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TEMA IV.

GLUCLISIS

1.Generalidades
2.Reacciones de la gluclisis
3.Control de la gluclisis
PRINCIPALES DESTINOS DE LA GLUCOSA

SNTESIS DE GLUCGENO,
ALMIDN, SACAROSA

Reserva

GLUCOSA

Oxidacin va Oxidacin va
Pentosas fosfato gluclisis

RIBOSA-5-FOSFATO PIRUVATO
PRECURSOR INTERMEDIARIOS PRODUCTO
(METABOLITOS)

Ecuacin global:

GLUCOSA + 2NAD+ + 2ADP + 2Pi 2 PIRUVATO + 2NADH + 2H+ +2ATP+2H2O

La conversin de glucosa en piruvato es exergnica:

Glucosa + 2NAD+ 2 piruvato + 2NADH + 2H+ G1o = -146 kJ/mol

y la formacin de ATP a partir de ADP y Pi, que es endergnica:

2ADP + 2Pi 2 ATP + 2 H2O G2o = 61 kJ/mol

Por lo tanto, la variacin global de energa libre estndar es:

Gso = G1o + G2o = -146 kJ/mol + 61 kJ/mol = -85 kJ/mol

La gluclisis es un proceso esencialmente IRREVERSIBLE


IMPORTANCIA DE LOS METABOLITOS FOSFORILADOS

1. Los metabolitos fosforilados no pueden abandonar la clula

2. Los grupos fosforilo son componentes esenciales en la conservacin


enzimtica de la energa metablica

3. La fijacin de los grupos fosfato a los centros activos de los enzimas


proporciona energa de fijacin que contribuye a reducir la energa de
activacin aumentando adems la especificidad de las reacciones
catalizadas enzimticamente
TRANSFORMACIONES QUMICAS EN LA GLUCLISIS

 La degradacin del esqueleto carbonado de la glucosa que produce piruvato

 La fosforilacin del ADP a ATP por la accin de compuestos fosfato de alta


energa formados durante la gluclisis

La transferencia de un ion hidruro al NAD+, lo cual da como resultado la


formacin de NADH
NIVELES DE ESTUDIO DE LA VA GLUCOLTICA:

1. Los pasos de interconversin qumica

2. El mecanismo de la transformacin enzimtica

3. La energtica de las transformaciones

4. Los mecanismos de control


FASES DE LA GLUCLISIS
Primera Fase Preparatoria:
Fase: Fosforilacin de glucosa
y su conversin en
Gliceraldehdo 3-fosato
Segunda Fase de beneficios:
Fase: Conversin oxidativa del
gliceraldehdo 3-fosfato
a piruvato con formacin
acoplada de ATP y NADH
FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

1. Fosforilacin de la glucosa

Glucosa + ATP Glucosa-6-fosfato + ADP


FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

1. Fosforilacin de la glucosa
 Es el primer paso de la gluclisis
 Es una reaccin irreversible Go=-16.7 kJ/mol
 La Hexocinasa cataliza la reaccin (Transferasa), es un enzima citoslica
 Requiere de Mg2+
 La hexocinasa cataliza la transferencia de un grupo fosforilo del ATP a la glucosa
para formar glucosa-6-fosfato y ADP
LA HEXOCINASA ES UN MONMERO

o
8A

De Levadura

Kuser et al. (2008) o


Proteins 72:731 8A
MECANISMO CATALTICO DE LA HEXOCINASA
1. Forma un complejo ternario con la glucosa y el Mg2+-ATP
2. El Mg2+ forma un complejo con los oxgenos del ATP de tal modo que
apantalla las cargas negativas
3. Favoreciendo el ataque nucleoflico por un OH de la glucosa al ATP
ES EL PRIMER CONSUMO DE ATP
LA CTALISIS ES POR PROXIMIDAD

Kuser et al. (2008)


