvas das trs espcies ocorrem tanto em habitats aquticos mais permanentes quanto
mais efmeros, contudo Niehaus, Wilson et al. (2006) justificaram as respostas das
larvas de L. peronii de acelerar mais o desenvolvimento pelo fato de serem sujeitas ao
risco de secagem de habitats efmeros, os quais apresentam alta variao trmica
diria. Se seguirmos com essa linha de raciocnio, poderamos sugerir que as larvas de
R. ornata e R. icterica desenvolvem-se em habitats efmeros em menor freqncia que
as larvas de L. peronii, no apresentando a resposta tpica ao risco de secagem,
descrita inicialmente por Newman (1989) em Scaphiopus couchii. Essa resposta, de
acelerar o desenvolvimento, foi considerada como adaptativa, pois evita a morte no
habitat aqutico (Newman, 1992). Podemos pensar, ento, que enquanto as larvas de
R. icterica simplesmente no apresentam sensibilidade variao trmica por no
desenvolverem freqentemente em habitats efmeros, as larvas de R. ornata
apresentam uma resposta no-adaptativa pela mesma razo. Nesse caso, a sua
sensibilidade variao trmica no teria sido selecionada, e poderia ser uma
manifestao de restrio fisiolgica.
Alm dos efeitos isolados da moda e variao de temperatura, efeitos de
interao entre essas duas variveis foram encontrados, indicando que o efeito da
moda depende da magnitude de variao trmica. Nos regimes variveis as diferenas
na massa na metamorfose entre as duas modas diminuram, assim como as diferenas
na taxa mdia de crescimento e no tempo mdio de desenvolvimento tambm
diminuram, especialmente variao de 8oC. Isso sugere que os maiores picos de

81
temperatura dos regimes variveis alteram a fisiologia das larvas, principalmente na
moda mais fria, reduzindo mais o tempo de desenvolvimento do que acelerando a taxa
de crescimento, resultando em uma massa na metamorfose menor e mais similar
moda mais quente.

6. Normas de reao de variao trmica das espcies de floresta atlntica

A anlise separada dos efeitos da moda, da variao de temperatura e da

interao entre esses fatores tem um carter mais fisiolgico, e em segundo plano,
ecolgico. uma apreciao dos possveis mecanismos fisiolgicos e presses
ecolgicas que podem estar atuando para a resposta das espcies. Esses mecanismos
contribuem para a determinao da forma de uma norma de reao, especialmente se a
norma for fruto de sensibilidade allica. A anlise das formas das normas de reao de
variao trmica mais direta em acessar a plasticidade fenotpica das larvas e levantar
questes evolutivas a serem discutidas, como benefcios ou custos da plasticidade e/ou
da canalizao e as diferenas de aptido das espcies diante de variao ambiental rara
ou nova.
A inteno principal do experimento de desenvolvimento com as espcies da
floresta atlntica foi de comparar suas respostas nos regimes trmicos considerados
como tpicos da floresta (os de moda de 20oC) e nos regimes considerados tpicos da
caatinga (os de moda 27oC), na tentativa de simular a mudana ambiental que se deu
na caatinga. As condies da caatinga foram tidas como novas ou raras para as
espcies de floresta, e segundo a teoria de normas de reao ocultas (explicitada em
Schlichting, 2008), fentipos novos poderiam ser detectados para as espcies,
indicando se a aptido seria a mesma que os fentipos mais comumente expressos na
natureza.
A varivel massa na metamorfose freqentemente utilizada como uma medida
de aptido em anfbios anuros, uma vez que diversos estudos relacionam uma maior
massa (ou maior tamanho) com maior sobrevivncia (Berven, 1990; Morey e Reznick,
2001; Altwegg e Reyer, 2003; Vonesh, 2005) e maior sucesso reprodutivo (Berven,
1981). Nesse estudo, com R. granulosa, obtivemos uma relao positiva entre massa
da fmea e massa do cordo de ovos, indicando que a massa pode ser analisada como
uma medida indireta de sucesso reprodutivo. Infelizmente no conseguimos construir

82
essa relao para as espcies da floresta atlntica, mas como o parentesco entre as trs
espcies de Rhinella alto, provvel que a relao seja vlida tambm para R. ornata
e R. icterica.
As formas das normas de reao de variao trmica foram bastante similares
entre as duas espcies, sendo condizente com seu alto parentesco filogentico e com os
resultados de outros estudos com espcies aparentadas (por exemplo, Blouin, 1992;
Morey e Reznick, 2004). Entretanto, as normas no foram idnticas: os regimes
trmicos nos quais as larvas de R. ornata e R. icterica apresentaram otimizao
simultnea da taxa mdia de crescimento e do tempo mdio de desenvolvimento no
foram os mesmos. R. ornata obteve maior crescimento e menor tempo de
desenvolvimento no regime quente constante e R. icterica obteve o mesmo no regime
quente de variao trmica de 4oC. Apesar dessa diferena, o regime trmico de maior
aptido (de maior massa) foi o mesmo para ambas as espcies, o de 20oC constante.
interessante notar que o fentipo de maior aptido no foi obtido nos regimes que
otimizaram as variveis de desenvolvimento, mas sim no regime que suscitou maior
crescimento total das larvas devido ao longo tempo de desenvolvimento apresentado
por estas. O fato das larvas terem maior aptido em um regime comum da floresta
atlntica aponta para um bom ajuste entre fentipo e ambiente nessas espcies. Essa
resposta tpica de larvas que freqentam habitats permanentes, sem restrio de
tempo e de baixa presso de predao (Wilbur e Collins, 1973; Werner, 1986; Rudolf e
Rdel, 2007).
Outra semelhana entre as normas de massa na metamorfose das duas espcies
que chama muita ateno a forte canalizao da massa em torno de 0,25 g ante uma
variao de regimes trmicos bastante grande. Essa canalizao resultado da
interao entre moda e variao de temperatura, j que os maiores picos de
temperatura nos regimes variveis de moda 20oC culminaram em uma massa menor
que a 20oC constante, igualando a massa na metamorfose nos regimes de modas 20oC
e 27oC. Essa queda da massa indica que as larvas perderam aptido com o efeito da
variao trmica, caracterizando, portanto, um custo de plasticidade fenotpica quando
comparamos com a ausncia de variao. Essa queda da massa est relacionada com a
regra de Smith-Gill e Berven (1979), de maior sensibilidade trmica do
desenvolvimento que do crescimento.

