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Glicoprotena-P El transportador de mltiples frmacos

Frances J. Sharom
Departamento de Biologa Molecular y Celular, Universidad de Guelph, Guelph, Ontario, Canad, N1G
2W1
Abstracto
Pgp (glicoprotena-P) (ABCB1) es una bomba de flujo impulsado por ATP que puede transportar
cientos de compuestos anfipticos hidrofbicos no relacionados estructuralmente, incluyendo drogas
teraputicas, pptidos y compuestos similares a lpidos. Este polipptido 170 kDa juega un papel
fisiolgico fundamental en la proteccin de los tejidos de xenobiticos txicos y metabolitos
endgenos, y tambin afecta a la absorcin y distribucin de muchos frmacos clnicamente
importantes. Se forma un componente principal de la barrera sangre-cerebro y limita la absorcin de
frmacos desde el intestino. La protena tambin se expresa en muchos cnceres humanos, en los
que probablemente contribuye a la resistencia al tratamiento de quimioterapia. Muchos moduladores
qumicos han sido identificados que bloquear la accin de Pgp, y puede tener aplicaciones clnicas en
la mejora de la administracin de frmacos y tratamiento del cncer. sustratos de Pgp son
generalmente soluble en lpidos, y la particin en la membrana antes de que el transportador de los
expulsa en la fase acuosa, como una "aspiradora hidrfobo '. El transportador tambin puede actuar
como un "flipasa ', moviendo sus sustratos desde el interior a la membrana externa prospecto. Una
estructura cristalina de rayos X muestra que los frmacos interactan con Pgp dentro de las regiones
transmembrana encajando en un gran bolsillo de unin flexible, que puede acomodar varias
molculas de sustrato al mismo tiempo. Los dominios de unin de nucletidos de Pgp parecen
hidrolizar ATP de una manera alterna; Sin embargo, todava no est claro si el transporte es
accionado por la hidrlisis de ATP o de unin a ATP. Los detalles de los pasos involucrados en el
proceso de transporte de frmacos, y la forma en que se acopla a la hidrlisis de ATP, siguen siendo
objeto de estudio intensivo.

Introduccin
Se observ hace muchos aos que las clulas cultivadas expuestas a concentraciones crecientes de
los frmacos citotxicos pueden desarrollar resistencia a sus efectos matando por varios mecanismos
diferentes. El grupo de Victor Ling observ que las clulas seleccionadas para la resistencia a la
colchicina tambin muestran resistencia a varios compuestos estructuralmente no relacionados, un
fenmeno conocido como MDR (resistencia a mltiples frmacos). En 1976, este fenotipo de
resistencia estaba relacionada con la presencia en la membrana plasmtica de una kDa glicoprotena
170 de la superficie, que llamaron Pgp (P-glicoprotena, tambin conocida como MDR1) por su
capacidad para reducir la permeabilidad celular aparente de drogas [1] . Pronto se hizo evidente que
PGP est implicado en la eliminacin dependiente de la energa de las drogas de la clula; en otras
palabras, se trata de una bomba de frmaco-eflujo activo. Tras el descubrimiento de Pgp, su
expresin fue identificado en los tejidos normales, as como muchas clulas cultivadas de origen
mamfero y humano, incluyendo 39 de lneas de clulas 60 tumorales utilizados por el Instituto
Nacional del Cncer de Estados Unidos en el descubrimiento de nuevos frmacos contra el cncer
[ 2]. Pgp es ahora el transportador ms estudiada y bien entendida en el (ATP-binding cassette)
superfamilia ABC. Genes Pgp han sido secuenciado a partir de humanos, de ratn y de hmster
chino, entre otros, y homlogos han sido identificados en muchas otras especies,
incluyendo Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster.

distribucin en los tejidos y el papel fisiolgico de Pgp


Aunque Pgp se expresa en la mayora de los tejidos humanos y de roedores en niveles bajos, que se
encuentra en cantidades mucho mayores en la superficie apical de las clulas epiteliales del intestino
grueso y delgado, ductules biliares del hgado y los tbulos proximales del rin [3], que todos tienen
excretor roles. El transportador tambin se encuentra en la glndula adrenal, la placenta y la
membrana apical de las clulas endoteliales que revisten los capilares del cerebro. Estas clulas
forman una monocapa continuo, la denominada barrera hematoenceflica, que para componentes de
la sangre desde el cruce en el sistema nervioso central. Pgp se orienta en estas clulas para el
transporte de sustratos hacia la sangre, y es por tanto un factor importante en la limitacin de su
entrada en el cerebro [4]. Del mismo modo, parece jugar un papel central en la proteccin del feto y
otros tejidos sensibles de la toxicidad de una variedad de molculas endgenas y exgenas. Esta
propuesta es apoyada por estudios en ratones knockout transgnicos que carecen de Pgp (roedores
tienen dos genes Pgp, Abcb1a y Abcb1b , por lo tanto deben ser inactivados). Estos animales tienen
una vida normal y parecen sanos y frtiles. Sin embargo, cuando los sustratos de Pgp se administran
a ellos, los frmacos se acumulan a niveles muy altos en el cerebro en comparacin con ratones de
tipo salvaje, lo que resulta en la neurotoxicidad [5]. Por ejemplo, los ratones knock-out Pgp son 100
veces ms sensible a la toxicidad de la ivermectina, un pesticida utilizado comnmente en colonias
de ratones.

