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Originalartikel Schattauer 2012 375

Vorkommen und Bekmpfung des Clostridium-perfrin-


gens-Typ-A-assoziierten Durchfalls der Saugferkel unter
besonderer Bercksichtigung der Immunprophylaxe
S. Springer1; J. Finzel1; V. Florian1; H. Schoepe2; G. Woitow3; H.-J. Selbitz1
1IDT Biologika GmbH, Geschftsbereich Tiergesundheit, Forschung und Entwicklung; 2Institut fr Hygiene und Infektionskrankheiten der Tiere, Justus-Liebig-Universitt Gieen;
3Nutztierwissenschaftliches Zentrum Merbitz, Martin-Luther-Universitt Halle-Wittenberg

Schlsselwrter Key words


Alpha-Toxin, Beta2-Toxin, Vakzine, Intoxikationsmodell Alpha-toxin, beta2-toxin, vaccine, challenge model

Zusammenfassung Summary
Gegenstand und Ziel: Clostridium perfringens Typ A wird hufig in Objective: Clostridium (C.) perfringens type A is often associated with
Verbindung mit Durchfllen von Saugferkeln isoliert. Die Bedeutung diarrhoea in suckling piglets. The impact of the alpha () and beta ()2
des Alpha-(-) und Beta()2-Toxins fr die Pathogenese der Erkran- toxins on the pathogenesis of the disease has not been conclusively
kung ist nicht abschlieend geklrt. Zur Bekmpfung der Erkrankung answered. Previously, autologous vaccines were used to control this
wurden in der Vergangenheit insbesondere stallspezifische Impfstoffe disease. The aim of our investigation was the classification of C. per-
eingesetzt. Ziel der Untersuchungen war die Typisierung und quantita- fringens strains and the quantitative determination of the and 2
tive Bestimmung des - und 2-Toxins von C.-perfringens-Stmmen, toxins during the production of autologous vaccines. The efficacy of a
die im Rahmen der Herstellung bestandsspezifischer Impfstoffe isoliert commercial vaccine against the C. perfringens type A associated diar-
wurden. Mithilfe eines Intoxikationsmodells wurde weiterhin die Wirk- rhoea was tested using an animal intoxication model. Material and
samkeit eines kommerziell erhltlichen Impfstoffs gegen den C.-per- methods: A total of 1,434 C. perfringens strains from piglets with
fringens-Typ-A-assoziierten Durchfall der Saugferkel geprft. Mate- diarrhoea were classified using a multiplex PCR in the first part of the
rial und Methoden: Im ersten Teil der Untersuchungen wurden 1434 examination. In parallel, the and 2 toxin content was determined
C.-perfringens-Stmme, die von an Durchfall erkrankten Ferkeln quantitatively using ELISA tests. In the second part of the study 18 gilts
stammten, mithilfe einer Multiplex-PCR typisiert. Gleichzeitig wurde were vaccinated twice in the last third of gestation to evaluate the
das - und 2-Toxin-Bildungsvermgen der Stmme mittels ELISA- and 2 toxoid containing C. perfringens type A vaccine (Clostriporc A,
Tests untersucht. Zur Prfung der - und 2-toxoidhaltigen C.-perfrin- IDT Biologika GmbH). Results: Of the C. perfringens strains which
gens-Typ-A-Vakzine fr Schweine (Clostriporc A, IDT Biologika GmbH) were found, 87.9% were type A (cpa, cpb2), 6.3% type A (cpa), and
wurden im zweiten Teil der Untersuchungen 18 Jungsauen im letzten 5.8% type C (cpa, cpb, cpb2). Low to middle toxin-producing strains
Drittel der Trchtigkeit zweimal im Abstand von 3 Wochen immuni- often strongly expressed the 2 toxin. The vaccination led to the pro-
siert. Ergebnisse: 87,9% der Stmme gehrten zur Toxovar A (cpa, duction of antibodies against the and 2 toxins, which were trans-
cpb2), 6,3% zur Toxovar A (cpa) und 5,8% zur Toxovar C (cpa, cpb, ferred to the offspring by colostrum. Piglets were significantly pro-
cpb2). Bei der quantitativen Untersuchung des Toxinbildungsverm- tected (p < 0.05) by the antibodies after having been challenged with
gens der C.-perfringens-Typ-A-Stmme (cpa, cpb2) zeichneten sich an and 2-containing supernatant of a heterologous C. perfringens
Stmme, die geringe oder mittlere Gehalte des -Toxins bildeten, hu- type A strain. Conclusion and clinical relevance: These results un-
fig durch eine starke Expression des 2-Toxins aus. Die geimpften derline the importance of and 2 toxin producing C. perfringens
Sauen bildeten Antikrper gegen das - und 2-Toxin, die ber das type A strains in diarrhoea in suckling piglets. Using the intoxication
Kolostrum auf die Nachzucht bertragen wurden und neugeborene model, this vaccine showed significant protective effects against the
Ferkel signifikant (p < 0,05) vor einer Intoxikation mit einem - und and 2 toxins.
2-toxinhaltigen berstand eines heterologen C.-perfringens-Typ-A-
Stammes schtzten. Schlussfolgerung und klinische Relevanz: Die
Ergebnisse unterstreichen die Bedeutung von - und 2-toxinbilden-
den C.-perfringens-Typ-A-Stmmen im Durchfallgeschehen der Saug-
ferkel. Im Intoxikationsmodell lie sich eine deutliche Schutzwirkung
der eingesetzten Vakzine vor dem - und 2-Toxin nachweisen.

