396 H.
ZAHI~: C h e m i s c h e S y n t h e s e v o n P r o t e i n e n
Quart. Rev. Biol. 38, 54 (1963). - - [20] HOLTFREI"ER, J., u. V.
HAMBURGER, in: Analysis of development, S. 230. Philadelphia:
W. B. Saunders t955. - - [21] WEiss, P., in: Analysis of develop-
ment, S. 346. Philadelphia: W. B. Saunders t955. - - [Z2] AGRA-
NOFF, B. W., R. E. DAVIS U. J. J. BRINK: Proc. Natl. Acad. Sci.
U. S. 54, 789 (1965). - - [23] JACOB, F., A. ULLMAN U. J. MONOD:
J. compt, rend. 2ss, 3125 ( t 9 6 4 ) . - [2g] W~LKINS, M. H. F.: Bio-
chem. Soc. Symposia (Cambridge, Engl.) No. 14, 13 ( 1 9 5 7 ) . -
[2~q] HOLLEY, R . W . , J. APGAR, G.A. EVERETT, S.T. MADISON,
M. MARQUISE[, S. M. MERILL, J. A. PENSWICK U. A. ZAMIR: Science
Chemische Synthese von Proteinen
H E L M U T ZAHN
Deutsches Wollforschungsinstitut an der T. H. Aachen*'
Um die Zeit, als der Naturforscher und Philosoph
LORENZ OI~EN die erste Versammlung Deutscher
Naturforscher und Arzte nach Leipzig fief, wurden
erstmals Aminos/iuren aus Proteinen durch Abbau
mit S~iuren und Alkalien gewonnen. Aber erst 80 Jahre
sp~iter konnte anl~tl31ich der 74. Versammlung.. der Ge-
sellschaft Deutscher Naturforscher und Arzte in
Karlsbad am 22. September t902 formuliert werden,
wie sich diese Abbauprodukte der Proteine urspriing-
lich zu langen Ketten vereinigt hatten, illdem zwischen
der Carboxyl-Gruppe der einen Aminos~iure und der
Amino-Gruppe der folgenden Aminos~ure unter Was-
serabspaltung eine S~iureamid-Bindung entstand.
Diese Theorie verdanken wir HOFMEISTER [1], da-
reals Professor Iiir Physiologic an der Universit/it
StraBburg. Auf der gleichen Tagung sprach FISCHER
[2] und best~itigte den Gedanken, dab s~iureamid-
artige Gruppen bei der Verbindullg der Aminos~iuren
in der Protein-Molekel die Hauptrolle spielen. Er be-
torte, dab ihn diese tJberzeugung schon t900 veran-
laBt babe, die synthetische Verkettung yon Amino-
s~iuren zu versuchen. Die dabei gebildeten Produkte
nannte er ,,Polypeptide". Obwohl in der damaligen
Zeit noch niemand wllBte, in welcher Reihenfolge die
in einem Protein enthaltenen Aminos~iuren mitein-
allder verkettet sind, prophezeite FISCHER [3], der
Vater der Peptidchemie, schon t906, dab auch bei
den Proteinen wie auch bei anderen Substanzen der
organischen Chemie eines Tages nicht nut die formel-
m~il3ige Struktur aufgekl~irt, sondern auch deren Syi1-
these gelingen wiirde. Allerdings hielt er die Proteine
ffir nieht allzugroBe Molekifle. Aus drei Leucin- und
fiinfzehn Glycin-Resten baute er durch schrittweise
eindeutige Synthese 1907 ein Octadekapeptid [4] und
verglich dieses mit nattirlichen Proteinen. Das t Ser
Peptid ist jedoch nur in beschr/inktem MaBe als
Modell ftir Proteine verwendbar, da es nut zwei
Aminos~iure-Elemente hat, w~ihrend am Bau eines
Proteins etwa 20 verschiedene Aminos~iuren beteiligt
sind.
Als sp~iter in den dreil3iger Jahren die makromoleku-
lare Natur der Proteine, insbesondere dank der Ar-
beiten von SORENSEN [5] und SVEDBERG [6] allge-
mein anerkannt wurde, erschien die Synthese echter
* Nach einem Vortrag auf der 104. Versammlung der Gesellschaft
Deutscher Naturforscher und Arzte am 26. September t 966 in Wien.
Naturwissenscha/ten
147, t462 (1965). - - [26] GIERER, A.: Nature 212, 1480 (1966). - -
[27] ARBER, W.: J. molee. Biol. 11, 247(1965). - - [28] WALKER, P.
M. B., u. A. McLAREN: Nature 208, 1175 (t966). - - [29] WALKER,
P. M. B., u. A. McLAREN: J. molec. Biol. 12, 394 (1965). - -
[30] BOLTON, E . T . , R. J. BRITTEN, D. B. CO}VIE, R . B . ROBERTS,
P. SZAFRANSKI U. M. J. WARING: Carnegie Institution Washing-
ton, Year Book 1964--t965, p. 3t3.
Eingegangen a m 2 t . Oktober t966
Proteine durch schrittweise Verkntipfung einzelner
Aminos~iure-Reste im Sinne yon FISCHERunerreichbar.