Pgp ahora se sabe que afectan a la disposicin de muchos frmacos administrados clnicamente
(discutido en ms detalle a continuacin), y hace una importante contribucin a la ADME (absorcin,
distribucin, metabolismo, excrecin). En el intestino, Pgp es responsable para la extrusin de las
drogas en el lumen, reduciendo as su absorcin y biodisponibilidad oral. Como era de esperar, los
ratones knock-out Pgp mostrar aumento de la captacin de sustratos desde el tracto digestivo y
marcadamente ms lenta eliminacin de la circulacin, lo que, para algunos frmacos, conduce a un
aumento de forma espectacular la toxicidad. Pgp ratones knock-out han demostrado ser muy til
para identificar o confirmar las drogas como sustrato para el transportador in vivo . En su mayor
parte, las diferencias entre especies entre ratn y humano con respecto a la especificidad de sustrato
de Pgp parecen ser pequeas.

Ciertos linajes de collie y otras razas de perros tienen una mutacin de desplazamiento de marco
en el gen de la Pgp, haciendo que la protena no funcional; tambin son muy sensibles a la toxicidad
ivermectina. A pesar del amplio uso clnico de los frmacos que son sustratos de Pgp, no ha habido
informes en lo que va de variantes Pgp no funcionales en los seres humanos.
Adems de proporcionar proteccin frente a xenobiticos nocivos, Pgp puede jugar un papel en el
transporte de molculas endgenas y metabolitos [6]. Las posibles sustratos endgenos incluyen
fosfolpidos y glicolpidos, factores activadores de plaquetas, el amiloide beta -peptides y pequeas
citoquinas tales como las interleuquinas. PGP tambin puede exportar las hormonas esteroides como
la aldosterona y progesterona de la glndula suprarrenal y el epitelio uterino. Sin embargo, hay poca
informacin disponible sobre el alcance del transporte mediada por Pgp de estas molculas
endgenas in vivo .

Los parientes cercanos de Pgp: ABCB4 y ABCB11


Los humanos ABCB4 y ABCB1 genes se encuentran adyacentes entre s, y surgieron de un gen caso
de-duplicacin. Las dos protenas estn relacionadas estrechamente (78% de identidad de
secuencia), lo que sugiere que probablemente comparten estructuras y mecanismos de accin
similares. La protena ABCB4 (anteriormente conocido como MDR3 en humano y Mdr2 en roedores)
es un translocador de lpidos, que lleva a cabo la exportacin de PC (fosfatidilcolina) de la
(canalicular) membrana apical de los hepatocitos en la bilis [7]. PC presente en las formas biliares
micelas con sales biliares mezclados, que de otro modo causan dao celular debido a sus
propiedades detergentes similares. Ratones knockout transgnicos que carecen de ABCB4 no
excretan cualquier PC en la bilis [8]. La funcin fisiolgica de ABCB4 es crucial para la salud humana,
y una deficiencia conduce a la progresiva colestasis intraheptica familiar tipo 3, una enfermedad
grave del hgado como resultado de la disminucin del flujo de bilis [9]. ABCB4 probablemente
funciona como una 'flipasa' dirigida hacia fuera, movindose PC desde el interior hacia el exterior
prospecto de la membrana plasmtica de hepatocitos, en los que se puede extraer en el lumen
canalicular por las sales biliares. Como veremos ms adelante, PGP tambin demuestra la actividad
flipasa lpidos.

En 1995, se identific otro pariente cercano de la Pgp, y nombrado SPGP (hermana de la P-


glicoprotena). Esta protena, que slo se expresa en el hgado, result funcionan como una bomba
de sales biliares-exportacin dependiente de ATP y por lo tanto se renombr BESB (ABCB11) [10]. Las
mutaciones heredadas en consecuencia ABCB11 en la enfermedad heptica colestsica graves
derivadas de la secrecin de sales biliares reducida. Ciertos polimorfismos en ABCB11 parecen ser el
resultado de ser ms susceptibles a la inhibicin por frmacos de la protena, lo que causa colestasis
adquirida.

pgp sustratos y moduladores


Pgp puede interactuar con una amplia gama de compuestos que son estructuralmente no
relacionados, incluyendo productos naturales, frmacos quimioteraputicos, esteroides, pptidos
lineales y cclicos, colorantes fluorescentes y ionforos. La mayora son dbilmente anfiptico y
relativamente hidrfobo, a menudo (pero no siempre) que contiene anillos aromticos y un tomo de
N cargado positivamente. Sin embargo, la medicin directa de transporte ha sido llevado a cabo por
slo unos pocos de estos sustratos putativos, y la mayora han sido identificados sobre la base de la
resistencia de lneas celulares que sobreexpresan Pgp-a sus efectos citotxicos. La Tabla 1 enumera
algunas de las diferentes clases de sustratos de Pgp y la Figura 1 muestra las estructuras
representativas.

