UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE INGENIERIA
INFORME DE LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA
INTEGRANTES:
MIGUEL ANGEL BEDOYA CARMONA
DAVID ALEXIS INSUASTY RIASCOS

SESION 3: Cromatografa en capa fina

Objetivos:
1. Separar una mezcla de compuestos orgnicos en solucin, mediante
cromatografa en capa fina.
2. Ensayar varias mezclas de solventes en diferentes proporciones y escoger
cul de ellas efecta la mejor separacin.
3. Identificar cada uno de los compuestos separados comparndolos con
muestras patrones.
4. Calcular el valor del RF para cada compuesto en la proporcin de solvente
escogida.

INTRODUCCION:
Cromatografa en capa fina:
La cromatografa de capa fina es un procedimiento que se utiliza para separar
molculas relativamente pequeas. En la biologa celular se utiliza
frecuentemente para separar azcares simples, lpidos, aminocidos,
nucletidos, metabolitos, y ocasionalmente para separar cadenas cortas de
polipptidos y cidos nucleicos. Al igual que otras cromatografas, consiste de
una fase estacionaria y una fase mvil y el principio es el mismo: la sustancia
de inters se adherir a la fase estacionaria o se mover con la fase mvil,
viajando una distancia que es inversamente proporcional a la afinidad por la
fase estacionaria.

La fase estacionaria puede ser variada. Puede ser de papel, de celulosa o de un

gel de silicato (vidrio molido bien fino) unido a una superficie slida (una placa
de vidrio, aluminio, plstico o papel). Esta superficie slida puede ser rgida o
flexible. El tipo de fase estacionaria que se utilice en un experimento
depender del tipo de molculas que se quieran separar. Incluso vienen
algunas placas con indicadores fluorescentes. La fase estacionaria consiste de
un solvente que puede ser agua, un solvente orgnico o una mezcla de ambos.

La CCF (cromatografa de capa fina) es una tcnica analtica y tiene como

objetivo el anlisis de una mezcla de componente, el proceso es similar a la
cromatografa de papel con la ventaja de que se desarrolla ms rpidamente,
proporciona mejores separaciones y se puede elegir entre diferentes
adsorbentes. La CCF es una tcnica estndar en el laboratorio de qumica
orgnica. Debido a su simplicidad y velocidad, la CCF se utiliza a menudo para
monitorizar las reacciones qumicas y tambin para el anlisis cualitativo de los
productos de una reaccin, puesto que permite conocer de manera rpida y
sencilla cuntos componentes hay en una mezcla.

Procedimiento

Una placa de CCF es una lmina de vidrio, metal o plstico recubierta con una
capa delgada de un slido adsorbente (gel de slice o almina). Se deposita
una pequea cantidad de la muestra problema en disolucin en un punto en la
parte inferior de la placa. Entonces la placa se introduce en una cubeta
cromatogrfica, de forma que slo la parte inferior de la placa queda
sumergida en el lquido. Este lquido o eluyente es la fase mvil y asciende por
la placa de CCF por capilaridad.

A medida que el eluyente pasa por el lugar donde est la mancha de la mezcla
problema se establece un equilibrio entre las molculas de cada uno de los
componentes en la mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en
disolucin.

En principio, los componentes se diferenciarn en solubilidad y en la fuerza de

su adsorcin, de forma que unos componentes se desplazarn ms que otros.
Cuando el eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la
cubeta, se seca, y los componentes separados de la mezcla se visualizan
despus de dejarlos dos minutos en la cmara cromatogrfica dentro de la
campana de extraccin.

Visualizacin de las manchas

Si los compuestos son coloreados al sacarlos de la cmara cromatogrfica se

pueden observar las manchas a simple vista. Si no es as, hay varios mtodos
para visualizar las manchas correspondientes a cada componente de la mezcla.

1. Utilizar luz ultravioleta (UV254) para observar la placa. Normalmente se

adiciona un colorante fluorescente al adsorbente, de forma que la placa sea
fluorescente en todas partes excepto donde haya una mancha
correspondiente a un compuesto orgnico.

2. Utilizar reveladores, por ejemplo, vapores de yodo que es un reactivo

inespecfico.