Proteins 72:731
FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

2. Conversin de la glucosa 6-fosfato en fructosa 6-fosfato


FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

2. Conversin de la glucosa 6-fosfato en fructosa 6-fosfato


Es una reaccin reversible Go=1.7 kJ/mol
 La Fosfohexosa isomerasa cataliza la reaccin, es un enzima citoslica
 La Fosfohexosa isomerasa cataliza el reordenamiento de los grupos carbonilo y
e hidroxilo en el C-1 y C-2 de la glucosa

Es un dmero
de Thermus
termophilus

Yamamoto et al. (2008)


J. Mol. Biol. 382:747
Residuos de la
interface del dmero
responsables de
la estabilidad

Yamamoto et al. (2008)


J. Mol. Biol. 382:747
Residuos del sitio
cataltico

Yamamoto et al. (2008)


J. Mol. Biol. 382:747
REACCIN DE LA FOSFOHEXOSA ISOMERASA

CATLISIS BSICA

Glu Glu Glu


FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

3. Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato a fructosa 1,6-bifosfato

Fosfofructoquinasa-1
Mg2+
ATP ADP

Fructosa-6-fosfato Fructosa-1,6-bifosfato
MgATP2-
FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

3. Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato a fructosa 1,6-bifosfato


 Es una reaccin irreversible Go=-14.2 kJ/mol
 La Fosfofructocinasa-1 (PFK-1) cataliza la reaccin, es un enzima citoslica
 La Fosfofructocinasa-1 cataliza la transferencia de un grupo fosforilo desde el ATP
a la Fructosa 6-fosfato para formar Fructosa 1,6-bifosfato

ES EL SEGUNDO CONSUMO DE ATP

ES CONSIDERADO EL PRIMER PASO COMPROMETIDO, EL PRODUCTO


FORMADO SLO PUEDE SEGUIR LA GLUCLISIS Y NO OTRA RUTA
ESTRUCTURA DE LA FOSFOFRUCTOCINASA (PFK-1)
La PFK-1 es un tetrmero

Es un enzima alostrica
La PFK-1 es un tetrmero

Es un enzima alostrica
(ATP ES UN MODULADOR
ALOSTRICO NEGATIVO)

[ATP] DISMINUYE

AUMENTO EN LA ACTIVIDAD
DE LA PFK-1

Schirmer et al. (1990)


Nature 343:6254
FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

4. Rotura de la fructosa 1,6-bifosfato


FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

4. Rotura de la fructosa 1,6-bifosfato


 Es una reaccin reversible Go=23.8 kJ/mol
 La Fructosa 1,6-bifosfato aldolasa cataliza la reaccin, es un enzima citoslica
 La Aldolasa cataliza una condensacin aldlica reversible
 La fructosa 1,6-bifosfato se rompe dando dos triosas fosfato diferentes, el
gliceraldehdo 3-fosfato, una aldosa, y la dihidroxiacetona fosfato, una cetosa
La aldolasa es un homo-
tetrmero

Msculo de Conejo Sherawat et al (2008)


Acta Cryst. D64:543
Residuos del sitio activo del Aldolasa

Sherawat et al (2008)
Acta Cryst. D64:543
IMINA
FASE PREPARATORIA DE LA GLUCLISIS

5. Interconversin de las triosas fosfato


 Es una reaccin reversible Go=7.5 kJ/mol
 La triosa fosfato isomerasa cataliza la reaccin, es un enzima citoslica
 La isomerasa cataliza la conversin de dihidroxiacetona fosfato a gliceraldehdo
3-fosfato

1
2
3
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

GLUCOSA
2 ATP

2 ADP

2 MOLCULAS DE GLICERALDEHDO 3-FOSFATO

4 ADP PASOS DE FOSFORILACIN


CONSERVADORES DE ENERGA
4 ATP

2 MOLCULAS DE PIRUVATO

POR UNA MOLCULA DE GLUCOSA SE FORMAN


2 MOLCULAS DE ATP
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

6. Oxidacin del gliceraldehdo 3-fosfato a 1,3-bifosfoglicerato


FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

6. Oxidacin del gliceraldehdo 3-fosfato a 1,3-bifosfoglicerato


 Es una reaccin reversible Go=6.3 kJ/mol
 La gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa cataliza la reaccin, es un enzima
citoslica
 La gliceraldehdo 3-fosfato deshidrogenasa cataliza la conversin del gliceraldehdo
3-fosfato a 1,3-bifosfoglicerato (HOLOENZIMA= ENZIMA + NAD+)