83
 O custo de plasticidade descrito aqui distinto do custo de plasticidade
descrito por DeWitt, Sih et al. (1998). Segundo esses autores, o custo de um
organismo plstico deve ser comparado ao de um organismo no-plstico, sendo que o
custo medido como uma perda de aptido, ou seja, a apresentao de uma
plasticidade no-adaptativa. Acreditamos que comparar a aptido de fentipos em
diferentes ambientes tambm pode esclarecer se a plasticidade trouxe um benefcio ou
um custo. Parece, portanto, que as espcies de floresta atlntica, sendo sensveis ao
efeito da interao entre moda e variao trmica, apresentaram plasticidade no-
adaptativa e perderam aptido. Newman (1998) argumentou que a interao entre
fatores ambientais poderia limitar as condies nas quais a resposta plstica adaptativa
pudesse ocorrer, exatamente como visto empiricamente nesse estudo.
Quando focamos na resposta das larvas somente nos regimes trmicos de moda
27oC, percebemos que no houve uma queda da massa do regime constante para o
varivel em parte da norma de R. ornata e em toda a norma de R. icterica. Ou seja, a
canalizao da massa nessa poro da norma significou manuteno da aptido perante
variao trmica. Segundo (Waddington, 1960), a canalizao resulta da eliminao
por seleo natural de alelos que sensibilizem o sistema de desenvolvimento variao
ambiental estressante. A definio de um ambiente estressante pode ser dada de mais
de uma maneira. Em diversos estudos com larvas de anuros, estresse implicitamente
definido como uma condio ambiental que leva perda de aptido. Exemplos dessas
condies so altas densidades, risco de secagem do habitat aqutico, presena de
predadores, entre outros (por exemplo, Newman, 1989; Steiner e Van Buskirk, 2008).
Entretanto, seguindo a teoria de normas de reao, um ambiente estressante aquele
de baixa freqncia de ocorrncia, no exercendo uma presso seletiva significativa
sob a populao (Schlichting e Pigliucci, 1995) ou um ambiente nunca encontrado
antes pela populao, impondo um desafio manuteno da homeostase (Ghalambor,
Mckay et al., 2007). Se utilizarmos esta ltima definio, realmente podemos denotar
os regimes mais quentes como estressantes para as larvas de R. ornata e R. icterica,
pois so regimes tpicos da caatinga.
O argumento de Waddington (1960) poderia ser aplicado para a canalizao da
massa vista nas espcies da floresta se alelos que determinam a sensibilidade diferencial
da diferenciao e do crescimento (seguindo a regra de Smith-Gill e Berven, 1979)
tivessem sido eliminados das suas populaes, resultando em uma insensibilidade

84
trmica da massa na metamorfose. Porm, para que essa sugesto seja vivel, alelos
distintos teriam que ser expressos em regimes mais frios e mais quentes. Se fossem os
mesmos alelos, a eliminao destes tambm conferiria insensibilidade da massa nos
regimes de 20oC de moda. Se so alelos distintos expressos nos regimes de distintas
modas, a resposta das espcies poderia ser denominada de converso do
desenvolvimento, em vez de modulao fenotpica, havendo um limiar de temperatura
para a expresso de um conjunto de alelos ou a expresso do outro conjunto. Uma
explicao alternativa que os alelos que conferem a sensibilidade diferencial da
diferenciao e do crescimento nos regimes frios no so expressos nos regimes
quentes. Essas consideraes tornam-se de fato relevantes quando verificamos que a
evoluo da sensibilidade trmica teoricamente prevista (Huey e Kingsolver, 1989) e
empiricamente comprovada (por exemplo, Berven, Gill et al., 1979; Olsson e Uller,
2002; Gomez-Mestre e Buchholz, 2006), alm de termos observado nas espcies R.
ornata e R. icterica variao individual na sensibilidade trmica.
Custos de plasticidade (por exemplo, Newman 1992; DeWitt, Sih et al. 1998;
Relyea, 2002) comearam a ser investigados recentemente em estudos com larvas de
anuros. At o momento, poucos estudos encontraram esses custos (revisto por Van
Buskirk e Steiner, 2009), porm Lind e Johansson (2009) ressaltaram que isso pode
ser decorrente da investigao de populaes de baixo grau de plasticidade, se os
custos esto associados com populaes de alta plasticidade. Esses autores
encontraram um custo de plasticidade, ante um experimento de reduo do volume de
gua, em populaes de Rana temporaria de alta plasticidade no tempo de
desenvolvimento. As populaes mais plsticas tiveram menor massa que as menos
plsticas. Esse argumento tambm se aplica s espcies de floresta atlntica que ns
estudamos, pois a plasticidade tanto no tempo de desenvolvimento quanto nas taxas de
crescimento foram bastante altas e encontramos um custo de plasticidade associado
sensibilidade interao entre moda e variao da temperatura.
Estudos que reportam custos de canalizao so ainda mais recentes na
literatura de larvas de anuros (por exemplo, Steiner e Van Buskirk 2008; Lind e
Johansson 2009). Steiner e Van Buskirk (2008) determinaram a plasticidade de vrios
caracteres em larvas de Rana temporaria em resposta presena de predadores. Para
se estimar possveis custos de plasticidade e de canalizao, os autores submeteram
larvas de diferentes graus de plasticidade, diante da presena de predador, a um

85
experimento de competio em diferentes densidades de larvas. Um custo de
canalizao foi detectado em larvas de baixa plasticidade de morfologia da cauda, uma
vez que estas desempenharam pior na competio com larvas de alta plasticidade. Lind
e Johansson (2009) alm de detectarem custos de plasticidade, encontraram um custo
de canalizao nas populaes de Rana temporaria de baixa plasticidade no tempo de
desenvolvimento, novamente no regime de reduo do volume de gua, que obtiveram
menor massa que as larvas mais plsticas.
Nas nossas populaes de R. ornata e R. icterica, ns detectamos na verdade
um ganho de canalizao nos regimes tpicos da caatinga para parte da norma, em R.
ornata, e para toda a norma em R. icterica. O ganho de canalizao pode ser
considerado como um aspecto novo da norma de reao das espcies de floresta
quando exposta a variao ambiental nova. Entretanto, se considerarmos que os
regimes tpicos da caatinga no so estressantes para as espcies da floresta, uma vez
que a aptido no perdida, o argumento de Waddington (1960) no se aplicaria mais.
Um outro argumento, de que a canalizao corresponde a faixa ambiental
historicamente mais comum para as espcies (Lewontin, 1974) faria mais sentido nesse
caso. Apesar dos regimes tpicos da caatinga no serem encontrados no habitat atual
das espcies de floresta, isso no impede que tenham sido comuns no passado,
pensando na linhagem das espcies. Se este for o caso, as espcies retiveram em sua
norma de reao uma parte de sua histria natural, e os regimes mais frios poderiam
ento ser considerados como variao ambiental nova. A plasticidade encontrada no
regime de 20oC constante passaria ento a ser considerada como adaptativa, pois
aumenta a aptido.
Contudo, o fato da canalizao em R. ornata ter sido perdida no regime mais
quente de maior variao trmica, enfraquece a idia de que os regimes da caatinga
eram comuns na linhagem ancestral das espcies. Nesse regime, as larvas de R. ornata
apresentaram plasticidade no-adaptativa, com perda de massa, e portanto de aptido.
Essa resposta est relacionada com o fato dessa espcie ter sensibilidade tanto
interao entre moda e variao de temperatura, quanto prpria variao trmica
isolada, diferente da insensibilidade de R. icterica. Essa plasticidade no-adaptativa de
R. ornata est relacionada com o compromisso de alocao destacado no item
anterior. Portanto, a nossa concepo inicial de que os regimes da caatinga so uma

86
variao nova para as espcies de floresta tem mais suporte, ainda mais se seguirmos a
teoria de normas de reao sobre o que significa um ambiente estressante.