Zu einer gewissen Hoffnung berechtigte in diesen Jah-
ren lediglich die Bergmann-Niemann-Regel [7], wo-
nach in den Proteinen gleiche Aminos~ure-Reste in
gleiehen Abst~tllden angeordnet sein sollen. Die an-
scheinend einfache Struktur des Seidenfibroins [8]
als ein Polypeptid, in welchem jede zweite Amino-
s~ture aus Glycin-Resten besteht, regte zur Synthese
yon Nylon ulld Perlon an [9]. Auch wurdell synthe-
tische hochmolekulare Polypeptide dargestellt [10],
die sich in H~nden yon Forscherll wie BAM~ORD,
ELLIOTT [11] und t(ATCI-IALSKI [12] zum Studium
physikalischer Protein-Eigenschaften wie Ketten-
faltung und -schraubung, Antigenicit/it ulld Bacteri-
cidie hervorragend bew~ihrten. Vor wenigen Jahren
gelang sogar die enzymatische Synthese von Poly-
peptiden in zellfreien Systemen in Gegenwart von
synthetischen Boten-Ribonukleins~iuren [13]. Syn-
thetische Polypeptide silld daher nfitzliche Modell-
verbindungen zur Entzifferung des genetischen Codes
geworden (vgl. MATTHAEI [14]).
Diese neueren Polypeptide haben zwar vor dem
Fischerschen Octadekapeptid den Vorzug, echte
Makromolektile zu sein, teilen aber den Mangel, nur
aus wenigen, oder auch nur einer Aminos~iure-Art zu
bestehen und darfiber hinaus nicht molekulareinheit-
lich zu sein.
Der Weg zur Insulin-Synthese
Als im Jahre t95t GANGERzusammen mit dem Wie-
ner Biochemiker TuPPY [15] die erste Formel (vgl.
Fig. t) einer aus einem Proteinmolekiil isolierten Pep-
tidkette, der B-Kette aus dem Insulin verSffentlichte,
war nicht nur die Hypothese von MAX BERGMANN
fiber eine regelm~iBige Reihenfolge tier Aminos~iuren
in den Proteinen endgfiltig widerlegt, sondern auch
klar geworden, dab man eine Proteinkette nicht durch
Kondensation von vorbereiteten Untereinheiten er-
halter wfirde. Wer die B-Kette, ein Triakontapeptid
synthetisieren wollte, mul3te ihre 16 verschiedenen
Aminos~ture-Bausteine einzeln nach dem Bauplan der
Sanger-Tuppy-Formel miteinander kondensieren.
5i. Jg., Heft 15/16, 1967 H. ZAHN: C h e m i s c h e S y n t h e s e v o n P r o t e i n e n 397

Nun waren vor 1951 lediglich drei kleine, nattirlich sein sollen, voriibergehend ausschalteten und nach
vorkommende Peptide, die Dipeptide Carnosin [16] beendeter Synthese wieder entfernt werden konnten,
und Anserin [17] und das Tripeptid Glutathion [18] ohne dabei die gekntipfte Peptidbindung zu sch~idigen
synthetisiert worden. Daher dachte niemand mehr (vgl. Fig. 6).
ernsthaft an eine Synthese echter Proteine, bis DU
VIGNEAUD t953 [19] die Totalsynthese des Peptid- CI,H9 ?H2SCH2C6H5
hormons Oxytocin aus neun Aminos~ure-Resten und 1~ C H2OCO- NHCHCO- NHCHCO-
Phe-Vat- Asn-Gtn- His- L e u - ~L HBr, CH3C00H
1 2 3 4 5 6
- Cys- Gly- Ser- His- Leu- Vat-
7 8 9 10 1 12
- G l u - A l a - Leu-Tyr - Leu-Val- 9 CI4H9 CH2SCH2CBH5
13 14 15 16 17 18 ~-CH2 Br, CO 2 NH3CHCO-NHCHCO-
- Cys-GLy-Gtu-Arg- Gty- P h e - B~
19 20 21 22 23 24 Fig. 4. Abspaltung einer N-terminalen Benzyloxycarbonyl-Schutz-
- Phe-Tyr-Thr - Pro- Lys-Ala gruppe mit Bromwasserstoff in Eisessig nach BEN-ISHAI und BER-
25 26 27 28 29 30 GER, t952 [24] an einem Cysteinpeptid-Derivatansder B-Kette
Fig. t. Strukturformel der B-Kette des Rinderinsulins nach SANGER des Insulins [85] B 6--8 vgl. oberste Zeile Fig. 3.
und TuPPY t951 [I$]

CH2CsH5 (~-CH2OCO- NHCHCO+

CBH5 NH2CH(C3H7)CO-
- NHCH2COOH NHxCHCO-
+ O
C6Hll N = C = NC6H u

l .CH2CBHs
N02
NHCH2CO- - NHcsco-
-

+
C6H5
>-CH2OCO N H CHCO-N H CH (C3H7) CO -
C6 Hll N H - CO - N H C6H.
HO
Fig. 2. Anwendung der Carbodiimimid-Methode yon SHEEHAN und
HEss, 1955 [Z0] zur Fragmentkondensation einer Carboxyl- mit
einer Amino-Komponente bei der Synthese des Dekapeptids B
2 t - - 3 0 nach SCHNABEL [54]
N02
BZL Fig. 5. Kondensation des p-Nitrophenylesters yon Benzyloxycar-
I
bonylphenylaIanin mit der Valinamino-Gruppe des Heptapeptid-
z-16 7 81-OEt Derivates B 2--8 zum Oktapeptid-Derivat B I - - 8 [35] (vgl. unterste
BZL BZL Zeile Fig. 3)
I l
z-1516 7 81
C3H7 C2HLCONH2
BZL BZL
I I -NHCHCO - NHCHCO - NHCHCO-
z~41sl 6 7 Bi I
C2HCO
BZL BZL
z-lul4l~l
BZL
6 ;
BZL
8 I +CF3cOON[ 6-C(CH3)3
I
C3H7 ?2H4CONH2
z~213141516 ~ 81 -NHCHCO- NHCHCO - NHCHCO-
BZL BZL
I I C2H4COOH
z-111213141s16 7 81 ,~CH2
Fig. 3. Anwendung der Nitrophenylester-Methode y o n BODANSZKY,
t 955 [21] zur gliedweisen Kettenverl/ingerung bei der Synthese des + C-CH3
N-terminalen Oktapeptids B 1--8 [35]
\ell3
die Schliel3ung der Disulfid-Brticke zum cyclischen Fig. 6. Acidolyse des ~-Tertifirbutylesters des Glutamins~ure-Restes
in Position 4 tier synthetischen geschtitzten A-Kette des Schaf-
Hormonmolektil gelang. Diese Pioniertat fiihrte zu insulins dnrch Behandlung mit Trifluoressigs~ure [39]
einem ungeheuren Aufschwung der Peptidchemie.
