3) ELECTROFORESIS

a) Definicin

La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la

movilidad de estas en un campo elctrico. Se usa para separar compuestos con
carga neta, como aminocidos, pptidos, protenas, nucletidos y cidos
nucleicos. 1

b) Fundamento

La electroforesis es un proceso en el que un gradiente de potencial produce el

transporte de las partculas cargadas. En el transporte electrofortico, a la fuerza
del campo (Felc = Z x E) se opone la resistencia viscosa del medio (Fres = f x v),
lo que produce, cuando se igualan, una velocidad constante de las partculas. El
proceso puede escribirse as:

donde Z = carga neta de la

Felc= Fres molcula

E= valor del campo elctrico

En la electroforesis, la fuerza que mueve la macromolcula es el potencial
elctrico, E. La movilidad electrofortica de laf =molcula
coeficiente de el
, es rozamiento
cociente entre la
velocidad de la partcula, V, y el potencial elctrico. La movilidad
V= velocidad electrofortica
de la partculas
tambin es igual a la carga neta de la molcula, Z, dividida por el coeficiente

friccional, f , que refleja en parte la forma de la protena. As:

V Z
u= =
E f

El desplazamiento de una protena en un gel durante una electroforesis es por

1,2
tanto funcin de su tamao y de su forma.

c) Elementos necesarios para una electroforesis

Cmara de electroforesis.- Permite la generacin de un campo elctrico
alrededor de un gel en el que se depositan las muestras.
 Gel.- Medio de soporte que evita perturbaciones mecnicas durante la
separacin.
Buffer de corrimiento.- Proporciona el medio para la transmisin de la
corriente elctrica y mantiene el pH sin variaciones mientras se realiza el
corrimiento.
Marcador de peso molecular.- Permiten determinar por comparacin el
tamao de las molculas contenidos en las muestras sometidas a
electroforesis.
Buffer de carga.- Brinda peso, densidad y color a la muestra, lo que facilita
su depsito en el pocillo y evita su salida del gel.
Transiluminador ultravioleta.- Transmite luz del espectro ultravioleta a
travs de la muestra, lo cual excita la molcula cromognica que emite
energa fluorescente y permite visualizarla.
Fuente de poder.- Provee el voltaje necesario para la corrida. Indica el
miliamperaje a que est siendo corrida la muestra (Fig. 3.1). 3

Figura N 3.1: Elementos necesarios para una electroforesis

d) Tipos
HORIZONTAL VERTICAL
Se lleva a cabo con gel de Empleada de forma exclusiva
agarosa para cidos nucleicos.
Para el corrimiento el buffer
debe cubrir el gel.
Al momento de cargar las
muestras en los pocillos, se
puede optar por hacerlo en
seco.
Una vez cargada la muestra, se
corre por unos minutos a bajo
voltaje hasta que la muestra
entre en el gel y entonces se
cubre del todo con el buffer de
corrimiento.3
con gel de poliacrilamida
Se utiliza para protenas o
cidos nucleicos de pequeo
tamao.
El gel debe estar contenido
entre dos placas rectangulares
de vidrio donde la corriente
elctrica se genera gracias al
buffer en el que se encuentra
embebido el gel y llena las
cubetas o compartimientos del
nodo y el ctodo. 3

TABLA N 3.1: Tipos de electroforesis

e) Procedimiento General de una electroforesis

1. Preparar un gel de agarosa o acrilamida a la concentracin requerida.
2. Mezclar las muestras a analizar con un buffer de carga adecuado.
3. Cargar las muestras en el gel.
4. Realizar la corrida electrofortica al voltaje pertinente.
5. Visualizar los cidos nucleicos o las protenas.3

f) Aplicaciones
Determinar los tamaos moleculares de los cidos nucleicos, analizar los
fragmentos cortados con enzimas de restriccin comparar los tamaos de
distintos tipos de DNA, aislar y recuperar fragmentos de DNA purificados
para clonaciones moleculares, y analizar productos de PCR, entre otros.
Proceso previo a las tcnicas de hibridacin, como el Southern blot (DNA) o
el Northern blot (RNA).
 Identificacin de fracciones proteicas o protenas particulares por tamao,
como es el caso de la electroforesis de globulinas, o protenas sricas.
Crucial en tcnicas como la secuenciacin. 3

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1) Gonzlez J. Tcnicas y Mtodos de laboratorio Clnico.3 a ed.
Barcelona: Elsiever Espaa;2010.
2) Lehninger AL, Cox MM. Principios de bioqumica. 5 ed.Barcelona:
Omega; 2009.
3) Lpez D, Sandoval A. Electroforesis. En: De Len J,director. Biologa
molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud.
1st ed. Mxico: McGraw-Hill Interamericana Editores;2013.p 110-19.