7. Normas de reao de Temperatura Crtica Mxima

R. granulosa possu maior tolerncia trmica em ambas as temperaturas de

aclimatao testadas, todavia essa maior tolerncia no seu deu devido a uma maior
plasticidade da norma de reao, e sim devido a um deslocamento da norma para
temperaturas crticas mais altas. Aparentemente, a maior tolerncia de R. granulosa
geneticamente determinada, sugerindo uma adaptao local. A sugesto de adaptao
fortalecida se considerarmos que a norma de tolerncia trmica de R. granulosa
anterior aridificao da caatinga era similar a das espcies da floresta atlntica.
Poderamos considerar que a maior tolerncia das larvas de R. granulosa
correlacionada com maior expresso de chaperonas (protenas Hsp), j que estas
protenas sabidamente so induzidas por altas temperaturas (Feder e Hofmann, 1999;
Roberts e Feder, 2000). Porm, um estudo com trs populaes de Rana temporaria,
distribudas ao longo de um gradiente latitudinal, somente detectou induo da
expresso de Hsp70 perante altas temperaturas em uma populao (Sorensen,
Pekkonell et al., 2009). Os autores sugeriram que a falta de induo da Hsp70 em
outras populaes poderia ser fruto de um alto custo para sua expresso,
especialmente na populao mais ao nordeste, que habita um ambiente limitante para o
crescimento. A induo de chaperonas como causa de maior tolerncia trmica na
natureza ainda uma questo no resolvida em anfbios anuros.
Todas as espcies apresentaram a resposta plstica de aclimatao da
tolerncia, sendo que R. ornata foi a espcie mais plstica. Encontramos, desse modo,
um benefcio da aclimatao trmica nas trs espcies, pois acarretou em maior
tolerncia trmica. Esse resultado pode ser considerado de acordo com a Hiptese de
aclimatao benfica, assim denominada por Leroi, Bennett et al., (1994), que postula
que a aclimatao a um ambiente particular promove uma vantagem de desempenho
em comparao com um organismo que no consegue se aclimatar. A vantagem de
desempenho no caso das espcies de Rhinella seria uma maior sobrevivncia.
A maior plasticidade vista em R. ornata diante de R. icterica ocorreu porque a
primeira espcie tolera uma temperatura menor quando aclimatada a 20oC.

87
Considerando as pocas reprodutivas das duas espcies, notamos que R. icterica
estende sua reproduo desde o inverno at o vero, sofrendo uma variao sazonal
dos mximos de temperatura bastante alta. Apesar dessa maior variao no ter se
refletido em uma maior plasticidade, a maior tolerncia a 20oC indica que essa espcie
ocupa microhabitats que apresentam temperaturas mximas mais altas, comuns no
vero. R. ornata reproduz somente at novembro, no passando pela variao sazonal
do vero. Isso sugere que seus microhabitats freqentes de desenvolvimento no
atingem temperaturas to altas quanto os de R. icterica. Uma alternativa a essa
explicao poderia ser simplesmente que as duas espcies selecionam microhabitats
distintos quanto aos picos de temperatura. O fato de R. ornata ser mais sensvel que R.
icterica variao trmica, perdendo aptido, sugere que essa espcie no selecione
microhabitats de picos mais altos de temperatura, que correlacionam-se com maior
amplitude trmica.
A diferena entre TCMax e Tmax ambiental pode ser denominada como
tolerncia ao aquecimento (warming tolerance), apesar de originalmente ter sido
definida como a diferena entre TCMax e temperatura mdia ambiental (Deutsch,
Tewksbury et al., 2008). Entretanto, seguindo a opinio de outros autores, ns
achamos que as temperaturas mximas so muito mais relevantes em determinar os
TCMax que as mdias ambientais (por exemplo, Chown, Hoffmann et al., no prelo).
Se considerarmos como Tmax a temperatura mxima mdia do microhabitat mais
quente em Boracia (Pedreira 27,1oC) e em S. Miguel (Poa rochas 39,4oC), e
calcularmos a tolerncia de aquecimento diante da TCMax a 30oC de aclimatao,
teremos os valores 15,4oC para as espcies de floresta, e 5,0oC para R. granulosa. Ou
seja, a tolerncia ao aquecimento das espcies de floresta trs vezes maior que de R.
granulosa. Isso indica que esta ltima espcie corre um risco muito mais alto de
mortalidade caso uma temperatura mais elevada que a mdia mxima ocorra. Portanto,
as condies de temperatura da caatinga so de alto risco para R. granulosa, mas as
larvas dessa espcie conseguem se manter nesse bioma.
O alto valor da tolerncia ao aquecimento encontrado para as espcies de
floresta sugere que em sua histria evolutiva episdios raros de temperaturas
extremamente altas ocorreram, selecionando indivduos de maior tolerncia. Se as
espcies de floresta fossem submetidas ao mximo mdio de temperatura da caatinga,
teriam uma tolerncia ao aquecimento de apenas 3,1oC, sendo as condies da caatinga

88
de risco extremamente alto de morte para essas espcies. O fato da aridificao da
caatinga ter sido gradual pode ter contribudo para o aumento da tolerncia ao
aquecimento de R. granulosa em comparao com R. ornata e R. icterica, em
condies de temperatura tpicas de caatinga.