Un segundo grupo de compuestos tambin puede interactuar con Pgp, conocido como moduladores (tambin
llamados inhibidores o quimiosensibilizadores) [11]. Los moduladores son capaces de revertir la MDR en clulas
intactas, al interferir con la capacidad de Pgp a las drogas de flujo de salida. Como sustratos, moduladores de PGP
son estructuralmente diversa (Figura 1), y muchos de ellos han sido identificados en los ltimos aos (ver Tabla 2).
Los moduladores pueden inhibir la funcin de transporte de Pgp en un nmero de maneras, y su modo de accin a
nivel molecular no se conoce bien. Algunos son transportados a s mismos (por ejemplo, ciclosporina A [12]), y por
lo tanto actan como sustratos de la competencia, mientras que otros (por ejemplo, LY335979 [13]) se unen
fuertemente al bolsillo de unin de drogas de la protena durante perodos prolongados de tiempo sin ser
transportado. Unos moduladores parecen interactuar con las NBDs (dominios de unin a nucletidos) (por ejemplo,
esteroides o disulfiram [14]) e interferir con la hidrlisis de ATP. Varios de membrana fluidificantes y agentes
tensioactivos (por ejemplo, alcohol benclico, Nonidet P40 o Cremaphor EL [15]) no parecen
interactuar directamente con la Pgp, y probablemente actuar como moduladores no especficos a
nivel de la membrana de doble capa. Moduladores de PGP puede ser valiosa por su capacidad para
aumentar el suministro de frmacos teraputicos para el cerebro [16], que es deseable en el
tratamiento de enfermedades como el cncer, el SIDA, la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de
Parkinson, la esquizofrenia y la epilepsia.

Estructura de Pgp
Pgp es un nico polipptido formado por dos mitades homlogas que surgieron de la duplicacin de
genes. Cada medio comprende seis TMHS (hlices transmembrana) y un NBD situado en el lado
citoplsmico de la membrana, que estn conectados por un enlazador citoplsmico (Figura 2A). Esta
topologa ha sido confirmado por mutagnesis cistena y experimentos eptopo de insercin. La
estructura de Pgp se estudi primero por EM (microscopa electrnica), y la estructura ms alta
resolucin [8 , (1 = 0,1 nm); ver Figura 2B], confirm la presencia de 12 TMHS y dos NBDs
estrechamente asociados [17]. En 2009, se inform de estructuras cristalinas de rayos X (3.8 hasta 4.4 a) del ratn
Pgp [18], tanto en ausencia de sustrato, y con dos inhibidores de hexapptidos cclicos estereoismeras con
destino al transportador (Figuras 2C y 2D). Dos haces de interdigitados dealfa se observaron hlices, cada una
compuesta de porciones de ambas las mitades N-terminal y C-terminal (TMHS 1-3, 6, 10 y 11, y TMHS 4, 5, 7 a 9 y
12) . Los largos bucles intracelulares de un contacto hlice paquete de la NBD opuestos. Este cruce entre las dos
mitades del transportador tambin se observa en la estructura cristalina de los transportadores bacteriana Sav1866
[19] y MsbA [20].

Figura 2. Topologa y la estructura de Pgp


( A ) modelo topolgico de Pgp, que muestra las dos mitades homlogas, cada uno con seis TMHS y un NBD. ( B )
de resolucin media estructura crio-EM de hmster Pgp unido al anlogo de nucletido no hidrolizable AMP-PNP
(adenosina 5 '- [ , -imido] trifosfato). ( C ) estructuras de rayos X de alta resolucin del ratn Pgp unidos a una
sola molcula del sustrato pptido cclico QZ59-RRR (panel de la izquierda, el pptido en verde; generado a partir
de cdigo PDB 3G60) y dos molculas de su estereoismero QZ59- SSS (panel de la derecha, los pptidos en rojo
y amarillo; generado a partir de cdigo PDB 3G61). La localizacin aproximada de la membrana est indicada por
la barra de color. ( D ) vistas en primer plano de los pptidos en el interior del bolsillo de unin al sustrato; QZ59-
RRR interactuar con el sitio medio (izquierda), y dos molculas de QZ59-SSS que ocupan los sitios de superior e
inferior (derecha).