Korrespondenzadresse Occurrence and control of the Clostridium perfringens type A associated diar-
Dr. Sven Springer rhea of the suckling pigs with special consideration of the immunoprophylaxis
PF 400214 Tierrztl Prax 2012; 40 (G): 375382
06855 Dessau-Rolau Eingegangen: 5. Juni 2012
E-Mail: sven.springer@idt-biologika.de Akzeptiert nach Revision: 2. Oktober 2012

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376 S. Springer et al.: Clostridium-perfringens-Typ-A-assoziierter Durchfall der Saugferkel

Einleitung Molekulargewicht von 27,67 kDa, wurde das erste Mal 1997 von
Gibert et al. (5) beschrieben. Die Wirkungsweise des Toxins ist
Clostridium (C.) perfringens ist ein grampositives, anaerob wach- nicht vollstndig geklrt (21). Smedley III et al. (17) und Fisher (3)
sendes Stbchen, das aufgrund der Bildung seiner majorletalen To- vermuten eine porenformende Aktivitt des Toxins, die zu einer
xine in die Toxovare (Toxintypen) AE eingeteilt wird (Tab. 1). Vernderung der Permeabilitt der Zellmembran und damit zur
Neben den majorletalen Toxinen bildet der Erreger eine Reihe Zerstrung der Membran und zum Zelltod fhrt.
minorletaler Toxine, z. B. das Perfringolysin O (Theta-[-]Toxin), Darber hinaus begnstigen Faktoren, die eigentlich der Im-
das Enterotoxin und das 2-Toxin, die als Virulenzfaktoren bei ver- munglobulinpassage in den ersten Lebenstagen dienen, die Ver-
schiedenen Krankheitsbildern von Bedeutung sind. Das erst krz- mehrung von C. perfringens (Toxovar A und C) und die Wirkung
lich beschriebene NetB-Toxin (necrotic enteritis toxin B) gehrt zu der Toxine. Dazu gehren eine geringe Aziditt des Magensaftes
den -porenformenden Toxinen, wird in erster Linie von C.-per- der Saugferkel, die geringe Eigensynthese proteolytischer Enzyme
fringens-Typ-A-Stmmen gebildet und wurde bisher insbesondere und der Nachweis von Antitrypsin in der Sauenmilch. Da Trypsin
im Zusammenhang mit der Nekrotisierenden Enteritis (NE) der die Wirkung des -Toxins beeinflusst und das - und 2-Toxin
Hhnervgel nachgewiesen (11). zerstrt (20), knnen diese Toxine ihre Wirkung im Ferkeldarm in
Grere Bedeutung fr das Schwein besitzen die Toxovare A den ersten Lebenstagen ungehindert entfalten.
und C von C. perfringens. Die Toxovar C verursacht die NE der Zur Therapie des C.-perfringens-Typ-A-assoziierten Durchfalls
Saugferkel. Diese Erkrankung verluft meist akut bzw. perakut werden vorzugsweise oral zu applizierende penicillinhaltige Pr-
und fhrt in betroffenen Bestnden zu hohen Saugferkelverlusten. parate eingesetzt. Dabei ist aber das Auftreten penicillinresistenter
Ein entscheidender Faktor in der Pathogenese der NE ist das Stmme zu beachten (14). Gleichzeitig kamen in der Vergangen-
-(1-)Toxin (7, 10). heit zur Prophylaxe insbesondere bestandsspezifische Impfstoffe
C. perfringens Typ A gehrt, im Gegensatz zur Toxovar C, in den zum Einsatz. Probleme bereiteten hier zum Teil die Auswahl eines
ersten Lebenswochen zur Normalflora der Saugferkel (12), wird geeigneten Impfstamms und die Haltbarkeit dieser Impfstoffe.
aber gleichzeitig fr das Auftreten von Durchfllen bei Saugferkeln Nach dem heutigen Kenntnisstand stellt der C.-perfringens-
verantwortlich gemacht (4, 6, 16). Die Ferkel erkranken in der Re- Typ-A-assoziierte Durchfall der Saugferkel eine Faktorenkrankheit
gel an einer sers-katarrhalischen Enteritis mit vorbergehenden dar (18), sodass bei der Bekmpfung auch die prdisponierenden
toxmischen Allgemeinstrungen (10), die durch eine hohe Mor- Faktoren beachtet werden mssen. Dazu zhlen die Bildung von
biditt, aber, anders als bei der NE, durch eine geringe Mortalitt Sporen durch C. perfringens, die den Einsatz sporenabttender Mit-
charakterisiert ist. Die Durchflle treten bereits in den ersten Le- tel bei der Stalldesinfektion bedingen. Andererseits sollte auf eine be-
benstagen auf und bedingen hufig verminderte Gewichtszunah- darfsgerechte Ftterung der Sauen und alle Erkrankungen der Mut-
men und das vermehrte Auftreten von Kmmerern. Schwere Ver- tertiere geachtet werden, die mit der Geburt lebensschwacher Ferkel
lufe wurden im Zusammenhang mit der Geburt von lebens- und/oder einer Verminderung der Milchleistung einhergehen.
schwachen Wrfen infolge einer Infektion mit dem PRRSV und Ziel der eigenen Untersuchungen war die Analyse von C.-per-
nach Mischinfektion mit Rotaviren, enterotoxischen E. coli und fringens-Isolaten, die im Rahmen der Produktion von bestands-
Isospora suis beschrieben (6, 9). Die Pathogenese der Erkrankung spezifischen Impfstoffen isoliert wurden. Dazu erfolgte die Ty-
ist nicht vollstndig geklrt. Alle C.-perfringens-Stmme, auch pisierung mittels PCR und eine quantitative Untersuchung der
Stmme der Toxovar A, bilden das -Toxin (Phospholipase C). Expression des - und des 2-Toxins. Auf der Grundlage dieser
Gleichzeitig lassen sich aus erkrankten Saugferkeln in der Regel Untersuchungen wurde eine C.-perfringens-Typ-A-Toxoidvakzine
C.-perfringens-Stmme isolieren, die das Gen fr die Produktion entwickelt und deren Immunogenitt im Anschluss im Tierver-
des 2-Toxins (cpb2) tragen. Das 2-Toxin, ein Protein mit einem such geprft.

