Necroptosis y su papel en la inflamacin Manolis Pasparakis1 y Peter

Vandenabeele2,3,4 La muerte celular regulada tiene funciones esenciales en el

desarrollo y en la homeostasis del tejido adulto. La necroptosis es una va
recin descubierta de necrosis regulada que requiere las protenas RIPK3 y
MLKL y es inducida por receptores de muerte, interferones, receptores de tipo
toll, sensores de ARN y ADN intracelulares, y probablemente otros mediadores.
RIPK1 tiene importantes kinasas dependientes y funciones de andamiaje que
inhiben o desencadenan necroptosis y apoptosis. Los estudios con modelos de
ratn han revelado funciones importantes para la necroptosis en la inflamacin
y sugirieron que podra estar implicado en la patognesis de muchas
enfermedades inflamatorias humanas. Discutimos los mecanismos que regulan
la necroptosis y su posible papel en la inflamacin y la enfermedad. La muerte
celular est ntimamente conectada con la vida en organismos multicelulares.
El equilibrio entre la muerte celular, la proliferacin y la diferenciacin es
crucial para el mantenimiento de la homeostasis de los tejidos durante toda la
vida. La muerte celular programada (PCD) es esencial para muchos procesos
fisiolgicos, incluyendo la formacin de rganos en desarrollo, la renovacin de
clulas epiteliales y la seleccin de linfocitos. Sin embargo, la muerte celular
que no se desarrolla programticamente es un signo de estrs, lesin o
infeccin y est relacionada con el dao tisular y la patognesis de la
enfermedad. La inflamacin es una reaccin del sistema inmune inducida en
respuesta a una infeccin o lesin tisular que es esencial para la defensa
eficiente del husped y la reparacin del tejido. Sin embargo, las respuestas
inflamatorias excesivas y / o prolongadas incontroladas causan dao tisular y
contribuyen a la patognesis de las enfermedades inflamatorias agudas y
crnicas. Aunque reconocido hace ms de 150 aos como un componente
central de los tejidos inflamados, el papel potencial de la muerte celular como
un componente activo que contribuye a la homeostasis de los tejidos, la
inflamacin y la patognesis de la enfermedad slo recientemente ha ganado
la atencin1. Muchos de los receptores implicados en la inflamacin tambin
pueden inducir la muerte celular, adems de su potente capacidad para
impulsar la expresin de citoquinas inflamatorias. Hallazgos recientes sugieren
que adems de la regulacin transcripcional de los genes inflamatorios, las
propiedades inductoras de la muerte celular de estos receptores tambin
contribuyen de manera crucial a la inflamacin. Durante muchos aos se
consider que la apoptosis era la nica forma de muerte celular regulada
(RCD), mientras que la necrosis era vista como un proceso de muerte celular
accidental no regulada (ACD). La evidencia gentica, bioqumica y funcional y
el descubrimiento de inhibidores qumicos especficos de la necrosis han
redefinido este proceso como una forma regulada molecularmente controlada
de muerte celular2. La necrosis regulada incluye varias modalidades de muerte
celular como necroptosis, parthanatos, ferroptosis u oxitosis, necrosis
dependiente de la transicin de permeabilidad mitocondrial (MPT), piropsis y
pyronecrosis y muerte celular asociada con la liberacin de trampas
extracelulares (neutrfilos), que se describe como NETOSIS o ETosis (Recuadro
1). La necrosis y la necroposis son las formas mejor caracterizadas de necrosis
regulada. La proptosis es una forma inflamatoria de muerte celular inducida
por la activacin del inflammasoma y tiene importantes funciones en la
defensa del husped y la inflamacin3. La necroposis, mediada por la protena
quinasa-3 (RIPK3) que interacta con el receptor y su sustrato como kinase de
linaje mixto (MLKL), es la forma mejor caracterizada de necrosis regulada.
Estudios recientes han proporcionado nuevos y emocionantes conocimientos
sobre los mecanismos que controlan la necroptosis y su relevancia in vivo y
sugieren que la necroptosis podra tener importantes funciones en la
patognesis de varias enfermedades humanas. Esta revisin discute los
mecanismos que controlan la necrosis regulada y su relevancia fisiolgica para
la homeostasis y la inflamacin de los tejidos, centrndose particularmente en
la necroptosis. Mecanismos y regulacin de la necroptosis Gran parte de
nuestro conocimiento de necroptosis proviene de estudios de sealizacin de
factor de necrosis tumoral (TNF). El TNF es una citoquina pleiotrpica que tiene
un papel clave en la inflamacin inducida por infeccin o lesin tisular. La
sealizacin del TNF, principalmente a travs del receptor TNF 1 (TNFR1),
induce la expresin de muchos genes que regulan la inflamacin, pero en
algunas condiciones el TNF tambin es un potente inductor de la muerte
celular4. A pesar de su nombre y la evidencia temprana de que el TNF tambin
induce la muerte celular independiente de la caspasa5 por un mecanismo que
implica RIPK1 (ref.6), durante muchos aos la mayora de los estudios de
muerte celular inducida por TNF se centr en la apoptosis. La identificacin de
necrostatinas como inhibidores de necrosis dirigidas a RIPK1 proporcion
evidencia de que la necrosis inducida por TNF es un proceso regulado por
quinasa, y se denomin necroptosis7,8. Un paso clave para desentraar la va
de la necroptosis fue el descubrimiento de RIPK3 como un regulador esencial
de la necrosis inducida por TNF9-11. El motivo de interaccin homotpica RIP
(RHIM) en RIPK3 y RIPK1 permite su interaccin y es necesario para la
induccin de necroptosis

