PROTENAS

Carol Montao; Suajil Bermudez

Laboratorio de Bioqumica, Departamento de Qumica
Facultad Experimental de Ciencias y Tecnologa. Universidad de Carabobo,
Valencia Venezuela

RESUMEN

El objetivo de la presente prctica fue caracterizar cualitativamente la presencia de algunos

aminocidos con base en los resultados de las reacciones de identificacin de Sakaguchi, Xantoproteca,
Acre-Rosenheim, Sulfidacin, Biuret y Ninhidrina; se realiz la hidrolisis de la casena y luego se
determin mediante cromatografa en papel los aminocidos presentes en la casena por medio de los
factores de retencin (Rf), obtenindose como resultado los siguientes Rf (______) tanto para la muestra
de casena como para los patrones cistena y arginina respectivamente.

I. INTRODUCCIN miles de clases de protenas diferentes, que varan

Los aminocidos son las unidades
estructurales ms simples (monmeros) que
componen las estructuras de las protenas, estn
constituidas por un grupo (NH2 o NH3), un grupo
carboxilo (COOH o COO-) unido al carbono 2 de
la molcula, un tomo de hidrogeno y una
cadena radical tambin conocida como grupo R.
Esta ltima es especfica para cada aminocido y
contribuyen a la identificacin de los mismos [1].
La presencia de estos grupos qumicos en la
estructura de los aminocidos es lo que determina
que estas molculas intervengan en un gran
nmero de reacciones qumicas [1].
Las Protenas son las macromolculas
biolgicas ms abundantes y estn presentes en
todas las clulas y en todas las partes de las
mismas. Las protenas tambin presentan una
gran variedad; en una clula se pueden encontrar
en tamao desde pptidos relativamente pequeos
hasta polmeros enormes de masas moleculares
del orden de los millones [2].
Todas las protenas, tanto si provienen de los
sistemas bacterianos ms antiguos como de las
formas de vida ms complejas, estn construidas
a partir del mismo conjunto de 20 aminocidos,
unidos de forma covalente en secuencias lineales
caractersticas. Debido a que cada uno de los
aminocidos tiene una cadena lateral propia que
determina sus propiedades qumicas, se puede
considerar este grupo de 20 aminocidos como
precursores de la estructura proteica [2].
Un gran nmero de reacciones son utilizadas
para la deteccin de protenas. Debido a la
complejidad de las molculas proteicas y a la
dificultad de obtenerlas en forma pura y aislada,
estas pruebas son usadas sabiendo que identifican
grupos qumicos especficos de la molcula de Luego de completarse las distintas reacciones, se
protena o ms general todava, para las cadenas registraron las observaciones, las cuales se muestran
laterales de los aminocidos encontrados en todas en la tabla N2.
las protenas. As, por ejemplo, el reactivo de Tabla N1: Sustancias y cantidades empleadas
Millon da una reaccin positiva cuando reacciona en las reacciones de identificacin de
con los grupos fenlicos de los aminocidos aminocidos.
Sustancia Sustancia Sustancia Sustancia Sustancia
presentes en la protena [3]. Tubo Reaccin Reaccin Reaccin de reaccin de Reaccin
de Xantoproteca Acre- Sulfidacin de Biuret
Las reacciones de aminocidos libres, son en Sakaguchi Rosemheim
1 Arginina Fenilalanina 1% Triptfano 1% Cistena Biuret
general, las que podran esperarse para los 1% 1%
2 Cistena Casena 1% Casena Casena Casena
compuestos que contienen grupos aminos y 1% 1% 1% 1%
3 Tirosina Tirosina Cistena Arginina Urea
grupos carboxilos, adems de cualquier otro 1% 1% 1% 1% 1%
4 H 2O H 2O H2O H2O H2O
grupo que pueda estar presente, sufre sus propias 0,25mL de 1mL de 1mL de
NaOH 0,5mL HNO3 0,5mL de NaOH 10% NaOH