Los dos haces de TMHS encierran un muy grande (6000 A3) de la cavidad que puede alojar al
menos dos molculas de sustrato al mismo tiempo. Esta cavidad est contenido dentro de la
membrana y est abierto a la cara interna a travs de portales '', probablemente para permitir la
entrada de medicamentos de la bicapa lipdica. Los estereoismeros de pptidos QZ59-RRR y QZ59-
SSS se unen a los subsitios distintos en la cavidad de unin en diferentes orientaciones, y hacer que
diferentes conjuntos de contactos con cadenas laterales de aminocidos de la protena. QZ59-RRR
une a un sitio "medio", en su lugar por interacciones hidrofbicas favorables con fenilalanina,
tirosina, leucina e isoleucina residuos (Figura 2D). Por otra parte, dos molculas de QZ5-SSS se
encuentran en diferentes lugares, "superior" y sitios "inferiores", dentro del bolsillo de unin (Figura
2D), y algunos residuos polares estn involucrados en interacciones con el ltimo. Por lo tanto Pgp
parece unirse mltiples drogas por tener una gran cavidad de unin altamente flexible que puede
adaptarse a muchos compuestos en diferentes lugares por una de tipo 'ajuste inducido' del
mecanismo.
Los estudios de reticulacin y de fluorescencia bioqumicos ya haban apuntado a una regin de
unin al sustrato con estas propiedades [21,22]. La naturaleza poliespecfica de la bolsa de Pgp de
unin y su capacidad para unirse ms de una molcula de frmaco hace simultneamente el diseo
racional de alta afinidad especfica Inhibidores de un problema difcil.

bombeo de drogas por Pgp


Caractersticas de transporte de frmacos de Pgp mediada
Debido a sustratos citotxico Pgp son generalmente lipfilos, que pueden entrar en las clulas
fcilmente por difusin pasiva a travs de la membrana plasmtica y luego se unen a su diana
celular, que podra ser (por ejemplo) los microtbulos o ADN. Los primeros estudios que utilizan
lneas celulares MDR selectiva de frmacos que expresan Pgp mostraron que la acumulacin del
frmaco celular se reduce en gran medida en comparacin con la lnea celular sensible a la droga
madre, y observaciones similares tambin se realizaron para las clulas transfectadas con
el ABCB1 gen. No se observ acumulacin del frmaco ms baja para requerir energa celular. El
tratamiento con moduladores de Pgp invierte la resistencia a frmacos y restaurado tanto mayor
acumulacin del frmaco y la citotoxicidad, con la curva de dosis-respuesta a los frmacos a menudo
en movimiento a 50 a 100 veces menores concentraciones en presencia de un compuesto tal como
verapamil. Tales cambios en la absorcin del frmaco se pueden observar convenientemente en
clulas intactas mediante citometra de flujo con sustratos de Pgp fluorescentes, tales como la
daunorrubicina o rodamina 123 (por ejemplo, [23]).

Sistemas de clulas intactas demostraron ser demasiado complejo para la diseccin de los detalles
bioqumicos de transporte de drogas, y los estudios se iniciaron muy pronto el uso de vesculas de membrana
plasmtica aisladas a partir de clulas que expresan MDR Pgp. Dentro de salida vesculas medicamentos de
transporte en el interior de la vescula in vitro como fuente de ATP en el medio externo, generando as un gradiente
de concentracin del frmaco a travs de la membrana, que est contrado por los inhibidores (por ejemplo,
[24]). Pgp purificado reconstituido en proteoliposomas de manera similar puede transportar frmacos en el interior
de la vescula. Transporte se observa que es saturable, requiere la hidrlisis de ATP y es inhibida por otros
sustratos de transporte y moduladores (por ejemplo, [25,26]). Sin embargo, las interacciones alostricas
inesperados se observan tambin entre sustratos transportados. Por ejemplo, Hoechst 33342 estimula el
transporte de rodamina 123 y viceversa [27], probablemente debido a que los dos frmacos se unen
simultneamente a diferentes subsitios dentro del bolsillo de unin. Tales interacciones complejas entre frmacos
puede ser una consideracin importante en la terapia clnica, donde a menudo se administran-co dos sustratos de
Pgp.

aspiradora hidrfobo o flipasa lpidos?


Los compuestos que interactan con Pgp son relativamente hidrfobo y fcilmente soluble en bicapas lipdicas, y
ahora es ampliamente aceptado que tienen la particin en la membrana antes de interactuar con la protena. Por lo
tanto Pgp se ha descrito como una "aspiradora hidrfobo '[28] que expulsa molculas lipfilas de la membrana en
el medio extracelular (Figura 3). Esta accin de bombeo da lugar a un gradiente de concentracin a travs de la
membrana plasmtica, con una concentracin de frmaco ms alta en la fase acuosa externa. El transportador es
capaz de interceptar los sustratos antes de que tengan la oportunidad de entrar en el citosol, lo que protege a la
clula de la exposicin a molculas potencialmente txicas. Estas ideas son apoyadas por las estructuras
cristalinas de rayos X Pgp, que muestran que dos estereoismeros de pptidos estn unidos profundamente
dentro de la TMHS, que sugiere que pueden tener acceso a la protena desde el interior de la bicapa lipdica [18].