Neue Methoden zur gezielten Kondensation yon
Aminos~turen wurden erarbeitet. Erw~ihnt seien z.B. Immer l~nger wurden die Peptidketten, die man mit
das Dicyclohexyl-carbodiimid-Verfahren [20] (vgl. diesen und anderen neuen Methoden stufenweise ein-
Fig. 2) und die Nitrophenylester-Methode [21] (vgl. deutig synthetisierte. Schon 19~6 wurde erstmalig ein
Fig. 3 bis 5). Eikosipeptid aus dem ACTH-Molekiil durch BOIS-
Zu der bereits bew~thrten Benzyloxycarbonyl-Gruppe SONNAS 11. Mitarb. [25] synthetisiert. Der HShepunkt
E22] (vgl. Fig. 4) traten neue Schutzgruppen [23], dieser erfolgreichen Periode der Peptidsynthese war
welche diejenigen Funktionen der Aminos~iuren, die ohne Zweifel die 1963 abgeschlossene Totalsynthese
an der geplanten Kondensation yon 0~-Amino und des ganzen ACTH-Molekfils aus 39 Aminos~iure-Resten
e-Carboxyl-Gruppe zur Peptidbindung nicht beteiligt durch SCHWYZERund SIEBER [26].
398 H. ZAHN : Chemische S y n t h e s e v o n P r o t e i n e n
Erste Insulin-Synthese
So ist es nicht verwunderlich, dab man in diesen
ftinfziger Jatlren die M6glichkeit einer chemischen
Proteinsynthese erneut diskutierte, obwohl man vor
t960 als einzige Proteinstruktur IIur die Insulin-For-
reel [27] (vgl. Fig. 7) kannte. Aber gerade die Insulin-
Formel bot verlockende Aspekte, war doch die A-Kette
nur um einen Aminos~iure-Rest l~nger als das Eikosi-
peptid yon BOlSSONI~AS u. Mitarb. und die B-Kette
S S
I
S S
T der reduzierten Kette Sauerstoff einwirken lieBen,
Fig. 7. Chemisehe Strukturformel des Molekiils des Rinderinsulins
nach SANG~R U. Mitarb. [27]. Zeichnung nach CARPENTER [53]
SH SH SH SH SH SH SH
I I I I I I I I
I 26 40 58 65 72 84 95
Fig. 8. Resynthese des Molekfils des Enzyms Ribonuelease aus der
offenen Thiol-Kette (unten) nach WI~IT~ und ANFINSEN [30]
@ s,. s.. s-s
SH SH -SH p S S
I~ I ! I, r l
SH- Ketten Insu tin
Fig. 9. Resynthese des Insulin-Molektils aus Thiol-A- und Thiol-B-
Kette nach DIXON und WARDLAW [3~] sowie D u e t al. [38]
sogar kt~rzer als das ACTH-Molekiih Die in der Pep-
tidsynthese wegen ihrer S/iureempfilldlichkeit bzw.
Autoxydation geftirchteten Aminos~uren Tryptophan
und Methionin fehlten sogar. Dafiir enthielt Schaf-
insulin nicht weniger als vier Glycin-Reste in giinstigen
Positionen ffir eine Unterteilung der ganzen Kette in
Fragmente, die mSglichst mit Glycin enden sollen.
Andererseits schien das Problem der formelrichtigen
Synthese der drei Disulfid-Gruppen unl6sbar. DU
VIGNEAUD [28] drtickte die Meinung der Peptid-
chemiker richtig aus, als er schrieb, die Synthese der
Ketten dtirfte nicht zu schwierig sein, aber das wirk-
liche Problem sei die Kntipfung der drei Disulfid-
Bindungen, zwei zwischen den Ketten, eine innerhalb
der A-Kette. E r selbst butte schon fdiher vergeblich
versucht, reduziertes Insulin durch vorsichtige 0 x y -
dation zu reaktivieren [29]. Aber selbst wenii die
Naturwissenscha]ten
Ketten eines Proteinmolekiils synthetisiert sind und
es gelungen ist, diese an den richtigen Stellen mit
Disulfid-Briicken zu verklammern, so garantiert dies
noch nicht die charakteristische Sekund~ir- und Ter-
ti~rstruktur, die jedes Protein im Gegensatz zu den
Polypeptiden besitzt. Es habe also keinen Sinn, so
meinte man damals, die chemisehe Synthese selbst
eines so kleinen Proteins wie Insulin zu beginnen.
Diese weft verbreitete Meinung wurde um t 960 durch
zwei Forschungsarbeiten in den USA und Kanada
widerlegt. WHITE und ANrlNSEN [30] spalteten das
tetracyclische Molekiil des Enzyms Ribonuclease durch
Reduktion der vier intramolekularen Cystin-Brticken
in eine offene Kette aus t24 Aminos~turen, darunter
acht Cystein-Resten. Als sie auf die verdiinnte LSsung
bildete sich unter t05 mSglichen isomeren monomole-
kularen Oxydationsprodukten nur das eine Isomere,
n~tmlich das vollaktive Enzym (Fig. 8). Das heiBt,
dab unter physiologischen Bedingungen ein natives,
biologisch aktives Protein die niedrigste Konforma-
tionsenergie besitzt [31], und dab die gesamte Infor-
mation fiir die Determinierung der dreidimensionalen
Proteinstruktur in den Aminosiiure-Sequenzen der
entfalteteii Polypeptidketten enthalten ist.
