Validacin parcial de un mtodo analtico

para la determinacin de bifenilos policlorados

(PCBs) en aceites de transformadores usando
la cromatografa gaseosa y Aroclor 1254
Margie Zorrilla Velazcoa*, Petra G. Velazco Pedrosoa, Gretel
Villanueva Ramosb, Herman Vanlangehovec
a
Centro de Estudio de Qumica Aplicada. Universidad Central de Las Villas. Carretera a Camajuan
Km 5 Santa Clara. CP 54830, Villa Clara, Cuba. bDepartamento de Ingeniera Qumica. Universidad
Central de Las Villas. Carretera a Camajuan Km 5 Santa Clara. CP 54830, Villa Clara, Cuba.
c
Laboratorio EnVOC, Facultad de Bioingeneria, Universidad de Gante, Blgica.

Partial validation of an analytical method for determination of polychlorinated

biphenyls (PCBs) in transformer oil using gas chromatography and Aroclor 1254

Validaci parcial dun mtode analtic per a la determinaci de bifenils policlorats

(PCB) en olis de transformadors utilitzant la cromatografia gasosa i Aroclor 1254

Recibido: 29 de abril de 2011; aceptado: 19 de septiembre de 2011

RESUMEN method is based in the PCBs liquid-liquid extraction from

En el trabajo se presentan los resultados obtenidos du-
rante el desarrollo y validacin parcial de un mtodo
analtico para la determinacin de Bifenilos Policlorados
(PCBs) presentes en aceites de transformadores. El mto-
do consiste en una extraccin lquido lquido de los PCBs
del aceite usando n-hexano como disolvente y la posterior
determinacin por cromatografa gaseosa con deteccin
de ionizacin por llama. La validacin se realiz utilizan-
do un estndar secundario de Aroclor 1254, con el que
se prepararon disoluciones a siete niveles de concentra-
cin comprendidos entre 10 y 1000 g/mL para evaluar
la linealidad del sistema y del mtodo. La curva de ca-
libracin obtenida presenta un comportamiento lineal en
todo el intervalo de concentraciones con un coeficiente de
correlacin R2 igual a 0.9992. El mtodo demostr buena
precisin a travs de la repetibilidad en la inyeccin, con
coeficientes de variacin inferiores al 5 %, buena exacti-
tud y elevados porcentajes de recuperacin. El lmite de
deteccin fue menor que 20 g/mL. Finalmente, el mtodo
validado se utiliz en la determinacin de la concentracin
de PCBs en muestras de aceite procedentes de transfor-
madores en desuso.
Palabras clave: Bifenilos Policlorados, Cromatografa ga-
seosa, PCBs.
SUMMARY
In this paper are presented the obtained results in the de-
velopment and partial validation of an analytical method
for determination of PCBs present in transformer oils. The
oil transformer using n-hexane as solvent and the later de-
termination of PCBs for gas chromatographic with flame
ionization detector. Aroclor 1254 was used as secondary
standard. To evaluate the linearity of the system and the
method seven dissolutions between 10 and 1000 g/mL
of concentration were prepared. The resulting calibration
curve presents a lineal behavior in the studied interval of
concentration with a correlation coefficient R2 of 0.9992.
The method shows a good reproducibility in the injection
with a variation coefficient smaller that 5%, good exactitu-
de and high recuperation percent. The detection limit was
smaller than 20 g/mL. Finally, the method validated was
used for the determination of PCBs concentration in oil
samples from out of service transformers.
Keywords: Polychlorinated Biphenyls, Gas Chromatogra-
phy, PCBs.
RESUM
En el treball es presenten els resultats obtinguts durant el
desenvolupament i validaci parcial dun mtode analtic
per a la determinaci de Bifenils Policlorats (PCB) presents
en olis de transformadors. El mtode consisteix en una
extracci lquid-lquid dels PCBs de loli usant n-hex com
dissolvent, i la posterior determinaci per cromatografia
gasosa amb detecci per ionitzaci de flama. La validaci
es va realitzar utilitzant un estndard secundari de Aroclor
1254, amb el qual es van preparar dissolucions a set ni-
* Autor para la correspondencia: margiezv@uclv.edu.cu
Telf.: (53) (42)-281510. Fax: (53) (42)-81608

Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011 341

vells de concentraci compresos entre 10 i 1000 mg / mL
per a tal davaluar la linealitat del sistema i del mtode. La
corba de calibratge obtinguda presenta un comportament
lineal en tot linterval de concentracions amb un coeficient
de correlaci R2 igual a 0,9992. El mtode va demostrar
bona precisi a travs de la repetibilitat en la injecci, amb
coeficients de variaci inferiors al 5%, bona exactitud i
elevats percentatges de recuperaci. El lmit de detecci
va ser inferior a 20 g / mL. Finalment, el mtode validat es
va utilitzar en la determinaci de la concentraci de PCBs
en mostres doli procedents de transformadors en dess.
Paraules clau: Bifenils Policlorats, Cromatografia gasosa,
PCB.
Introduccin
El trmino bifenilos policlorados, o PCBs, hace referencia
a una clase de productos qumicos orgnicos de sntesis
que, en gran medida, son qumicamente inertes. La prime-
ra sntesis de PCBs fue realizada por Schmitt-Schulz en
Alemania en 1881, y se inici la produccin industrial para
su uso comercial, por la empresa Monsanto en 1929. La
molcula de PCB fue producida por medio de un proceso
qumico que liga los tomos de cloro a una molcula de
bifenilo. (Lpez y col, 2001)
Su frmula qumica es C12H(10-n)Cln en la que n representa el
nmero de tomos de cloro entre uno y diez, que incluye
a todos los compuestos con una estructura de bifenilo (es
decir, dos anillos de benceno enlazados entre s que es-
tn clorados en grados diversos). En teora existe un total
de 209 congneres de PCBs posibles, pero de ellos solo
unos 130 pueden encontrarse en productos comerciales.
Los PCBs han tenido multitud de aplicaciones, muchas
de las cuales an se mantienen, por ejemplo: como lqui-
dos dielctricos de equipos elctricos, lquidos de termo-
transferencia en operaciones mecnicas, plastificantes,
lubricantes, tintas y revestimientos de superficies. Su pre-
sencia se manifiesta en sistemas cerrados, parcialmente
cerrados y abiertos. Estas designaciones hacen referencia
a la facilidad con que un producto que contenga PCBs
puede pasar al entorno. (UNEP, 1999)
Actualmente, debido a los riesgos que presenta para el
medio ambiente y la salud la utilizacin de los PCBs, est
prohibida su fabricacin y comercializacin y sus usos
han sido restringidos, permitindose slo seguir utilizando
transformadores y condensadores con PCBs hasta el final
de su vida til. A pesar de estas regulaciones, grandes
cantidades de PCBs, materiales y residuos contaminados
con los mismos, sobre todo transformadores y condensa-
dores, se encuentran an en muchos lugares de trabajo,
generando un grave riesgo para la salud de los trabajado-
res y el medio ambiente.
Para la correcta gestin de estos residuos peligrosos el
primer paso es la identificacin del contenido de PCBs en
los mismos. La determinacin cuantitativa de los PCBs se
lleva a cabo principalmente por tcnicas cromatogrficas,
y para aceites de transformadores con bajo contenido de
PCBs se requiere un tratamiento previo de la muestra, que
consiste en un procedimiento de extraccin a partir de
la muestra de la parte lipfila, procedimiento que puede
llevarse a cabo mediante microextraccin en fase slida,
extraccin slido - lquido, Soxhlet, disco de fase slida o
microondas y posteriormente un proceso de limpieza para
342
eliminar las interferencias el que puede llevarse a cabo
mediante cromatografa de permeacin en gel (GPC), Flo-
risil o cido sulfrico concentrado. Este anlisis propia-
mente dicho se lleva a cabo mediante un cromatgrafo
de gases con detector de captura electrnica (GC-ECD),
con detector de masas (GC-MS) o HPLC. http://www.ats-
dr.cdc.gov/toxprofiles/tp17-c7.pdf. Para anlisis de rutina
de muestras de PCBs en diferentes matrices como sue-
lo, agua y aceite se propone el mtodo de determinacin
que usa la cromatografa gaseosa con detector de captura
electrnica. (Renan, 2002)
La EPA (Environmental Protection Agency, por sus siglas
en ingls) registra dos mtodos para la determinacin de
PCBs en aceites de transformadores:
1. EPA-600/4-81-045, 1982. The Determination of Poly-
chlorinated Biphenyls in Transformer Fluid and Waste
Oils.
2. EPA-SW-846 Method 9079, 1996. Screening Test
Method for Polychlorinated Biphenyls in Transformer
Oil.
Otros pases, sin embargo, han editado sus propias nor-
mas para la determinacin de PCBs en lquidos aislantes
empleado la cromatografa gaseosa con detector de cap-
tura electrnica un ejemplo es la Norma CISCOE 03/10/00,
para Colombia.
Finch y Mahon (Finch, 1990; Mahon y col., 2002) proponen
mtodos ms rpidos, sencillos y econmicos para la de-
terminacin de PCBs en los aceites de transformadores,
uno de ellos es el L2000 PCBs Analyzer, que puede ser
usado en el campo o en el laboratorio y es efectivo en un
intervalo de 5 a 5000 ppm de PCBs, aunque la determina-
cin por esta va puede dar un falso positivo debido a que
junto con los PCBs a los aceites se le adicionan muchas
veces otras sustancias que contienen cloro en su estruc-
tura, para disminuir su viscosidad.
Los mtodos de determinacin descritos anteriormente
se utilizan para el anlisis de muestras que poseen bajos
contenidos de PCBs y requieren tratamientos previos em-
pleando engorrosos procedimientos de separacin, reac-
tivos qumicos costosos y la mayora utiliza la cromatogra-
fa gaseosa acoplada a un detector de captura electrnica
(detector ms selectivo para compuestos clorados), de-
tector de masas o la cromatografa liquida de alta eficacia,
lo que representa una desventaja para su utilizacin en
muestras que contienen altas concentraciones de PCBs
que pueden ser determinadas con un procedimiento sen-
cillo y un detector de ionizacin por llama (FID).
Por lo tanto, el objetivo de este trabajo estuvo encamina-
do a implementar un mtodo analtico para identificar y
cuantificar los PCBs en muestras de aceites de transfor-
madores y residuos de aceites con altos contenidos de
PCBs usando la cromatografa gaseosa con detector de
ionizacin por llama y el Aroclor 1254 como estndar.
Materiales y Mtodos
Anlisis de PCBs
Para la cuantificacin de los PCBs se us un cromatgra-
fo gaseoso Agilent 7890A equipado con un detector de
ionizacin por llama (FID) y una columna de 5% fenilpo-
lixilosano (HP-5) de 30 m de largo x 320m de ancho, con
un dimetro interior de 0,25 m. Las condiciones experi-
mentales del cromatgrafo gaseoso fueron las siguientes:
Nitrgeno como gas portador a 4 mL/min; temperatura
Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011
 como para el resto de los nueve congneres seleccionados. A cada una de las