Figura 3. El papel de Pgp como una aspiradora hidrfoba y una flipasa


Pgp se une drogas similares a lpidos y factor activador de plaquetas [29], que pueden ser un
sustrato fisiolgico [30], y tambin se transloca fosfolpidos marcados con fluorescencia a travs de
la membrana de una manera dependiente de ATP [31]. As, la protena puede funcionar como una
translocasa o 'flipasa' para las molculas lipoflicas [28] (Figura 3), que se muevan desde el
citoplasma al folleto de la membrana extracelular. Dado el alto nivel de similitud de secuencias entre
Pgp y su estrecha relacin ABCB4, que es una flipasa PC, tal vez no sea sorprendente que comparten
algunos atributos funcionales.La velocidad de movimiento transbilayer espontnea de muchos
sustratos de Pgp es relativamente baja, y ya que parecen localizar discretamente a un folleto de la
membrana, el transportador sera capaz de mantener una concentracin de frmaco mayor en el
exterior prospecto. Esta actividad flipasa tambin dara lugar a un gradiente de concentracin de
sustrato a travs de la membrana, ya que las drogas en el exterior prospecto sera equilibrar
rpidamente con el medio externo. Sin embargo, debido a los equilibrios de particin rpidos
implicados, es muy difcil distinguir entre la actividad flipasa y transporte directo de frmaco a partir
de la membrana a la fase acuosa extracelular.

ATPasa ciclo cataltico


el transporte de frmacos por Pgp es alimentado por la hidrlisis de ATP en los dos NBDs
citoplasmticos, que se caracterizan por tres muy conservadas motivos de secuencia [32]. Los
motivos Walker A y B se encuentran en muchas protenas que se unen y ATP hidrolizan y GTP, y el
motivo de la firma C es nico a la superfamilia ABC. Los estudios estructurales de las protenas ABC
bacterianas condujeron al concepto generalmente aceptado que los NBDs deben dimerizar con el fin
de hidrolizar ATP [33]. En este llamado "dmero sndwich de ATP ', los NBDs estn dispuestos en una
disposicin de cabeza a cola, con dos molculas de ATP con destino a lo largo de la interfaz. Cada
nucletido se mantiene en su lugar por los motivos Walker A y B de una NBD y la C motivo de la firma
de la otra NBD, que de este modo forman un sitio de unin compuesto [34]. La estructura cristalina
Pgp no contiene nucletidos unida, y puesto que los dos NBDs estn separados por 30 [18], que no
proporciona ninguna informacin til sobre el proceso de dimerizacin putativo. Sin embargo, los de
la firma C y Walker A motivos son conocidos por ser cerca uno del otro a partir de estudios de
reticulacin [35].

No se entiende bien cmo la hidrlisis de ATP es coordinada co entre los dos NBDs, o cmo se usa
esta energa para conducir el transporte de frmacos [36]. la unin a Pgp Drogas altera su actividad
ATPasa basal, que es relativamente alta, incluso en la ausencia aparente de sustratos. Algunos
medicamentos estimulan la actividad ATPasa, mientras que otros la inhiben, y un patrn bifsico de
la estimulacin a bajas concentraciones y la inhibicin a concentraciones ms altas es
comn. Todava no se sabe si Pgp hidroliza una o dos molculas de ATP por cada molcula de
frmaco que transporta.

Algunos conocimientos mecnicos importantes fueron proporcionados por el uso de ortovanadato


(Vi), un anlogo de fosfato inorgnico. Adems de Vi y ATP para Pgp conduce a la prdida muy rpida
de la actividad ATPasa. Despus de una sola recambio cataltico, Pi se disocia y Vi toma su lugar, lo
que lleva a 'atrapamiento' de la ADP complejo estable Vi Mg2 + en un NBD [37]. El complejo
atrapado-Vi es muy estable, y su estructura se piensa para asemejarse a la del estado de transicin
cataltica PENTACO de coordenadas. Desde la captura de Vi en una NBD suprime la actividad
cataltica en el otro, esto sugiere que ambos sitios activos deben ser funcionales para la hidrlisis de
ATP que se produzca. Esta observacin dio lugar a la propuesta del mecanismo '' sitios alternos, en el
que slo uno de NBD es catalticamente activa en cualquier instante en el tiempo, y los dos sitios
activos se turnan en la hidrlisis de ATP [38].