8. Especulaes sobre a plasticidade de desenvolvimento

de R. granulosa e Consideraes finais

O ganho de canalizao que encontramos somente na poro da norma de

reao dos regimes tpicos da caatinga, especialmente em R. icterica, que manteve sua
aptido at no regime de maior pico de temperatura, nos fez especular que a expresso
de uma norma como essa na caatinga poderia ser vantajosa. Isso porque diante de
picos maiores de temperatura, a massa seria mantida. Essa resposta foge regra de
Smith-Gill e Berven (1979) de que a sensibilidade temperatura da diferenciao
maior que do crescimento, o que culminaria em perda de massa a maiores
temperaturas. R. icterica fugiu essa regra porque em regimes de moda 27oC, suas
larvas possuem a mesma sensibilidade da diferenciao e do crescimento, mantendo a
massa na metamorfose. Sugerimos que o padro de sensibilidade trmica distinto entre
regimes mais frios e mais quentes se deve expresso diferencial de alelos nos regimes
frios e nos quentes que ns testamos. A possvel no expresso dos alelos nos regimes
quentes pode estar relacionada com a baixa freqncia desses regimes na floresta
atlntica, no havendo uma presso seletiva constante para que esses alelos sejam
expressos.
A insensibilidade trmica da massa na metamorfose aos regimes de caatinga
junto da alta plasticidade no tempo de desenvolvimento, sendo as espcies da floresta
capazes de reduzir esse tempo em at trs vezes, so caractersticas que poderiam ser
selecionadas e aumentadas na caatinga, se a espcie R. granulosa apresentava uma
norma de reao de desenvolvimento similar s espcies de floresta. Os microhabitats
desse bioma so temporrios, e portanto apresentam uma restrio de tempo. Porm, a
acelerao do desenvolvimento no resultaria em uma perda de massa se os indivduos
selecionados na caatinga fossem os que no seguem a regra de Smith-Gill e Berven
(1979), possuindo uma sensibilidade trmica da diferenciao similar ao do
crescimento.

89
 A idia de fixao do tempo de desenvolvimento, para o mais curto possvel,
em espcies tpicas de habitats aquticos efmeros teoricamente prevista por alguns
autores (por exemplo, Alvarez e Nicieza, 2002; Rudolf e Rdel, 2006) e
empiricamente comprovada em Scaphiopus e Spea (Morey e Reznick, 2004; Gomez-
Mestre e Buchholz, 2006) e em algumas populaes de Rana temporaria (Lind e
Johansson, 2007). A idia de que essas espcies perderam sua plasticidade no tempo
de desenvolvimento diante de seleo forte para desenvolvimento rpido bastante
atraente, e concordante com as idias de Richards, Bossdorf et al. (2006), por
exemplo, de que a plasticidade seja vantajosa somente no estgio inicial de invaso (ou
manuteno) em um novo ambiente, mas selecionada contra em um estgio posterior.
Diante dessas reflexes, um potencial cenrio de que as larvas da espcie R.
granulosa no apresentariam maior plasticidade de desenvolvimento que as espcies R.
ornata e R. icterica nas condies atuais. Isso foi verificado para a temperatura crtica
mxima, sendo esta maior, mas no mais plstica, em R. granulosa.
Por fim, importante ressaltar dois pontos: (1) Esse trabalho um estudo de
caso, pois foi restrito a somente uma populao de cada uma das espcies. Por
conseguinte, os resultados encontrados no se aplicam necessariamente s espcies
como um todo; (2) A grande maioria das teorias e dos estudos com larvas de anfbios
anuros foi conduzida com espcies do hemisfrio norte, como as do gnero Rana por
exemplo, e os padres descritos no necessariamente se aplicam s espcies que ns
estudamos. A descoberta de um padro distinto da regra de sensibilidade trmica
diferencial da diferenciao e do crescimento, reportado por Smith-Gill e Berven
(1979), um exemplo disso. Pode ser que justamente esse novo padro seja
importante para a manuteno de espcies de anuros em um ambiente como a caatinga.

90
Concluses

1. A heterogeneidade de temperatura dos microhabitats larvais da

floresta atlntica maior que a da caatinga, especialmente no
aspecto temporal;

2. A heterogeneidade de variao trmica dos microhabitats larvais

suscita plasticidade na massa na metamorfose das larvas;

3. A sobrevivncia das larvas em regimes trmicos mais quentes no

parece limitar a manuteno das espcies nessas condies;

4. Existe variao individual na sensibilidade trmica das larvas de R.

ornata e R. icterica quanto aos processos de desenvolvimento;

5. A regra de Smith-Gill e Berven (1979) de sensibilidade trmica

diferencial da diferenciao e do crescimento no se aplica a todos
os indivduos larvais de R. ornata e R. icterica;

6. R. ornata mais sensvel variao trmica que R. icterica,

perdendo massa em maior variao da temperatura devido a um
possvel compromisso de alocao;

7. Existe interao entre moda e variao da temperatura nas variveis

de desenvolvimento;

91
8. Foram detectados um custo de plasticidade nos regimes trmicos
frios e um ganho de canalizao da massa na metamorfose nos
regimes trmicos quentes nas larvas de R. ornata e R. icterica;

9. A canalizao da massa das larvas de R. ornata e R. icterica nos

regimes tpicos da caatinga resultado da fuga da regra de Smith-
Gill e Berven (1979);

10. R. granulosa apresenta maior Temperatura Crtica Mxima e menor

tolerncia ao aquecimento que R. ornata e R. icterica;

11. Em conjunto, os resultados obtidos no corroboraram a hiptese de

que a espcie da caatinga mais plstica que as espcies de
floresta.

92
Resumo

A manuteno de espcies de anfbios anuros na caatinga, um bioma que sofre

um processo de aridificao, suscita perguntas sobre quais aspectos fisiolgicos e
evolutivos esto envolvidos nesse contexto. O argumento de que a plasticidade
fenotpica permite que uma populao sobreviva perante mudanas ambientais parece
uma explicao plausvel. A temperatura e sua variao foram eleitas como
representativas da alterao ambiental, tendo como referncia os valores
correspondentes da floresta atlntica. Essa comparao fundamentou-se na evidncia
de que a caatinga assemelhava-se a uma floresta mida antes da aridificao.
Utilizamos como marco terico um trabalho central de Smith-Gill e Berven (1979),
que mostrou que a sensibilidade trmica da diferenciao maior que do crescimento
em larvas de anuros. A hiptese central foi que a plasticidade de desenvolvimento da
espcie Rhinella granulosa, presente na caatinga, maior que das espcies Rhinella
ornata e Rhinella icterica, habitantes da floresta atlntica. O mtodo principal foi de
comparar normas de reao trmicas de taxa de crescimento, tempo de
desenvolvimento, massa na metamorfose e temperatura crtica mxima (TCMax) das
espcies. Para isso, regimes trmicos foram simulados em laboratrio a fim de
representarem microhabitats tpicos da floresta e da caatinga. A interao entre moda e
variao da temperatura foi significativa para as espcies Rhinella ornata e Rhinella
icterica. As espcies de floresta foram muito plsticas. Quando submetidas a regimes
tpicos da caatinga, apresentaram um aumento de duas vezes da taxa mdia de
crescimento e um tero do tempo mdio de desenvolvimento, em comparao com
regimes de floresta. As larvas apresentaram variao individual de sensibilidade
trmica, sendo que uma parte da amostra no seguiu a regra de Smith-Gill e Berven
(1979), apresentando sensibilidade da diferenciao similar ao do desenvolvimento.
Como conseqncia, mantiveram sua massa na metamorfose canalizada em 0,25g
mesmo diante de maiores picos de temperatura. A TCMax foi maior para R.
granulosa, porm menos plstica que as espcies de floresta. Os resultados no
corroboraram a nossa hiptese, uma vez que as espcies de floresta parecem ser mais
plsticas que a espcie da caatinga.