3. Emplear reactivos especficos para desarrollar coloracin en las manchas.

Esto se puede hacer sumergiendo la placa de CCF en una disolucin que los
contenga o en forma de spray.
Nosotros en esta prctica de laboratorio utilizamos el segundo mtodo en las
cmaras cromatogrficas que estaban dispuestas en la campana de extraccin.

Clculo del factor de retencin Rf

Cuando son visibles, se puede determinar para cada una de las manchas el
valor de Rf (factor de retencin), o la distancia que cada compuesto se
desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un Rf caracterstico que depende
del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, pero es
independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a
identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un
compuesto conocido (preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa
de CCF).

Despus de hacer el revelado en las cmaras cromatogrficas y como se puede

evidenciar en las imgenes, la placa ms eficiente fue la de la mezcla de
hexano-acetato de etilo 6:4.

-El B-Naftol es poco polar.

Rf=1.2/3.8=0.32

-El resorcinol es polar, ms polar que el B-Naftol

Rf=2/3.8=0.53
-El cido glico es muy polar.

Rf=3.5/3.8=0.92

Despes de analizar las polaridades, el Rf y la placa cromatogrfica 6:4,

podemos concluir que el componente a determinar era el B-Naftol ya que la
distancia recorrida corresponde al B-Naftol de la muestra de tres componentes.

Podemos concluir tambin que la polaridad es directamente proporcional a la

polaridad.

METODOLOGIA

Materiales:

- 2 placas cromatogrficas
- 2 cmaras
- Slica gel
- Cmara de yodo
- 2 capilares

Sustancias:

- Mezcla de cido glico, resorcinol y -naftol

- Muestras problema: solucin de cido glico, resorcinal y -naftol.
- Acetato de etilo
- Hexano

Seccin experimental:

1. Marcamos las dos placas cromatogrficas primeramente con una lnea gua
ms o menos a medio centmetro de la parte inferior de la placa, y
posteriormente marcamos los dos puntos donde vamos a sembrar la
muestra patrn y la muestra con los 3 compuestos orgnicos, hacemos la
misma marcacin en la segunda placa, y marcamos cada placa segn la
proporcin en la que vaya a ser introducida.
2. Preparamos los capilares de tal manera que puedan absorber las sustancias
que van a ser sembradas.
3. Sembramos las muestras segn como habamos marcado en la placa, la
sumergimos un poco en el eluyente y despus marcamos con otra lnea
segn hasta donde avanz el solvente. Luego las llevamos a las cmaras
que contienen la mezcla de hexano acetato de etilo con las dos
proporciones, 8:2 y 6:4, despus marcamos con otra lnea segn hasta
donde avanz el solvente.
4. Por ltimo se introdujeron en una cmara de yodo.

Discusin y preguntas

1. Existen diferentes criterios de clasificacin de la cromatografa:

1.1Por la naturaleza de sus fases:

- Cromatografa lquido - lquido

- Cromatografa gas - lquido
- Cromatografa lquido - slido
- Cromatografa gas - slido

1.2Atendiendo al proceso qumico - fsico que va a protagonizar el proceso de

separacin: siendo este el criterio ms coherente de clasificacin:

- Cromatografa de Adsorcin (lquido - slido o cromatografa de fases

normales).
- Cromatografa de Reparto (o lquido - lquido), se basa en las caractersticas
de solubilidad relativa de los solutos entre la fase mvil y una fase
estacionaria de un lquido no polar. La fase lquida se impregna a un soporte
inerte de slice o, en el caso de cromatografa de fase invertida, se une
qumicamente.
- Cromatografa de Intercambio inico.
- Cromatografa de Exclusin.

1.3Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase

estacionaria:
1.3.1
- Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o
sobre un papel, las principales tcnicas son :

- Cromatografa en papel
- Cromatografa en capa fina (TLC)

1.3.2 Cromatografa en columna: La fase estacionaria se sita dentro de una

columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:

- Cromatografa de gases (GC)

- Cromatografa lquida (LC)
- cromatografa lquido - lquido
- cromatografa slido - lquido

2. Cromatografa y electroforesis

2.1cromatografa es un proceso que se puede utilizar para separar los diversos

componentes de una mezcla. Hay diferentes tipos en uso, incluyendo gas,
 lquido, papel y la cromatografa de gel permeable. ste proceso puede
llegar a ser muy til especialmente con mezclas complejas.