y por ltimo a una velocidad de 5C/min hasta 280C. Latres inyeccinrplicas. se realiz
Storr-Hansen, en modo1993 de flujoestablece sin divisin
un valor y sede tolerancia permitida d
como para el resto de los nueve congneres seleccionados. A cada una de las determinaciones se
yemple
por ltimo 1L adeuna velocidad de 5C/min como
muestra. hasta 280C.para el La resto
PCBs
de los nueve
inyeccin desin 0.02%se realiz congneres
y delen 1% modo seleccionados.
parade el flujo
estndar
A cada una de las determinaciones
sin divisin
interno. y se
velocidad de 5C/min hasta 280C. La inyeccin se realiz en modo de flujo divisin y se
tres rplicas. Storr-Hansen, 1993 establece un valor de tolerancia permitida del coeficiente de v
emple 1L de muestra. tres rplicas. Storr-Hansen, 1993 establece un valor de tolerancia permitida del coeficiente de
Soluciones de estndar
inyeccin, 250C y temperatura del detector, 300C.
ocidad de 5C/min hasta 280C. La inyeccin se realiz en modo de flujo ElEltiempo sin divisin de
Hansen,retenciny se relativo (RRT) es definido como la relacin entre el RT
1993 establece un valor de tolerancia permitida
uestra. horno se program de la siguiente PCBs manera: dela0.02% y del 1% paradel
temperatura elcoeficiente
estndar interno. de variacin para PCBs de 0.02% y del 1%
Soluciones estndar PCBsdespus de 0.02% seyde del 1% para para elelestndar
estndar interno.
ra. Fueron inicial
preparadasde 110C se sostieneenpor
disoluciones 1 min.;
n-hexano (grado au-
pesticida) a
referencia concentraciones
(SR) segn deinterno.
la 5, 25, 50,3. 100, 250, 500 y
ecuacin
ar menta hasta 180C a razn de 5C/min.; El tiempo de retencin relativo
posteriormente (RRT) de
El tiempo es retencin
definido como relativola(RRT) relacin entre elcomo
es definido RT dela cada congner
Fueron se eleva
preparadas a 230C a razn
disoluciones de 2C/min El tiempo
y por de
ltimo retencin
a una relativo relacin (RRT) entre es definido
el RT de como
cada la relacin
congner y entre
el el
estndar RTdede cada congn
1000 g/ mL a partir del estndarenden-hexano Aroclor 1254 (gradosuministrado
pesticida)
(3) aporconcentraciones
Sigma-Aldrich. de 5, 25, 50, 100, 250, 500 y
disoluciones en n-hexano (grado pesticida)
velocidad de 5C/min hasta 280C.de a concentraciones
Lareferencia
inyeccin se de
(SR) 5, 25,
realiz 50,
segn la ecuacin 100, 250,
referencia 500 y
3. (SR) segn la ecuacin 3.
1000 en modo de flujo sin divisin y se emple
g/ mL a partir del estndar de Aroclorde referencia
1L de muestra.
1254 (SR) segnpor
suministrado la ecuacin
Sigma-Aldrich. 3.
oluciones en Eln-hexano
congner (grado 52 (2, 2', 5, 5'- tetraclorobifenilo)
pesticida) a concentraciones fuedetomado 5, 25,donde:como
50, 100,estndar 250, 500 interno
y para determinar el tiempo de
tir del estndar de Soluciones
Aroclor 1254 suministrado
estndar por Sigma-Aldrich. (3)es el tiempo de retencin del congner y el tiempo de retencin
Fueron preparadas disoluciones en n-hexano (3) (grado pes-
El congner
retencin 52
relativo (2, 2',
(RRT).5, 5'- tetraclorobifenilo) (3) fue tomado como estndar interno para determinar el tiempo de
del
2',estndar de Aroclor
5, 5'- tetraclorobifenilo)
ticida) 1254 suministrado
fue tomado como
a concentraciones por
de Sigma-Aldrich.
estndar
5, 25, 50, interno 100, 250,para 500determinar
El yRRT obtenido el tiempo de esta deforma fue comparado con el promedio de cada una de l
1000 g/ mL a partir del estndar donde: de Aroclor 1254 sumi-
es el tiempo de retencin donde: RT del es el tiempo de retencin
C congner y el tiempo del decongner
retencin y RT del
SR estndar de re