Es un tetrmero

E. coli
REACCIN DE LA GLICERALDEHDO 3-FOSFATO DESHIDROGENASA

OXIDACIN

ACIL FOSFATO
Anhdrido de G= -49.3 kJ/mol
Grupo
aldehdo cido carboxlico
con cido fosfrico (Compuesto fosforilado con
alto valor de G de hidrlisis)

ACEPTOR DE HIDRGENO EN LA REACCIN ES EL NAD+


LOS NUCLETIDOS DE NICOTINAMIDA

HIDROGENACIN

340 nm

OXIDORREDUCTASAS
DESHIDROGENASAS
260 nm

NAD+ + 2e- + 2H+ NADH + H+ Eo

NADP+ + 2e- + 2H+ NADPH + H+ Eo


LA ASOCIACIN ENTRE UNA DESHIDROGENASA Y
EL COFACTOR (NAD O NADP):
ES DBIL Y DIFUNDE FCILMENTE DESDE
UN ENZIMA A OTRO

PLIEGE DE ROSSMANN
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS
7. Transferencia de fosforilo desde el 1,3-bifosfoglicerato al ADP

LA FORMACIN DE ATP POR


TRANSFERENCIA DEL GRUPO
FOSFORILO A PARTIR DE UN
SUSTRATO SE CONOCE COMO
FOSFORILACIN A NIVEL DE
SUSTRATO

IMPLICANDO ENZIMAS SOLUBLES


E INTERMEDIARIOS QUMICOS
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

7. Transferencia de fosforilo desde el 1,3-bifosfoglicerato al ADP


 Es una reaccin irreversible Go= -18.5 kJ/mol
 La fosfoglicerato cinasa cataliza la reaccin, es un enzima
citoslica
 La fosfoglicerato cinasa cataliza la transferencia del grupo fosforilo de el
gliceraldehdo 1,3-bifosfoglicerato al ADP
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

8. Conversin del 3-fosfoglicerato en 2-fosfoglicerato


FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

8. Conversin del 3-fosfoglicerato en 2-fosfoglicerato


 Es una reaccin reversible Go= 4.4 kJ/mol
 La fosfoglicerato mutasa cataliza la reaccin, es un enzima
citoslica
 La fosfoglicerato mutasa cataliza un desplazamiento reversible del grupo fosforilo
entre C-2 y C-3 del glicerato

ES UN DMERO
Humano
Levadura
Bacteria

Wang et al. (2005)


Biochem. Biophys. Res. Commun. 331:1207
Transferencia del gpo. Fosforilo del enzima
al sustrato

Transferencia del gpo. Fosforilo del C-3 del


Sustrato al enzima
SITIO ACTIVO DE LA FOSFOGLICERATO MUTASA DE LEVADURA

Wang et al. (2005)


Biochem. Biophys. Res. Commun. 331:1207
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

9. Deshidratacin del 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato


FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

9. Deshidratacin del 2-fosfoglicerato a fosfoenolpiruvato


 Es una reaccin reversible Go= 7.5 kJ/mol
 Es la segunda reaccin glucoltica que genera un compuesto con potencial
elevado de transferencia del grupo fosforilo
 La enolasa cataliza la reaccin, es un enzima citoslica, promueve
la eliminacin reversible de una molcula de agua del 2-fosfoglicerato
(HOLOENZIMA= ENZIMA + Mg2+)