El necrosoma se defini como el complejo que contiene RIPK1 y RIPK3 que

particip en el inicio de la necroptosis [12]. RIPK1 y RIPK3 se demostr ms
tarde para formar grandes amiloides-como las estructuras [13], aunque no est
claro si estos representan una verdadera plataforma de sealizacin o un post-
evento de acumulacin de estas dos interactuar cinasas. El importante papel
fisiolgico de la necroptosis fue destacado por varios estudios genticos que
mostraron que la caspasa-8 o la protena asociada a Fas con la deficiencia del
dominio de muerte (FADD) causan letalidad embrionaria y desencadenan
inflamacin in vivo sensibilizando a las clulas a la necrosis mediada por
RIPK314-18. Ejecucin de la necroptosis La identificacin de la pseudokinasa
MLKL como sustrato de RIPK3 necesaria para la necroptosis arroja luz sobre los
mecanismos implicados en la ejecucin de la muerte celular necrtica aguas
abajo de RIPK3 (refs 19, 20). Aunque inicialmente MLKL fue propuesto para ser
asociado con la regulacin de la fisin mitocondrial a travs de las protenas
fosfoglicerato mutasa miembro de la familia 5 (PGAM5) y dynamin relacionados
con la protena 1 (DRP1) 21, la causalidad de la fisin mitocondrial en la
necroptosis ha sido impugnada.

Formas de regular la necroptosis

Existen varios tipos de necrosis regulada adems de necroptosis (revisado en

la referencia 2). Parthanatos implica la hiperactivacin de la poli (ADPribosa)
(PAR) polimerasa 1 (PARP1), una enzima caracterizada originalmente por su
papel en los mecanismos de reparacin del ADN despus de una respuesta de
dao del ADN. La PARilacin masiva de protenas diana conduce al agotamiento
celular de NAD + (y consecuentemente de ATP), dando como resultado una
crisis bioenergtica y una forma de necrosis regulada. El trmino ferroptosis se
acu recientemente para describir un tipo de necrosis regulada que se
caracteriza por la produccin dependiente de hierro de especies reactivas de
oxgeno (ROS), que puede ser bloqueado por el quelador de hierro
desferrioxamina (DFO). Se produce por la inhibicin farmacolgica del sistema
antiportador xc-, que intercambia cistina extracelular por el glutamato
intracelular. La toxicidad del glutamato en las neuronas funciona bloqueando el
mismo sistema antiportador y se ha denominado oxitosis. La necrosis regulada
mediada por la transicin de permeabilidad mitocondrial (MPT) es otra
modalidad de muerte celular. La ciclofilina D (CYPD) es el nico componente
genticamente confirmado del complejo de porosidad de transicin de
permeabilidad (PTPC), que est implicado en la necrosis regulada mediada por
MPT. La pirropesis y la pironecrosis son modalidades altamente inflamatorias de
muerte celular caracterizadas por inflamacin celular y permeabilizacin de la
membrana plasmtica. La pirroposis se produce despus de la estimulacin
inflamsica cannica y no cannica,

Dando lugar a la activacin de caspasa-1 y caspasa-11, respectivamente.

Algunos informes distinguen pyronecrosis como una modalidad de muerte
celular que ocurre durante la infeccin que no depende de la caspasa-1 o
caspasa-11, pero requiere la liberacin de catepsina B despus de
permeabilizacin de la membrana lisosomal. NETosis / ETosis (NET es la trampa
extracelular de neutrfilos, ET es la trampa extracelular) tambin est
implicada en la proteccin contra la infeccin microbiana y viral. Esta
modalidad se produce en neutrfilos, eosinfilos, mastocitos y macrfagos.
Est asociado con la descondensacin de la cromatina y la liberacin de las
NET, que estn compuestas de ADN, cromatina e histonas, y permiten que las
clulas inmunes inmovilicen y maten a los agentes infecciosos. Adems de la
apoptosis y de las diversas formas de necrosis regulada, se presenta a menudo
una tercera modalidad: la muerte celular autofgica. El nombre es un poco
engaoso porque la autofagia es en primera instancia un mecanismo crucial en
la homeostasis celular y las respuestas adaptativas, sin embargo, tambin
puede convertirse en un mecanismo de muerte celular. La muerte celular
autofgica se caracteriza bioqumicamente por marcadores de autofagia tales
como la lipidacin de LC3 (cadena ligera de protena 1 asociada a los
microtbulos 3) y la degradacin de p62, una protena de andamios de unin a
ubiquitina, y bloqueada por orientacin gentica o farmacolgica de los
miembros de la autofagia camino. Los inhibidores que interfieren con las
modalidades de muerte celular se muestran en la Tabla 1.