Abet auch beim Zweikettenmolekt~l Insulin gelang
eine solche Resynthese, obwohl DIXON und WARD-
LAW [32] das Molektfl zuerst in die beiden Buntesalz-
Ketten zerlegten, diese isolierten und reduzierten und
dann erst kombinierten (Fig. 9). Wenn auch die Aus-
beute an Insulin bei diesen ersten Resynthesen nur
1 bis 2% betrug, batten die Autoren mit Recht den
ftir die Proteinsynthese so folgenschweren Satz for-
muliert:
"Even with the present yield it can be said that i/chemi-
cally synthesized A and B chains were available in mg
SH amounts it should be possible to obtain insulin by the
124 above method and thereby provide the terminal step in
110
the total synthesis o/a protein with biological activity".
Gleichzeitig wurde auch an der Academia Sinica in
Schanghai an der Resynthese yon Insulin gearbeitet.
Dort gelang es Do, CHANG, Lu u n d T s o u [33] nicht nur
h6here Ausbeuten an Insulin zu erzielen, sondern
auch das in den Resyntheseprodukten enthaltene
I- Hormon in Form von vollaktiveu Kristallen zu ge-
winnen. Der Weg fiir die Totalsynthese des Insulins
war damit vorgezeichnet und wurde yon drei Gruppen,
in den USA und Kanada, in der Volksrepublik China
und in Deutschland mit dem Versuch einer Synthese
der ganzen Ketten in Angriff genommen. Dabei er-
gaben sieh dieselben peptid-chemischen Probleme, die
man in fast identischer Weise 15ste. Es sind dies eine
zweckm~Bige Unterteilung der Ketten in einzelne
Fragmente (vgl. Tabelle t), die Wahl der Peptid-
kupplungsmethoden und der Schutzgruppen ffir die
Seitenketten (vgl. Tabelle 2).
Tabelle 1. Fragmente /iir die Synthese yon Insulin-Ketten 1963--1965
Kette Aachen Pittsburgh Schanghai
Peking
A ~--9
10--21
B 1--8 t--9 t-- 8
9--14 10--t3 9--16
15--20 t4--20 t 7--20
21 --30 2t --30 21 --30
54. f g . , H e f t 15/16, 1967 H. ZAHN: Chemische Synthese von Proteinen 399

So nimmt es nicht wunder, dal3 gewisse gr613ere Ket- Auf der anderen Seite kritisierten Chemiker die ange-
tenfragmente wie das Katsoyannissehe Nonapeptid wandten Methoden, die zu InsuIin-Ausbeuten von nut
der A-Kette I--9 [84] oder das Aachener Oktapeptid 0,t bis 1,0% gefiihrt batten. Solange man die drei
der B-Kette 1--8 [85] mit unbedeutenden Varianten Disulfid-Brficken nicht nacheinander verknfipft hatte,
auch bei der Synthese in einem der beiden konkur- kSnne man nicht yon einer Synthese, sondern nur yon
rierenden Arbeitskreise eingesetzt wurden, t3berhaupt Insulin-Bildung aus synthetischen Ketten sprechen.
hat die yon AuBenstehenden oft angeprangerte Parai- H~iufig wurde auch die Frage laut, ob die biologische
lelarbeit auch im Falle der Insulin-Synthese deren Aktivit~it der Pr/iparate tats~ichlich von echtem In-
Erfolg entscheidend gefSrdert, well jedes Team aus sulin herrfihre, oder ob nicht schon die einzelnen Ket-
den Publikationen der anderen lernen konnte. ten oder Kettenfragmente eine insulin-/ihnliche Wir-
kung zeigen kSnnten. Diese schwerwiegenden Ein-
Tabelle 2. Bei den Imulin-Synthesen 1963--1965 verwendete Schutz- wfinde schon ein Jahr sp~iter widerlegt zu haben, ist
gruppe~r zur Blockierung yon SeitenkettenJunktionen das Verdienst der chinesischen Forschergruppen, und
damit kommen wir zur Wfirdigung der Erfolge, die
Aachen Pittsburgh China
diese durch ihre Totaisynthese yon Rinderinsulin er-
1964 t965 rungen haben.