Es un dmero
MECANISMO CATALTICO DE LA ENOLASA

2-Fosfoglicerato unido al enzima Intermediario enlico Fosfoenolpiruvato

1. Unin coordinada por dos iones Mg2+


2. Extraccin de un protn por catlisis bsica
3. Extraccin de un hidroxilo por catlisis cida
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

10. Transferencia del grupo fosforilo desde el fosfoenolpiruvato al ADP

FOSFORILACIN A
NIVEL DE SUSTRATO
FASE DE BENEFICIOS DE LA GLUCLISIS

10. Transferencia del grupo fosforilo desde el fosfoenolpiruvato al ADP


 Es una reaccin irreversible Go= -31.4 kJ/mol
 La piruvato cinasa cataliza la reaccin, es un enzima citoslica, promueve la
transferencia del grupo fosforilo desde el fosfoenolpiruvato al ADP

Es un tetrmero
Es un enzima alostrica
Fosforilacin Isomerizacin

Hexocinasa Fosfohexosa FRUCTOSA 6-FOSFATO


GLUCOSA GLUCOSA 6-FOSFATO isomerasa
Fosforilacin

PFK-1

FRUCTOSA 1,6-BIFOSFATO
Rotura Aldolasa FRUCTOSA 1,6-BIFOSFATO

GLICERALDEHDO 3-FOSFATO Oxidacin y


Fosforilacin a nivel
Fosforilacin de sustrato

G 3-P
3-FOSFOGLICERATO
Deshidrogenasa Isomerizacin
DIHIDROXIACETONA FOSFATO 1,3-BIFOSFOGLICERATO
Fosfoglicerato
cinasa Mutasa
Fosforilacin a nivel
de sustrato
Enolasa
Piruvato cinasa
PIRUVATO 2-FOSFOGLICERATO
FOSFOENOLPIRUVATO
DESTINOS DEL PIRUVATO

Condiciones Condiciones Condiciones


Aerbicas Anaerbicas Anaerbicas
(Levadura)
Piruvato
Piruvato Piruvato
CO2
NADH
Acetil-CoA
Ciclo de NAD+
Krebs Lactato Etanol + CO2
Fermentacin del Fermentacin
CO2 cido lctico alcohlica
e-

Fosforilacin
Oxidativa

Destino anablico: Precursor de la sntesis de alanina


CONDICIONES AERBICAS

Oxidacin
PIRUVATO ACETATO CO2 + H2O
Ciclo de
NADH Krebs e-

Fosforilacin
oxidativa

NAD+
EN CONDICONES DE HIPOXIA

Msculo esqueltico muy activo, plantas sumergidas

EL NADH NO PUEDE SER REOXIDADO POR EL OXGENO

PARA REGENERAR LA POZA DE NAD+

SE REALIZA UNA TRANSFERENCIA DE LOS ELECTRONES


DESDE EL NADH PARA FORMAR

UN PRODUCTO FINAL REDUCIDO

ETANOL O LACTATO
LOS ERITROCITOS NO TIENEN
MITOCONDRIAS POR LO TANTO
EN CONDICIONES AERBICAS
DURANTE LA GLUCLISIS
PRODUCEN LACTATO
11. El piruvato es el aceptor electrnico terminal en la fermentacin lctica

ltimo paso de la va glucoltica

nica reaccin que dispone el


cuerpo para formar L-lactato o
utilizarlo.

Totalmente reversible.
11. El piruvato es el aceptor electrnico terminal en la fermentacin lctica

1. Es una reaccin irreversible Go= -25.1 kJ/mol


2. La reaccin esta catalizada por la lactato deshidrogenasa

LDH

NO HAY CAMBIO NETO


DE NAD+ O DE NADH
GLUCOSA LACTATO NO HAY CAMBIO EN
EL CONTENIDO NETO
(C6H12O6) (C3H6O3) DE NAD+ O DE NADH

HAY PRODUCCIN DE
2 PASOS DE OXIDO-REDUCCIN 2 ATP

NO HAY CAMBIO EN EL ESTADO DE


OXIDACIN DEL CARBONO
LA PROPORCIN H:C ES LA MISMA

FERMENTACIN.- Es un proceso que extrae energa (ATP) pero no hay consumo

de oxgeno ni cambian las concentraciones de NAD+ o NADH


Fermentacin alcohlica
La levadura y otros microorganismos

DOS PASOS:

1. Descarboxilacin del piruvato (irreversible) catalizada por la piruvato descarboxilasa


2. Reduccin del acetaldehdo para formar etanol a travs de la accin de la
alcohol deshidrogenasa
La piruvato descarboxilasa Holoenzima= Enzima + TPP (Tiamina pirofosfato) y Mg2+
Grupo prosttico

Anillo de
tiazolio
Protn relativamente
cido

Tiamina Pirofosfato (TPP)


Mecanismo cataltico de
la Piruvato descarboxilasa
Mecanismo de la
Alcohol
deshidrogenasa
EL NADH FORMADO EN LA GLUCLISIS DEBE RECICLARSE
PARA REGENERAR EL NAD+

CONDICIN:

AERBICA SE REGENERA DURANTE LA FOSFORILACIN OXIDATIVA

ANAERBICA: MSCULO, ERITROCITOS MEDIANTE FERMETACIN


LCTICA

LEVADURA Y OTROS MICROORGANISMOS MEDIANTE


FERMENTACIN ALCOHLICA
REGULACIN DE LA GLUCLISIS
GLUCOSA
HEXOCINASA
GLUCOSA 6-FOSFATO

FRUCTOSA 6-FOSFATO
FOSFOFRUCTOCINASA-1
FRUCTOSA 1,6-BIFOSFATO

DIHIDROXIACETONA FOSFATO + GLICERALDEHDO 3-FOSFATO

1,3-FOSFOGLICERATO

3-FOSFOGLICERATO

2-FOSFOGLICERATO

FOSFOENOLPIRUVATO
PIRUVATO CINASA
PIRUVATO
HEXOCINASA
ES UN MONMERO

REGULACIN

ALOSTRICA
ES INHIBIDA POR SU PRODUCTO,
LA GLUCOSA 6-FOSFATO

POR LA PRESENCIA DE
4 ISOENZIMAS (I A IV)

HEXOCINASA I A III EN MSCULO KM= 0.1 mM

HEXOCINASA IV EN HGADO GLUCOCINASA KM= 10 mM

UNA BAJA [GLUCOSA] ES UTILIZADA POR MSCULO


UNA ELEVADA [GLUCOSA] ES UTILIZADA POR EL HGADO
FOSFOFRUCTOCINASA-1
La PFK-1 es un tetrmero

Es un enzima alostrica
Regulacin alostrica de la PFK-1

ELEVADO CONTENIDO DE ATP


INHIBE ALOSTRICAMENTE LA PFK-1

ELEVADO CONTENIDO DE CITRATO


(intermediario de la oxidacin aerbica
del piruvato) INHIBE LA PFK-1

AMP, ADP Y LA
FRUCTOSA 2,6-BIFOSFATO
AUMENTAN LA ACTIVIDAD
DE LA PFK-1
ESTRUCTURA DE LA FOSFOFRUCTOCINASA-2
CONTROL DE LA SNTESIS Y DEGRADACIN DE LA
FRUCTOSA 2,6-BIFOSFATO