Por otra parte, el agotamiento de las mitocondrias por parkin RBR E3 ubiquitina
proREVIEW ligasa (PARK2) y / o cianuro de carbonilo m-clorofenilhidrazona
(CCCP) induce [11:16, 11/1/2017] Bere : Necrocriptosis

[11:18, 11/1/2017] Bere : Argumentando contra las especies de oxgeno

reactivo mitocondrial (ROS) como un mecanismo ejecutor final. La evidencia
sugiere que la oligomerizacin RHIM dependiente y la autofosforilacin
intramolecular de RIPK3 da como resultado el reclutamiento y la fosforilacin
de MLKL25, 26, lo que conduce a un cambio conformacional en el dominio de la
pseudocinasa que conduce a la exposicin del dominio de haz helicoidal 4. Se
proponen dos modelos no exclusivos para el mecanismo ejecutor de MLKL: uno
como plataforma en la membrana plasmtica para el reclutamiento de canales
de iones Ca2 + o Na + 27,28, y uno como complejo de formacin directa de
poros que se recluta a travs de la unin del Amino del dominio del haz de 4
helicoidales de MLKL a fosfatidilinositolfosfatos cargados negativamente29-31.

[11:35, 11/1/2017] Bere : Mecanismos que regulan la necroptosis inducida

por TNFR1.

En la mayora de las clulas, la estimulacin con TNFR1 no es citotxica e

induce sealizacin proinflamatoria directa mediante la formacin de un
complejo proteico asociado a membrana (complejo I) (Fig. 1a) 4. En las clulas
sensibilizadas, TNFR1 induce la apoptosis a travs de los complejos citolticos
IIa y IIb, y, en particular condiciones o clulas, puede realizarse la necroptosis
por el necrosoma. La sealizacin inducida por TNF hacia la necroptosis se
evita mediante varios frenos en RIPK1, ya que la presencia o ausencia de RIPK1
y sus modificaciones postraduccionales tales como ubiquitacion y fosforilacin
son imprescindibles para el resultado biolgico. RIPK1 viene en varios sabores
en los cuatro complejos diferentes (I, IIa, IIb y IIc / necrosoma), y stos son
inducidos de una manera dinmica despus de la unin del TNF a TNFR1. La
ligacin de TNFR1 induce la formacin de complejo I, que comprende la
protena del dominio de muerte asociada a TNFR1 (TRADD), RIPK1 y las
ubiquitina ligasas E3 factor 2 asociado al receptor de TNF (TRAF2), los
inhibidores celulares de la apoptosis (cIAP1 o cIAP2) Complejo de montaje en
cadena de ubiquitina lineal (LUBAC, que consiste en IRP2 ubiquitina ligasa-1,
HOIL-1L, protena que interacta con HOIL-1, HOIP y SHARK-SH asociada al
dominio de SH, SHARPIN). TRADD es necesario para el reclutamiento de TRAF2,
cIAP1 / 2 y LUBAC, y para la ubiquitinacion de RIPK1 con K63 y las cadenas
lineales dentro del complejo I. Este complejo favorece la sealizacin
proinflamatoria y previene la muerte celular mediante el reclutamiento de la
TGFactivada quinasa 1 (TAK1) (IKK) complejo IKK1, IKK2 y NF- B modulador
(NEMO), dando lugar a NF- B y mitogen activado por la protena quinasa
(MAPK) activacin (revisado En la referencia 32). La desestabilizacin del
complejo I conduce a la formacin de un segundo complejo citoslico IIa,
constituido por TRADD, FADD y caspasa-8, que seala hacia la apoptosis33-35.
En condiciones tales como la estimulacin de TNF en presencia de inhibidores
de IAP (mimticos Smac) o el desmontaje de IAPs35, inhibicin de TAK1 o
knockdown36, eliminacin de NEMO37 o Pellino knockdown38, se forma un
complejo citoslico IIb que est compuesto de RIPK1, RIPK3, FADD y caspasa-
8 . Esta composicin se asemeja al complejo de ripoptosoma citoslico, que se
forma independientemente del TNF, ligando Fas (FASL) o ligando inducido por
apoptosis relacionado con TNF (TRAIL) despus de la prdida o inhibicin de
IAP39,40. Este complejo IIb favorece la apoptosis dependiente de la actividad
RIPK1-quinasa, sin embargo, cuando los niveles de RIPK3 y MLKL son
suficientemente altos y la actividad de la caspasa-8 es reducida, bloqueada o
ausente, el complejo IIb puede evolucionar para formar el necrosoma. Caspasa-
8 inhibe la necroptosis mediante la escisin de RIPK1 y RIPK3, as como
CYLD43, una enzima deubiquitinacin que elimina las cadenas de ubiquitina de
RIPK1 y contribuye a la necroptosis in vitro e in vivo pero la contribucin de la
escisin de cada una de estas protenas a la inhibicin de la necroptosis sigue
siendo poco clara. Los niveles de expresin de la protena inhibidora de la
enzima convertidora de la interleucina (IL) -1 (FLIPL) celular de tipo FADD son
cruciales en el control de la necroptosis y la apoptosis. La presencia de altos
niveles de FLIPL conduce a la caspasa-8-FLIPL heteromrica en el complejo II,
que es catalticamente activo pero no conduce al procesamiento completo de
la p10-p20 caspasa-8 (y apoptosis consecutiva) y altera la especificidad del
sustrato.