Tab. 1 Einteilung von C. perfringens auf der Grundlage der majorletalen


Toxine Material und Methoden
Table 1 Classification of C. perfringens based on major lethal toxins.
Untersuchung der bei der Herstellung bestandsspezi-
Toxovar Majorletale Toxine Minorletale Toxine fischer Impfstoffe isolierten C.-perfringens-Stmme
2 cpe NetB
Von Mrz 2005 bis Februar 2008 wurden im Rahmen der Her-
A + (+) (+) (+) (+)
stellung von bestandsspezifischen Impfstoffen insgesamt 1434 C.-
B + + + (+) (+) perfringens-Stmme typisiert und die Bildung des - und des
C + + (+) (+) (+) (+) 2-Toxins untersucht. Alle Stmme wurden aus an Durchfall er-
D + + (+) (+) (+) krankten Ferkeln isoliert. In den meisten Bestnden kam dabei
bereits eine kommerziell verfgbare Muttertiervakzine gegen die
E + + (+) (+) (+)
NE zum Einsatz, die aber nicht zum gewnschten Erfolg fhrte.

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Die Typisierung der C.-perfringens-Stmme erfolgte mithilfe einer Tab. 2 Erhebung der klinischen Symptome nach der Intoxikation (Score)
Multiplex-PCR (1). Diese PCR erlaubt den Nachweis der Toxin- Table 2 Evaluation of clinical symptoms after intoxication (score).
gene fr die majorletalen Toxine (cpa), (cpb), epsilon () (etx)
Parameter Score
und jota () (iap) sowie die minorletalen Toxine 2 (cpb2) und das
Enterotoxin (cpe). Zur Quantifizierung des - und des 2-Toxins Allgemeinbefinden 0 = ungestrt
(klinischer Gesamteindruck) 1 = gestrt
wurden die Stmme in einem Flssigmedium kultiviert und mit
einem ELISA untersucht. Haltung 0 = normal, alle vier Gliedmaen
Sandwich-ELISA zum Nachweis des - und 2-Toxins: Zur Be- untersttzen den Rumpf gleichmig,
Tier bewegt sich physiologisch
stimmung des - und 2-Toxin-Gehalts wurden Mikrotiterplatten
1 = schwankender Gang, Kyphose
mit monoklonalen Antikrpern gegen das - oder 2-Toxin be- 2 = Tier liegt fest
schichtet. Nicht besetzte Bindungsstellen wurden mit einer PBS-
Verhalten 0 = normal, Tier ist aufmerksam
Lsung mit 5% Milchpulver geblockt. Die zu untersuchenden Pro-
1 = apathisch
ben (Fermentationsberstnde), das Referenztoxin und eine haus- 2 = somnolent
eigene Kontrolle wurden im Anschluss in die wells verbracht und
Milchaufnahme 0 = ja
seriell verdnnt. An das Waschen schloss sich eine Detektion des
1 = nein
gebundenen Antigens mit geeigneten Kaninchenseren an. Wh-
rend der anschlieenden Inkubation mit enzymmarkierten Anti-
Kaninchen-Immunglobulinen erfolgte die Bindung des Enzyms
Meerrettichperoxidase an die polyklonalen Antikrper. Das En- Impfstamm entsprach (heterologer Challenge), intraabdominal
zym katalysierte die Umsetzung des Substrats TMB zu einer far- belastet (6000 rE/Tier -Toxin). Bis zum 4. Tag nach der Intoxi-
bigen Verbindung, deren Absorption nach Abstoppen der Reak- kation erfolgten die Erfassung von klinischen Vernderungen (All-
tion mit Schwefelsure photometrisch (OD450 nm) gemessen wur- gemeinbefinden, Haltung, Verhalten, Milchaufnahme) mithilfe
de. Die Intensitt der Farbreaktion korrelierte mit der Menge des eines Scoring-Schemas (Tab. 2) und die Bestimmung der Mor-
gebundenen Enzymkonjugats und erlaubte eine Quantifizierung talittsrate. Bei ausgeprgten klinischen Vernderungen (Somno-