reacciones caractersticas [3]. Cantidad 10% y concentrado y Formaldehido y 0,25mL de 10% y

empleada 0,25mL de 2mL de NaOH y 1mL de HCl nitrato de 0,5mL de
En la presente prctica se realizaron ensayos -naftol 8M. plomo 1%. CuSO4
0,05%. 0,5%.
para el reconocimiento de aminocidos, hidrolisis
de la casena comercial y la identificacin de sus Tabla N2: Observaciones referentes a las
aminocidos mediante cromatografa en papel. reacciones de identificacin de los aminocidos.
Aminocido Reacciones de Identificacin
/Protena/
II. MATERIALES Y MTODOS Agua Sakaguchi Xantoproteca Acre- Sulfidacin Biuret
Rosemheim
Para caracterizar cualitativamente los distintos Arginina Naranja - - Incoloro (-) -
Fuerte (+)
aminocidos a travs de ensayos qumicos se Cistena Amarillo - Incoloro (-) Gris (+) -
Plido (-)
Tirosina Meln (-) Naranja (+) - - -
llevaron a cabo reacciones cualitativas de Fenilalanina - Incoloro (-) - - -
Triptfano - - Ocre (+) - -
identificacin y se realiz la determinacin de los Biuret
Urea
-
-
-
-
-
-
-
-
Azul (+)
Incoloro

aminocidos de la casena mediante Casena - Amarillo Fuerte Marrn Gris (+)

(-)
Incoloro
(+) Claro (+) (-)
cromatografa en papel por medio de los Rf H2O Incoloro Incoloro Incoloro Incoloro Incoloro
(-) (-) (-) (-) (-)
obtenidos experimentalmente.
Reacciones de Reconocimiento de los Hidrolisis de la casena comercial

Aminocidos Se prepar un aparato de reflujo con 20mL de

Se sometieron los distintos aminocidos y la H2O, 20 mL de HCl y (0,50060,0001) g de
casena con diferentes reactivos distribuidos de la casena, calentando durante 35 minutos.
manera que se indica en la tabla N1, a 5 ensayos Posteriormente, se realiz la prueba de Biuret
cualitativos, siguiendo el procedimiento descrito en para constatar que la reaccin de hidrolisis haba
[4]
. finalizado. Luego, la solucin fue filtrada y sta
casena hidrolizada se utiliz para las pruebas de
identificacin de aminocidos y para la
cromatografa en papel.
Cromatografa en Papel
Se realiz la cromatografa en papel
empleando patrones de Arginina, Cistena, Figura N1: Reaccin de Sakaguchi para la
Tirosina, Glicina, Fenilalanina y la Casena arginina (R), cistena (C), tirosina (Y), y agua.
hidrolizada, utilizando como fase mvil fenol. Como puede observarse, esta prueba fue
positiva frente a la arginina, puesto que sta posee
Tabla N3: Distancias recorridas por los el grupo guanidino.
patrones y la muestra.
Frente/Aminocido/Proten Distancia
a (d0,1)cm
Frente 11,8
Cistena 6,8 Figura N2: Grupo guanidino.
Arginina 3,4
Casena 5,3
La reaccin es la siguiente:
III. DISCUSIN DE RESULTADOS
Reacciones de Identificacin de Los
Aminocidos
En la tabla N2 se muestran los resultados
obtenidos en las diferentes reacciones de
identificacin de los aminocidos, las cuales se
justifican a continuacin:
La reaccin de Sakaguchi se basa en la
identificacin del grupo guanidino y se Los aminocidos restantes de la prueba
fundamenta en la condensacin del grupo resultaron negativos puesto que stos no
guanidino con -naftol en un medio altamente presentan el grupo guanidino para tornar positiva
oxidante, con la posterior produccin de un este ensayo.
[1]
compuesto de color rojo o naranja intenso . La reaccin Xantoproteca permite identificar
En la siguiente figura se muestra el resultado aminocidos que tienen el anillo bencnico en su
de la reaccin: estructura, tales como la fenilalanina o la tirosina.
En esta reaccin el aminocido reacciona con
cido ntrico concentrado, ocurriendo la nitracin
del anillo aromtico y como productos finales de
la reaccin se forman nitroderivados de color
amarillo [1]:
cuidado, una gota de cido sulfrico concentrado
de manera que no se mezcla y se formen dos
fases [1]
. Esta Prueba result positiva para el
triptfano, como puede observarse en la siguiente
figura:

Cuando los aminocidos con la caracterstica

estructural ya mencionada, se calientan en
presencia de cido ntrico concentrado, producen
compuestos nitrados de color amarillo, a los Figura N4: Reaccin de Acre-Rosemheim
cuales el lcali como el hidrxido de amonio, para el triptfano (Trp), cistena (Cys) y agua.
convierten en sus sales respectivas de color (NO ENCONTRE MAS DE ESTA
naranja, como se puede observar en la siguiente REACCION SI ENCUENTRAS PONLO)
figura:

La reaccin de Sulfidacin es una prueba para

identificar aminocidos azufrados y las protenas
que los contienen, y se reconocen por la
formacin de una coloracin negra o gris
mediante la siguiente reaccin [5]:

Figura N3: Reaccin Xantoproteca para la

tirosina (Tyr), fenilalanina (Phe) y agua.
El anillo bencnico de la fenilalanina no tiene
la suficiente capacidad para tornar positiva esta
prueba, al igual que el agua.
La reaccin de Acre-Rosemheim se lleva a
cabo aadiendo unas gotas de formol o
formaldehido a la solucin y despus, con
 Como se puede observar en la figura N5, la
reaccin result positiva para la cistena ya que
esta reaccin se basa en la separacin mediante
un lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al
reaccionar con una solucin de acetato de plomo,
forma el sulfuro de plomo [5].
Figura N5: Reaccin de Sulfidacin para
cistena (Cys), arginina (Arg) y agua.
Por ltimo, la reaccin de Biuret es una
reaccin general para la identificacin de pptidos
y/o protenas. Se le da ese nombre debido a que el
color que se produce en esta reaccin, es similar
al de la condensacin de dos molculas de urea
(H2N=C=NH2), conocido en alemn como:
Biuret. Se fundamenta en la formacin de un
compuesto azul violeta por la reaccin del ion
cprico con el pptido o protena en medio
alcalino. Este ion forma un enlace covalente
coordinado con los enlaces peptdicos [5]:
La reaccin dar resultado positivo si el
compuesto analizado posee al menos dos enlaces
peptdicos en su estructura [5]
. En el caso del
ensayo realizado en la prctica el resultado di
negativo ya que no se calent para completar la
reaccin, esto se puede observar en la siguiente
figura:
Figura N6: Reaccin de Biuret para urea,
agua y el reactivo de Biuret.
Cuando se calienta la urea a 180C, se
descompone transformndose en un compuesto
llamado "biuret", el cual en presencia de Cu2+ en
solucin alcalina forma un complejo color
violceo ya que reconoce los enlaces peptdicos
de las protenas, esta prueba no es especfica para
identificacin de protenas con dos o ms enlaces
peptdicos [5].
Se obtuvo la casena comercial hidrolizada
mediante la desnaturalizacin de sta.
Entendindose por desnaturalizacin de una
protena, la prdida de la conformacin
tridimensional nativa de la misma, prdida que
suele ir acompaada de un descenso en la
solubilidad (las cadenas polipeptdicas de la
protena desnaturalizada se agregan unas a otras y
forman un precipitado que se separa de la
disolucin). Durante el proceso
desnaturalizacin se rompen las interacciones
dbiles que mantienen estable la conformacin
pero se mantienen los enlaces covalentes del
esqueleto polipeptdico, es decir, se pierden las
estructuras secundaria, terciaria y, en su caso,
cuaternaria, pero permanece intacta la secuencia
de aminocidos. La desnaturalizacin puede ser
provocada por diferentes causas o agentes