Cystein Benzyl
Lysin Tosyl Verbesserung der Synthesen
Histidin Benzyl Durch die ihnen gelungene Resynthese von Insulin
Arginin Tosyl Nitro aus den natfirlichen Ketten ermutigt, konzentrierten
Glutamins~iure t-Butyl Methyl t-Butyl t-Butyl sich die chinesischen Forscher auf die Synthese der
A- und B-Kette. Zwischen t96t und t964 erschienen
zahlreiche Berichte fiber die Synthese der Ketten-
Ohne Zweifel durften KATSOYANNIS U. Mitarb. den fragmente. Die Synthese der beiden Ketten schliefi-
ersten grol3en Erfolg im Sommer t963 [36] ft~r sich lich wurde t964 bewerkstelligt, ebenso wie die Par-
bnchen, ais ihnen die Synthese der ganzen A-Kette tialsynthese yon Rinderinsulin aus synthetischer B-
des Schaf-Insulins gelang, die in den H~inden von und natiirlicher A-Kette sowohl als auch umge-
DIXON und WILSON bei der Kombination mit natfir- kehrt [41]. Die biologische Aktivit~it dieser haibsyn-
licher B-Bette ein insulin-haltiges Pr~tparat lieferte. thetischen Pr~iparate lag zwischen 2 und 4%. Selbst-
Wenn auch der Insulin-Gehalt nach DIXON [87] nut verst~indlich wurde auch die Kombination der syn-
0,26% betrug, so ist es doch diese Arbeitsgruppe ge- thetischen Ketten ausgeffihrt. Da aber das totalsyn-
wesen, der die erste Partialsynthese eines Proteins ge- thetische Proteinpdiparat nur eine leichte biologische
lang. Niemand erwartete oder verlangte t963 schon Aktivit/it besaB, erschien die Extraktion des kristal-
hohe Ausbeuten. Die Frage war vielmehr, ob es fiber- linen Insulins nicht praktikabel. Man sah sich des-
haupt gel~inge, Insulin aus einer synthetischen Kette halb gezwungen, die Arbeitspl~ine ffir die Synthese der
und der nattirlichen Gegenkette im Laboratorium zu Ketten abzu~indern, und insbesondere groBe Frag-
erhalten. mente nicht mehr mit Alkalien zwecks Verseifung yon
Den n~ichsten Erfolg muB man den Mitgliedern des Methylestergruppen zu behandeln. So wurde bei der
Aachener Teams der Jahre t962 und t963 zubilligen, Synthese der A-Kette das schon aus der Aachener
die noch im September t963 [38~ zwar fast alle Ket- Synthese bekannte Dodekapeptid A 10--21 einge-
tenfragmente, aber noch keine einzige Kette beisam- setzt, das keine C-terminale Estergruppe enthielt.
men hatten, und dann in einer Art "concerted team Ferner wurden aile gr6Beren Peptide mit Hilfe tier
reaction" in wenigen Wochen die Synthese beider Azid-Methode synthetisiert, um eine Racemisierung
Ketten, die Abspaitung der Schutzgruppen und die zu vermeiden. Groge Mfihe gait der Verbesserung der
Kombination der beiden synthetischen Ketten zu einzigen Methode zur Abspaltung der Schutzgruppen
einem totalsynthetischen Pr~iparat meisterten, das durch Behandlung mit Natrium in fltissigem Ammo-
immerhin 1% Insulin enthiett. niak, um so eine wirksame Deblockierung bei mini-
Im Dezemberheft 1963 der Zeitschrift ffir Naturfor- maler Sch~idigung der Peptidketten zu erreichen. Die
schung [39] berichteten wir fiber dieses erste vollsyn- aus den verbesserten synthetischen Ketten und ihren
thetische Protein. Wenige Wochen sp~ter publizier- natfirlichen Gegenketten gewonnenen haibsyntheti-
ten im 1. M~irzheft t964 des Journal of the American schen Insuline enthielten bereits 5--t0% des Protein-
Chemical Society KATSOYANNISund seine Mitarb. [40] hormons. Eine Extraktion und Aufarbeitung dieser
ihre Synthese tier B-Kette und die Kombination mit Pr~iparate ergab Kristaile von derselben Aktivit~it wie
der bereits bekannten synthetischen A-Kette zu Rinderinsulin [49].
einem Insulin-Pr~iparat mit biologischer Aktivitiit. Kondensation der synthetischen A-Kette mit der syn-
DIXON hat den Insulingehalt der Kombinationspro- thetischen B-Kette lieferte Rohprodukte, die sich wie
dukte aus den synthetischen Ketten yon KATSOYAN- 1,2 bis 2,5%iges Insulin verhielten. Trotz niedrigen
NIS mit 0,02 und 0,07% angegeben. Insulingehaltes gelang wie bei den halbsynthetischen
Die Resonanz auf die erste Insnlin-Synthese fiel hete- Pr~iparaten die Extraktion und Kristallisation [48].
rogen aus. Einige Arzte waren sich nicht fiber das Damit war erstmals die Darstellung eines syntheti-
Ausmal3 der experimentellen Schwierigkeiten im kla- schen kristallinen Proteins im Laboratorium gelungen.
ren und hofften auf einen sofortigen Einsatz des syn- Die Kristaile des synthetischen Rinderinsulins glichen
thetischen Insulins in der Diabetestherapie, besonders dem Rinderinsulin nicht nur vSllig in bezug auf den
bei solchen Patienten, die gegen natfirliches Insulin Mauskrampf- nnd Kaninchenblntzucker-Test, sondern
allergisch sind. auch hinsichtlich ehemischer Daten wie der Amino-
400 I{. ZAItN: C h e m i s c h e S y n t h e s e v o n P r o t e i n e n Nelurwissenschc~/ten

s~tureanalyse, dem Verhalten bei der Papierchromato- Wenn die Insulin-Synthese lediglich zum wissen-
graphie und Elektrophorese und nieht zuletzt auch schaftlichen Selbstzweck ausgeftihrt worden w~ire, so
im ,,Fingerprint"-Diagramm. Mit Recht beenden die k6nnte man heute nach der chinesischen Synthese
drei chinesischen Institute das einleitende Kapitel von Rinderinsulin in kristalliner Form einen Schlul3-
ihres zusammenfassenden Berichtes [44] tiber die strich unter das Kapitel Insulin ziehen. Ein neues,
Totalsynthese yon kristallinem Insulin mit der Fest- lohnendes Ziel ist es dagegen, zahlreiche modifizierte
stellung, dab alle angesammelten Mel3daten zu der Insulin-AnMoga zu synthetisieren, um an ihnen die
SchluBfolgerung fiihren, die synthetischen Kristalle Beziehungen zwischen chemischer Struktur und bio-
seien nichts anderes als kristallines Rinderinsulin. logischer Wirkung, etwa nach dem Vorbild der auf-
schlul3reichen Arbeiten an den Peptidhormonen, zu
|
CH2
I
CH2 ClI H2 CH2
I studieren [45]. Dazu ist jedoch die Ausarbeitung
einer neuen Insulin-Synthese erforderlich. Die Syn-
I
H C ~ C H
t
HC.~.~'~--CH thesen der Jahre t943 his t965 erfordern n~imlich
~H2
I x~/ i
CH2 tH2~'~-/ ~IH2/.~___~ tiber 200 Synthesestufen von den Aminos~iuren his zu
H~ H~'-~C~i. HC../~-~ HC-"~L_)/ den geschtitzten Ketten, wobei die Ausbeute wegen
I ~ "---" der unvermeidlichen Substanzverluste in jeder Stufe
.CH2~['~ C'x.,, CH2
/ \ letztlich sehr niedrig ausfitllt. Bei der nachfolgenden
Abspaltung der aromatischen Schutzgruppen von Cy-
Fig. 10. Ausschnitt aus einem Fig. 11. ,,Merrifield-Harz"-Copo- steinschwefel, Histidin und Arginin wird der gr613te
mit Divinylbenzol vernetzten lystyrol m i t eingebauten reak-
Polystyrol tiveI1 Chlormethyl-Gruppen Tell der miihevoll synthetisierten B-Kette zerst6rt.