[16:19, 11/1/2017] Bere : La caspasa heterotrmica-8-FLIPL previene la

apoptosis compleja dependiente de IIa. El mecanismo preciso del paradjico
papel en favor de la caspasa 8

[16:21, 11/1/2017] Bere : En la inhibicin de la necrosis no est

completamente clara, [16:28, 11/1/2017] Bere : Pero no su procesamiento
proteoltico y la supresin de RIPK1-RIPK3 activation. Por tanto, el control
mediado por FADD-caspasa-8-FLIPL del complejo IIb es una segunda ruptura
importante que evita la induccin de necroptosis. La existencia de estos frenos
(IAPs, TAK1, caspasa-8 y FLIPL) explica por qu en la mayora de los estudios de
necroptosis estn bloqueados por una combinacin de mimticos Smac o
inhibidor de TAK1 (freno inhibidor 1) y zVAD-fmk (carbobenzoxivilalanil -
aspartil- [O-metil] -fluorometilcetona, inhibiendo el freno, facilitando la
formacin eficiente del necrosoma mientras RIPK3 y MLKL se expresen
suficientemente. La mayora de las clulas no son sensibles a la muerte celular
inducida por TNF. La adicin del inhibidor de la sntesis de protenas
cicloheximida hace que las clulas sean sensibles a la apoptosis mediada por el
complejo IIa y, cuando se inhibe la caspasa-8, a la necroptosis mediada por
necrosomas, pero las protenas protectoras precisas dirigidas por la
cicloheximida permanecen inciertas. Otros estmulos que inducen necroptosis
Existen seis receptores de muerte humana (DRs) en la superfamilia del TNF:
TNFR1, FAS (tambin conocido como CD95 o APO-1), DR3 (tambin conocido
como TRAMP o APO-3), TRAILR1 (tambin conocido como DR4 ), TRAILR2
(tambin conocido como DR5, TRICK o KILLER) y DR6 (referencia 48). En
contraste con la sealizacin de TNFR1, en la que el complejo de sealizacin
de prosurvival primero y los complejos inductores de muerte se forman
posteriormente en clulas sensibilizadas (vase ms arriba), la unin de FASL a
FAS o de TRAIL a TRAILR1 o TRAILR2 induce el ensamblaje de una membrana-
(DISC) a travs de la protena adaptadora FADD, lo que conduce al
reclutamiento y la activacin de la caspasa-8 y la apoptosis consecutiva (Fig.
1b]. Bajo condiciones particulares tales como la ausencia de cIAPs, que
favorece el reclutamiento de RIPK1 a Fas49 y la formacin de un complejo
ripoptosmico citoslico IIb39, estos ligandos tambin median necroptosis
cuando se bloquea la caspasa-8. El estrs celular, el dao y la infeccin son
detectados por varios receptores tales como los receptores Toll-like (TLRs), los
receptores nucletidos de unin y oligomerizacin del dominio (NOD) (NLR), el
cido retinoico inducible del gen I (RIG-I) Receptores (RGR), ripoptosomas y
protena quinasa R (PKR) complejos. Algunos de estos receptores tambin han
demostrado inducir necroptosis. El TLR3 activado forma una plataforma
endosmica que recluta un adaptador citoslico, interfern (IFN) - (TRIF) que
contiene el dominio Toll / IL-1 receptor (TIR), que est implicado en la
activacin de NF-B y en la induccin de IFNs de tipo I50 . Adems de la
sealizacin a travs de la diferenciacin mieloide respuesta primaria 88
(MyD88) adaptador, TLR4 tambin seales a travs de TRIF50. TRIF contiene
un dominio RHIM, que permite la interaccin con RIPK1 y RIPK3. La
estimulacin de TLR3 en la presencia de zVAD-fmk induce una necroptosis
mediada por TRIF que depende de RIPK3 y MLKL, pero tambin puede proceder
en ausencia de RIPK1 (RIPK1). La estimulacin de TLR3 de Lipopolisacrido
(LPS) -TLR4 o polyinosine-polycytidylic (poly (I: C) Refs 51, 52). Sin embargo, la
inhibicin de la actividad de la quinasa RIPK1 por necrostatin-1 (Nec1) o en
macrfagos knock-in que expresan RIPK1D138N inactiva a la quinasa (ref. 53)
previno la necroptosis inducida por LPS-poli (I: C) -zVADfmk. Estos resultados
sugieren que RIPK1 es probablemente reclutados en el complejo de
sealizacin TRIF y cuando su actividad quinasa se inhibe acta como un
bloqueador de la activacin de RIPK3 inducida por TLR3 o TLR4, aunque TRIF
tambin puede reclutar y activar directamente RIPK3 en ausencia de RIPK1
(Figura 1c). Otra protena que contiene el dominio RHIM es el activador
citoslico dependiente del ADN de los factores reguladores del IFN (DAI,
tambin conocido como protena de unin al Z-DNA 1, ZBP1), que en respuesta
al ADN bicatenario viral induce la activacin del NF-B y el tipo I, pero tambin
RIPK3 mediada por necroptosis(Fig. 1d]. En ausencia de caspasa-8 y FADD, se
ha demostrado recientemente que los IFN de tipo I y de tipo II inducen la
formacin de necrosomas RIPK1-RIPK3 en fibroblastos embrionarios de ratn
(MEF) que depende de la protena quinasa R sensible a ARN viral, que
interacciona con RIPK1 Ref. 55). Sin embargo, los experimentos independientes
en macrfagos deficientes en PKR no