93
Abstract

The lasting presence of anuran amphibian species in the Caatinga, an

environment that has been undergoing a desertification process, raises questions
regarding the physiological and evolutionary aspects involved. The argument that
phenotypic plasticity allows for the survival of populations in face of environmental
changes seems to provide a plausible explanation. Temperature and its variation were
elected as representatives of the desertification process. Based on the evidence that the
Caatinga was originally a humid forest, correspondent values for the Atlantic forest
were used as reference for comparison. The theoretical framework adopted assumes
that the thermal sensitivity of differentiation in anuran larvae is higher than growth
sensitivity (Smith-Gill and Berven, 1979). Our main hypothesis was that the
developmental plasticity of the Caatinga species Rhinella granulosa is greater than
those of Atlantic forest species Rhinella ornata and Rhinella icterica. We compared
thermal reaction norms of growth rate, development time, metamorphic mass and
critical thermal maxima (CTMax) for each species. Larvae were submitted to thermal
regimes typical of the Caatinga and the Atlantic forest. A significant interaction
between thermal mode and variation was detected for both Rhinella ornata and
Rhinella icterica. Forest species appeared very plastic. When submitted to Caatinga
thermal regimes, they displayed double growth rate and a third of development time in
comparison to when they were submitted to Atlantic forest thermal regimes. The larvae
presented individual variation in thermal sensitivity. Indeed, a fraction of the sample
did not follow Smith-Gill and Bervens rule and displayed thermal sensitivity of
differentiation similar to growth sensitivity. As a consequence, they maintained their
metamorphic mass canalized at 0,25g in face of higher temperatures. Although
Rhinella granulosas CTMax was higher than for the forest species, it presented less
plasticity. The results have not supported our hypothesis as the Atlantic forest species
seems more plastic than the Caatinga species.

94
Referncias Bibliogrficas

Altwegg, R. e H. U. Reyer. Patterns of natural selection on size at metamorphosis in

water frogs. Evolution, v.57, n.4, Apr, p.872-882. 2003.

Alvarez, D. e A. G. Nicieza. Effects of induced variation in anuran larval development

on postmetamorphic energy reserves and locomotion. Oecologia, v.131, n.2, Apr,
p.186-195. 2002.

Angilletta, M. J., R. S. Wilson, et al. Tradeoffs and the evolution of thermal reaction
norms. Trends in Ecology & Evolution, v.18, n.5, May, p.234-240. 2003.

Arendt, J. D. The cellular basis for phenotypic plasticity of body size in Western
Spadefoot toad (Spea hammondi) tadpoles: patterns of cell growth and recruitment in
response to food and temperature manipulations. Biological Journal of the Linnean
Society, v.88, n.3, Jul, p.499-510. 2006.

Baldissera JR., F. A., U. Caramaschi et al. Review of the Bufo crucifer species group,
with descriptions of two new related species (Amphibia, Anura, Bufonidae). Arquivos
do Museu Nacional, Rio de Janeiro, v.62, n.3, Jul/Set, p.255-282. 2004.

Baldwin, J. M. A new factor in evolution. American Naturalist, v.30, p.354-451. 1896.

Bellis, E. D. The Influence of Humidity on Wood Frog Activity. American Midland Naturalist,
v.68, p.139-148. 1962.

Bertoluci, J. e M. T. Rodrigues. Seasonal patterns of breeding activity of Atlantic

Rainforest anurans at Boraceia, Southeastern Brazil. Amphibia-Reptilia, v.23, n.2,
p.161-167. 2002.

Berven, K. Heritable and Environmental Components of Development and

Reproduction in Ranid Frogs. American Zoologist, v.21, n.4, p.980-980. 1981.

Berven, K. A. The Genetic-Basis of Altitudinal Variation in the Wood Frog Rana-

Sylvatica .1. An Experimental-Analysis of Life-History Traits. Evolution, v.36, n.5,
p.962-983. 1982.

______. Factors Affecting Population Fluctuations in Larval and Adult Stages of the
Wood Frog (Rana-Sylvatica). Ecology, v.71, n.4, Aug, p.1599-1608. 1990.

Berven, K. A., D. E. Gill, et al. Countergradient Selection in the Green Frog, Rana-
Clamitans. Evolution, v.33, n.2, p.609-623. 1979.

Bigarella, J. J. e D. de Andrade-Lima. Paleoenvironmental changes in Brazil. In:

Prance, G. T. (ed). Biological diversification in the tropics. Columbia, University Press,
New York. p.27-40. 1982.

95
Blouin, M. S. Comparing Bivariate Reaction Norms among Species - Time and Size at
Metamorphosis in 3 Species of Hyla (Anura, Hylidae). Oecologia, v.90, n.2, May,
p.288-293. 1992.

Brattstrom, B. H. Thermal Acclimation in Anuran Amphibians as a Function of

Latitude and Altitude. Comparative Biochemistry and Physiology, v.24, n.1, p.93-&.
1968.

______. Call Order and Social Behavior in the Foam-Building Frog, Engystomops-
Pustulosus. American Zoologist, v.2, n.3, p.394-394. 1962.

Buchholz, D. R. e T. B. Hayes. Evolutionary patterns of diversity in spadefoot toad

metamorphosis (Anura : Pelobatidae). Copeia, n.1, Feb 8, p.180-189. 2002.

Carnaval, A. C. O. Q. Frogs in forest fragments of northeastern Brazil: a

phylogeographic study. American Zoologist, v.41, n.6, Dec, p.1406-1407. 2001.

Chaparro, J. G., J. B. Pramuk, et al. Secondary homonymy of Bufo proboscideus Spix,

1824, with Phryniscus proboscideus Boulenger, 1882. Copeia, n.4, Dec 28, p.1029-
1029. 2007.

Deutsch, C. A., J. J. Tewksbury, et al. Impacts of climate warming on terrestrial

ectotherms across latitude. Proceedings of the National Academy of Sciences of the
United States of America, v.105, n.18, May 6, p.6668-6672. 2008.