Bei der Kombination der nach langwierigen Reini-
gungsprozessen herauspr~parierten, noch intakten
I I Ketten ist die Insulin-Bildung nur eine Nebenreak-
tion. Man ben6tigt daher unausweichlich neue Metho-
den, um l~tngere Peptidketten rasch und in guten
Ausbeuten zu synthetisieren, neue Schutzgruppen,
die sich ohne Sch~digung der Kette abspMten lassen
und neue Verfahren zur Kettenkombination.

..CH " (~
CHz"NH ~ Insulin-Ketten bekannt, aus der sich vielleicht eine
0 CIN1-12
C/O
~0
/C/xH
CH2 NH
CI(CH3)3 OCNH2CO
Rc(cH)
Fig. 12. Aufpfropfen der letzten Aminos~ure aus der A-Kette des
Human-Insulins auf Merrifield-Harz dureli Umsetzung mit einer
alkoliolischen L6sung des Tri~itliylammoniumsalzes yon Butyloxy-
earbonyl-asparagin: Es entsteht das Butyloxycarbonyl-asparaginyl-
Polymer [47]
~Es w~ire so kleinlich wie unrecht, welm wir diese
groBe Errungenschaft der synthetischen Protein-
chemie dadurch zu schm~lern versuehten, dab wir
hier unseren zeitlichen Vorsprung vor den Chinesen
ausspielten, denen die Synthese der Ketten und deren
Kombination zu einem synthetischen Prodnkt zwei
Jahre nach dem deutschen, bzw. dem amerikanischen
Schaf-Insulin gelang, oder wenn wir auf den niedrigen
Hormongehalt des chinesischen synthetischen Roh-
produktes hinweisen, das mit 1,2 bis 2,5 % auch nicht
viel mehr Insulin enthielt als das Aachener Pr~iparat.
Wir haben im Gegenteil das Endziel der Insulin-
Synthese, die Kristallisation des im Rohprodukt ent-
haltenen Insulins nie aus dem Auge verloren, konnten
aber bisher nur bei einer Partialsynthese yon Schaf-
Insulin genug Material fiir eine Extraktion und Kri-
stallisation gewinnen [59]. So ergibt sich im zeitlichen
Ablauf der Teilerfolge der drei Gruppen eine pro-
gressive Steigerung v o n d e r ersten Partialsynthese
t~ber die erste Totalsynthese his zur ersten Reindar-
stellung synthetischen Insulins in kristalliner Form.
Und ftir diese letzte und abgerundetste Arbeit spre-
chen wir den chinesischen Kollegen unsere uneinge-
schr~inkte Anerkennung und Bewunderung aus.
Die Merrifield-Methode
Aber schon ist eine neue Methode zur Synthese von
M6glichkeit zur Synthese noch gr6gerer Proteinmole-
k file als Insulin ergeben wird. Gemeint ist die von
MERRIFIELD [46] in New York entwickelte Peptid-
synthese an einem quellbaren, mit Reaktivgruppen
ausgestatteten Polystyrol-Kunstharz. Bei dieser Me-
thode wird die Peptidkette Aminos~ture ftir Amino-
s~iure im Inneren des Harzmolektils rasch und in hohen
Ausbeuten synthetisiert, wobei am Ende der Syn-
these ein Peptidyl-Polymer vorliegt. Die letzte Stufe
einer Merrifield-Synthese besteht in der Abl6sung der
fertigen Peptidkette durch Acidolyse der Esterbindung
zwischen HarzbenzyI-Gruppe und dem endst~indigen
Carboxyl der Peptidkette. Beim 8. Europ~ischen Pep-
tidsymposium in Noordwijk berichtete MERRIFIELD
[48] tiber die mit MARGLINmit der Festk6rpermethode
ausgeft~hrte Synthesen der Ketten des Rinderinsulins.
Kombination der synthetischen Ketten lieferte ein
10%iges Insulinpr~tparat. Ein halbsynthetisches Rin-
derinsulin aus synthetischer B- und nat~flicher A-
Kette enthielt 66% Insulin. Die Brauchbarkeit der
Merrifield-Methode ftir die Synthese von Insulin-
Ketten wurde in unserem Laboratorium durch
OKUDA best~Ltigt. Die B-Kette des Schaf-(Rinder-)In-
sulins wurde mit der Merrifield-Methode synthetisiert.
Kombination mit konventionell synthetisierter Schaf-
A-Kette [52] lieferte ein Rohprodukt (Proteingehalt
ca. 50%), das einen (unkorrigierten) Insulin-Gehalt
von 0,7% besaB.