desnaturalizantes de tipo fsico o qumico [6].
En la prctica se llev acabo
desnaturalizacin por aumento de temperatura y
alteracin del pH; al aumentar la temperatura se
provoca una mayor agitacin molecular que hace
que las interacciones dbiles que mantienen
estable la conformacin de la protena terminen
por ceder con la consiguiente desnaturalizacin.
Con la alteracin de pH se causa la variacin en
el grado de ionizacin de distintos grupos
funcionales (carboxilo, amino, hidroxilo, etc.)
implicados en interacciones dbiles
estabilizan la conformacin. Estas variaciones
provocan la rotura de dichas interacciones (sobre
todo enlaces inicos y tambin puentes de
hidrgeno) y por lo tanto la desnaturalizacin
(debido a ello son tan importantes los tampones
que mantienen estable el pH de los fluidos
biolgicos).
A la casena hidrolizada obtenida, se realizaron
pruebas de identificacin de aminocidos las
cuales fueron: Xantoproteca, Acre-Rosemheim,
Sulfidacin y Biuret; los resultados se muestran
en la siguiente figura:
de
Figura N7: Reacciones de Sulfidacin,
la Acre-Rosemheim, Xantoproteca y Biuret,
realizadas a la casena hidrolizada.
Como puede observarse en la tabla N2 las
reacciones resultaron positivas, excepto para
biuret ya que al desnaturalizar la protena se
pierden los enlaces peptdicos que unen a los
aminocidos, quedando solo la secuencia de
aminocidos o estructura primaria y como se dijo
anteriormente la prueba de biuret solo resulta
positivo cuando hay presencia de enlaces
que peptdicos en la molcula. El resultado positivo
para Sulfidacin, Xantoproteca y Acre-
Rosemheim demuestra que en la casena existe la
presencia de aminocidos azufrados, anillos
bencnicos y triptfano respectivamente.
 IV. CONCLUSIONES [3] Rodrguez J, (1987) Manual de Practicas
- Se pudieron caracterizar cualitativamente los de Bioqumica. Editorial Limusa. Cuarta edicin,
distintos aminocidos a travs de reacciones Mxico. Pginas: 91-92.
qumicas. [4] Armado A., Tapizquent, M., Salamanca L
- Se pudo realizar la cromatografa en papel para la
& Moy B. (2016). Gua del Estudiante-
identificacin de los aminocidos contenidos en
Laboratorio de Bioqumica (QAO-901). Valencia.
la casena.
Facultad Experimental de Ciencias y Tecnologa.
- Se corrobor que la desnaturalizacin de una
Pgina: 8.
protena ocurre a altas temperaturas y alteraciones
[5] Aminocidos [En lnea] [Citado:
de pH ocurriendo de esta manera el rompimiento
31/01/2017]. Disponible en internet:
de enlaces peptdicos de la protena.
- En la cromatografa de papel los componentes de http://www.sisoyyomismo.files.wordpress.com/20
una mezcla se separan en base a una distribucin 12/02/prc3a1ctica-no-2-qf-y-q-aminoacidos.pdf
diferente entre la fase mvil y la fase estacionaria. [6] Protenas [En Lnea] Espaa [Citado:
31/01/2017] Disponible en internet:
V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS http://www.bionova.org.es/biocast/documents/te
[1] Universidad del Zulia. Reacciones de me08.pdf.
Identificacin de Aminocidos y Protenas. [En
lnea] Venezuela [Citado: 31/01/2017].
Disponible en Internet:
http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras
/bioquimica/05_reacciones_amino%C
%3A1cidos_prote%C3%ADnas.pdf
[2] David L. Nelson, Michael M (2001)
Principios de Bioqumica. Editorial COX. Cuarta
edicin, Mxico. Pginas: 77-78.