des - bzw. 2-Toxin-Gehalts. Die Angabe erfolgte in rE (relativen lenz, Festliegen, keine Milchaufnahme) bzw. Tod des Tieres ergab
Einheiten) pro Milliliter. sich der maximale Score von 6. Alle Versuche wurden als kontrol-
lierte und verblindete Studien durchgefhrt. Die statistische Un-
Prfung der C.-perfringens-Typ-A-Toxoidvakzine tersuchung von Unterschieden zwischen den geimpften Gruppen
am Zieltier und den Kontrollgruppen erfolgte mit dem U-Test nach Mann und
Whitney (klinischer Score) und dem exakten Test nach Fisher
Da der C.-perfringens-Typ-A-assoziierte Durchfall eine Faktoren- (Mortalittsrate).
krankheit darstellt und ein reproduzierbares Infektionsmodell Whrend der Versuche wurden die gesetzlichen Bestimmungen
schwierig zu etablieren ist, kam ein Intoxikationsmodell auf der (Tierschutzgesetz 7, 8, 9, European Convention on the pro-
Grundlage des - und 2-Toxins zum Einsatz (19). Dazu wurden tection of animals used for scientific purpose, Revised Derective
in drei Versuchen insgesamt 18 Jungsauen (Deutsche Landrasse 86/609/EEC) eingehalten (Tierversuchsanzeige IDT A 03/2004).
Large White) 5 und 2 Wochen ante partum mit 2,0 ml der C.-per- Sandwich ELISA zum Nachweis von Antikrpern gegen das
fringens-Typ-A-Toxoidvakzine (Clostriporc A, Fa. IDT Biologika - und 2-Toxin: Zum quantitativen Nachweis von Antikrpern
GmbH) subkutan vakziniert. Die 19 Kontrolltiere erhielten eben- gegen das - und 2-Toxin wurden Mikrotiterplatten ebenfalls mit
falls subkutan ein Plazebo (physiologische Kochsalzlsung) den oben genannten monoklonalen Antikrpern gegen das -
(Tab. 3). Die tragenden Sauen wurden in Gruppen im Laufstall oder 2-Toxin beschichtet und nicht besetzte Bindungsstellen mit
auf Betonfuboden mit Stroh gehalten und zur Geburt in Kasten- einer PBS-Lsung mit 5% Milchpulver geblockt. Im Anschluss er-
stnden (Einzelhaltung) untergebracht. Bis zum 84. Trchtigkeits- folgte eine Sttigung der Antigenbindungsstellen mit einem -To-
tag bestand die Ftterung aus einem Alleinfutter fr niedertra- xin (Phospholipase C, Fa. Sigma) bzw. 2-Toxin. Dabei wurde ei-
gende Tiere, danach aus einem Alleinfutter fr laktierende Sauen. ne Reihe pro Serum (Testserum, Standardserum, Kontrollserum)
Vor der ersten und zweiten Impfung sowie zur Geburt wurden nicht mit dem Toxin, aber mit PBS-Lsung mit 5% Milchpulver
Blutproben genommen. Zur Geburt erfolgte zudem die Entnahme beschichtet. Diese Reihe diente der Erkennung unspezifischer Bin-
einer Kolostrumprobe. Die Seren und das Kolostrum wurden mit dungen und damit der Berechnung des spezifischen Signals. Nach
einem ELISA auf Antikrper gegen das - und das 2-Toxin unter- Bindung der Antikrper an das - bzw. 2-Toxin aus dem Serum
sucht. Zum Nachweis von neutralisierenden Antikrpern gegen oder Kolostrum erfolgte nach einem Waschschritt die Inkubation
das -Toxin diente der Lezithinase-Neutralisationstest. mit Meerrettichperoxidase-markiertem Anti-Schwein-Immun-
Am Tag nach der Geburt wurden ein bis zwei Ferkel der geimpf- globulin. Das Enzym katalysierte die Umsetzung des Substrats
ten Sauen und der Kontrollsauen mit einem - und 2-toxinhalti- TMB zu einer farbigen Verbindung, deren Absorption nach dem
gen berstand eines C.-perfringens-Typ-A-Stamms, der nicht dem Stoppen photometrisch bei OD450 nm gemessen wurde. Die Intensi-