[16:52, 11/1/2017] Bere : Apoyan un papel esencial para esta quinasa en la

necroptosis mediada por el receptor IFN- tipo I. Curiosamente, dependiendo
del tipo de clula, los bucles autocrinos pueden estar implicados en la
regulacin de la necroptosis. En los macrfagos, la necroptosis mediada por
LPS-TLR4-, TNF-TNFR1- y poli (I: C) -TLR3 requiere la sealizacin tipo I del
receptor IFN-, sugiriendo un bucle autocrino de IFNs56 de tipo I (Figura 1e).
Adems, la estimulacin de Pam3CysK-TLR2, Flagellin-TLR5, CpG-TLR9 (ref. 52)
o administracin de etopsido57 conduce a un ciclo de produccin de TNF
auto- o paracrino, que en condiciones de inhibicin de IAP o deplecin de
caspasa-8 sensibiliza clulas a TNF Inducida por RIPK1-necroptosis
dependiente. Por lo tanto, la regulacin de la necroptosis

RIPK1 determina la supervivencia celular o la muerte Estudios genticos han

demostrado el papel fundamental de RIPK1 en la supervivencia celular y la
muerte. La deficiencia de RIPK1 causa letalidad perinatal, que se evita
completamente por la ausencia combinada de caspasa-8 y RIPK3 (refs 58-60).
La deficiencia de Caspase-8 no prolong la supervivencia de neonatos de Ripk1
- / - ratn, aunque impidi la apoptosis en muchos tejidos incluyendo el
intestino, timo, hgado y pulmn, mientras que RIPK3 o MLKL

Deficiencia mejor la inflamacin sistmica, impidi la hiperplasia epidrmica y

prolong marginalmente la supervivencia de los cachorros Ripk1 - / -, revelando
funciones distintas para la apoptosis y necroptosis en la patologa
multiorgnica y la muerte perinatal de ratones Ripk1

Adems, el epitelio intestinal de clulas epiteliales (IEC) de eliminacin de

Ripk1 caus una grave patologa intestinal letal debido a la apoptosis FADD-
caspasa-8 mediada por IEC inducida principalmente, pero no exclusivamente,
por TNF. Es importante destacar que el aumento de los ratones Ripk1-knockout
especficos de IEC o ratones Ripk1 - / - Ripk3 - / - en condiciones libres de
grmenes no impidi la apoptosis de IECs y la patologa intestinal,
demostrando que la microbiota no es esencial para desencadenar la muerte de
RIPK1- Epitelial clulas 60, 61, aunque antibiticos estudios sugieren que las
bacterias pueden agravar el fenotipo. Sin embargo, el knockout de Ripk1
especfico de epidermalqueratinocitos desencaden una inflamacin severa de
la piel al sensibilizar a los queratinocitos con RIPK3-MLKL-dependiente