ciclo de transporte
En circunstancias especiales en las que se bloquea la hidrlisis de nucletidos {por ejemplo, despus
de la inactivacin de los NBDs por mutacin, o el uso de los ATP analgica mal hidrolizables gamma S
(adenosina 5 '[ tio] trifosfato)}, que ha sido posible Pgp aislar un intermedio con un nucletido muy
fuertemente unido ( 'ocluido') y un nucletido unido dbilmente [39-41]. Esta especie representa
probablemente la E (sustrato de la enzima ) S intermedia normalmente presente inmediatamente
antes de que ocurra la hidrlisis de ATP. El ATP fuertemente unido se supone que tiene una interfaz
de dmero "cerrado" (Figura 4), y en el caso de una protena activa con lmite ATP, sera progresar
rpidamente al estado de transicin, que conduce a la hidrlisis de ATP. Por el contrario, la interfaz de
dmero alrededor del nucletido dbilmente unida es probable que sea "abierta". Esta informacin
llev a la propuesta de un modelo en el que la Pgp existe siempre en un estado asimtrico, con una
cerrada (alta afinidad) del sitio activo y uno (baja afinidad) abierta sitio activo (Figura 4). La molcula
de ATP fuertemente unido se ha comprometido a entrar en el estado de transicin y se someten a
hidrlisis. Conmutacin simultnea de las afinidades como resultado de la hidrlisis de ATP resultara
en alternancia de la catlisis entre los dos NBDs. El movimiento del frmaco a travs de la membrana
puede ser accionado por la energa liberada durante la hidrlisis de ATP, e implicara cambiar de una
conformacin que mira hacia dentro con una alta afinidad de unin a frmaco a una conformacin de
cara hacia el exterior con baja afinidad de unin a frmaco (Figura 4). Se han propuesto otros
modelos para el mecanismo de transportadores ABC (vase el captulo 4) en la que el ATP solas
unidades de transporte de frmacos (interruptor de ATP modelo [42]) de unin, o dos molculas de
ATP son secuencialmente hidrolizada para abrir las dos mitades de la interfaz NBD dmero ( modelo
de pinza processive [43]). Claramente, se necesita ms trabajo para aclarar los detalles de la
mecnica de cmo el NBDs de Pgp hidroliza ATP, y cmo se alimenta el transporte de drogas.

Importancia de Pgp en la terapia de drogas y enfermedades


Las interacciones con los frmacos utilizados clnicamente
Pgp interacta con muchos medicamentos de uso clnico generalizado (vase la Tabla 1), que incluye
un gran nmero de medicamentos contra el cncer, antihistamnicos, agentes inmunosupresores,
antiepilpticos, glucsidos cardacos, antihipertensivos, inhibidores de la proteasa del VIH, canales de
Ca2 + bloqueadores, antibiticos y las estatinas para reducir el colesterol (para una revisin, ver
[44]). La eficacia clnica de estos frmacos se ve afectada en gran medida por Pgp, que altera su
absorcin y distribucin en el tejido [45]. La interaccin de un frmaco con Pgp puede causar mala absorcin en el
intestino, reduciendo as la biodisponibilidad oral, y prevenir la entrega de frmacos al cerebro, que es un problema
grave en el tratamiento de enfermedades cerebrales. La co-administracin de dos frmacos que son sustratos de
Pgp tambin puede dar lugar a importantes efectos farmacocinticos ya que compiten por el transportador
[46]. Los niveles de frmaco en plasma permanecen ms alto durante ms tiempo, y una reduccin en la dosis del
frmaco es a menudo necesario para evitar la toxicidad. Se observaron efectos similares cuando un medicamento
sustrato de Pgp se consume con alimentos o suplementos de hierbas que contienen productos naturales que
tambin son sustratos de Pgp (flavonoides por ejemplo, plantas, hierba de San Juan [47]). Por estas razones, las
pruebas de drogas para las interacciones PGP es ahora recomendada por la FDA (Administracin de Alimentos y
Medicamentos) como parte de su proceso de aprobacin [48]. Tales pruebas se llevan a cabo normalmente usando
monocapas polarizadas de lneas de clulas epiteliales o bien transfectadas con Pgp humana, o la expresin de
Pgp de forma natural. El movimiento del compuesto de ensayo a partir del medio en el lado basolateral de la
monocapa para el medio en el lado apical (B A, difusin pasiva adems de flujo de salida mediada por Pgp) se
compara con el movimiento en la direccin opuesta (A B, difusin pasiva solamente). Este es un ensayo de
tiempo y es costoso, y en la actualidad existe una necesidad urgente de nuevos mtodos rpidos de alto
rendimiento.

Figura 4. El ciclo cataltico y el transporte de Pgp


Un modelo propuesto para el ciclo cataltico y el transporte de Pgp. En el estado simtrico, las dos mitades de la
interfaz de dmero son "abiertas", con cada unin de una molcula de ATP sin apretar (ATP L ). La bomba
catalticamente activo progresa rpidamente al estado asimtrica en la que una molcula de ATP est muy unido
(ATP T ) en una NBD, donde el dmero interfaz est "cerrado". La molcula de ATP fuertemente unido se ha
comprometido a entrar en el estado de transicin y se somete a la hidrlisis, que proporciona la energa para el
movimiento de drogas (esfera roja) de la bolsa de unin dentro del transportador al espacio extracelular.