Die wichtigsten Teilreaktionen einerMerrifield-Synthese
m6gen am Beispiel der ersten Stufen der Synthese der A-
Kette des Humaninsulins [47] erI~tutert werden. Fig. 10
zeigt zun~ichst einen winzigen Ausschnitt aus dem mit
Divinylbenzol dreidimensional vemetzten Polystyrol-
harz. Umsetzung mit Chlormethyl~tther liefert ein
54. Jg., Heft 15/16, 1967 H . ZAItN: C h e m i s c h e S y n t h e s e v o n P r o t e i n e n 40t

Reaktiv-Harz mit ca. t Milli/iquivalent Chlormethyl- nur 3 bis 4 Std (vgl. Fig. 14). Zwei Aminos~turen k6n-
Gruppen (vgl. Fig. t t). nen t~glich angebaut werden. Nach Anbau der letzten
L~13t man nun eine alkoholische L6sung des Tri- Aminos~ture der A-Kette wird die Esterbindung zwi-
iithylammoniumsalzes von Butyloxycarbonyl-aspara- schen Harzbenzyl-Gruppe und den: C-terminalen
gin auf das Reaktivharz Asparagin durch Behandeln mit Bromwasserstoffs~ture
einwirken, so wird die C- in Trifluoressigs~ure gespalten und die S-benzylierte
I I terminale Aminos~ure der
A-Kette des Humaninsu-
A-Kette freigesetzt (Fig. 15).
Auch mit Hilfe konventioneller Synthesemethoden
lins tiber eine Esterbin- lassen sich Fortschritte erzielen. Erst ktirzlich gelang
dung (vgl. Fig. t 2) covalent es BODANSZKY[49], das aus 27Aminosiiuren beste-
auf das Harz gepfropft. In hende Polypeptid Sekretin mit seiner Nitrophenyl-
einer weiteren Stufe wird ester-Methode durch gliedweise Kettenverl~ngerung

cl;
/
die Butyloxycarbonyl-
Schutzgruppe durch S~ure-
behandlung zersetzt (vgl.
zu synthetisieren. Noch bis 1963 hatte man als gr613-
tes Peptid mit dieser Methode ein t Ser Fragment
synthetisiert [26]. So dtirfte es - - ungeachtet der
CH2 NH2 Fig. 13). Die freigelegte Skepsis maneher Fachgenossen - - in den n/tchsten
OCNH2 oCH2 Amino-Grnppe
Kondensation mit
ist ftir die
der
Jahren zu einer Synthese weiterer Proteine kommen.
Ftir diese Prognose spricht die im Sommer 1966 be-
* CO2,/C, Carboxyl-Gruppe des n~ch- kanntgewordene erste Partialsynthese eines Enzyms,
CH3 CH3 sten Aminos~ture-Derivats, der Ribonuclease S' durch HOFMANN [50] in Pitts-
Fig. t3. Acidolyse der B u t y l - des Butyloxycarbonyl-S- burgh. Die chemisehe Synthese yon sog. groBen Pro-
oxycarbonyl- Sehutzgruppe benzylcysteins,bereit. Diese teinen mit tiber 100 Aminos/turen hat also bereits
u n d F r e i l e g u n g der A m i n o -
Gruppe: E s b i l d e t sieh Aspara-
Kondensation bewirkt Di- begonnen.
ginyl-Polymer cyclohexyl-carbodiimid in
A usblick
I I I I
Wenn einmal die Geschichte der organischen Chemie
der Proteine gesehrieben werden wird, wird man ver-
mutlich Peptide und Proteine zu ein und derselben
Substanzklasse zugeh6rig betrachten. Die Renais-
sance dieser Chemic wird dabei auf das Jahr 194t
fallen, weil in ibm mit der Verteilungschromatogra-
phie [51] eine neue _5~ra der Analyse yon Aminos~tu-
cH 2oo ren, Peptiden und Proteinen begann.
CH2 NH2 CH Die ersten Ableitungen chemischer Proteinformeln
OCNH2#C~OH "c1(t2\ N H und Synthesen biologisch aktiver Polypeptide bilden
O NH/CHCI'I2SCI'~H5
d
O~-"CHCH2SCH2C6H5die Glanzleistungen der ftinfziger Jahre. Die sechziger
Jahre bringen die ersten Resynthesen von Disulfid-
CO NH Proteinen, die ersten Partialsynthesen von Enzymen
o "co und die Totalsynthese des Hormons Insulin. Unser
d
Jahrzehnt hat nunmehr die Prophezeiung EMIL
FISCHERs wahrgemaeht, indem es die Proteine wieder
Fig. 14. Gliedweise Kettenverl~ingerung m i t der DCC-Methode. Die voll in die organische Chemie integrierte.
zweitletzte Aminos~iure der A - K e t t e des Insulins, Cystein, wird als
B u t y l o x y e a r b o n y l - S - b e n z y l e y s t e i n m i t HiKe yon Dieyclohexyl-car-
b o d i i m i d m i t d e m A s p a r a g i n y l - P o l y m e r k o n d e n s i e r t : E s liegt vor [1] HOFMEISTER, F.: Naturw. R u n d s c h a u 17, 529, 545 ( 1 9 0 2 ) . -
Butyloxycarbortyl-S-benzyl-cysteinyl-asparaginyl-Polymer [2] FISCHER, F~.: Chemiker-Z. 26, 939 (t902). - - [3] FISCHER, E.:
Bet. deut. chem. Ges. 39, 530 (1906). - - [4] FISCHER, E.: Ber. deut.

| 1 chem. Ges. 40, t754 (t907). - - [5] SOERENSEN, S. P. L.: Kolloid-Z.