Necroptosis, revelando un papel novedoso para RIPK1 como un inhibidor de

necroptosis en queratinocitos. Adems, la deficiencia de RIPK1 en las clulas
hematopoyticas caus insuficiencia de la mdula sea debido a la apoptosis
de clulas hematopoyticas y necroptosis. Colectivamente, estos estudios
demostraron el papel esencial de RIPK1 en la prevencin de la apoptosis y
necroptosis in vivo. Los ratones knock-in que expresan quinasa inactiva Ripk1
alelos no mostrar letalidad postnatal o patologa de los tejidos lo que
demuestra que RIPK1 media de supervivencia celular independiente de la
quinasa funciones andamiaje. Las funciones de supervivencia de RIPK1 que son
importantes para prevenir la apoptosis IEC parecen ser independientes de la
activacin de NF-B. Aunque los mecanismos exactos por los que RIPK1 impide
la muerte celular an no se han dilucidado, la deficiencia de RIPK1, pero no la
falta de su actividad quinasa, result en la degradacin de cIAP1, FLIPL y TRAF2
in vivo y en respuesta a la estimulacin in vitro, sugiriendo que la quinasa
independiente RIPK1 Las propiedades de los andamios son importantes para
sostener las plataformas de sealizacin para la supervivencia. La actividad de
la quinasa RIPK1 no es necesaria para la activacin de la sealizacin de NF-B
y MAPK, sino que media la muerte celular por apoptosis o necroptosis. Por un
lado, la falta de actividad de la quinasa RIPK1 inhibi parcialmente pero no
impidi la necroptosis mediada por RIPK3 de IECs y queratinocitos deficientes
en FADD, lo que demuestra la existencia de vas dependientes y dependientes
de la actividad RIPK1-quinasa que inducen necroptosis in vivo. Por otro lado, la
falta de actividad de la quinasa RIPK1, as como la protena RIPK3 deficiencia
protegido ratones de sndrome de respuesta inflamatoria sistmica inducida
por TNF (SIRS), lo que demuestra que las funciones kinase-dependientes de la
RIPK1 en lugar de directa Induccin de genes proinflamatorios son cruciales
para SIRS inducida por TNF, como se ha propuesto previamente. Mecanismos
que determinan la apoptosis o la necroptosis.

A pesar de los avances en desentraar las vas que regulan la necroptosis, los
mecanismos precisos que determinan la decisin de si una clula muere por
apoptosis o necroptosis siguen siendo mal entendidos. En el lado positivo de la
regulacin, varios estudios han sugerido que los niveles de expresin de RIPK3
y MLKL correlaciona con la sensibilidad a necroptosis. Sin embargo, un
inconveniente potencial de estos estudios es que la expresin de RIPK3 y MLKL
se compar entre tejidos sanos e inflamados; Por lo tanto, es difcil concluir que
la sobreexpresin de RIPK3 y / o MLKL tiene funciones causales primarias y no
es una consecuencia secundaria de la inflamacin en curso. Curiosamente,
algunos estudios sugieren que si RIPK3 es catalticamente activo o no puede
determinar necroptosis o apoptosis. Como una plataforma catalticamente
inactiva RIPK3 favorece la apoptosis dependiente de RIPK1, mientras que RIPK3
cataliticamente activa induce necroptosis. Esta bifurcacin fue ilustrada in vivo
por el hallazgo de que, aunque los ratones RIPK3-knockout no tienen fenotipo
espontneo, los ratones knockin inactivos a RIPK3D161N-quinasa mueren
durante la embriognesis debido a la apoptosis mediada por RIPK1-FADD-
caspasa-865, lo que sugiere que el RIPK3 activo con quinasa Necesario para
suprimir la apoptosis. Sin embargo, un informe reciente mostr que RIPK3K51A
quinasa inactiva knock-in ratones son viables y que los inhibidores de RIPK3
bloquean la necroptosis inducida por TNF, pero a concentraciones ms altas
inducir RIPK3scaffold dependiente de apoptosis, lo que sugiere que RIPK3
cambios conformacionales y no la inhibicin de su actividad quinasa apoptosis.
En el lado negativo de la regulacin, la caspasa-8 es el factor ms importante
para prevenir la necroptosis. De hecho, en la mayora de los sistemas
experimentales in vivo, lejos, la sensibilizacin a la necroptosis se logr por un
defecto gentico comprometiendo FADD caspasa-8 de sealizacin, y por lo
tanto, la inhibicin de apoptosis. La prdida de cIAP sensibiliza a las clulas a la
apoptosis72-74 y, cuando se inhibe la caspasa-8, hasta la necroptosis, lo que
sugiere que la inhibicin de la cIAP confiere susceptibilidad a la muerte celular
pero que la decisin de si una clula muere por apoptosis o necroptosis
depende de la actividad de la caspasa-8. Como ya se ha comentado, la
deficiencia de RIPK1 sensibiliza a las clulas tanto a la apoptosis y necroptosis,
aunque los factores que determinan si una clula que carece de RIPK1 morirn
por apoptosis o necroptosis siguen siendo esquiva. Por lo tanto, se requieren
ms estudios in vivo para comprender los mecanismos que determinan la
susceptibilidad de diferentes tipos de clulas a necroptosis o apoptosis.

La muerte celular regulada en la inflamacin

Ms recientemente, el concepto de que la muerte celular puede preceder,

desencadenar o amplificar la respuesta inflamatoria ha ganado cada vez ms
atencin. Establecer la muerte celular como un iniciador de la inflamacin in
vivo es un desafo, porque es muy difcil resolver temporalmente las dos
respuestas para demostrar la causalidad. En la siguiente seccin discutiremos
las evidencias que implican la necroptosis como un mediador activo de la
inflamacin, centrndose particularmente en las implicaciones de estos
hallazgos para la patognesis de las enfermedades inflamatorias - otros
aspectos relacionados con el papel de la muerte celular regulada en la defensa
de patgenos han sido cubiertos en Otras revisiones recientes

