Enzimas

Santiago Imbachi ; ngela Suley Cruz; Daniel Daz Snchez

edierimbachi@unicauca.edu.co; ascruz@unicauca.edu.co
danieladiazs@unicauca.edu.co.
Ingeniera Agropecuaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad del
Cauca.
Grupo No. 7
Fecha de entrega 14/0/1

RESUMEN

En la prctica Enzimas se llevaron a cabo cuatro procedimientos diferentes con

el fin de evaluar las caractersticas y estructura de las enzimas: amilasa salival e
invertasa, para esto se hizo variacin de temperatura, pH, sustrato y adicin de
sales.

DATOS Y RESULTADOS.

Tabla 1. Resultados obtenidos para la Labilidad trmica de las enzimas.

Tub Enzima Condiciones Sustrato Incubacin Coloracin Resultad

o experimento con yodo o

1 Amilasa Hervir 1 2 Almidn 10min, Azul +

m 37C
2 Amilasa Almidn 10min, Incoloro -
37C
3 Amilasa Hielo a 0C Almidn 10min, 0C Incoloro -

Tabla 2. Resultados obtenidos para la Influencia del pH sobre la actividad de

las enzimas.

Tub Enzima pH del Sustrato Incubacin Coloracin Resultado

o medio con yodo (+/-)
1 Amilasa 5 Almidn 10min, 37C Amarillo -
2 Amilasa 6.8 Almidn 10min, 37C Incoloro +
3 Amilasa 8 Almidn 10min, 37C Incoloro +
Tabla 3. Resultados obtenidos para la Especificidad de las enzimas.

Tub Sustrato Enzima Incubacin Reaccion Reaccin Resultado

lugol Fehling (+/-)
1 Almidn Amilasa 10 min Incolora -
37C
2 Almidn Invertas 10 min Incolora -
a 37C
3 Sacaros Amilasa 10 min Azul
a 37C
4 Sacaros Invertas 10 min Violeta
a a 37C

Tabla 4. Resultados obtenidos para la Influencia de los activadores e inhibidores.

Tub Sustrato Enzima Sustancia Incubacin Coloracin Resultad

o aadida con yodo o
(+/-)
1 Almidn Amilasa NaCl (1%) 10min, 37C Ninguna
2 Almidn Amilasa CuSO4 (1%) 10min, 37C Azul

Discusin de resultados

Labilidad trmica de las enzimas.

En esta prctica los aumentos de temperatura hace que se aceleran las

reacciones qumicas, donde por cada 10C la velocidad de reaccin se duplica; sin
embargo, hacer protenas, a partir de cierta temperatura se empiezan a
desnaturalizar por el calor, igual a como sucedi en el tubo N 1, en donde esta
enzima se desnaturalizo a causa de la temperatura y no catalizo el sustrato, al no
catalizarse el sustrato el resultado final de la prueba es un color azul, este color se
produce debido a que el lugol reacciona con almidn. El almidn en contacto con
unas gotas de reactivo lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color
azul violeta caracterstico, el fundamento de esta prueba es la coloracin
producida por el lugol que se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de
la molcula de almidn, por lo tanto, no es una verdadera reaccin qumica, si no
que se forma un compuesto de inclusin que modifica a las propiedades fsicas de
esta molcula, apareciendo la coloracin azul.

En el tubo N 2 hay un caso diferente al primer tubo, debido a que, en este tubo, la
amilasa que se encuentra en este no se ha expuesto a ningn cambio de
temperatura, por lo que este si acta con el almidn, catalizndolo para
transformarlo en azucares ms simples, como la amilosa, amilopectina y
finalmente la glucosa, las molculas que eran complejas pasan a ser ms simples,
debido a que el glucgeno ha sido degradado y a lo que se aade el lugol, este
arroja una coloracin transparente, ya que no se encuentra resultados de
glucgeno.

Para el tubo N 3 el resultado es igualmente una coloracin transparente,

negativa, esto se debe a que la amilasa hace un cambio qumico verdadero con el
almidn, al haberla colocado en un vaso con hielo hace que esta no se
desnaturalice en su totalidad, haciendo que, al agregar almidn a esta sustancia,
haya una reaccin entre estas dos y de nuevo colocando esta mescla a una
temperatura de 0C durante 10 minutos se logra que la reaccin de la mescla
permanezca en su estado original sin llegar a desnaturalizarse, luego al haber
agregado lugol, este no logra introducirse entre las molculas de almidn
fcilmente dando como resultado una coloracin clara o incolora que es negativa
para los resultados de obtencin de glucgeno.

Influencia del pH sobre la actividad de las enzimas

En este procedimiento usualmente se requiere que la enzima y el substrato tengan

grupos qumicos en una forma inica particular para poder interactuar; a efectos
de PH cidos extremos pueden ocasionar la desnaturalizacin de las enzimas,
debido a que la estructura con estos cambios es posible modificar las
interacciones inicas que intervienen en la estabilidad de la enzima en su estado
nativo, motivo por el cual en el procedimiento del primer tuvo, el resultado es una
coloracin amarilla que indica una prueba positiva para el lugol, esto quiere que la
encima no hidroliza completamente al almidn por el efecto que produce el PH, de
lo contrario el resultado final sera incoloro, es decir negativa para el lugol. De esta
manera puede decirse que la encima trabaja, mejor a un PH bsico.

