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Para determinar la concentracin de protenas totales presente en una muestra mediante
Bradford, es necesario interpolar en una curva de calibracin la cual es llevada a cabo
utilizando una protena patrn de concentracin conocida, la cual suele ser la Albmina
Srica Bovina.
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Tabla II. Principales mtodos para la cuantificacin de protenas, principales ventajas e
inconvenientes
PROTOCOLO
OBJETIVO
MATERIALES
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visto que participa en la regulacin de proliferacin/diferenciacin, procesos
regenerativos, mantenimiento de clulas madres y su disfuncin lleva a enfermedades
degenerativas y cncer. En s, -catenina es la responsable de la entrada al ncleo y la
activacin de genes de respuesta a Wnt. Por esta razn mutaciones en -catenina o en
esta va llevan a la sobreexpresin de los genes blancos. Una forma de activar la va Wnt
es induciendo la estabilizacin de -catenina en las clulas, lo que se realiza estimulando
las clulas con Cloruro de Litio (LiCl).
3- Buffer de lisis celular: Est diseado para promover una lisis rpida y total de las
clulas en cultivo sin la necesidad de raspado o ciclos de congelamiento y
descongelamiento.
4- Reactivo de Bradford: se prepara mezclando 10 mg de Comassie Blue G-250
con 10 ml de cido fosfrico al 88% y 4,7 ml de etanol absoluto. Se aade H2O hasta 100
ml. Se filtra a travs de papel de filtro y se guarda en oscuridad.
2. Agregar 300 l de buffer de lisis por placa. Re-pipetear para homogenizar y llevar
a un tubo de 1,5 ml. Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos.
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anteriores. Para conocer la cantidad de protenas de la muestra (g), se determina la
absorbancia de la misma y se interpola en la curva de calibracin.
REFERENCIA
BRADFORD, M.M.; A rapid and sensitive method for the quantification of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72: 248-
254 (1976).
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