UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

PRINCIPALES CONSTITUYENTES QUIMICOS DE LA MATERIA VIVA

Equipo 1

GRUPO: 1451

FECHA DE ENTREGA: 9 noviembre de 2016

1. Curva Estndar de azcares reductores

 Tabla1. Concentracin de azcares reductores en moles/mL en cada
muestra estudiada de acuerdo a la absorbancia obtenida.

Concentracin
Glucosa-Fructuosa
Absorbanci Glucosa +
N Tubo 0.005M
a fructuosa
(mL)
(mol/mL)
Blanco 0 0 0.0
1 0.05 0.025 0.25
2 0.1 0.022 0.5
3 0.2 0.048 1
4 0.4 0.214 2
5 0.6 0.227 3
6 0.75 0.31 3.75

a) Clculos para obtener la concentracin de Glucosa+Fructuosa:

(0.005 M )(mL G+ F en cada tubo)

moles=
1000 mL

Donde:

G+F = Glucosa + Fructuosa

0.005M= concentracin del reactivo G+F

Tubo 1:

(0.005 M )(0.05 mL)

=2.5 x 10 7 mol
1000 mL

Tubo 2:

( 0.005 M ) ( 0.1 mL)

=5 x 10 7 mol
1000 mL

Tubo 3:

( 0.005 M ) ( 0.2 mL )
=1 x 10 6 mol
1000 mL

Tubo 4:
 (0.005 M )(0.4 mL)
=2 x 10 6 mol
1000 mL

Tubo 5:

( 0.005 M ) ( 0.6 mL )
=3 x 10 6 mol
1000 mL

Tubo 6:

(0.005 M )(0.75 mL)

=3.75 x 10 6 mol
1000 mL

Conversin para obtener moles de Glucosa+Fructuosa:

( moles de G+ F)(1 x 10 6)
mol=
1mol

Tubo 1:

(2.5 x 10 7 mol)(1 x 10 6)
=0.25 moles
1mol

Tubo 2:

(5 x 10 7 mol)(1 x 10 6)
=0.5 moles
1mol

Tubo 3:

(1 x 10 6 mol)(1 x 10 6)
=1 moles
1mol

Tubo 4:

( 2 x 10 6 mol ) (1 x 10 6 )
=2 moles
1mol
Tubo 5:

(3 x 10 6 mol)(1 x 10 6)
=3 moles
1 mol

Tubo 6:

(3.75 x 10 6 mol)(1 x 10 6)
=3.75 moles
1 mol

0.35
0.33
0.3
0.28 f(x) = 0.08x
0.25 R = 0.99
0.23
0.2
0.18
Absorbancia
0.15
0.13
0.1
0.08
0.05
0.03
0
0 0.25 0.5 0.75 1 1.25 1.5 1.75 2 2.25 2.5 2.75 3 3.25 3.5 3.75 4

Glucosa+Fructuosa (mol/mL)

Grfica 1. Curva estndar de azcares reductores (Glucosa+

Fructuosa vs absorbancia).
 2. Efecto de la concentracin de enzima
Tabla 2. Absorbancias obtenidas en cada muestra estudiada con
la enzima Invertasa

No. Tubo Blanco 1 2 3 4 5

Absorbanc -0.06 1.24 2.76 5.85 8.14 11.23
ia
(540nm)
Enzima 0.0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
10g/mL
(mL)

a) Interpolacin de valores en la curva estndar de azucares

reductores
y=mx +b

y=0.0783 x

Donde:

m=0.0783
y=absorbancias
x= concentracin de G+F
Despejando x:

Frmula para obtener la concentracin de G+F (1)

absorbancias( y )
(1) x=
pendiente(m)

0.097
x 1= =1.24
0.0783

0.216
x 2= =2.76
0.0783

0.45
8
x 3= =5.85
0.0783

0.637
x 4= =8.14
0.0783

0.879
x 5= =11.23
0.0783

b) Determinando velocidad (2):

micromoles obtenidos
Velocidad=
(2) tiempode reaccin(5 minutos)

1.24
V 1= =0.24776501
5

2.76
V 2= =0.55172414
5

5.85
V 3= =1.16985951
5
 8.14
V 4= =1.62707535
5

11.23
V 5= =2.24521073
5

b) Conversin para obtener g de enzima invertasa:

Tubo 1:

10g-------------1 mL

X=0.5g <---------- 0.05mL

Tubo 2:

10g-------------1 mL

X=1g<----------0.1mL

Tubo 3:

10g-------------1 mL

X=1.5g<---------0.15Ml

Tubo 4:

10g-------------1 mL

X=2g<----------0.2mL

Tubo 5:

10g-------------1 mL

X=2.5g<---------0.25m
 2.5

2
f(x) = 0.82x
R = 0.99

1.5

Velocidad mol/min
1

0.5

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5

Concentracin de enzima g/mL

Grfica2. Efecto de la concentracin de enzima Invertasa (10g/mL)

3. Efecto de pH

Tabla 3. Velocidad enzimtica

Concentracin Velocidad
Glucosa + (mol/min)
N Tubo pH Absorbancia
fructuosa
(mol/mL)
 Blanco 5.0 0.0 0.0 0.0
1 2.5 0.027 0.34 0.07
2 3.5 0.014 0.18 0.04
3 4.5 0.088 1.12 0.22
4 5.0 0.065 0.83 0.17
5 5.5 0.139 1.78 0.36
6 6.5 0.274 3.50 0.70
7 7.5 0.212 2.71 0.54

a) Clculos para obtener concentracin de Glucosa+Fructuosa

utilizando la frmula de la pendiente calculada a partir de la curva
estndar de azcares reductores. Se utiliza la frmula (1)

Tubo 1:

0.027
=0.34 mol/mL
0.0783

Tubo 2:

0.014
=0.18 mol /mL
0.0783

Tubo 3:

0.088
=1.12 mol /mL
0.0783

Tubo 4:

0.065
=0.83 mol /mL
0.0783

Tubo 5:

0.139
=1.78 mol /mL
0.0783

Tubo 6:
 0.274
=3.50 mol /mL
0.0783

Tubo 7:

0.027
=2.71 mol /mL
0.0783

Clculo de velocidad utilizando frmula (2):

Velocidad 1:

0.34 mol
=0.07
5 min

Velocidad 2:

0.18 mol
=0.04
5 min

Velocidad 3:

1.12 mol
=0.22
5 min

Velocidad 4:

0.83 mol
=0.17
5 min

Velocidad 5:

1.78 mol
=0.36
5 min

Velocidad 6:
 3.50 mol
=0.70
5 min

Velocidad 7:

2.71 mol
=0.54
5 min

Grfica 3. Efecto del pH sobre la velocidad enzimtica.

0.80

0.70

0.60

0.50

0.40
Vel (mol/min)
0.30

0.20

0.10

0.00
2 3 4 5 6 7 8

pH

4.- Efecto de temperatura

numero absorbanci valor X temperatu V

a ra
BLANCO 0 0.00 0 0.00
1 0.159 2.03 0 0.41
2 0.231 2.95 25 0.59
3 0.248 3.17 37 0.63
4 0.915 11.69 50 2.34
5 0.55 7.02 75 1.40
6 0.142 1.81 92 0.36
 EFECTO DE LA TEMPERATURA
2.50 2.34

2.00

1.50

V=mol/min
1.00

0.50

0.00
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Temperatura C
5.- Efecto de la concentracin del sustrato

Tubo Alcuota Absorbancia mol de mol/ mL de

Sacarosa glucosa-
Fructosa
Blanco 0,5 0 175 0
1 0,02 0,119 7 1,51
2 0,05 0,141 17,5 1,8
3 0,12 0,151 42 1,92
4 0,17 0,116 59,5 1,48
5 0,25 0,100 87,5 1,27
6 0,5 0,052 175 0,66
7 1 0,074 350 0,94
8 1,25 0,083 475 1,06

Efecto de la concentracin del sustrato

2.5

1.5

0.5

0
7 17.5 42 59.5 87.5 175 350 475

Se us de nuevo la formula 1 para calcular moles/ mL de glu-fruct

Para calcular mol de sacarosa se us la siguiente conversin

0.35 moles de sacarosa --------- 1000 mL

X ----------- 0,5 mL
 x = 0,000175 moles de sacarosa

1 mol --------- 1000000 mol

0,000175mol------ x

x = 175 mol de sacarosa

ANALISIS DE RESULTADOS:

Se realiz una curva estndar (absorbancia vs concentracin) utilizando

azcares reductores, Glucosa y Fructuosa, a una concentracin 0.005M.
Al realizar la grfica con todos los datos registrados en la Tabla 1 y al
aplicar la lnea de tendencia lineal se obtuvo una R 2 menor a 1. Se
decidi descartar el dato del tubo 4 cuya absorbancia fue de 0.214
dando una R2 final de 0.9814 considerndose aceptable. (Ver Grfica 1).

Utilizando la frmula de la pendiente obtenida de la curva estndar se

despej x que nos indica la concentracin de azcares reductores; esta
concentracin se dividi entre cinco minutos para calcular la velocidad
enzimtica en cada una de las grficas tratadas.