Necroptosis como un desencadenante de la inflamacin

Un obstculo importante en el estudio del papel de la necroptosis in vivo ha
sido la falta de un marcador molecular definido para la identificacin in situ de
clulas necroptticas. Los anticuerpos que detectan MLKL fosforilados
humanos, que recientemente se han descrito para detectar hepatocitos
necrticos en el hgado de personas con lesin heptica inducida por frmacos,
prometen proporcionar tal herramienta, pero se requerir validacin adicional
para demostrar su aplicabilidad para la deteccin de necroptosis en otros seres
humanos

El desarrollo de los anticuerpos fosfo-MLKL especficos de ratn ser de gran

valor para la validacin preclnica de MLKL fosforilado como marcador de
clulas necroptticas en modelos murinos de enfermedad humana. Hasta la
fecha, en la mayora de los estudios publicados, las clulas necroptticas se
describen por morfologa necrtica y la ausencia concomitante de activacin de
caspasa-3, que no puede distinguir entre diferentes tipos de muerte celular
necrtica (Recuadro 1). En ausencia de un marcador molecular especfico, el
nico criterio definido para la necroptosis ha sido la dependencia de RIPK3 y
MLKL. Aunque NEC1 ha sido utilizado ampliamente como un inhibidor de la
necroptosis, a la luz de los hallazgos ms recientes que muestran la existencia
de RIPK1-quinasa-dependiente de la actividad y la necroptosis independiente in
vivo as como las funciones complejas de RIPK1 quinasa actividad en la
regulacin Tanto necroptosis y apoptosis como los efectos inhibitorios de NEC1
sobre indolamina 2,3-oxigenasa, los estudios basados en NEC1 no pueden
considerarse como evidencia definitiva de necroptosis y necesitan ser
reproducidos en un fondo deficiente en RIPK3 y / o MLKL. Por lo tanto, en esta
revisin, slo se discutirn estudios in vivo que apoyan un papel
proinflamatorio para la necroptosis mediante la demostracin de que la muerte
celular y la inflamacin se previenen por RIPK3 y / o MLKL deficiencia. La
evidencia in vivo para apoyar una funcin proinflamatoria para la necroptosis
fue inicialmente proporcionada por estudios en ratones que carecen de FADD
en IECs, que haba aumentado el nmero de IECs necrticas y desarroll colitis
y ileitis espontnea con prdida de clulas de Paneth. La deficiencia de RIPK3
previno la muerte de las clulas epiteliales y la inflamacin tanto en el colon
como en el intestino delgado de estos ratones, proporcionando evidencia
experimental in vivo de que la necroptosis mediada por RIPK3 de las clulas
epiteliales causa inflamacin intestinal. Las condiciones libres de germen y la
deficiencia de MyD88 o TNF previenen la colitis, pero no la prdida de
Panethcell y la ileitis en ratones que carecen de FADD en IECs, lo que sugiere
que diferentes mecanismos desencadenan RIPK3 mediada por necroptosis de
clulas epiteliales e inflamacin en el colon y el intestino delgado17. IEC
especfica de caspase-8 causado Paneth prdida de clulas y ileitis, que
posteriormente se demostr que dependen de RIPK3, pero no en TNFR1 como
se sugiri inicialmente. Curiosamente, en contraste con el IEC especfica
knockouts FADD, IEC especficos caspase-8 knockout ratones no desarrollaron
colitis, lo que sugiere que FADD y caspasa-8 tienen diferentes funciones en el
epitelio colnico.