Dewitt, T. J., A. Sih, et al. Costs and limits of phenotypic plasticity. Trends in Ecology
& Evolution, v.13, n.2, Feb, p.77-81. 1998.

Donohue, K., E. H. Pyle, et al. Adaptive divergence in plasticity in natural populations

of Impatiens capensis and its consequences for performance in novel habitats.
Evolution, v.55, n.4, Apr, p.692-702. 2001.

Duellman, W. E. Patterns of distribution of amphibians: a global perspective.

Baltimore: Johns Hopkins University Press, 1999.

Etterson, J. R. Evolutionary potential of Chamaecrista fasciculata in relation to climate

change. 1. Clinal patterns of selection along an environmental gradient in the great
plains. Evolution, v.58, n.7, Jul, p.1446-1458. 2004.

Falconer, D. S. e T. F. C. Mackay. Introduction to Quantitative Genetics. 4th ed.

Essex: Longman Group Ltda., 1998. 450p.

Feder, M. E. e G. E. Hofmann. Heat-shock proteins, molecular chaperones, and the

stress response: Evolutionary and ecological physiology. Annual Review of
Physiology, v.61, p.243-282. 1999.

96
Floyd, R. B. Ontogenetic Change in the Temperature Tolerance of Larval Bufo-
Marinus (Anura, Bufonidae). Comparative Biochemistry and Physiology a-Physiology,
v.75, n.2, p.267-271. 1983.

Frost, D. R., T. Grant, et al. The amphibian tree of life. Bulletin of the American
Museum of Natural History, n.297, p.8-370. 2006.

Ghalambor, C. K., J. K. Mckay, et al. Adaptive versus non-adaptive phenotypic

plasticity and the potential for contemporary adaptation in new environments.
Functional Ecology, v.21, n.3, Jun, p.394-407. 2007.

Gomez-Mestre, I. e D. R. Buchholz. Developmental plasticity mirrors differences

among taxa in spadefoot toads linking plasticity and diversity. Proceedings of the
National Academy of Sciences of the United States of America, v.103, n.50, Dec 12,
p.19021-19026. 2006.

Gosner, K. L. A simplified table for staging anuran embryos and larvae with notes on
identification. Herpetologica, v.16, p.183-190. 1960.

Hartwig, W. C. e C. Cartelle. A complete skeleton of the giant South American

primate Protopithecus. Nature, v.381, n.6580, May 23, p.307-311. 1996.

Hensley, F. R. Ontogenic Loss of Phenotypic Plasticity of Age at Metamorphosis in

Tadpoles. Ecology, v.74, n.8, Dec, p.2405-2412. 1993.

Hentschel, B. T. Complex life cycles in a variable environment: Predicting when the

timing of metamorphosis shifts from resource dependent to developmentally fixed.
American Naturalist, v.154, n.5, Nov, p.549-558. 1999.

Heyer, W. R., A. S. Rand, et al. Frogs of Boracia. Special Publication Of the

Arquivos de Zoologia, Museu de Zoologia da Universidade de So Paulo. 1990.

Hochachka, P. W. e Somero, G. N. Biochemical Adaptation. Princeton, N.J. Princeton

University Press. 2002.

Huey, R. B. e J. G. Kingsolver. Evolution of Thermal Sensitivity of Ectotherm

Performance. Trends in Ecology & Evolution, v.4, n.5, May, p.131-135. 1989.

Huey, R. B. e R. D. Stevenson. Integrating Thermal Physiology and Ecology of

Ectotherms - Discussion of Approaches. American Zoologist, v.19, n.1, p.357-366.
1979.

Jared, C., M. M. Antoniazzi, et al. Some aspects of the natural history of the casque-
headed tree frog Corythomantis greeningi Boulenger (Hylidae). Annales Des Sciences
Naturelles-Zoologie Et Biologie Animale, v.20, n.3, Jul-Sep, p.105-115. 1999.

______. Head co-ossification, phragmosis and defence in the casque-headed tree frog
Corythomantis greeningi. Journal of Zoology, v.265, Jan, p.1-8. 2005.

97
Lee, C. E., J. L. Remfert, et al. Evolution of physiological tolerance and performance
during freshwater invasions. Integrative and Comparative Biology, v.43, n.3, Jun,
p.439-449. 2003.

Leroi, A. M., A. F. Bennett, et al. Temperature-Acclimation and Competitive Fitness -

an Experimental Test of the Beneficial Acclimation Assumption. Proceedings of the
National Academy of Sciences of the United States of America, v.91, n.5, Mar 1,
p.1917-1921. 1994.

Levins, R. Theory of Fitness in a Heterogeneous Environment .1. Fitness Set and

Adaptive Function. American Naturalist, v.96, n.891, p.361-&. 1962.

______. Theory of Fitness in a Heterogeneous Environment .1. Developmental

Flexibility and Niche Selection. American Naturalist, v.97, n.893, p.75-&. 1963.

Lewontin, R. C. The Adaptations of Populations to Varying Environments. Cold

Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology, v.22, p.395-408. 1957.

______. Analysis of Variance and Analysis of Causes. American Journal of Human

Genetics, v.26, n.3, p.400-411. 1974.

Lind, M. I. e F. Johansson. The degree of adaptive phenotypic plasticity is correlated

with the spatial environmental heterogeneity experienced by island populations of Rana
temporaria. Journal of Evolutionary Biology, v.20, n.4, Jul, p.1288-1297. 2007.

______. Costs and Limits of Phenotypic Plasticity in Island Populations of the

Common Frog Rana Temporaria under Divergent Selection Pressures. Evolution, v.63,
n.6, Jun, p.1508-1518. 2009.

Loeschcke, V., R. A. Krebs, et al. Genetic-Variation for Resistance and Acclimation to

High-Temperature Stress in Drosophila-Buzzatii. Biological Journal of the Linnean
Society, v.52, n.1, May, p.83-92. 1994.

Lowe, C. H. e V. J. Vance. Acclimation of the Critical Thermal Maximum of the

Reptile Urosaurus Ornatus. Science, v.122, n.3158, p.73-74. 1955.

Lynch, J. D. Evolutionary relationships, osteology, and zoogeography of

leptodactyloid frogs. University of Kansas Museum of Natural History, Miscellaneous
Publications, v.53, p.1-238.

Morand, A., P. Joly, et al. Phenotypic variation in metamorphosis in five anuran

species along a gradient of stream influence. Comptes Rendus De L Academie Des
Sciences Serie Iii-Sciences De La Vie-Life Sciences, v.320, n.8, Aug, p.645-652.
1997.

Morey, S. e D. Reznick. A comparative analysis of plasticity ln larval development in

three species of spadefoot toads. Ecology, v.81, n.6, Jun, p.1736-1749. 2000.