En el punto 3 se estudi el efecto del pH sobre la velocidad de reaccin

de la enzima Invertasa sobre el sustrato Sacarosa. Se hizo una medicin
de absorbancia a diferentes pH para estudiar el pH ptimo al cual la
enzima-sustrato alcanza su mayor velocidad y poder comparar los
resultados con los expresados en la literatura, la cual nos dice que el pH
ptimo de la invertasa es en promedio entre 4.5 a 5 . Sin embargo el
estudio no es concluyente pues hubo errores al preparar las muestras
entre los que encontramos el tiempo en que los tubos se mantuvieron
en bao mara, adems de que el espectrofotmetro que se utiliz
marcaba mediciones errneas. Siguiendo lo que la literatura nos indica,
el pH es fundamental para la accin enzimtica pues al no estar a un pH
adecuado la conformacin de la enzima cambia ya que tienen en su
estructura grupos ionizables (carboxilos, aminas, etc), perdiendo as su
actividad sobre el sustrato.

El EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA. El

ensayo para cada actividad se realiz al pH ptimo y sin variar las
dems condiciones de la reaccin enzimtica. La temperatura ptima
encontrada se vaso de las experiencias anteriores o basndose en
estudios anteriores a esta prctica. En el ensayo, se utiliz un tiempo de
reaccin de 5 minutos, encontrndose que la temperatura ptima para
la actividad-(2.34mol/min)-invertasa fue de50C

La elevacin de la temperatura incrementa la velocidad de una reaccin

catalizada por enzimas. Al principio la velocidad de reaccin aumenta
cuando la temperatura se eleva debido al incremento de la energa
cintica de la energa de las molculas reactantes. Sin embargo, al final,
la energa cintica de la enzima excede a la barrera energtica para
romper los enlaces dbiles de hidrogeno que conservan su estructura
secundaria y terciaria. A esta temperatura predomina la
desnaturalizacin con prdida precipitada de la actividad cataltica. Por
tanto la enzima invertasa muestra una temperatura ptima de accin de
50 C.

Los lmites de actividad para la mayor parte de las enzimas tiene lugar
entre los 10C y 50C; la temperatura ptima para las enzimas en el
cuerpo se hall alrededor de 37C. El factor por el cual un proceso
biolgico aumenta para un incremento de temperatura de 10C.

Para la concentracin del sustrato, se puede observar que en el tubo dos

se observ la mayo cantidad de concentracin de glucosa-fructosa, y
sta iba decreciendo conforme se agregaba sacarosa. Quiz pudo haber
errores tcnicos que influyeron en sta, pero no afecta en gran medida
la estructura de sta. La velocidad de una reaccin enzimtica depende
de la concentracin de sustrato. Adems la presencia de productos
finales puede hacer que la reaccin sea ms lenta

Conclusiones

Las enzimas son protenas que realizan la catlisis de las reacciones

qumicas que se llevan a cabo en los seres vivos. Aunque las reacciones
enzimticas obedecen a los mismos principios de la cintica qumica, se
diferencian de stas por el hecho de que las enzimas son saturadas por
los substratos. En general, los aumentos de temperatura aceleran las
reacciones qumicas: por cada 10C de incremento, la velocidad de
reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta
ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta
temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura
a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima
en el caso de la invertasa es de 50 C. Por encima de esta temperatura,
el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es
contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la
desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece
rpidamente hasta anularse.
La relacin entre el pH y la actividad depende del comportamiento
cido-base del enzima y del propio sustrato. Sustrato y enzima (centro
activo) pueden contener grupos funcionales cidos y bsicos, siendo su
grado de disociacin dependiente del pH, lo que determinar, entre
otros aspectos, la conformacin de la protena, la capacidad de unin del
sustrato al centro activo del enzima y la capacidad de transformacin
del sustrato). Los estudios cinticos a diferentes valores de pH nos
proporcionan informacin sobre el mecanismo cataltico de los enzimas y
la naturaleza de los aminocidos ms directamente implicados en la
catlisis. En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene
constante la concentracin del E, la velocidad de la reaccin aumenta
exponencialmente al incrementarse la concentracin del sustrato, ya
que al existir ms molculas de sustrato es ms probable el encuentro
con el enzima y la formacin del complejo E-S.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de
sustrato y, a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta
que la concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del
cual, aunque aumente la concentracin del mismo, no aumenta la
velocidad de la reaccin.

Bibliografa
Olvera Daz, Guillermo, Bioqumica y fisiologa, Interamericana,
Mxico, 1986, pp. 3-5, 22, 23, 85-87, 99-105.
Alemany, Lamana M. y S Fontsebarroja, Practicas de bioqumica,
Editorial Alhambra, Espaa, 1983, pp 23.