Funciones dependientes e independientes de la necroptosis de RIPK3

Los experimentos genticos de rescate utilizando RIPK3 o knockouts MLKL se

usan rutinariamente para demostrar que la necroptosis desencadena la
inflamacin. Sin embargo, no est claro si en algunos casos RIPK3 podra ser
capaz de desencadenar la inflamacin mediante el ejercicio de funciones
independientes de necroptosis. RIPK3 ha sido implicado en la activacin de
inflammasoma y la liberacin de IL-1 en macrfagos tratados con Smac-
mimticos o en las clulas dendrticas deficientes en caspasa-895,96,
aparentemente de una manera independiente de muerte celular, aunque
mltiples estudios independientes no mostraron un papel Para RIPK3 en
cannico o no cannico activacin de inflammasome97-99. Sin embargo,
recientemente se inform que los virus de ARN activaban el inflammasoma de
NLRP3 de una manera dependiente de RIPK1 y RIPK3 pero independiente de
MLKL, sugiriendo que en respuesta a la deteccin de RNA viral RIPK1 y RIPK3
inducen la activacin de inflammasoma de una manera independiente de
necroptosis que parece Involucran la fisin mitocondrial y la produccin de
ROS100. Estos estudios sugieren que la regulacin del inflammasoma por
RIPK3 puede contribuir a la inflamacin, aunque los datos disponibles in vivo no
apoyan un papel importante para el inflammasoma en la inflamacin
dependiente de RIPK3, porque, por ejemplo, la deficiencia doble de IL-1 e IL-
1 No previenen la inflamacin en ratones con la eliminacin especfica de
queratinocitos epidrmicos de caspasa-8 (referencia 81). Adems, un estudio
reciente inform que RIPK3 regula la activacin de NF-B y caspasa-1 inducida
por LPS y la produccin de citoquinas inflamatorias en clulas dendrticas pero
no en macrfagos y controla la inflamacin del colon inducida por dextrano-
sulfato de sodio. Varios estudios han demostrado que la caspasa-8 activa el
inflammasoma y tambin escinde directamente pro-IL-1 para secretar IL-1,
lo que sugiere que podra inducir inflamacin independientemente de sus
funciones pro-apoptticas. Sin embargo, la mayora se realiz en macrfagos
que carecen tanto de caspasa-8 como de RIPK3, ya que los macrfagos
caspase-8-knockout no sobreviven, lo que plantea la cuestin de si los efectos
observados podran, en cierta medida, depender del papel de la caspasa-8 en
la inhibicin Necroptosis. Una explicacin alternativa de estos hallazgos podra
ser que la activacin de inflammasoma se acopla a la muerte celular en clulas
que estn preparadas para expresar componentes de inflammasomas y
precursores de citocinas de la familia de IL-1. La caspasa-8 podra escindir
directamente las protenas precursoras de IL-1 y quizs tambin la caspasa-1
durante la apoptosis, mientras que la necroptosis dependiente de RIPK3-MLKL
podra desencadenar la activacin del inflamasoma induciendo cambios en el
estado redox, las concentraciones intracelulares de iones y el estado
metablico de la clula, Todos los cuales son bien conocidos inductores de
inflamacin. Esta hiptesis es intrigante a la luz de los hallazgos recientes que
muestran que la IL-1 se libera principalmente de morir macrfagos en
respuesta a la activacin de inflammasome105. Teniendo en cuenta que la
mayora de los estmulos que actan como activadores inflamados en los
macrfagos impregnados infligen dao celular, la activacin del inflamasoma
podra representar un mecanismo unificador dotando a las clulas cebadas con
la capacidad de inducir inflamacin cuando estn expuestas al estrs inducido
por la muerte celular. El acoplamiento de la muerte celular regulada con la
activacin de inflammasoma en clulas cebadas podra proporcionar un
mecanismo para asegurar que la muerte de clulas expuestas a estmulos que
activan NF-B, como productos microbianos o citoquinas inflamatorias,
desencadenarn una respuesta inmunitaria para mediar la defensa del
husped y promover el tejido reparar. La potente capacidad de la mayora de
los estmulos que desencadenan la muerte celular regulada (por ejemplo, TNF,
IFN y LPS) para inducir tambin la expresin gnica proinflamatoria asegura
que en una poblacin de clulas se producen respuestas mixtas entre clulas
que sobreviven o mueren y que las clulas moribundas tambin tienen Ha sido
preparado para producir citoquinas y quimiocinas106. Por lo tanto, se
necesitarn estudios adicionales en modelos in vivo relevantes para evaluar la
contribucin de las funciones dependientes e independientes de la muerte
celular de RIPK3 y caspasa-8 en la inflamacin. La necroptosis es ms
inflamatoria que la apoptosis? La apoptosis generalmente se considera no
inmunognica, basada en el concepto de que la muerte celular programada de
forma programada, tal como la que durante la seleccin de timocitos en el
timo, no debe desencadenar inflamacin. Sin embargo, la muerte celular
apopttica que no est programada para el desarrollo indica lesin en el tejido
y debe ser detectada por el sistema inmunolgico para asegurar la
regeneracin eficiente del tejido y la defensa del husped. De hecho, varios
estudios recientes apoyaron un papel proinflamatorio de la apoptosis. Se
demostr que la apoptosis de clulas cancerosas en respuesta a algunos
agentes quimioteraputicos era altamente inmunognica, contribuyendo a las
respuestas teraputicas (revisada en la referencia Mouse-modelos estudios
sugieren que la apoptosis de las clulas epiteliales que carecen de NEMO o
TAK1 desencadena inflamacin crnica108-111, aunque el papel potencial de
la necroptosis en estos modelos no ha sido abordada.

Los resultados que muestran que la necroptosis, pero no la apoptosis, de

queratinocitos deficientes en RIPK1 desencadenan inflamacin de la piel,
proporcionan evidencia experimental inicial in vivo que, al menos en este
modelo, la necroptosis de queratinocitos es un desencadenante ms potente
de inflamacin de la piel comparada con apoptosis, La apoptosis de
queratinocitos ha demostrado desencadenar la inflamacin en otros modelos.
En conclusin, aunque existen indicios de que la necroptosis es ms
inflamatoria que la apoptosis, se necesitan nuevos y ms especficos modelos
in vivo para comparar directamente la capacidad de estas dos vas de muerte
celular regulada para desencadenar la inflamacin y abordar los mecanismos
subyacentes. Tales modelos podran aprovechar mediadores intracelulares que
inducen exclusivamente apoptosis (por ejemplo, tBid) o necroptosis (por
ejemplo, mutantes de MLKL constitutivamente activos) para dirigir
especficamente la funcin de cada va de muerte celular sin interferencia de
inductores extracelulares.