Cintica de Michalis-Menten y de Briggs-Haldane para la glucosa

isomerasa
Moiss Guerrero Esperanza

Resumen
El estudio de la cintica enzimtica es importante desde una perspectiva cientfica porque gracias a esto
es posible formular modelos moleculares y desde el punto de vista tecnolgico porque permite el diseo
de reactores. Para describir la cintica enzimtica existen modelos distintos, en los que se encuentra la
cintica de Michaelis-Menten y la de Briggs-Handane, las cuales suponen una formacin rpida y
reversible de un enlace no covalente (ES) a partir del sustrato (S) y la enzima (E), y un estado de
estabilidad respectivamente. Sin embargo, estas ecuaciones son llevadas a cabo planteando un mecanismo
en el que se considera que la reaccin del complejo enzima-sustrato (ES) a la enzima y el producto no es
una reaccin reversible. De tal manera que al realizar las ecuaciones a un modelo de comportamiento
reversible como lo es el de la glucosa isomerasa se obtienen ecuaciones distintas, y al igual que en los
modelos considerados por los modelos Michaelis y de Briggs es posible, a partir de consideraciones de
las constantes, obtener la ecuacin de Michaelis a partir del modelo de Briggs.

Introduccin
-------ec. (1)
El estudio de cintica enzimtica es importante
desde una perspectiva cientfica porque gracias Esto lleva a la ecuacin de Michaelis-Menten:
a esto es posible formular modelos moleculares
de la accin enzimtica, y, desde el punto de k cat C E 0 C s V m xCs
vista tecnolgico, permite la formulacin de = = ec .( 2)
k M +C s k M +C
modelos cinticos usados para el diseo y S

desarrollo de reactores. (Andrs, 2008). La

velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas depende de las condiciones en las que
se lleva a cabo la reaccin, y su cintica se
determina en primer lugar por las propiedades
del catalizador de modo que es ms compleja
que la cintica de las reacciones no catalizadas.
(Koolman & Rhm, 2004).
Cintica de Michaelis Menten
Experimentalmente la velocidad inicial v de
reacciones catalizadas por enzimas muestra
cintica de saturacin con respecto a la
concentracin de sustrato S. A bajas
concentraciones de sustrato la velocidad inicial
incrementa al incrementar la concentracin de
sustrato S pero se vuelve independiente de [S] a
altas o bajas saturaciones de [S]. Esta
observacin fue interpretada por Michaelis y
Menten debido a la formacin rpida y
reversible de un enlace no covalente (ES) a
partir del sustrato (S) y la enzima (E), que luego
se descompone en los productos (P) como se
muestra en la siguiente ecuacin
Donde kM es a constante de Michaelis la cual es
la concentracin del sustrato a la cual la
velocidad inicial es la mitad de la velocidad
mxima de saturacin, Vmx. La constante de
velocidad de primer orden para la
descomposicin de ES es kcat. A bajas
concentraciones de sustrato, donde [S]<<KM, v
est dada por la ecuacin 1, con kcat/kM siendo
una constante de velocidad de segundo orden
aparentemente.
k cat
=
kM 0
[ E ] [S ]
ec. (3)
A altas concentraciones de S, donde [S]>>kM, v
est dado por la ecuacin 4 y se vuelve
independiente de S.
=k cat [ E 0 ]=V m x ec .(4 )
A pesar de que la ecuacin de Michalis-Menten
(ec. 2) es vlida para varias reacciones
catalizadas por enzimas el mecanismo (ec. 1) no
siempre es el mismo. Los valores de k M y kcat no
son siempre iguales a la constante de
disociacin, k1, para el complejo enzima-
sustrato y la constante de descomposicin de
ES, respectivamente. (Page, 1984)
Cintica de Briggs-Haldane
Las ecuaciones propuestas por Michaelis-
Menten son dependientes de un rpido
acercamiento al equilibrio por cualquier
reaccin enzimtica. Sin embargo, este enfoque
puede ser nicamente aplicable para mediciones
de cinticas de reaccin rpida. Generalmente
cuando una enzima es inicialmente mezclada
con un exceso de sustrato, existe un periodo
inicial, llamado estado pre-estable, donde la
concentracin de [ES] se acumula lentamente.
Este periodo es normalmente poco observado
debido a que su duracin dura apenas algunos
microsegundos. Luego de esto la reaccin
alcanza un estado en el que [ES] permanece
constante ante el tiempo. El estado estable fue
introducido por G. E. Briggs y J. B. S. Haldane
en 1925, que no es ms que una modificacin al
mtodo de Michaelis-Menten y es referido
como cintica de estado estable. En el estudio
de Michaelis-Menten slo la formacin de [ES],
no su consistencia, se le da importancia,
mientras que en el mtodo Briggs-Haldane, el
mantenimiento de una concentracin constante
de [ES] y su descomposicin a productos se
discute a detalle.
Considerando la ec. 1 podemos decir que el
estado estable se atribuye al tiempo de duracin
en el que, la velocidad de formacin de [ES]
ser igual a su velocidad de descomposicin de
los productos.
k 1 [ E ][ S ] =k 2 [ ES ] ec .(5)
De tal manera que podemos obtener:
[ E ] [ S] k 2
= =k M ec .(6)
[ ES] k1
Que se observa la igualdad de la constante de
Michaelis-Menten, kM.
Considerando a la enzima total [E] como:
[ E ] =[ E0 ] + [ ES ] ec .( 7)
Y sustituyendo la ec. 7 en la ecuacin 6
podemos obtener:
[ E0 ]
[ ES ] = ec .(8)
k M +[S ]
Esta ecuacin es comparable con la de
Michaelis. La nica diferencia es el cambio de
la constante en el denominador. (Shanmugan &
Sathishkumar, 2009)
Fosfoglucosa isomerasa
La segunda reaccin de la gluclisis es la
conversin de glucosa-6-fosfato a fructosa-6-
fosfato catalizada por la fosfoglucosa isomerasa.
Esto es, la isomerizacin de una aldosa a una
cetosa. (Voet, Voet, & Pratt, 2009) Esta reaccin
transcurre con facilidad en ambas direcciones,
como puede predecirse de la pequea variacin
de la energa libre estndar. La
2+
fosfoglucoisomerasa necesita de Mg y es
especfica para la glucosa-6-fosfato y la
fructosa-6-fosfato. (Melo & Cumatzi, 2006)
La cintica de isomerizacin de glucosa a
fructosa catalizada por la glucosa isomerasa a
una concentracin especificada de sustrato
puede ser relacionada a un comportamiento de
reaccin reversible catalizada por una enzima,
representada en la siguiente ecuacin:
Donde representa la concentracin de glucosa, F
a la fructosa, e a la glucosa isomerasa libre, q al
complejo enzima-sustrato y E la glucosa
isomerasa total. (Macallister, 1979)
Metodologa
Se realiz una homologa de las ecuaciones de
los modelos de Michaelis-Menten y Briggs-
Haldane entre el mecanismo mediante el cual se
deducen estos modelos (ec. 1) y el mecanismo
de la glucosa isomerasa (ec. 9) para obtener las
ecuaciones con los modelos respectivos de
Michalis-Menten y Briggs Haldane para la
glucosa isomerasa.
Resultados Para obtener una ecuacin de [q] podemos restar
la ec. 16 de la 15, y que el cambio de q con
Modelo Michaelis-Menten para la glucosa respecto al tiempo es despreciable:
isomerasa
d [q]
=k 1 [ G ][ e ] k 2 [ q ]k 4 [ F ][ e ] k 3 [ q ] 0 ec .(17)
Considerando la ec. 9 podemos deducir la dt
frmula:

d [ F] d [G] Si sustituimos ec 12 en la 17:

V= = =k 3 [ q ]k 4 [ F ][ e ] ec . (10)
dt dt
[ E 0 ] [G] k 4 [F ]
[ q ]= + ec .(18)
k 4 [ F] k 2 +k 3 k 1 [G]+ k 4 [ F ]+k 2 +k 3
Debido a que el complejo q puede relacionarse [ G ]+ +
con la concentracin de la glucosa
k 1 k1

k 1 [ G ] [ e ]=k 2 [ q ] ec .(11) Sustituyendo la ec 18 en la ec 15:

k4[F]
Se considera que la concentracin total de
enzima E0 se conserva y se puede relacionar con d [F ]
=
(
[ E0 ] [ G ] + k1 )
(k 3+ k 4 [F ])
k 4 [ F ] [ E0 ] ec .(19)
la enzima libre e. dt k [ F] k +k
[ G ]+ 4 + 2 3
k1 k1
[ E0 ]= [ e ] + [ q ] ec .( 12)

Sustituyendo la ec. 2 en la ec. 3 obtenemos: Conclusin

[ E0 ] [G] Las aproximaciones de Michaelis-Menten y de

[ q ]= ec .(13) Briggs-Handane se formularon a partir de un
k2 mecanismo de reaccin como se muestra en la
+[G]
k1 ecuacin 1, obteniendo las ecuaciones 4 y 8 para
cada cintica respectivamente, de tal forma que
al trabajar con un mecanismo diferente como lo
Al sustituir la ec. 13 en la ec. 10 y considerando
es el de la glucosa isomerasa (ec. 9) se obtienen
que la constante de Michaelis-Menten kM est
ecuaciones muy distintas (ec. 14 y 19) a las
dada por k2/k1 obtenemos:
obtenidas por el mecanismo mostrado en la ec.
1.
d [ F] d [G] k 3 [ E 0 ] [G]
V= = = +k 4 [ F ] [ q]k 4 [ F ] [ E0 ] ec .(14)
dt dt k M +[G] Al comparar las ecuaciones obtenidas de la
glucosa isomerasa, es posible pasar del modelo
de Briggs-Handane (ec. 19) al de Michaelis-
Modelo Briggs-Haldane para la glucosa Menten (ec. 14) haciendo la consideracin de
isomerasa que k1>>k3 as como que k1>>k4.
A partir de la ecuacin 9 se pueden obtener las
siguientes ecuaciones para la velocidad de
reaccin:
Bibliografa
Andrs, I. (2008). Enzyme biocatalysis:
d [F ] principles and applications. (A. Illanes, Ed.)
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Page, M. I. (1984). The chemistry of enzyme
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Voet, D., Voet, J. G., & Pratt, C. (2009).
Fundamentos de bioqumica: la vida a nivel
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