GLUCOSA ABUNDANTE
(Gliclisis activa)
CONTROL DE LA SNTESIS Y DEGRADACIN DE LA
FRUCTOSA 2,6-BIFOSFATO

GLUCOSA ESCASA
ELEVADA
GLUCOSA PFK-2 FRUCTOSA 2,6-BIFOSFATO PFK-1
MS
ACTIVA

ESCASA
GLUCOSA PFK-2 FRUCTOSA 2,6-BIFOSFATO PFK-1

FBPasa-2 FRUCTOSA 6-FOSFATO PFK-1


MENOS
ACTIVA
GLUCOSA + 2 ATP
GLUCOSA + 2+NAD
2 NAD
+ ++2+ADP
4 ADP
+ 2+ Pi
2 Pi

2 PIRUVATO + 2 ADP
2 PIRUVATO + 2+NADH
2 NADH + +2H
+ 2H + +2+ATP
4ATP
+ 2+ H
2 2H
O2O

RECUPERAR
MECANISMOS LA POZA
DE REGULACIN DE
DE LOS NAD+
ENZIMAS
QUE CATALIZAN LAS REACCIONES IRREVERSIBLES

Aerobiosis: Fosforilacin oxidativa


Anaerobiosis: Fermentacin lctica o alcohlica

PIRUVATO
HEXOCINASA: REGULACIN POR ALOSTERISMO Y POR ISOFORMAS

PFK-1: REGULACIN ALOSTRICA


PIRUVATO CINASA

Es un tetrmero
Es un enzima alostrica

1)REGULACIN ALOSTRICA:
ELEVADO CONTENIDO DE ATP Y LA ALANINA
LA INHIBEN ALOSTRICAMENTE

LA FRUCTOSA 1,6-BIFOSFATO LA
ACTIVAN ALOSTRICAMENTE

2) POR ISOENZIMAS
LA L PREDOMINA EN HGADO
LA M EN MSCULO Y CEREBRO

3) POR MODIFICACIN COVALENTE


SLO LA ISOFORMA L

LA FOSFORILACIN DEL ENZIMA RESULTA EN SU INHIBICIN


LA PIRUVATO CINASA SE REGULA POR EFECTORES ALOSTRICOS, POR LA
PRESENCIA DE ISOFORMAS Y POR MODIFICACIN COVALENTE

NIVEL ALTO NIVEL BAJO


DE GLUCOSA DE GLUCOSA
MODIFICACIN SANGUNEA SANGUNEA
COVALENTE Piruvato cinasa
fosforilada
(Regulacin (Menos activa)
Hormonal)

Piruvato cinasa
desfosforilada
(Ms activa)

EFECTORES ALOSTRICOS
REGULACIN DEL TRANSPORTE DE GLUCOSA
REGULACIN DE LA GLICLISIS

COMPARTAMENTALIZACIN: Se lleva a cabo en el citosol

ENZIMTICO: HEXOCINASA (Por alosterismo, isoformas)


PFK-1 (Por alosterismo)
PIRUVATO CINASA (Alosterismo, isoformas, modificacin covalente)

TRANSPORTE: Por isoformas


LA GLUCOSA PUEDE SER OBTENIDA A PARTIR DE
OTROS CARBOHIDRATOS Y ENTONCES ENTRAR A
GLUCLISIS

Maltasa
MALTOSA + H2O 2 D-GLUCOSA

Lactasa
LACTOSA + H2O D-GALACTOSA + D-GLUCOSA

Sacarasa
SACAROSA + H2O D-FRUCTOSA + D-GLUCOSA
LOS SUSTRATOS
O PRODUCTOS
DE LA
GLUCLISIS
PUEDEN SER A
SU VEZ
SUSTRATOS DE
OTRAS VAS
METABLICAS
FORMACIN DE ATP ACOPLADA A LA GLUCLISIS

Ecuacin global:

Glucosa + 2NAD+ + 2ADP + 2Pi 2 piruvato + 2NADH + 2H+ +2ATP+2H2O

La conversin de glucosa en piruvato es exergnica:

Glucosa + 2NAD+ 2 piruvato + 2NADH + 2H+ G1o = -146 kJ/mol

y la formacin de ATP a partir de ADP y Pi, que es endergnica:

2ADP + 2Pi 2 ATP + 2 H2O G2o = 61 kJ/mol

Por lo tanto, la variacin global de energa libre estndar es:

Gso = G1o + G2o = -146 kJ/mol + 61 kJ/mol = -85 kJ/mol

La gluclisis es un proceso esencialmente IRREVERSIBLE