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E.

P MEDICINA HUMANA-UCSM INMUNOLOGIA BASICA


PRACTICA 6

MODELO DE INFLAMACION IN VIVO: EDEMA PLANTAR EN RATA


INDUCIDO POR CARRAGENINA

I. INTRODUCCIN

El proceso inflamatorio es complejo e involucra una serie de fenmenos que


pueden ser desencadenados por varios estmulos, entre los que se incluyen
factores endgenos (necrosis tisular o rotura sea) o factores exgenos
como lesiones por agentes mecnicos (corte), fsicos (quemaduras,
radiaciones, fro, calor), qumicos (corrosivos, venenos, toxinas), biolgicos
(bacterias, virus, parsitos, hongos) e inmunolgicos (reacciones de
hipersensibilidad)

El mismo tiene lugar en el tejido conjuntivo vascularizado e implica cambios


vasculares, eventos celulares, y la produccin de mediadores qumicos de la
inflamacin. Todos estos componentes del sistema, estn estrechamente
vinculados. En el proceso inflamatorio despus de una breve contraccin de
las arteriolas se produce vasodilatacin que es la causa del aumento de
flujo sanguneo que a su vez es causa de rubor y calor, y un incremento de
la permeabilidad vascular. Como consecuencia de estos eventos vasculares
se torna lenta la circulacin que hace que los leucocitos se dirijan hacia la
periferia, proceso conocido como marginacin.

Estos leucocitos se sitan sobre el endotelio vascular, lo que se conoce


como rodamiento, se produce la adhesin leucocitaria y posteriormente, la
trasmigracin que es el proceso mediante el cual los leucocitos
(fundamentalmente neutrfilos en la inflamacin aguda) abandonan la
circulacin mediante diapdesis.

Una vez fuera del sistema vascular se produce el fenmeno de quimiotaxis,


migrando los leucocitos hacia la zona de lesin. Los factores quimiotcticos
pueden ser exgenos o endgenos. Entre los exgenos estn los productos
bacterianos como los pptidos; entre los endgenos estn los componentes
del complemento, productos de lipoxigenasa y las citoquinas.

En la zona de lesin, diversos factores favorecen la activacin leucocitaria


como las sustancias quimiotcticas en concentraciones elevadas, la
fagocitosis y complejos antgeno-anticuerpo. La activacin leucocitaria se
caracteriza por la produccin de metabolitos del cido araquidnico (AA)
debido al incremento de la actividad de fosfolipasa A2 (FLA2) por
diacilglicerol (DAG) y calcio, generacin de especies reactivas del oxgeno

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(ERO) y liberacin del contenido lisosomal a causa de la lisis celular, lo cual
conduce al dao celular y tisular.

EDEMA PLANTAR EN RATA INDUCIDO POR CARRAGENINA

Los modelos in vivo para la investigacin de la actividad antiinflamatoria


tienen como base para el ensayo los sntomas de la inflamacin, siendo el
ms frecuentemente utilizado el edema. En estos modelos, la mayora de
veces solamente nos permite llegar a determinar la actividad ms no el
mecanismo implicado en el proceso antiinflamatorio que presenta el
compuesto a investigar, pero son de gran importancia ya que nos permiten
hacer un evaluacin de esta actividad y puede ser el punto de partida para
la investigacin de nuevos compuestos capaces de interferir en el proceso
inflamatorio.

El mtodo de edema plantar inducido por carragenina consiste en la


administracin subcutnea de una solucin de carragenina a nivel de la
aponeurosis plantar de la rata, provocando una reaccin de carcter
inflamatorio mediada por la liberacin de diversos autacoides (histamina,
serotonina, bradicinina, prostaglandinas) adems diversos factores del
complemento que estn implicados en la amplificacin de la respuesta. El
producto a ensayar se puede administrar va intraperitoneal, oral, etc.

Una hora despus de la administracin de la sustancia problema, la


histamina y la serotonina tienen un papel principal como mediadores. De
una hora y media a dos y media horas despus de la inyeccin de
carragenina, intervienen las cininas como mediadores. La ltima fase esta
mediada por prostaglandinas (PGE1 y PGE2, PGF2).

La respuesta vascular mxima ocurre aproximadamente a las 4 horas de la


administracin de carragenina y coincide con la fase mediada por las
prostaglandinas. La extravasacin de protenas ocurre durante toda la
respuesta al agente edematgeno. La migracin celular, fundamentalmente
leucocitos polimorfonucleares, comienza a las 2 horas de haberse inyectado
el agente.

Se prefiere la carragenina ante otros irritantes porque el edema producido


esta menos modificado por factores ajenos a los propiamente
caractersticos de la inflamacin y adems, porque la actividad
antiinflamatoria de este ensayo guarda una buena correlacin con la
actividad anti-inflamatoria en clnica.

II. OBJETIVOS

- Inducir inflamacin in vivo en ratas


- Determinar el porcentaje de inflamacin inducida
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III. REACTIVOS Y MATERIALES

3.1 REACTIVOS
- Carragenina
- Suero fisiologico
- NaCl 0.1%
- Triton X100
- EDTA 5mM

3.2 MATERIALES

- Pletismometro
- Micropipetas
- Jeringas 1ml
- Tubos Eppendorf
- Bao maria

IV. PROCEDIMIENTO

A. Preparacin de la solucin de carragenina 2%

1. Pesar 20mg de carragenina y agregar 1ml de suero fisiolgico


2. Disolver la carragenina calentando la solucin a 80 oC

B. Induccin de inflamacin

1. Inyectar en la aponeurosis plantar de la pata trasera derecha de la


rata 100ul de la solucin de carragenina al 2%, dejar la pata
izquierda sin inyectar
2. Esperar 1 hora y realizar la medicin del volumen de ambas patas
utilizando el pletismometro.