5, 5'- retencin
PCBs nistrado
tetraclorobifenilo) relativo
seleccionados por
fue (RRT).paracomo
Sigma-Aldrich.
tomado la calibracin
estndar donde:
interno paraes determinar
el tiempo deelretencin eltiempo
tiempode delretencin
de congnerdel y estndar el tiempo de retencin del estndar de
de referencia.
(RRT). (4) fue comparado con el pro-
El congner 52 (2, 2, 5, 5- tetraclorobifenilo) El RRT obtenido fue tomado de esta forma RRTcomparado
El fue obtenido decon esta elforma
promedio de cada una de las determinaciones
PCBs
Para laseleccionados
calibracin
como estndar se para la calibracin
seleccionaron
interno nueve
para determinar El picos
RRT cromatogrficos
obtenido
el tiempo dede re-esta forma que representan
medio fue cadaauna
comparado
de los congneres
con
de las el promedio
determinacionesde PCBs de cada ms una de 4).
(ecuacin las determinacion
T).
os para la calibracin tencin relativo (RRT). La desviacin del RRT se obtiene mediante la diferencia entre las ecuaciones
Para
intensoslaPCBs
calibracin
y mejor se seleccionaron
seleccionados
resueltos enpara nueve (4)depicos
la calibracin
el estndar cromatogrficos que(4)representan a los congneres de PCBs ms
ara la calibracin
se seleccionaron nueve (4) Aroclor 1254. La integracin se realiza
de forma manual.
Para lapicos cromatogrficos
calibracin se seleccionaron que representan
nueve picosacromato- los congneres de PCBs ms
Hoof y Hsieh, 1996) establecen que diferencias mayores de 0.02 implican
intensos
Control grficos
ydemejor que
la calidad representan
resueltos en elaestndar
del mtodo Ladedesviacin
los congneres Aroclor de PCBs del ms
1254. RRT se obtienesemediante
La integracin realiza delaforma diferenciamanual. entre las ecuaciones 3 y 4. Van Hoof
seleccionaron
esueltos nueve
en el estndar picos
intensos ycromatogrficos
de Aroclor mejor 1254. resueltos queelrepresentan
La integracin
en La se
estndar aAroclor
realiza
desviacin
de los decongneres
forma
del
1254. RRT de obtiene
manual.
se PCBs msmediante la diferencia
se obtieneentre las ecuaciones 3 y 4. Van Hoo
movilidad y que adems su cuantificacin nomediante
La desviacin del RRT la diferencia
es representativa.
La integracin se realiza de forma manual.
Hoof parcialy Hsieh, 1996) establecen entre las ecuaciones 3 y 4. Van Hoof y Hsieh (Van Hoof
ltosdel
en mtodo
Control
Los parmetros
el estndar
de la calidad
de Aroclor utilizadosdel mtodo
Laen la validacin dedel mtodo analtico que fueron: diferencias
linealidad, mayoreslmite de de deteccin
0.02 implican que el congner
dad Control de la1254. calidad integracin
del mtodo se realiza
Hoof y Hsieh, forma 1996) manual. establecen y Hsieh, que1996) diferencias
establecen mayores
que diferenciasde 0.02 implican
mayores de que el congne
Los parmetros utilizados en la validacin parcial del m-
d) Para la repetibilidad en la inyeccin se utiliza el punto de concentracin 250
0.02 implican que el congner presenta gran movilidad y
Los
(LoD) parmetros
y lmite de utilizados
cuantificacin en la validacin
(LoQ), movilidad parcialy(repetibilidad
precisin que mtodo
del adems analtico su
en cuantificacin
la inyeccin) no
fueron: ylinealidad, es representativa.
reproducibilidad lmite de deteccin
intermedia.
del mtodo
ilizados en la validacin todo analtico parcialfueron:del mtodolinealidad,analtico
lmite fueron:
movilidad
de deteccin ylinealidad,
que(LoD)
adems lmite
su que de adems
deteccin
cuantificacin su no es representativa.
cuantificacin no es representativa.
y lmite de cuantificacin (LoQ), precisin (repetibilidad en tres veces para posteriormente
d) Para la repetibilidad en la inyeccin se determinar elutiliza
promedioel puntodel de rea bajo la
(LoD)
a) y
Linealidad:lmite de
Para cuantificacin
el estudio de(LoQ),
la d)
linealidadPara
precisin la
del repetibilidad
(repetibilidad
mtodo fue enen la
la
seleccionado inyeccin
inyeccin) el sey utiliza el
reproducibilidad
intervalo de punto
concentracin de concentracin
intermedia. de 5 a 250 g/mL y se inye
ados en la validacin
cuantificacin (LoQ), parcial del
la inyeccin)
precisin mtodo analtico
y (repetibilidad
reproducibilidad fueron:
d) Paralinealidad,
enintermedia.
la inyeccin) la yrepetibilidad lmiteendela
reproducibilidad deteccin
concentracin
inyeccin se250
intermedia. g/mL
utiliza y se inyecta
el punto la muestra tres
de concentracin 250 ve-g/mL y se iny
a) Linealidad: Para el estudio de la linealidad del mto- cromatogrficos ces para integrados
posteriormente manualmente determinar y referidos
el promedio al tiempo
del reade retencin rela
a) Linealidad:
1000 (g/mL)
do fue Para
de
seleccionadoel estudio
Aroclor 1254.
el intervalo tres
de laAllinealidad
realizar
de veces
la