El transporte del frmaco probablemente implica un cambio conformacional desde una orientado hacia el interior a
una conformacin de la protena-hacia fuera. Despus de la hidrlisis de ATP, ADP es dbilmente unida (ADP L ),
lo que resulta en la apertura de la interfaz de dmero. El otro sitio cataltico cambia simultneamente al estado de
alta afinidad, lo que resulta en unin fuerte de la segunda molcula de ATP y el cierre de la interfaz de dmero en la
otra NBD. P i luego se disocia del sitio cataltico de la primera NBD, seguido de ADP, que se sustituye por otra
molcula de ATP (intercambio de nucletidos) dbilmente unida para alcanzar el estado asimtrico nuevo. Una
segunda ronda de hidrlisis de ATP y el transporte de frmacos a continuacin, se lleva a cabo en el otro NBD. Pgp
existe en un estado asimtrico en todas las etapas del ciclo cataltico, por lo que requiere que las dos NBDs
alternativa en la hidrlisis de ATP. Adaptado de [40] con el permiso. 2010 Sociedad Americana de Bioqumica y
Biologa Molecular.

Ms de 50 polimorfismos de un solo nucletido (polimorfismos y las inserciones / deleciones) en el ABCB1 se


conocen de genes [49], y algunos de ellos parecen cambiar la expresin de mRNA, expresin de la protena y la
funcin de Pgp. Los polimorfismos pueden ser responsables de la variacin en las respuestas de drogas
observadas entre diferentes individuos y las poblaciones, y en los ltimos aos, ha habido un considerable inters
en la forma en que podran afectar el resultado de la terapia con medicamentos en las personas que los portan. Sin
embargo, ha habido muchos informes contradictorios en este campo, y no hay una clara asociacin entre el
genotipo y la alteracin de la respuesta al tratamiento farmacolgico han surgido [44]. Del mismo modo, se han
notificado polimorfismos para alterar la susceptibilidad de ciertos individuos a diversos estados de enfermedad,
incluyendo el cncer de colon, cncer renal, enfermedad inflamatoria intestinal y la enfermedad de Parkinson
(revisado en [44]). Este es un campo en rpido desarrollo, y requerir una mayor investigacin sustancial antes de
llegar a conclusiones firmes.

Pgp en el descubrimiento de frmacos


La presencia de Pgp en el epitelio intestinal es un problema grave en el descubrimiento de frmacos, ya que los
nuevos candidatos a frmacos se pueden absorben mal, por lo que clnicamente ineficaces. Es especialmente
importante para detectar a los sustratos de Pgp en el desarrollo de frmacos dirigidos al cerebro, ya que su
eficacia depende de su capacidad para cruzar la barrera sangre-cerebro. Muchas compaas farmacuticas
incluyen ahora rutinariamente pruebas para las interacciones con Pgp como parte de su proceso de
descubrimiento de frmacos. Los mtodos que se emplean gama a partir de mediciones de la absorcin de
frmaco en clulas intactas a in vitro ensayos que evalan el efecto de un compuesto sobre Pgp ATPasa o
actividad de transporte en vesculas de membrana [50]. Mtodos predictivos han sido de valor limitado en
determinar si un compuesto es probable que sea un sustrato para Pgp, aunque esto puede cambiar a medida que
ganamos una mejor comprensin de su bolsillo de unin del frmaco.

