Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Departamento de Bioqumica

Laboratorio de Mtodos de Anlisis

Verificacin del funcionamiento de un espectrofotmetro

Fecha de entrega: 27 de Marzo de 2017

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Verificacin del funcionamiento de un
espectrofotmetro
Fundamento.

Cuando la luz de una apropiada longitud de onda atraviesa una cubeta que contiene una
solucin colorida, parte de la luz es absorbida por la solucin, el resto de la luz es
trasmitida a travs de la muestra hasta el detector. La luz que llega al detector se conoce
como trasmitancia, pero nuestro equipo es capaz de transformarla a absorbancia.

Cada solucin colorida tiene un espectro de absorcin caracterstico que se establece a

partir de la medicin de la absorbencia a diferentes longitudes de onda. La longitud a la
cual se analiza una sustancia es generalmente (pero no siempre), aquella a la cual se
obtiene la mxima absorbencia. Por lo regular se selecciona aquella que d la mayor
sensibilidad y que ms se aproxime a la ley de Beer.

Objetivo.

Evaluar el rendimiento instrumental de un espectrofotmetro y verificar la exactitud

de su escala con base en la longitud de onda y la presencia de luz dispersa.

Resultados.

Longitud de onda
%T
(nm)
400 45
410 55
420 67
430 48
440 45
450 47
460 46
470 43
480 49
490 58
500 54
510 38
520 27
530 31
540 51
550 68
560 57
570 28
580 6
590 4

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 Tabla 1.espectro de transmisin del filtro de didimio

Grafica 1. Espectro de trasmisin del filtro de Didimio

Longitud de onda %T
(nm)
380 6
390 5
400 4
410 5
420 12
430 25
440 40
450 52
460 62
470 72
480 83
490 89
500 91
510 90
520 88
530 85
540 82
550 78
560 74
570 67
580 60
590 51
Tabla 2. Espectro de transmisin de la solucin de sulfato de nquel al 20%

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 Grafica 2. Espectro de transmisin de la solucin de sulfato de nquel al 20%

Longitud Absorban %T
de onda cia
(nm)
530 0,07 85
540 0,085 82
550 0,1 79
560 0,13 74
570 0,17 68
Tabla 3. Proporcionalidad entre A y para el sulfato de nquel

Grafica 3. Proporcionalidad entre A y para el sulfato de nquel

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 Longitud de onda/
400 nm 500 nm
Parmetro

Tolerancia aceptada 5 5
Absorbancia
1,5 0,04
medida
Tabla 4. Exactitud fotomtrica

Concentraci
Tubo n de A400
NiSO46H2O
a a' (M) Serie a Serie b
1 1' 0 - -
5
2 2' 3.8 x 10 0,05 0,05

3 3' 1.14 x 104 0,13 0,14

4 4' 2.66 x 104 0,31 0,3

5 5' 4.18 x 104 0,44 0,47

4
6 6' 5.7 x 10 0,6 0,6

7 7' 6.08 x 104 0,61 0,61

4
8 8' 6.8 x 10 0,71 0,71

9 9' 7.2 x 104 0,75 0,75

10 10' 0.19 0,8 0,79

Tabla 5. Intervalo dinmico lineal de la concentracin

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Discusin

Obtuvimos los espectros de trasmisin caractersticos del filtro de Didimio y de una solucin de
sulfato de nquel. En la grafica 1, perteneciente a el espectro de absorcin para el filtro de
Didimio, obtuvimos picos a 420, 490 y 550 nm y valles a 440, 470 y 510. Esto demuestra que
nuestro espectrofotmetro tiene una escala exacta y que las determinaciones que se realicen en
ese equipo van a ser confiables ya que con esto nos aseguramos que al ajustarlo a la longitud de
onda deseada, el equipo realmente selecciona esa longitud de onda. En la grafica 2 tenemos el
espectro de trasmisin caracterstico de la solucin de sulfato de nquel, en ella podemos
observar que obtenemos un pico mximo de trasmisin a 500 nm, la escala de la longitud de
onda es muy exacta ya que se registran valores desde la primera lectura a 380 nm y valores
hasta la ltima a 590 nm y el intervalo en la escala es muy grande. Ambos mtodos son muy
efectivos para determinar la exactitud de la escala de la longitud de onda, pero el filtro de Didimio
es muy costoso y no todos los equipos tienen la ranura para este tipo de filtros especiales por lo
que no lo hace un mtodo muy rentable, sin en cambio el sulfato de nquel es mucho ms barato
y de fcil manejo, por lo que es mucho ms eficiente este mtodo, tanto por confiabilidad como
por costos.

En la grafica 3, en la cual graficamos la absorbancia obtenida contra la longitud de onda a la cual

fue medida, observamos que existe proporcionalidad fotomtrica, ya que se obtiene una grafica
lineal y a pesar de esto, la R nos indica lo contrario, pues no una proporcionalidad a pesar de que
el valor se acerca mucho al esperado. Por lo que podemos decir que la proporcionalidad es
mnimo al leer el sulfato de nquel a diferentes longitudes de onda.

Con base en todo lo anterior sabemos que no hay presencia de luz extraa en nuestro
espectrofotmetro, ya que la escala de la longitud de onda seleccionado, pertenece a la longitud
de onda a la cual se registran nuestras lecturas de %T, si existiera la presencia de este tipo de
luz, la escala se modificara y obtendramos valores por debajo de los esperados.

Conclusin

Nuestro espectrofotmetro esta en optimas condiciones para leer la absorbancia y

trasmitancia de diferentes muestras.
No hay presencia de luz dispersa.

Preguntas extra

Seale dos causas que originan:

a) Luz extraa
Abertura de la compuerta para muestra.
Filtracin de luz al interior de espectrofotmetro por algn sitio no detectado.

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 b) Cambio en el ancho de banda
Baja intensidad de la luz de la lmpara por su deterioro.
Mal estado del mecanismo de seleccin de ancho de banda.
c) Alteracin de la respuesta relativa o rendimiento instrumental
Muestra muy pequea y presencia del efecto menisco.
Variaciones de voltaje.

Referencias.

Skoog. Principios de Anlisis Instrumental. Ed. Mac Graw Hill. 2002. Pp.182, 201.