C. Medicin de la Inflamacin

1. Calibrar el pletismometro con una solucin de NaCl 0.1% y Triton


X100, llevando a 0 ml (cero) el instrumento para luego colocar una
pesa de 3ml en el reservorio de medida y apretar el botn de
calibrado, la pantalla deber mostrar el valor de 3ml, lo cual indica
que el instrumento ya esta calibrado Al retirar la pesa la pantalla
deber mostrar 0 ml
2. Introducir primero la pata no inyectada (izquierda) en el reservorio
de medida y anotar la lectura que aparece en la pantalla
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3. Luego introducir la pata inyectada (derecha) en el reservorio de
medida y anotar la lectura que aparece en la pantalla.

C. Calculo del porcentaje de Inflamacin

1. Con las lecturas del pletismometro correspondientes a cada pata


trasera aplicar la siguiente frmula para determinar el porcentaje
de inflamacin

%inflamacin= Vt (pata derecha) Vnt (pata izquierda) X 100

V. RESULTADOS

Esquematice los pasos para la induccin de inflamacin in vivo

Haga los clculos para determinar el porcentaje de inflamacin hasta las


dos horas
%inflamacin= Vt (pata derecha) Vnt (pata izquierda) X 100
%inflamacin=1,22-0,68= 54%

VI. CUESTIONARIO

1. Defina inflamacin aguda y crnica

Inflamacin aguda

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La fase aguda de la inflamacin es sinnimo de reaccin inmune innata. En la inflamacin aguda
distinguimos tres puntos clave: cambios hemodinmicos, alteracin de la permeabilidad vascular y
modificaciones leucocitarias

Inflamacin crnica

Cuando la inflamacin se mantiene durante un tiempo prolongado (semanas o meses), se habla


de inflamacin crnica, en la que coexisten el dao tisular y los intentos de reparacin, en diversas
combinaciones. Este segundo caso es el responsable del dao tisular de algunas de las enfermedades
humanas ms invalidantes, como la artritis reumatoide, la aterosclerosis, la tuberculosis o la fibrosis
pulmonar.

2. Mencione los principales eventos que ocurren en un proceso


inflamatorio

3. Describa el modelo de edema plantar por carragenina en la pata de


la rata y que ventajas tiene frente a otros modelos

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4. Mencione y comente otros modelos para evaluar actividad


inflamatoria in vivo

in vivo de inflamacin edema tpico en :


oreja de ratn: El irritante empleado fue aceite de croton (100 g/oreja) con dos
aplicaciones de 10 L en cada superficie (interna y externa) del pabelln
auricular derecho. El patrn empleado fue indometacina en dosis de 250
g/oreja. Los extractos se aplicaron en dosis de 500 g/oreja. El irritante,
patrn, extractos y fracciones se disolvieron en acetona. La oreja izquierda, no
tratada, permaneci como referencia. Al grupo control se le aplic vehculo y
aceite de croton. A las cuatro horas de aplicado el irritante se sacrificaron los
animales por dislocacin cervical, se obtuvo biopsia por sacabocado del centro
del pabelln (dimetro aproximado 6 mm), y se determin el peso (expresado
en miligramos, mg)
edema plantar por carragenina en rata : ya se vio en practica
bolsa de aire en ratn: Se inyectaron 10 mL de aire estril en el dorso del
animal el da cero, con reinyeccin de 5 mL el da tres. El da seis el grupo
control recibi 1 mL de zimosn al 1% en SSN; el grupo patrn recibi zimosn
mezclado con indometacina (250 g/bolsa); los grupos tratamiento recibieron
zimosn mezclado con las fracciones evaluadas (500 g/bolsa) y el grupo
blanco recibi 1 mL de SSN. Despus de cuatro horas se sacrificaron los
animales por dislocacin cervical. Se inyect luego 1 mL de SSN realizando
masaje sobre la bolsa y se recolect el exudado para realizar recuento
leucocitario como ndice de migracin celular. El recuento se realiz por la
tcnica de hemocitometra manual empleando la cmara de recuento de
Neubauer con tincin previa del exudado con colorante de Wright. Los datos se
expresaron como media del nmero de leucocitos x 106/mL D.E

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5. Esquematice el diseo experimental para evaluar la actividad
antiinflamatoria de un flavonoide obtenido a partir del llantn

Conclusiones:

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La inflamacin es la respuesta del tejido vivo vascularizado a la lesin; puede ser
causada por agentes biolgicos, fsicos o qumico.
Existe liberacin de sustancias mediadoras -bradiquinina, prostaglandina, histamina y
serotonina-, que inducen permeabilidad vascular.
La IL-1 permite la induccin de genes que codifican para la ciclooxigenasa tipo 2
(COX2), la fosfolipasa A tipo 2 (PLAT2) y el xido ntrico sintetasa inducible (iNOS).
Otras citoquinas, como IL-2, IL-6 e IL-8, contribuyen a la aparicin de manifestaciones
de respuesta inflamatoria.
La inflamacin es una respuesta protectora, cuyo principal objetivo es librar al
organismo del elemento causante del dao celular, como microbios y toxinas, y de las
consecuencias de ese dao, con formacin de clulas y tejidos necrticos. Sin la
inflamacin, las infecciones se diseminaran y las heridas nunca cicatrizaran. Por otro
lado, la inflamacin no curada adecuadamente es la base de las reacciones de
hipersensibilidad y enfermedades crnicas, como la artritis reumatoide, la
aterosclerosis y la fibrosis pulmonar.

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