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Ergebnisse
Untersuchung der C.-perfringens-Stmme im Rahmen
der Herstellung bestandsspezifischer Impfstoffe

Insgesamt 1260 (87,9%) der untersuchten C.-perfringens-Stmme,


die im Rahmen der Herstellung bestandsspezifischer Impfstoffe
typisiert wurden, gehrten zur Toxovar A (cpa) und zeigten das
Gen fr das 2-Toxin (cpb2). Weitere 90 Stmme (6,3%) konnten
ebenfalls der Toxovar A (cpa) zugeordnet werden, erlaubten aber
keinen Nachweis des 2-Toxin-Gens. 83 Stmme (5,8%) wurden
als Toxovar C (cpa, cpb) mit Nachweis des 2-Toxin-Gens (cpb2)
identifiziert.
Die Ergebnisse der quantitativen Untersuchung der Isolate auf
Abb. 1 Bildung des - und 2-Toxins in relativen Einheiten (rE) nach
Kultivierung von C.-perfringens-Stmmen (n = 1434) im Rahmen der Pro-
Bildung des - und des 2-Toxins nach Anzucht in einem Fls-
duktion bestandsspezifischer Impfstoffe sigmedium sind in Abbildung 1 dargestellt. Die Stmme wiesen
Fig. 1 Production of and 2 toxins in relative units (rE) after cultivation unter In-vitro-Bedingungen ein unterschiedliches Bildungsver-
of C. perfringens strains (n = 1,434) during the production of autologous mgen des - und des 2-Toxins auf. Dabei lieen C.-perfringens-
vaccines. Typ-A-Stmme (cpb2-negativ), die kein 2-Toxin bildeten, hufig
mittlere bis hohe Gehalte an -Toxin erkennen. Dagegen zeichne-
ten sich Stmme, die wenig -Toxin bildeten, hufig durch eine
tt der Farbreaktion korrelierte mit der Menge des gebundenen starke Expression des 2-Toxins aus.
Enzymkonjugats und erlaubte eine Quantifizierung der gebildeten
Antikrper gegen das - bzw. 2-Toxin. Die Angabe erfolgte in rE Prfung der C.-perfringens-Typ-A-Toxoidvakzine
(relativen Einheiten) pro Milliliter Serum (Kolostrum). am Zieltier
Nachweis von neutralisierenden Antikrpern gegen das -To-
xin: Das -Toxin von C. perfringens (Phospholipase C) ist in der Die Ergebnisse der Untersuchung der Seren und Kolostren auf
Lage, Lezithin zu spalten. Diese Eigenschaft fhrt nach Ausstrich Antikrper gegen das - und das 2-Toxin (Versuch 1) sind in
eines -Toxin-bildenden Stamms auf Eigelb-Laktose-Agar zur Bil- Abbildung 2 und 3 dargestellt. Geimpfte Sauen zeigten zur Ab-
dung eines opaken Hofes um die Kolonie. Diese Eigenschaft wur- ferkelung signifikant (Signifikanzniveau p < 0,05) hhere mittlere
de zum Nachweis von neutralisierenden Antikrpern gegen das Antikrpergehalte gegen das - und das 2-Toxin im Serum und
-Toxin ausgenutzt. Dazu wurden Verdnnungen des Serums Kolostrum als Tiere, die das Plazebo erhalten hatten. In den Kolos-
oder Kolostrums mit einer standardisierten -Toxin-Prparation tren aller Sauen, deren Ferkel vor der Intoxikation geschtzt waren,
gemischt und inkubiert. Danach wurden die Toxin-Antikrper- fanden sich Antikrper, die im Lezithinase-Neutralisationstest ei-
Gemische in ausgestanzte Vertiefungen einer Eigelb-Laktose- ne neutralisierende Wirkung gegen das -Toxin aufwiesen. Nur
Agarplatte verbracht und inkubiert. Beim Auftreten einer neutra- das Kolostrum einer geimpften Sau (Versuch 1) lie keine neutra-
lisierenden Wirkung konnte der opake Hof um die Vertiefung ver- lisierende Wirkung auf das -Toxin erkennen. Ein Ferkel dieser
hindert werden. Die letzte Verdnnung des Serums (Kolostrums), Sau wurde mit dem Prftoxin belastet und verendete an den Fol-
bei der eine Neutralisation auftrat, wurde als Titer angegeben. gen der Intoxikation.