98
______. Effects of larval density on postmetamorphic spadefoot toads (Spea
hammondii). Ecology, v.82, n.2, Feb, p.510-522. 2001.

Morey, S. R. e D. N. Reznick. The relationship between habitat permanence and larval

development in California spadefoot toads: field and laboratory comparisons of
developmental plasticity. Oikos, v.104, n.1, Jan, p.172-190. 2004.

Narvaes, P. e Rodrigues, M. T. Taxonomic revision of Rhinella granulosa species

group (Amphibia, Anura, Bufonidae), with a description of a new species. Arquivos de
Zoologia, Museu de Zoologia da Universidade de So Paulo, v.40, n.1, p.1-73. 2009.

Navas, C. A. Implications of microhabitat selection and patterns of activity on the

thermal ecology of high elevation neotropical anurans. Oecologia, v.108, n.4, Dec,
p.617-626. 1996.

______. Herpetological diversity along Andean elevational gradients: links with

physiological ecology and evolutionary physiology. Comparative Biochemistry and
Physiology a-Molecular and Integrative Physiology, v.133, n.3, Nov, p.469-485. 2002.

Navas, C. A., M. M. Antoniazzi, et al. Physiological basis for diurnal activity in

dispersing juvenile Bufo granulosus in the Caatinga, a Brazilian semi-arid environment.
Comparative Biochemistry and Physiology a-Molecular & Integrative Physiology,
v.147, n.3, Jul, p.647-657. 2007.

Newman, R. A. Genetic-Variation for Larval Anuran (Scaphiopus-Couchii)

Development Time in an Uncertain Environment. Evolution, v.42, n.4, Jul, p.763-773.
1988.

______. Developmental Plasticity of Scaphiopus-Couchii Tadpoles in an Unpredictable

Environment. Ecology, v.70, n.6, Dec, p.1775-1787. 1989.

______. Adaptive Plasticity in Amphibian Metamorphosis. Bioscience, v.42, n.9, Oct,

p.671-678. 1992.

______. Ecological constraints on amphibian metamorphosis: interactions of

temperature and larval density with responses to changing food level. Oecologia,
v.115, n.1-2, Jun, p.9-16. 1998.

Niehaus, A. C., R. S. Wilson, et al. Short- and long-term consequences of thermal

variation in the larval environment of anurans. Journal of Animal Ecology, v.75, n.3,
May, p.686-692. 2006.

Nimer, E. Climatologia da Regio Nordeste do Brasil: Introduo Climatologia Dinmica.

Revista Brasileira de Geografia, v.34, p.3-51. 1972.

Olsson, M. e T. Uller. Developmental stability and genetic architecture: a comparison

within and across thermal regimes in tadpoles. Journal of Evolutionary Biology, v.15,
n.4, Jul, p.625-633. 2002.

99
Pigliucci, M. How organisms respond to environmental changes: From phenotypes to
molecules (and vice versa). Trends in Ecology & Evolution, v.11, n.4, Apr, p.168-173.
1996.

______. Phenotypic Plasticity: Beyond Nature and Nurture. Baltimore: The Johns
Hopkins University Press, 2001. 631p.

Pramuk, J. B. Phylogeny of South American Bufo (Anura : Bufonidae) inferred from

combined evidence. Zoological Journal of the Linnean Society, v.146, n.3, Mar, p.407-
452. 2006.

Pramuk, J. B., T. Robertson, et al. Around the world in 10 million years: biogeography
of the nearly cosmopolitan true toads (Anura : Bufonidae). Global Ecology and
Biogeography, v.17, n.1, Jan, p.72-83. 2008.

Reis, A. C. de Souza. Clima da Caatinga. Anais da Academia Brasileira de Cincias,

v.48, p.325-335. 1976.

Relyea, R. A. Costs of phenotypic plasticity. American Naturalist, v.159, n.3, Mar,

p.272-282. 2002.

Richards, C. L., O. Bossdorf, et al. Jack of all trades, master of some? On the role of
phenotypic plasticity in plant invasions. Ecology Letters, v.9, n.8, Aug, p.981-993.
2006.

Roberts, S. P. e M. E. Feder. Changing fitness consequences of hsp70 copy number in

transgenic Drosophila larvae undergoing natural thermal stress. Functional Ecology,
v.14, n.3, Jun, p.353-357. 2000.

Rudolf, V. H. W. e M. O. Rodel. Phenotypic plasticity and optimal timing of

metamorphosis under uncertain time constraints. Evolutionary Ecology, v.21, n.1, Jan,
p.121-142. 2007.

Schlichting, C. D. Hidden Reaction Norms, Cryptic Genetic Variation, and

Evolvability. Year in Evolutionary Biology 2008, v.1133, p.187-203. 2008.

Schlichting, C. D. e M. Pigliucci. Control of Phenotypic Plasticity Via Regulatory

Genes. American Naturalist, v.142, n.2, Aug, p.366-370. 1993.

______. Gene-Regulation, Quantitative Genetics and the Evolution of Reaction

Norms. Evolutionary Ecology, v.9, n.2, Mar, p.154-168. 1995.

______. Phenotypic Evolution: A Reaction Norm Perspective. Sunderland,

Massachusetts: Sinauer Associates, Inc., Publishers, 1998. 344p.

Semlitsch, R. D. Pedomorphosis in Ambystoma-Talpoideum - Effects of Density,

Food, and Pond Drying. Ecology, v.68, n.4, Aug, p.994-1002. 1987.

100
Sherman, E. Ontogenetic Change in Thermal Tolerance of the Toad Bufo-Woodhousii
Fowleri. Comparative Biochemistry and Physiology a-Physiology, v.65, n.2, p.227-
230. 1980.

Smith-Gill, S. J. Developmental Plasticity - Developmental Conversion Versus

Phenotypic Modulation. American Zoologist, v.23, n.1, p.47-55. 1983.

Smith-Gill, S. J. e K. A. Berven. Predicting Amphibian Metamorphosis. American

Naturalist, v.113, n.4, p.563-585. 1979.

Sorensen, J. G., M. Pekkonell, et al. Complex patterns of geographic variation in heat

tolerance and Hsp70 expression levels in the common frog Rana temporaria. Journal of
Thermal Biology, v.34, n.1, Jan, p.49-54. 2009.

Steiner, U. K. e J. Van Buskirk. Environmental stress and the costs of whole-organism

phenotypic plasticity in tadpoles. Journal of Evolutionary Biology, v.21, n.1, Jan, p.97-
103. 2008.

Sultan, S. E. e F. A. Bazzaz. Phenotypic Plasticity in Polygonum-Persicaria .3. The

Evolution of Ecological Breadth for Nutrient Environment. Evolution, v.47, n.4, Aug,
p.1050-1071. 1993.