concentracin paradeposteriormente
delintegracin
mtodo 5fuea de seleccionado
los picos
bajo la determinar
el intervalo
resultantes
curva para ael depromedio
estas
los concentracin
nueve concentraciones
picos del rea
de 5 se
cromatogrficosabajo lainte- curva para los
ntificacin
a el estudio(LoQ), precisin (repetibilidad
de la linealidad del mtodo fue enseleccionado
la inyeccin)tres veces ely intervalo
reproducibilidad
para de concentracin
posteriormente intermedia. de 5 a
determinar el promedio del rea bajo la curva para lo
1000 (g/mL) de Aroclor 1254. Al realizar la integracintetraclorobifenilo) de grados manualmenteque aparece aylos 15 minutos
referidos al tiempoaproximadamente.
de retencin
estudio de 1000
laobtiene (g/mL)
loscomo
linealidad picos deldesealAroclor
resultantes
mtodo fue1254.
analtica
a estas elAl
seleccionado
cromatogrficos
realizar
rea bajo
concentraciones
el lalaintegracin
intervalo curva, integrados
se obtiene
de que de se
concentracin
manualmente
los representa
picos
relativo deresultantes y referidos
delagrficamente
5 congner a estas
52 (2, alen tiempo
2, 5, 5- de
concentraciones
funcin retencin
de se relativo
las
tetraclorobifenilo) que del congner 5
Aroclor 1254. Al realizar la integracin de los picos resultantes a integrados
cromatogrficos estas concentraciones manualmente se y referidos al tiempo de retencin relativo del congner
como seal analtica el rea bajo la curva, que se repre- aparece a los 15 minutos
La repetibilidad en la inyeccin se evalu mediante la determinacin de la desvaproximadamente.
clor 1254. obtiene
concentraciones
Al realizar como
senta
la seal
grficamente
de cada
integracin analtica
en funcin
disolucin
de los y setetraclorobifenilo)
el picos
rea
de bajo
lasobtiene la lacurva,
concentraciones
resultantes curva
a estas que
de aparece
se representa
decalibracin
concentraciones
Laa repetibilidad
los
con15 la
se
minutos
grficamente aproximadamente.
que seendeterminan en funcin
la inyeccin losse de lasmediante la
evalu
parmetros
al analtica el rea cada bajo disolucinla curva, que selarepresenta
y se obtiene curva grficamente
tetraclorobifenilo)
de calibracin con que en
aparece funcin a losde
determinacin 15las minutos aproximadamente.
de la desviacin estndar relativa (RSD) a
partir del valor de la desviacin estndar (S) y la media aritmtica de cada una d
la que sede
concentraciones
derea
la ecuacin determinan
delacada delosmejor
disolucin
rectaque parmetros
y seLa
ajuste. de la ecuacin
repetibilidad
obtiene la curvaen de
delalacalibracin
inyeccin partir se
con del lavalor
evalu dedeterminan
quemediante
se la desviacin
la determinacinlosestndar
parmetros (S) la
de y desviacin
la media estndar rel
analtica el
e cada disolucin yrecta bajo
se obtiene la
de mejor curva,
la ajuste. se representa
curva de calibracinLacon grficamente
la que se determinan
repetibilidad enenla inyeccin
funcin los dese las
parmetros
aritmtica evalu de cada mediante
una delalas determinacin
determinaciones de la(segn
desviacin
la estndar r
b) El LoD y LoQ fueron calculados a partirdel devalor las ecuacio-
la ecuacinecuacin 5. 5.
deb) yla
Elseecuacin
LoD y LoQ de lafueronrecta de mejor ajuste. de la desviacin estndar (S) y la media (1) aritmtica de cada una de las determinacio
da disolucin
a recta de mejor obtiene
ajuste.
nes la curva decalculados
de Vogelgesang calibracin
y Hdrich (1)
a con
partir
y la
partir
de las
(2)que del
ecuaciones
sevalor
reportadas determinan
depor
de
losVogelgesang
la desviacin parmetros y Hdrich y (2) reportadas
(5) estndar (S) y la media aritmtica de cada una de las determinac
Robles (Robles, H. y col., 2005), teniendo en cuenta(5) los ( )
b)por ElRobles
LoD y(Robles,
LoQ fueron H.eny lacalculados
col., 2005), la ecuacin
ateniendo
partir deenlascuenta5.ecuaciones
los datos de obtenidos
Vogelgesang en lay curva
Hdrich (1) y (2) reportadas
de calibracin.
cta de mejor
fueron ajuste.
calculados a partir
datos de las ecuaciones
obtenidos curva de calibracin.
de Vogelgesang
la ecuacin y Hdrich
5. (1) y (2) reportadas
Como criterio de aceptacin se adopt un valor lmite para
por Robles (Robles, H. y col.,y2005), teniendo en cuenta los Como datoscriterio obtenidos de aceptacin
en5la%. curvasedeadopt calibracin. un valor lmite para la RSD de 5 %.
s,onH.calculados
y col., (1)2005), (1)
a partirteniendode lasenecuaciones
cuenta los de Vogelgesang
datos (5)
y obtenidos y Hdrich (1) y (2)( la ) RSD de
reportadas
(5) en la curva de calibracin. (e)Precisin
) (Reproducibilidad intermedia). Para el estudio
e) Precisin de (Reproducibilidad
reproducibilidad intermedia).
intermedia Para el estudio de reproducibilid
parase la realizaron
RSD de 510 %.determina-