Tab. 3
Versuch Gruppe Anzahl Klinischer Score Ferkel Mortalitt Ferkel
Ergebnisse der klinischen Untersuchung (klini-
der Sauen
n1 Mittelwert SA n1 gestorben % scher Score) und der Mortalitt nach Impfung
1 geimpft 5 9 0,56 1,67a 8 1b 12,5 von Sauen mit Clostriporc A und Belastung
der Ferkel mit einem - und 2-toxinhaltigen
Kontrolle 6 11 4,91 0,83 11 7 63,6 berstand eines heterologen C.-perfringens-
2 geimpft 7 13 0,15 0,55 a 13 0b 0 Typ-A-Stamms
Table 3
Kontrolle 7 13 4,77 1,01 13 8 61,5
Results of clinical examination (clinical score)
3 geimpft 6 12 0,08 0,29a 12 0 0 and mortality after vaccinating the sows with
Kontrolle 6 12 3,42 1,78 12 3 25,0 Clostriporc A and challenging the piglets with
an and 2-toxin containing supernatant of
1
Anzahl der Ferkel, SA = Standardabweichung a heterologous C. perfringens type A strain.
a
p < 0,05 (U-Test nach Mann und Whitney), bp < 0,05 (exakter Test nach Fisher)

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Abb. 2 Ergebnisse der Bildung von Antikrpern gegen das -Toxin im Se- Abb. 3 Ergebnisse der Bildung von Antikrpern gegen das 2-Toxin im
rum und Kolostrum (logarithmisch skaliert) von Jungsauen (Versuch 1) nach Serum und Kolostrum (logarithmisch skaliert) von Jungsauen (Versuch 1)
zweimaliger subkutaner Impfung mit Clostriporc A (Gruppe 1) im Vergleich nach zweimaliger subkutaner Impfung mit Clostriporc A (Gruppe 1) im Ver-
zur Kontrollgruppe (Gruppe 2). B0 zeigt die Daten vor der ersten Impfung, B1 gleich zur Kontrollgruppe (Gruppe 2). B0 zeigt die Daten vor der ersten Imp-
vor der zweiten Impfung, B2 zur Geburt (grne Box) und Kol. im Kolostrum fung, B1 vor der zweiten Impfung (gelbe Box), B2 zur Geburt (grne Box) und
(rote Box). Kol. im Kolostrum (rote Box).
Fig. 2 Results of the antibody formation against the toxin in serum and Fig. 3 Results of antibody formation against the 2 toxin in serum and co-
colostrum (in a logarithmical scale) in gilts (trial 1) after being vaccinated lostrum (in a logarithmical scale) in gilts (trial 1) after being vaccinated twice
twice (s.c.) with Clostriporc A (group 1) in comparison to the control group (s.c. ) with Clostriporc A (group 1) in comparison to the control group (group
(group 2). B0 shows the data before the first vaccination, B1 before the se- 2). B0 shows the data before the first vaccination, B1 before the second vac-
cond vaccination, B2 at birth (green box) and Kol. in colostrum (red box). cination (yellow box), B2 at birth (green box) and Kol. in colostrum (red box).