Tilman, D., R. M. May, et al. Habitat Destruction and the Extinction Debt. Nature,
v.371, n.6492, Sep 1, p.65-66. 1994.

Trefaut-Rodrigues, M. Herpetofauna da Caatinga. In: Leal, I. R., M. Tabarelli et al.

Ecologia e Conservao da Caatinga, Ed. Universitria, UFPE. 2003.

Van Buskirk, J. A comparative test of the adaptive plasticity hypothesis: Relationships

between habitat and phenotype in anuran larvae. American Naturalist, v.160, n.1, Jul,
p.87-102. 2002.

Van Buskirk, J., S. A. Mccollum, et al. Natural selection for environmentally induced
phenotypes in tadpoles. Evolution, v.51, n.6, Dec, p.1983-1992. 1997.

Van Buskirk, J. e U. K. Steiner. The fitness costs of developmental canalization and

plasticity. Journal of Evolutionary Biology, v.22, n.4, Apr, p.852-860. 2009.

Via, S. Adaptive Phenotypic Plasticity - Target or by-Product of Selection in a

Variable Environment. American Naturalist, v.142, n.2, Aug, p.352-365. 1993.

Via, S., R. Gomulkiewicz, et al. Adaptive Phenotypic Plasticity - Consensus and

Controversy. Trends in Ecology & Evolution, v.10, n.5, May, p.212-217. 1995.

Vonesh, J. R. Sequential predator effects across three life stages of the African tree
frog, Hyperolius spinigularis. Oecologia, v.143, n.2, Mar, p.280-290. 2005.

Waddington, C. H. Analization of development and the inheritance of acquired

characters. Nature, v.150, Jul-Dec, p.563-565. 1942.

101
______. Experiments on Canalizing Selection. Genetical Research, v.1, n.1, p.140-150.
1960.

Werner, E. E. Amphibian Metamorphosis - Growth-Rate, Predation Risk, and the

Optimal Size at Transformation. American Naturalist, v.128, n.3, Sep, p.319-341.
1986.

Westeberhard, M. J. Phenotypic Plasticity and the Origins of Diversity. Annual Review

of Ecology and Systematics, v.20, p.249-278. 1989.

Wilbur, H. M. e J. P. Collins. Ecological Aspects of Amphibian Metamorphosis.

Science, v.182, n.4119, p.1305-1314. 1973.

Yeh, P. J. e T. D. Price. Adaptive phenotypic plasticity and the successful colonization

of a novel environment. American Naturalist, v.164, n.4, Oct, p.531-542. 2004.

102
 Tabela 2. ANOVA hierrquica paraa varivel massa no experimento de campo com Rhinella icterica. O fator gaiola, com
Anexos

quatro nveis, foi aninhado no fator ambiente, com dois nveis. Ambos os fatores foram significativos, e o fator ambiente explicou 99%
da variao dos dados.

103
 Tabela 3. ANOVA univariada e teste de comparaes mltiplas de Tukey da massa mdia do experimento de campo com
Rhinella icterica. O fator gaiola, com quatro nveis, foi considerado como principal na anlise e comparaes entre todas as gaiolas,
par a par, foram feitas pelo teste de Tukey HSD. Somente as gaiolas 3 e 4, presentes na pedreira, no foram diferentes. 1: Cachoeira 1;
2: Cachoeira 2; 3: Pedreira 1; 4: Pedreira 2.

104
 Tabela 4. Comparaes das curvas de sobrevivncia do experimento de campo com Rhinella granulosa. As curvas de
sobrevivncia no foram iguais para as larvas de R. granulosa submetidas aos regimes trmicos semi-naturais em campo, mostrando
que existiu variao entre famlias na sobrevivncia.

105
 Tabela 5. Comparaes das curvas de sobrevivncia do experimento de desenvolvimento com Rhinella ornata. Verificada a
diferena entre as curvas na comparao geral, comparaes par a par foram feitas entre todos os tratamentos: 1) moda de 20oC ; 2)
moda de 20oC e variao de 18 a 22oC; 3) moda de 20oC e variao de 18 a 26oC; 4) moda de 27oC; 5) moda de 27oC e variao de 25 a
29oC e 6) moda de 27oC e variao de 25 a 34oC.

Com paraes Ge rais

Quiquadrado gl Sig.
Log Rank (Mantel-Cox) 21,891 5 ,001
Tes te de igualdade das funes de sobrevivnci a para os
diferentes nveis de R. ornata.lab

106
 Tabela 6. Correlaes das variveis de desenvolvimento de Rhinella ornata. Foram feitas correlaes de Pearson para as variveis
taxa de crescimento, tempo de desenvolvimento e massa na metamorfose, para cada uma das modas de temperatura. As correlaes
direita so para a moda de 20oC, e esquerda, para a moda de 27oC. Todas as correlaes foram significativas.

107
 Tabela 7. ANOVA de duas vias e testes pos-hoc de Tuckey para a massa na metamorfose das larvas de Rhinella ornata
submetidas ao experimento de desenvolvimento. Os fatores moda e variao da temperatura foram analisados como fixos. No teste
de Tuckey, somente diferiram os tratamentos de variao 4oC e 8oC.

108
 Tabela 8. ANOVA de duas vias para os dados de taxa de crescimento do experimento de desenvolvimento com R. icterica. Os fatores moda
e variao foram analisados como fixos. A moda isolada e a interao entre moda e variao da temperatura foram significativas.

Teste de Efeito entre S ujeitos

Dependent Variable: Tax a.cres c.ict

Soma de
quadrados Quadrado
Fonte tipo III gl mdio F Sig.
Modelo 6814,033a 6 1135,672 41,076 ,000
Moda 593,508 1 593,508 21,466 ,000
Variao 31,705 2 15,852 ,573 ,573
Moda * Variao 252,049 2 126,024 4,558 ,023
Erro 552,967 20 27,648
Total 7367,000 26
a. R ao quadrado = ,925 (R ao quadrado ajustado = ,902)

Tabela 9. ANOVA de duas vias para os dados de massa na metamorfose do experimento de desenvolvimento com R. icterica. Os fatores
moda e variao foram analisados como fixos. Apesar do modelo ter sido significativo, nenhum dos fatores ou a interao entre eles o foram.

109
 Tabela 10. ANOVA de duas vias para os dados de Temperatura Crtica Mxima (TCMax). Os fatores temperatura de aclimatao e espcie
foram analisados como fixos. Ambos foram significativos, assim como a interao entre eles. O teste de Tuckey indicou que as trs espcies so
distintas quanto aos seus respectivos TCMax. 1: R. ornata, 2: R. granulosa e 3: R. icterica.

110