Produccin de isobuteno por la levadura Rhodotorula.

(sistema aerbico)

La produccin de isobuteno se lleva a cabo especialmente por la levadura

R.minuta var. Texensis IFO 1102. La adicin de L-leucina al medio, estimula
adems su produccin.
Se teoriza que el origen bioqumico del isobutileno se lleva a partir del 3-
metilcrotonil CoA, un intermedio de la ruta metabolica de la L-leucina
La tirosina y la fenilalanina ayudan al incremento en compaa de la leucina.
La tasa de produccin fue de 16,4(nanolitro/ml de medio de cultivo/ hora)

MATERIALES Y MTODOS
1. Los mtodos de cultivo. levaduras RhodotoFula se cultivaron en matraces
Erlenmeyer de 500 ml que contienen 50 ml de medio. Se utilizaron dos tipos de
medio: medio A era 20 g de glucosa, 3 g de extracto de carne, 5 g de peptona,
2 g NaCl !, 2 g de extracto de levadura y agua desionizada 1.000 ml, pH 6,0;
medio B era 20 g de glucosa, 5 g (NH4) 2S04 '1 g KH2P04, 1 g MgS04' 7h20,
0,1 g CaCl2 2H20, 0,1 g de NaCl, cido p-aminobenzoico 0,5 mg, 0,5 mg de
tiamina-HCl, 50 mg de citrato sdico, 30 mg MnCI2 '4H20, 20 mg ZnCI2, 20 mg
FeCI2 6H20, 2 mg CuS04' 5h20, 2 mg CoCI2 '6H20, yo mg Na2Mo04'2H20,
Img K2B40 7' xH20 and.I, OOOml agua desionizada, pH 6,5. Despus de la
inoculacin en el medio A, los matraces se colocaron en un agitador rotatorio
(180 rpm con trazos 7 cm) a 25 C durante 2 das. Cuando se utilizaron las
clulas en reposo, las clulas se cultivaron en medio B durante 2 das
recogieron por centrifugacin a 1000 x g para Iomin, y despus se lavaron dos
veces con tampn S0rensen mM 33, las clulas pH 6.0.The se resuspendieron
en la misma solucin tampn.

2. Mtodos analticos para isobuteno. caldo de cultivo (1 ml) o suspensin de

clulas en reposo (0,5 ml) se transfiri a un tubo de ensayo estril (18 mm de
dimetro, la capacidad de 34 ml). El tubo de ensayo se sell con un tapn de
caucho estril y se incubaron en un agitador recproco a 2SOC durante 5 a 10
h. Isobuteno contenido en muestras de I ml, que fueron retirados de la
atmsfera en el tubo de ensayo sellado, se determin por cromatografa de
gases en una columna de almina activada (4m, 60 a 80 mesh), operado a 150
C con nitrgeno (40 ml / min) como gas portador. La tasa de produccin de
isobuteno (nl / ml de caldo de cultivo / h) se calcul por los mismos mtodos
como se describi anteriormente. 5)

3. Identificacin de isobuteno. Por lo general, isobuteno se identific por

comparacin del tiempo de retencin de una muestra de gas con el de una
muestra autntica. El isobuteno se verific con otros tipos de relleno de la
columna tales como BondGCjPIC (Wako Pure Chemical Ind. Ltd., Osaka) y
Unibeads 2S (Gaskuro Kogyo Inc., Tokio). Tambin, se verific por cromatografa
de papel despus de la absorcin en acetato 0,1 M mercrico en metanol de la
sample.7 gas) El sistema disolvente usado para la cromatografa en papel era
butanol-I / 95% de etanol / 28% de amoniaco (8: I: 3) . Se detectaron dos
puntos, el ms importante tena el mismo valor de Rf que la de isobuteno
autntico y el de la menor correspondi a la de etileno autntico. A partir de los
dos experimentos anteriores, llegamos a la conclusin de que el isobuteno
estaba contenido en el gas producido por R. minuta IFO 1102.

4. La concentracin de clulas. La concentracin de clulas se determin a

partir de la densidad ptica a 660 nm.