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DNA-Isolierung aus A.

nidulans TN02A7 und Transformanten

eingestellt von: Elisabeth eingestellt am: 30.10.2014


gendert von: gendert am:
Literatur:
Bemerkungen:

1. Mycel mrsern
2. Bis zur Hlfte in 2 ml Reaktionsgef fllen
3. + 1 ml Lysispuffer
4. Fr 30 min bei 68C inkubieren
5. Zentrifuganion: 14.000 g, 4C, 10 min
6. Obere, wssrige Phase in neues Eppi geben
7. +1 ml Phenol/Chloroform/Isoamylalkohol (25:24:1)
8. Vortexen
9. 10 min auf Eis
10. Zentrifuganion: 14.000 g, 4C, 10 min
11. Schritte 6-10 wiederholen
12. Schritte 6-10 mit nur Chloroform/Isoamylalkohol (24:1) wiederholen
13. Obere, wssrige Phase in neues Eppi geben
14. +1-2 Vol. eiskaltes 100%iges Isopropanol zugeben
15. 10 min auf Eis
16. Zentrifuganion: 14.000 g, 4C, 30 min
17. +0,5 Vol. 70%igen Ethanol
18. Zentrifuganion: 14.000 g, 4C, 5 min
19. Pellet trocknen und in 100 l Wasser aufnehmen
Lysispuffer
Tris-HCl 50 mM
EDTA 50 mM
SDS 3% (w/v)
2-Mercaptoethanol 1%

pH auf 7,5 einstellen