Para el tubo N 2 el experimento arrojo una coloracin negativa para el almidn,

debido a que la enzima se catalizo correctamente al sustrato (almidn), donde su
actividad cataltica fue ptima e igualmente sucede para la prueba del tubo N 3
donde indica que la enzima tambin se lig completamente al sustrato y por tal
causa su actividad cataltica fue totalmente ptima.

Especificidad de las enzimas.

En una reaccin catalizada enzimticamente, la enzima se combina

temporalmente con el reactivo o el sustrato, formando un complejo enzima-
sustrato. Entonces, a medida que la reaccin avanza, el producto se libera y la
enzima vuelve a su estado original.
La enzima es, generalmente, ms grande que el sustrato y la combinacin de la
enzima y el sustrato depende, normalmente, de fuerzas dbiles, tales como
puentes de hidrgeno, fuerzas de van der Waals e interacciones hidrofbicas para
unir la enzima con el sustrato. La pequea parte de la enzima a la que se une el
sustrato se conoce como el sitio activo de la enzima.
Las enzimas pueden catalizar la transformacin de apenas un sustrato o una
familia de sustratos relacionados estructuralmente, catalizando solo una de las
posibles reacciones que ese substrato puede experimentar. Cuando la enzima
solo puede actuar sobre un tipo de sustrato, se dice que la enzima muestra
especificidad absoluta para el substrato.
Esta especificad se debe a la complementariedad que debe existir entre el
sustrato y el centro activo de la enzima.

En esta prueba para el tubo N1 la coloracin oscura se da porque el lugol se

introduce en las molculas de los enlaces de almidn, debido a la incubacin de
los 10 minutos, que hace una reaccin cataltica de la enzima. La amilasa salival
presenta especificidad con el almidn como sustrato generando un resultado
positivo para esta prueba. Cuando se llev a cabo la interaccin de la amilasa con
la sacarosa el resultado fue negativo, pues no resulta un buen sustrato para la
misma.

Para la invertasa el sustrato ideal a las condiciones de trabajo es la sacarosa a lo

cual dio como resultado positivo, en la reaccin de Fehling, por lo que cuando se
llev a contacto con el almidn, el resultado de la prueba fue negativo en la
reaccin de lugol.

Influencia de los activadores e inhibidores.

Tub Sustrato Enzima Sustancia Incubacin Coloracin Resultad

o aadida con yodo o
(+/-)
1 Almidn Amilasa NaCl (1%) 10min, 37C Ninguna
2 Almidn Amilasa CuSO4 (1%) 10min, 37C Azul

Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su

actividad puesto que el Bloqueo de una enzima puede matar a un organismo patgeno o
corregir un desequilibrio metlico. Sin embargo no todas las molculas que se unen a las
enzimas sin inhibidores, los activadores enzimticos se unen a las enzimas y se incrementan
su actividad. La unin de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo
de la enzima y obstaculizar que la enzima catalice su reaccin correspondiente. La unin
del inhibidor puede ser reversible e irreversible. Normalmente los inhibidores irreversibles
reaccionan con la enzima de forma covalente y no clasifican su estructura qumica a nivel
de residuos esenciales de los aminocidos necesarios para la actividad enzimtica.
En cambio los reversibles se unen a la enzima de forma no covalente donde da lugar a
diferentes tipos de inhibicin dependiendo si el inhibidor se una a la enzima, al complejo:
enzima sustrato o ambos
-Se unen a las enzimas mediantes interacciones no covalentes= puentes de hidrogeno,
enlaces inicos
- Los inhibidores y el sitio activo se combinan para producir una unin fuerte y especifica.
Al contrario que ocurre con el sustrato y los inhibidores irreversibles no experimentan
reacciones qumicas cuando se une a la enzima y pueden ser eliminados fcilmente por
dilucin o por dilisis.
Se realiza la combinacin de enzima: amilasa y sustrato: almidn, ya que se sabe que este
es un buen sustrato para la enzima y que a partir de esto se puede analizar la velocidad de la
reaccin adicionando sustancias tales como NaCl y CuSO 4, para generar un anlisis del
comportamiento de los mismos en reaccin con la enzima-sustrato formados.
Observando los resultados en la tabla 4 se encontr que el sulfato de cobre fue un inhibidor
mientras que el NaCl fue activador, esto coincide con lo encontrado en la teora, es
importante tener en cuenta que la inhibicin tambin depende de la cantidad de sustrato, ya
que si se aumenta la cantidad de NaCl, a pesar de que este es un activador la enzima se
precipita por saturacin de la solucin en la que se encuentra la enzima.