Nach der Belastung mit dem Toxin zeigten nicht geschtzte Tie-
re Apathie, lagen vermehrt und nahmen keine Milch auf. Bei der
pathologisch-anatomischen Untersuchung verendeter Ferkel war
vermehrt ein blutig-serses Transsudat in der Brust-, aber auch in
der Bauchhhle nachweisbar (Abb. 4). Weitere Befunde umfass-
ten ein alveolres Lungendem und -emphysem, Hypermie, de-
me und zum Teil Blutungen im Bereich des Dnn- und Dickdarms
sowie den Nachweis von Blut in der Harnblase. Histologisch lieen
sich ein interstitielles und alveolres Lungendem, Gefwand-
deme in den Arteriolen sowie die Ablagerung von Hmosiderin
und Hmosiderinophagen im Bereich der Blutgefe nachweisen
(Abb. 5). Ein Vergleich der Ergebnisse des mittleren klinischen
Score und der Mortalittsrate in der geimpften Gruppe und in der
Kontrollgruppe ist fr die Versuche 1 bis 3 in Tabelle 3 dar-
Abb. 4 Ansammlung eines blutig-sersen Transsudats in der Brusthhle
gestellt. Ferkel von geimpften Sauen wiesen im Vergleich zu den nach intraabdominaler Applikation eines - und 2-toxinhaltigen ber-
Ferkeln der Kontrollsauen in allen Versuchen einen signifikant stands eines heterologen C.-perfringens-Typ-A-Stamms
(p < 0,05) geringeren mittleren klinischen Score auf. In den Versu- Fig. 4 Accumulation of bloody-serous transudate in the thoracic cavity
chen 1 und 2 zeigte sich gleichzeitig eine signifikant (p < 0,05) ge- after intraabdominal application of and 2 toxin containing supernatant
ringere Mortalitt. Im dritten Versuch waren die Unterschiede in of a heterologous C. perfringens type A strain.
der Mortalitt aufgrund der geringen Anzahl gestorbener Tiere in
der Kontrollgruppe nicht signifikant.

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waren gleichzeitig positiv im Nachweis des 2-Toxin-Gens (cpb2).