La resistencia a tratamiento de quimioterapia


La resistencia de los tumores a la accin citotxica de los medicamentos de quimioterapia es la
causa ms comn de fracaso del tratamiento del cncer. Algunos tipos de cncer, incluyendo
tumores de rin, hgado, mama y ovario, son desde el principio (resistencia intrnseca) resistente a
los medicamentos, mientras que otros, por lo general leucemias, linfomas y mieloma mltiple,
desarrollan resistencia despus de una o ms rondas de quimioterapia (adquirida
resistencia). Durante varios tipos de cncer, incluyendo AML (leucemia mieloide aguda), ALL
(leucemia linfoblstica aguda) y los tumores ovricos, los altos niveles de expresin de Pgp estn
fuertemente ligados a una dbil respuesta al tratamiento de quimioterapia y de mal pronstico en
general [51,52]. Sin embargo, en otros casos, se ha demostrado difcil vincular MDR en el cncer a la
expresin de Pgp, probablemente porque hay varios mecanismos por los que algunos tumores
pueden desarrollar resistencia a los medicamentos.
No ha habido mucho inters en la combinacin de moduladores con medicamentos de
quimioterapia para mejorar el resultado del tratamiento del cncer [53]. Sin embargo, slo unos
pocos de los cientos de compuestos identificados como moduladores in vitro result adecuado para
su uso en los ensayos clnicos [54] (Tabla 2). Moduladores de primera generacin, que ya estaban en
uso para otras condiciones mdicas (por ejemplo, verapamilo), fueron probados en la dcada de
1980 y, en general resultaron ser demasiado txico para los pacientes. Ellos fueron modificados para
producir compuestos de segunda generacin, que a menudo mostraban interacciones adversas entre
medicamentos, en el que una disminucin del aclaramiento de agentes contra el cncer llev a la
toxicidad. En los ltimos aos, ms racionalmente diseados moduladores tercera generacin de baja
toxicidad se han producido, que son inhibidores altamente selectivos y potentes de la funcin de
transporte de Pgp. Un xito notable ha sido el uso combinado de los moduladores y la quimioterapia
para curar retinoblastoma infancia [55]. Sin embargo, los resultados de los ensayos clnicos que
utilizan moduladores Pgp en el tratamiento del cncer en general, han sido decepcionantes
[51,53,54], posiblemente debido a que estos estudios sufrieron de serias limitaciones
experimentales, como los criterios de seleccin de pacientes pobres.Existe un inters actual en
explorar el uso de componentes naturales de los alimentos / plantas como moduladores de Pgp (por
ejemplo, los flavonoides, los curcuminoides; vase la Tabla 2), y que podra servir como conductores
tiles para el desarrollo de agentes de cuarta generacin [54].

conclusiones
En este captulo se ofrece una breve descripcin de lo que actualmente sabemos acerca de la
estructura, la funcin y el mecanismo de la bomba de eflujo de drogas-Pgp. Este transportador es de
central importancia en la proteccin de los tejidos sensibles de xenobiticos txicos y tambin puede
interferir con la entrega de frmacos usados clnicamente. Como se ha indicado, se ha hecho un
progreso rpido en los ltimos aos en la aclaracin del ciclo de estructura tridimensional y ATP-
hidrlisis de Pgp. Sin embargo, queda mucho por aprender para entender cmo tantos compuestos
diferentes interactan con flexibles bolsillo de unin al sustrato de la protena, y cmo ATP transporte de
frmacos poderes de hidrlisis. Las muchas herramientas moleculares ahora a nuestra disposicin deben
proporcionar informacin sobre la participacin de esta protena fascinante, tanto en la fisiologa y la entrega de
drogas humano normal. Dicha informacin puede conducir al desarrollo de nuevos enfoques para manipular la
funcin de Pgp de una manera que va a mejorar el resultado del tratamiento clnico.

Resumen
La funcin principal de la bomba de eflujo de mltiples frmacos de Pgp parece ser la proteccin de los tejidos
sensibles de los efectos txicos de los xenobiticos y compuestos endgenos, y que tambin pueden estar
involucrados en la exportacin de molculas fisiolgicamente importantes, como el factor activador de plaquetas.
PGP puede interactuar con una amplia gama de molculas de estructura diversa; la mayora son
relativamente hidrfobos, y muchos poseen anillos aromticos y un tomo de nitrgeno cargado positivamente.
Pgp puede transportar muchos medicamentos que son de uso comn clnicamente y desempea un papel
importante en su absorcin y distribucin; su localizacin en la barrera del intestino y sangre-cerebro reduce la
absorcin oral de frmacos e impide su entrada en el cerebro.
los ratones knock-out para Pgp son una herramienta muy til para la identificacin de los sustratos de Pgp in
vivo .
compuestos conocidos como moduladores pueden bloquear la actividad de eflujo de frmaco de Pgp-, y
pueden tener importantes aplicaciones clnicas en terapia del cncer y la administracin de frmacos al cerebro.
La estructura de la protena se conoce a partir de rayos X y estudios de EM; dos paquetes de seis TMHS
forman un gran bolsillo de unin al sustrato flexible con las diferentes subsedes en las cuales una o dos molculas
de la droga se llevan a cabo principalmente por interacciones hidrofbicas.
Pgp se cree que operan ya sea como una aspiradora hidrfobo que bombea molculas lipfilas fuera de la
membrana o una flipasa que se mueve sustratos de la citoplsmica al folleto de la membrana extracelular.
El ciclo cataltico de Pgp se cree que implique la dimerizacin de los NBDs para formar un sndwich de
nucletidos con dos molculas de ATP consolidados, seguido por la hidrlisis de ATP en un solo sitio activo, que
impulsa el transporte de frmacos. Los dos NBDs parecen alternar en hidrolizante de ATP.

FJS es un Tier 1 Canad Ctedra de Investigacin en Biologa de protenas de membrana, y su trabajo en la Pgp
es apoyado por una subvencin de la Sociedad Canadiense del Cncer. Debido a las limitaciones de espacio, slo
referencias representativas han sido citados a lo largo de este captulo.