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ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini.

EEMNº 11 Alte Brown
6 de junio de 2008

La molécula que guarda todos los secretos…

El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos. Cada
nucleótido, a su vez, está compuesto por un azúcar de 5 carbonos (desoxirribosa),
un grupo fosfato y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro:
adenina (A), timina (T), citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta a
una T y una C se enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas se
dice que son complementarias. El ADN adopta una forma de doble hélice, como una
escalera caracol donde los lados son cadenas de azúcares y fosfatos conectadas
por "escalones", que son las bases nitrogenadas. La molécula de ADN se asocia a
proteínas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y compactada para
formar el cromosoma. Esta asociación de ADN y proteínas se conoce como
cromatina. La cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado,
dependiendo de la etapa en que se encuentra la célula; por ejemplo, cuando el ADN
se ha duplicado antes de que la célula se divida, la cromatina se compacta en su
mayor grado, y como resultado se pueden visualizar los cromosomas duplicados al
microscopio como corpúsculos con forma de X.
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6 de junio de 2008

Extracción de ADN en el laboratorio

El ADN se encuentra presente en todos los seres vivos. Un “alfabeto” de 20 Aminoácidos
puede escribir todas las proteínas que regulan la vida sobre la tierra.
En el laboratorio extraeremos ADN de células vegetales y animales.

Protocolos de trabajo:

• Extracción de ADN en células animales:

El objetivo del presente trabajo es la extracción de ADN presente en las células del hígado
de pollo. Para ello debemos provocar la ruptura de los tejidos, el estallido de los núcleos y la
separación de las proteínas asociadas al ADN.
Los diferentes pasos de esta técnica van cubriendo estas etapas.

Materiales:

Etanol
Hígado de pollo
Solución de cloruro de sodio 10% m/V
Varilla de vidrio
Detergente de color claro o champú
Mortero
Arena
Vasos de precipitado
Gasa
Pipeta
Hielo
Probeta
Agua destilada

1- Colocar en un recipiente adecuado (conservadora de hielo o envase de helados)
un vaso de precipitado con 50 cm3 de etanol entre cubos de hielo. Preparar la
solución de cloruro de sodio
2- Colocar el hígado pollo trozado en un mortero con un poco de arena y triturar (la
arena favorece la ruptura de membranas)
3- Agregar al triturado 50 cm3 de agua destilada hasta formar una especie de papilla
o puré
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4-Esta papilla se filtra colocando gasa en embudo varias veces hasta retener
todos los posibles trozos de tejidos en suspensión. Medir el filtrado con probeta

5- Agregar al filtrado igual cantidad de solución de cloruro de sodio 10% m/V con lo
que se consigue producir el estallido de los núcleos y la exposición de la fibras
de cromatina.
6- Agregar 1 cucharadita de detergente o champú que formará un complejo con las
proteínas asociadas al ADN dejándolo libre. (Mezcla suavemente evitando la
formación de espuma)
ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown
6 de junio de 2008

7- Agregar suavemente y deslizando por las paredes del vaso de precipitado el
etanol helado. Se formará un sistema bifásico y en la interfase quedan
suspendidas las fibras de ADN, simulando esos fideos de sopa llamados
“cabellos de ángel”
ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown
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Las fotos fueron tomadas en el laboratorio de la EMNº 11durante la práctica
realizada por 3º 4º
ADN y su extracción en el laboratorio. Prof. Liliana H. Perini. EEMNº 11 Alte Brown
6 de junio de 2008

• Extracción de ADN en células vegetales:

Vaso de precipitado
Licuadora
embudo y gasa
20 ml de agua destilada
champú o detergente de color claro
1 banana
Sal de mesa
1 tubo de ensayo
Etanol
hielo
1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur

1- Colocar en un recipiente adecuado (conservadora de hielo o envase de helados) un
tubo de ensayo con etanol entre cubos de hielo

2- Licuar una banana con una taza de agua destilada.

3- Prepara en un vaso de precipitado una cucharadita de té de champú o detergente
junto a dos pizcas de sal y 20 cm3 de agua destilada, mezclar evitando la formación
de espuma

4- Agregar a esta última preparación 3 cucharadas del licuado de banana, mezclar
durante 5 minutos

5- Filtrar con embudo y gasa. Tomar aproximadamente 5 cm3 del filtrado
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6- Agregar el filtrado al etanol helado, cuidando que se deslice por las paredes. Dejar
reposar sin mover. Las fibras de ADN precipitan en la interfase
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6 de junio de 2008
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Las fotos fueron tomadas en el laboratorio de la EMNº 11durante la práctica
realizada por 3º 4º