Insgesamt wurden 5,8% der Stmme als Toxovar C typisiert. Alle
C.-perfringens-Typ-C-Stmme trugen das 2-Toxin-Gen. Damit
entsprechen die eigenen Ergebnisse den Angaben in der Literatur
und weisen gleichzeitig wiederholt auf die Bedeutung von C. per-
fringens Typ A fr das Durchfallgeschehen der Saugferkel hin. Wei-
terhin wird deutlich, dass C. perfringens Typ C, der Erreger der NE
der Saugferkel, nicht so hufig nachgewiesen wurde. Eine Ursache
knnte der hufige Einsatz -Toxoid-haltiger Muttertierimpf-
stoffe sein, der eine Verdrngung der Toxovar C zur Folge hat. Bei
der quantitativen Untersuchung der C.-perfringens-Typ-A-Stm-
me wiesen die Isolate zum Teil ein sehr unterschiedliches Ver-
mgen zur Bildung des - und des 2-Toxins auf. Dies knnte er-
klren, warum die Krankheit in einigen Bestnden zu schwereren
klinischen Erscheinungen fhrt. Gleichzeitig zeigten Stmme mit
einem geringen oder mittleren -Toxin-Bildungsvermgen hufig
Abb. 5 Lunge eines Ferkels nach Intoxikation (HE-Frbung): interstitielles
und alveolres Lungendem, Gefwanddem der Arteriolen (Pfeil) sowie
eine starke Bildung des 2-Toxins. Wenngleich die Wirkungsweise
Ablagerung von Hmosiderin und Hmosiderophagen (Stern) (Foto und Be- des 2-Toxins bisher nicht abschlieend geklrt werden konnte
fund: Dr. med. vet. Th. Vissiennon) (21), lassen die Ergebnisse einen deutlichen Zusammenhang zwi-
Fig. 5 Lung of a piglet (haematoxylin-eosin stain): Interstitial and alveolar schen dem quantitativen Nachweis des - und des 2-Toxins er-
lung edema, vascular wall edema of the arteriols (arrow), and deposits of kennen. Vorstellbar wre eine Verbesserung der Aufnahme des
haemosiderin and haemosiderophages (asterisk). (Picture and diagnostic -Toxins durch das 2-Toxin oder eine synergistische Wirkung der
findings: DVM Th. Vissiennon). beiden Toxine, die von Schotte et al. (15) bereits diskutiert wurde.
Das -Toxin ist eine zinkabhngige Phospholipase, die Be-
standteile von Zellmembranen, wie Phosphatidylcholin (Lezithin)
Diskussion und Sphingomyelin, zerstrt und damit letal, dermonekrotisie-
rend und hmolytisch wirkt (13). Im Gegensatz zur Praxis, in der
Im Vergleich zu den vorgestellten Ergebnissen konnten Garmory et hufig eine katarrhalische Enteritis beobachtet wird, traten nach
al. (4) bei 29 von 33 an einer Enteritis erkrankten Ferkeln (87,9%) intraabdominaler Verabreichung des Rohtoxins pathologisch-
C. perfringens Typ A nachweisen. Aus dem Darm von vier Ferkeln anatomische und histologische Vernderungen auf, die auf eine
lie sich C. perfringens Typ C isolieren. Dabei trugen 27 der C.-per- deutliche Schdigung des Gefsystems hinweisen. Diese waren
fringens-Typ-A-Stmme (82,0%) das 2-Toxin-Gen. Bueschel et al. mit hoher Wahrscheinlichkeit auf die Wirkung des -Toxins zu-
(2) untersuchten 381 C.-perfringens-Stmme, die im Zusammen- rckzufhren. Die Schwere der beobachteten Symptome wurde
hang mit einer Enteritis von Ferkeln und Lufern isoliert wurden. mit Sicherheit durch die gewhlte Applikationsroute bestimmt.
Davon gehrten 85,9% der aus Ferkeln isolierten C.-perfringens- Gleichzeitig demonstrieren die Vernderungen aber auch, welche
Stmme zur Toxovar A und 14,1% zur Toxovar C. Insgesamt wiesen Bedeutung die Toxine erlangen knnen, wenn sie resorbiert wer-
85,8% der porzinen Stmme das 2-Toxin-Gen auf. den. In den Intoxikationsversuchen lie sich zeigen, dass geimpfte
In den eigenen Untersuchungen gehrten 94,2% der unter- Sauen Antikrper gegen das - und das 2-Toxin bilden, die ber
suchten C.-perfringens-Stmme zur Toxovar A. 87,9% der Isolate das Kolostrum auf die Nachkommen bertragen werden. Bei den
Ferkeln geimpfter Sauen waren der mittlere klinische Score und die
Mortalitt signifikant geringer als bei den Ferkeln der Kontroll-
sauen. Alle Ferkel, deren geimpfte Mtter neutralisierende Anti-
Fazit fr die Praxis
krper gegen das -Toxin im Kolostrum aufwiesen, berlebten die
Nach den Ergebnissen der Untersuchung sind cpb2-positive C.-per-
Intoxikation. Demzufolge kommt den neutralisierenden Antikr-
fringens-Typ-A-Stmme bei an Durchfall erkrankten Ferkeln weit ver-
pern gegen das -Toxin eine besondere Bedeutung bei der Ausbil-
breitet. Auffallend war das unterschiedliche Toxinbildungsvermgen
dung der Schutzwirkung zu.
dieser Stmme. Gleichzeitig bestand ein Zusammenhang zwischen
dem Nachweis des - und des 2-Toxins. Der Einsatz einer kommer-
Interessenkonflikt
ziellen C.-perfringens-Typ-A-Toxoidvakzine fhrte zur Bildung von
Ein Teil der Autoren ist in der IDT Biologika GmbH beschftigt,
Antikrpern gegen das - und das 2-Toxin im Kolostrum, die die
die den Impfstoff Clostriporc A herstellt. Die im Manuskript dar-
Ferkel vor der Wirkung der oben genannten Toxine schtzten. Erste Er-
gestellten Inhalte oder Meinungen wurden durch keine geschtz-
gebnisse aus Feldversuchen (8) belegen die Resultate der vorgestell-
ten, finanziellen, beruflichen oder anderen persnlichen Interes-
ten Laborversuche.
sen beeinflusst.

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381

Danksagung
Wir danken den Mitarbeitern des Bereichs Forschung und Ent-
wicklung der IDT Biologika GmbH fr die exzellente technische
Assistenz. Dank gilt auch Herrn Dr. Thophile Vissiennon (Tier-
pathologie Leipzig) fr berlassung des Fotos (Abb. 5). Des Wei-
teren danken wir Herrn Prof. Dr. Dr. Georg Baljer (Institut fr Hy-
giene und Infektionskrankheiten der Tiere, Justus-Liebig-Univer-
sitt Gieen) fr die gute Zusammenarbeit sowie fr die offene
und zielfhrende Diskussion.

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