La tcnica cromatogrfica es muy til en una variedad de campos

incluyendo ciencias puras, aplicadas, medicina forense y atletismo entre
otros. El proceso se basa en el hecho de que diferentes molculas se
comportan de manera diferente cuando se disuelven con un solvente y se
mueven a travs de un medio absorbente.

Un ejemplo muy simple es el caso del que se presenta con una marca de
tinta en un pedazo de papel. El papel podra ser sumergido en agua, la
accin capilar del agua har que se disperse a travs del papel. A medida
que la tinta se mueve sus ingredientes se separaran, revelando un patrn
distintivo que podra ser utilizado para determinar los componentes de la
tinta.

2.2La electroforesis es una cromatografa, pero la fuerza que hace mover a las
molculas es un campo elctrico que las separa. Es una tcnica para la
separacin de molculas (protenas o cidos nucleicos) sobre la base de su
tamao molecular y carga elctrica, en cambio en una cromatografa comn
son las propiedades mismas de las molculas que hacen que se separen,
por ejemplo, su solubilidad en diferentes lquidos, como en el caso de agua
y alcohol.

3. La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios

para realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy
potente no requiere de ningn tipo de equipamiento.

La fase estacionaria est constituida simplemente por una tira de papel de

filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de
la solucin y evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado como
fase mvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la tira de
papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de un
recipiente que contiene fase mvil en el fondo.

Despus de unos minutos cuando el solvente deja de ascender o ha llegado

al extremo se retira el papel y seca. Si el solvente elegido fue adecuado y
las sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color
separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se
somete a procesos de revelado.

Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la

eleccin del solvente y la del papel de filtro.

4. Algunos de los solventes ms utilizados son:

- Hexano (muy apolar)

- Diclorometano (bastante apolar)
- ter dietlico (algo polar)
- Acetato de etilo (bastante polar)
- Metanol (muy polar)

5. La eleccin del disolvente depende de las sustancias que se va a separar y

del soporte (gel de slice o almina). El agua se puede utilizar, pero tambin
el hexano, o el THF, o una mezcla de 2 o 3 disolventes, normalmente el
agua se usa para separar sustancias polares en cromatografa.

Una razn por la cual no podra servir como solvente se debe a que no es
muy voltil y tardara demasiado tiempo en ascender por la fase
estacionaria de slica, pero la principal razn es que al ser un compuesto
muy polar no interacciona con los solutos que en su mayora son
compuestos orgnicos, esto hace del agua una psima fase mvil en la
cromatografa de capa fina.

6. Para aumentar la polaridad de un eluente con hexano ter, se debe

aumentar la cantidad de ter debido a que este es el nico compuesto polar
de los dos, el hexano es un compuesto apolar como cualquier alcano.

7. En un eluente benceno cloroformo, solo el cloroformo es una sustancia

polar, el benceno es completamente apolar, por lo tanto se debe disminuir
la concentracin o proporcin del cloroformo en eluyente, es decir, hay que
aumentar el benceno.

8. Diferencia entre adsorcin y absorcin

La adsorcin: es un proceso fsico o qumico por el cual tomos, iones o

molculas son atrapadas o retenidas en la superficie de un material.
Absorcin: es un proceso fsico o qumico en el cual tomos, molculas o
iones pasan de una primera fase a otra incorporndose al volumen de la
segunda fase.
Por tanto en la absorcin una sustancia se introduce en la estructura de
otra, y por otro lado la adsorcin es un proceso superficial, la sustancia
adsorbida no se introduce en el volumen del cuerpo, solo se adhieren a su
superficie.
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html
http://www.uprm.edu/biology/profs/velez/fina.htm
http://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-CROMATOGRAF
%C3%8DA.pdf
http://laboratorio-quimico.blogspot.com.co/2013/11/que-es-cromatografia-y-
para-que-sirve.html