. y col., 2005),(1) teniendo en cuenta los datos obtenidos y Como en la curvade
criterio deaceptacin
calibracin.
se adopt un valor lmite
Donde:y (ycrit) seal de rea crtica, (a) intercepto
Como criterio y (b) pendiente
de aceptacin de la securva
ciones adopt dede un calibracin,
un valordelmite
punto la (t ) distribucin
f;para
curva RSD de de
delacalibracin 5 (concentra-
%.
determinaciones cin dede500 un g/mL)
punto de en la curva dedas,
diferentes calibracin
con el mismo (concentracin
ins- de 500
e) Precisin (Reproducibilidad intermedia). Para el estudio de reproducibilidad intermedia se
yt con f (y
Donde: n )seal
= crit 2 dl de y rea crtica, valor
=0,05, (a) intercepto
e) Precisin
medio dey la (b)concentracin
pendiente de la
(Reproducibilidad detrumento
curva
todos de ylos
intermedia). por el mismo
calibracin,
anlisis Para y S(tanalista.
elyf; error Se
) distribucin
estudio
realiz un anlisis de intermedia s
de
de reproducibilidad
estndar del
de rea crtica, (a) intercepto
Donde: y (b) de
(ycrit) seal pendiente
rea crtica,de la(a)curva

interceptode calibracin, mismo
y (b) pen- (tf; instrumento
) distribucin
varianza (ANOVA) y depor elpara mismo analista.
determinar el Se
efectorealiz
de cadaun anlisis
uno de varianz
diente de la curva de calibracin, (tdeterminaciones
) distribucin de de
t con un punto de de losla curvadas porde separado
calibracin y se(concentracin
calcul, para de n500
las g/mL) en diferent
determi-
tmodelo
con f =den regresin. 2 dl y = 0,05, valor f;medio de la concentracin
determinaciones de de de todos los anlisis y Sy error estndar del de 500 g/mL) en diferen
rea
y= crtica,
0,05, (a) valor
intercepto n 2 ydlde
f = medio (b) pendiente
y la =concentracin
0,05, valor de lamedio
curva
de todos delacalibracin,
de los (tyf;un
anlisisefecto
concentracin
punto
S)y distribucin
error
de cada
la curva
uno de
estndar
naciones deendellos
de calibracin
los das
dos pordas,separado
(concentracin
la media,y la se desviacin
calcul, para las n determinacio
estn-
de todos los anlisis y Sy error estndar mismo instrumento
del modelo de y por el dar mismo analista. Sederealiz
y el coeficiente variacin. un anlisis
A partir de de estevarianza
anlisis(ANOVA) para
modelo de regresin. mismo instrumento y porestndar el mismo analista. Se realiz un anlisis de varianza (ANOVA) par
= 0,05, valor
n. (2) medio regresin. de la concentracin yde todos los anlisis Sy error
y[ desviacin ] se estndar
determin del y el
si coeficiente
existen de
diferencias variacin. A
significativas partir
entrede este anlisis se
los
efecto de cada uno de los dasresultados por separado obtenidosy se calcul,
para los para dos lasdasn usando
determinaciones
el criterio en los dos da
efecto de cada uno de los das por separado y se calcul, para las n determinaciones da enellos dos d
(2) (2) yy [ significativas ] de Fisher, entre los y laresultados
homogeneidad obtenidos de lapara
varianza
los dos en das
cadausando criterio
Donde y yDTM es el punto [ ]
ms bajo de ladesviacin distribucin estndar gaussiana
y el cercana
coeficiente
por a 2LoD
separado de y valor
variacin.
a partir
A
del medio
partir
criterio dede
delos
estevalores
anlisis
Cochran. se
(CEMCED, determin si exist
desviacin estndar y el coeficiente 2007), de la desiguiente
variacin. forma:A partir de este anlisis se determin si exi
yrespuestas [ ms bajo ] de lasignificativas la varianza en cada da por separado a partir del criterio de Cochran. (CEMCED
Donde yDTMdeeslos el anlisis.
punto
distribucin gaussiana
entre
losmedio cercana aobtenidos
resultados 2LoD y para valor losmedio
dos das de usando
los valores el criterio de Fisher, y la hom
punto ms bajo de la distribucin gaussiana cercana a 2LoD y
significativas entre los valor resultados de los
1. valores
Siobtenidos
F < F , se para
puedelos dos concluir das queusando el criterioob-
los resultados de Fisher, y la ho
cal tab
respuestas
Dondede ylos anlisis.
esestabilidad
el punto msdelbajo de la de
distribucin gaus- tenidos en los
del diferentes
dedas
denoretencin
difieren entre s y2007),
el
to ms bajoc)dePara
nlisis.
estimar
la siana DTMla
distribucin
cercanagaussiana
a 2LoD y cercana
tiempo
alala
valor medio 2LoD retencin
varianza en cada
y valores
varianza
de los valor (TR)
medio
en cada
sedeevala
da por
da por
res-
separado
los la amovilidad
valores
separado
partir
a partir
mtodo
del tiempo
criterio Cochran. (CEMCED, de la sigui
del criterio de Cochran. (CEMCED, 2007), de la sigu
es preciso.
c) Parapuestas
(MRT) estimardelalos
mediante anlisis. del
elestabilidad
coeficiente tiempo dedelretencin
de variacin tiempo de(TR) 2.
(CV,Sila%)
se evala
retencin Gmovilidad
< Gtabpara
tanto
cal
, la del
variacin delde
tiempo
el estndar mtodo puede
retencin
interno (E. I) 5 conside-
sis.
estabilidad del tiempo
c) Para de retencin
estimar (TR) sedelevala
la estabilidad tiempolademovilidad del tiempo de rarse
retencin (TR) retencinigual para los intervalos considerados y es un
(MRT)se evala la movilidad del tiempo de retencin (MRT) me-
mediante el coeficiente de variacin del tiempo de retencin (CV,criterio
4 tiempo %) tantoa favor de la precisin del mismo.
para el estndar interno (E. I)
labilidad del de
coeficiente tiempo de el
variacin
diante retencin
del tiempo(TR)
coeficientede se evala(CV,
deretencin
variacin la tiempo
del movilidad
%) tanto del
para de3. retencin
el estndar
de retencin interno
Si el (E. I)
coeficiente de variacin
5 es menor del 5% hay
(CV, %) tanto para el estndar interno (E. I) como para el
4 una
reproducibilidad. 5
eficiente de variacin
restodel
de tiempo decongneres
los nueve retencin
4 (CV, %) tanto para
seleccionados. el estndar
A cada interno (E. I)
de las determinaciones se le realizaron tres rplicas. Storr-
4

Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011 343

Resultados y Discusin

En la Figura 1 se presenta el cromatograma obtenido para
la disolucin de Aroclor 1254 de concentracin igual a 500
g/mL, donde se observa la elucin de 40 picos cromato-
grficos, 21 de los cuales presentan una intensidad mayor
que 1% del rea total por tanto estos representan el rea de
integracin del registro cromatogrfico. Usando la bibliote-
ca NISTO2 del software Chemstation fueron identificados
los compuestos de la mezcla estndar del Aroclor 1254.
a)Linealidad: Se realiza el cromatograma de cada uno de
los patrones previamente preparados (5, 10, 25, 50, 100,
250, 500, 1000 g/mL) con tres rplicas para cada concen-
tracin. Para la obtencin de la curva de calibracin con el
Aroclor 1254 se seleccionaron nueve picos los cuales fue-
ron integrados manualmente. En la Figura 2 se muestran
los picos seleccionados con sus respectivos tiempos de
retencin y reas.

Figura 1. Cromatograma correspondiente al Aroclor 1254

Figura 2. Los nueve picos usados para la calibracin (Aroclor 1254, 500 g/mL)

Figura 3. Curva de calibracin para el Aroclor 1254.

344 Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011

La Figura 3 muestra la curva de calibracin obtenida en
funcin del rea total de los picos frente a la concentra-
cin del patrn, la cual corresponde a una lnea recta cuya
ecuacin es la siguiente: y = 6.0916 x + 0.0102 con un
coeficiente de correlacin (R2) de 0,9992, lo cual es indi-
cativo de que existe una fuerte relacin entre las variables
(rea y concentracin).
Para la verificacin estadstica de la linealidad de la curva
de calibracin, se realiz un anlisis de los resultados el
cual se muestra en la Tabla 1.
El intercepto es de 0.0102 con un error estndar de
12.2849 lo que hace que el intervalo de confianza sea de
-24.9048 a 24.9251 que incluye el cero. Por otra parte,
para la pendiente cuyo valor es de 6.0916, con un error
estndar de 0.0294, el intervalo de confianza est entre
6.03198 a 6.15129, francamente a la derecha del cero, lo
que indica que la pendiente es altamente significativa que-
dando demostrada la linealidad de la curva de calibracin.
El anlisis de varianza demuestra que la regresin lineal es
significativa siendo la ecuacin del modelo ajustado:

Tabla 1. Valores de los coeficientes a y b de la curva de calibracin.

Coeficientes Error estndar T- Student valor - P Inferior 95% Superior 95%

Intercepto 0.0102 12.2849 0.0008269 0.9994 - 24.9048 24.9251

Pendiente 6.0916 0.0294 207.09969 0.0000 6.03198 6.15129

Tabla 2. Movilidad del tiempo de retencin.

Congneres RTm CV (%)

1 15.757 0.0037

2 17.547 0.0043

3 17.826 0.0034

4 19.288 0.0043

5 20.492 0.0044

6 21.067 0.0042

7 22.423 0.0042

8 25.850 0.0032

Estndar Interno 14.975 0.2000

Tabla 3. Desviacin del RRT de los congneres incluidos en la curva de calibrado.

Congneres Desviacin del RRT para las diferentes concentraciones expresadas en g/mL

5 10 25 50 100 250 500 1000

1 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

2 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

3 0.000 0.003 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

4 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000 0.002 0.000 0.004

5 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

6 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

7 0.004 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000

8 0.004 -0.003 -0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

rea = 0.0102 + 6.0916*concentracin
b)Lmite de Deteccin (LoD) y Lmite de Cuantificacin
(LoQ): El lmite de deteccin calculado fue de 17.0 g/mL
y el de cuantificacin de 47.9 g/mL. El primer valor indica
que la presencia de los PCBs puede ser detectada por
el mtodo utilizado a niveles bajos de concentracin y el
LoQ indica que slo hasta un lmite de 47.9 g/mL pueden
ser cuantificados los congneres de PCBs con un alto ni-
vel de confianza.
c) Estabilidad del tiempo de retencin (RT): En la Tabla 3.2
se muestran los resultados de la movilidad del tiempo de
retencin (MRT). El tiempo de retencin medio (RTm) re-
presenta la media del RT a la cual eluyen los congneres
seleccionados para el anlisis y se muestra el coeficien-

Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011 345

te de variacin (CV) de cada una de las determinaciones,
que para la mayora de los congneres se encuentra por
debajo de 0.01% excepto para el pico correspondiente al
estndar interno. Storr Hansen (1993) establece un va-
lor de tolerancia permitida para PCBs de 0.02% y de 1%
para el estndar interno debido a la influencia que puedan
tener sobre este los picos correspondientes a congneres
menos abundantes. Por tanto, puede decirse que la mo-
vilidad del tiempo de retencin es estable en la columna.
El CV para el estndar interno est por debajo del 1% por
lo cual puede ser usado en la determinacin de la desvia-
cin del RRT. La desviacin del RRT debe ser cero o cer-
cana a este valor, diferencias mayores que 0.02 implican
que el congner presenta gran movilidad y que adems
su cuantificacin no es representativa. (Van Hoof y Hsieh,
1996). La Tabla 3 muestra la desviacin del RRT de los
congneres incluidos en la curva de calibrado.
A partir de los resultados obtenidos, la desviacin del RRT
cumple con el criterio fijado ya que los valores mostrados
de la desviacin son cero o lo suficientemente cercanos a
este valor por lo cual se puede decir que la RRT es consis-
tente y muestra una baja movilidad.
d) Precisin (Repetibilidad en la inyeccin). En la Tabla 4
se observa que los valores de cada uno de los picos to-
mados para la calibracin son menores que el 5%, por
lo que puede considerarse una buena repetibilidad en la
inyeccin. Valores mayores implicaran serios errores en la
determinacin de PCBs.

Tabla 4. Resultados de la repetibilidad en la inyeccin.

rea, rplica rea, rplica rea, rplica

TRR 1 (pA*s) 2 (pA*s) 3 (pA*s) Promedio Desviacin estndar RSD (%)

1.00 195.2 202.8 192.4 196.8 5.38 2.73

1.05 82.2 83.9 82.4 82.8 0.93 1.12

1.17 86.5 86.7 85.9 86.4 0.42 0.48

1.19 224.3 225.4 212.6 220.8 7.09 3.21

1.28 86.7 93.1 89.5 89.8 3.21 3.57

1.36 115.9 120.7 117.5 118.0 2.44 2.07

1.40 278.0 295.1 277.7 283.6 9.96 3.51

1.50 333.3 355.1 331.8 340.1 13.04 3.83

1.72 196.9 219.4 211.6 209.3 11.42 5.46

rea total 1599.0 1682.2 1601.4 1627.5 47.36 2.91

Tabla 5 Resultados de la evaluacin de precisin intermedia.

Da 1 Da 2
CVtotal
(%)
rea C (g/mL) rea C (g/mL)

3107.0 510.18 3163.0 519.4

500 g/mL 3152.0 516.33 3115.0 511.5 0.72

3129.3 512.55 3151.5 517.5

CV(%) 0.80 0.58

e) Reproducibilidad intermedia. En la tabla 5 se muestran los
resultados experimentales obtenidos para la precisin inter-
media evaluados por un mismo analista en diferentes das.
donde:
Fcal = 0.565848, Ftab (2; 0.05) = 4.303
Gcal =0.6386, Gtab (2; 0.05) = 0.9750
Al comparar las medias correspondientes a cada uno de
los das se aprecia que se cumple la hiptesis nula: media
1 = media 2
De la comparacin de los valores de F obtenidos se evi-
dencia que para un nivel de confianza de un 95% no exis-
ten diferencias significativas entre los factores estudiados
y que no existe variacin del mtodo entre los das, lo que
demuestra la buena precisin del mismo.
Teniendo en cuenta el cumplimiento de los criterios eva-
luados para la repetibilidad en la inyeccin y la precisin
intermedia, la tcnica analtica por GC- FID para la determi-
nacin de PCBs es precisa en las condiciones estudiadas.
Determinacin de PCBs en muestras de aceite de
transformador
Las muestras utilizadas para la determinacin de PCBs en
aceite de transformador fueron suministradas por el Cen-
tro de Investigaciones del Petrleo de Cuba (CEINPET).
Las concentraciones fueron obtenidas a partir de la curva
de calibracin.
Las muestras fueron identificadas como Sovtol-10 y la con-
centracin fue de 76.89 g/kg y 64.83 g/kg respectivamente.

346 Afinidad LXVIII, 555, Septiembre - Octubre 2011

Conclusiones
1. Las condiciones cromatogrficas establecidas para
GC-FID permiten una separacin eficiente de los con-
gneres seleccionados para la calibracin, lo cual es
corroborado por la poca variabilidad ( 0.003) en la
desviacin estndar relativa del tiempo de retencin.
2. Las caractersticas analticas de la calibracin obte-
nida presenta una linealidad mayor que 99%, con un
lmite de deteccin y un lmite de cuantificacin que
permite la identificacin y cuantificacin de PCBs a
concentraciones menores que 17 g/mL y 47.9 g/
mL respectivamente. El mtodo muestra una buena
repetibilidad en la inyeccin corroborada por una
desviacin estndar relativa RSD menor que 5 % lo
que indica consistencia en las mediciones.
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clors (A1254:A1260). J. Mex. Chem. Soc. 49(3), 263-
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and Breach Sci. Pub., Singapore. 24-38.

Agradecimientos

Los autores desean agradecer al editor y a los rbitros

por sus comentarios, al Proyecto Educacin Ambiental y
Tecnologas ms limpias entre las universidades flamen-
cas de Blgica y la Universidad Central Marta Abreu de
Las Villas, Cuba, financiado por el VLIR, y muy especial-
mente al Dr. Herman Van Langenhove y a los tcnicos del
laboratorio Amberlab de la Facultad de Bioingeniera de la
Universidad de Gante, Blgica por su contribucin en la
realizacin de este trabajo.

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