Fig. 15. F r e i s e t z u n g der vollst~ndigen S-benzylierten A - K e t t e v o m
Merrifield-Harz durch Acidolyse m i t H B r i n CF3COO, [47]
53, 102, 170, 306 (1930); - - Compt. rend. trav. lab. Carlsberg 18,
Nr. 5 ( 1 9 3 0 ) . - [6] SVEDBERG, T.: Proc. Roy. Soc. (London),
Ser. B, No. 846, 127, I (1939). - - [7] BERGMANN, M., u. C. NIX-
MANN: J. Biol. Chem. 118, 301 ( 1 9 3 7 ) . - [8]MEvER, K.H.: Die
h o c h p o l y m e r e n Verbindungen, S. 417. 'Leipzig: A k a d e m i s c h e Ver-
lagsgesellschaft 1 9 4 0 . - [9] CAROTHERS, W. H.: U S - P a t . 2130523,
2130948. - - SCHLAcK, P.: D R P 748253, 753046, 756818. - -
[10] WOODWARD, R. B., u. C. H. SCHRA~M: J. Am. Chem. Soc. 69,
1551 (1947). - - [11] BAMFORD, C. U., A. ]Z;LLIOTT U. W. E. HANBY:
S y n t h e t i c polypeptides, p r e p a r a t i o n , structure, a n d properties. New
Y o r k : A c a d e m i c Press Inc. t956. - - [12] KATCHALSKI, E.: Proc.
P l e n a r y Sessions VI. Int. Congr. Biochem., 5. U. B. 33, 8t (t964). - -
[13]NIRE~BERG, M. W., u. J. H. MATTHAEI : Proe. Natl. Acad. Sci. U.S.
47, t588 (1961). - - [lg]MATT~AEI, J . H . : Klin. ~vVschr. ( i m D r u c k ) . " - -
[15] SINGER, F., u. H. TvePY: Bioehem. J. 49, 463, 481 (195t). - -
[18] BARGER, G., u. F. TvTIN: Bioehem. J. 12, 402 (1918). - -
BAU~ANN, L., U. T. INGVALDSEN: J. Biol. Chem. 3s, 263 (t918). - -
[17] BEHRENS, O. K., U. V. DU VIGNEAUD: J. Biol. Chem. 120, 5t7
(1937). - - [lS] HAR:NCTON, C. R., u. T. H. MEAD: Bioehem. J. 29,
1602 (t935)- - - [19] DU VIGNEAuD, V., C, RESSLER, J . M . SWAN,
C. W. ROBERTS, P. G. KATSOVANNIS U. S. GORDOn: J. Am. Chem.
Soc. 7s, 4879 (t953). - - [20] SHEEHAN, J. C., u. G. P. HESS: J. Am.
Chem. Soc. 77, 1067 (1955). = - [21] BODANSZKY, M.: N a t u r e 175,
402 H . GUTFREUND: The D y n a m i c Behaviour of Proteins during Catalysis
685 (t955). - - [25] ]~ERGI~IANN, M., 11. L. ZERVAS: Ber. deut. chem.
Ges. 65, 1192 ( 1 9 3 2 ) . - [23] CARPINO, L. A.: J. Am. Chem. Soc. 79,
98 (~957). - - Mc KAY, F. C., u. N. F. ANFINSEN: J. Am. Chem. Sue.
79, 4686 (1957). - - ANDERSON, G. W., u. A. C. McGREGOR: J. Am.
Chem. Sue. 79, 6180 (t957). - - SCHW~rZER, R., P. SIEBER U. H. KAP-
PELER: H e N . Chim. A c t a 42, 2622 (1959). - - TASCHNER, E., B. LI-
EEREK, C. WASIELEWSKI 11. J. F. BIERNAT: Angew. Chem. 71, 743
(1959). - - RoEsKE, R.: C h e m . & I n d . (London) 1959, 1t21. - -
ANDERSON, G. W . : C h i m i a (Switz.) 14, 371 (1960). --TASCHNER, E.,
C. WAStELE'vVSKI H. J. F. BIERNAT: Liebigs Ann. Chem. 646, t t 9
(196I). - - CALLAHAN, F . M . , G . W . ANDERSON, R. PAUL U. J . E .
ZIMMER~ANN: J'. Am. Chem. Sue. 85, 201 (1963). - - [~4] BEN-
ISHAI, D., u. A. BERGER: J. Org. Chem. 17, 1564 (t952). - - [ZS]
BOISSONNAS, R.A., S. GUTTMANN, J.-P. WALLER U. P.-A. JAQUE-
NOUn: E x p e r i e n t i a 12, 446 (t956). - - [~6] SCHWYZER, R., u.
P. SIEBER: N a t u r e 199, t72 (1963); - - Helv. Chim. A c t a 49, 134
(t966). - - [27] RYLE, A. P., F. SANGER, L. F. SMITH U. R. KITAI:
Bioehem. J. 60, 541 (1955). - - SANGER, F.: E n d e a v o u r 16, 48
(t957).- [28] DuVIGNEAoD, V.: Ann. N . Y . Aead. Sci. 88, 537
(t960). - - [29] DU VIGNEAUD, V., A. FITCH, E. PEKAREK U. W.W.
LOCKWOOD: J. Biol. Chem. 94, 233 (1931). -- [30] WHITE, F. H., u.
C. B. ANEINSEN: Ann. N. Y. Acad. Set. 81, 515 (1959). -- [31] HA-
BER, C. E., 11. C. B. ANFINSEN: J. Biol. Chem. 237, 1839 (1962). - -
[32] D i x o N , G. H., 11. A. C. WARDLAW: N a t u r e 188, 72t (t960). - -
[33] Du, Y.-c., Y.-s. CHANG, Z.-X. LO u. C.-1. Tsou: Seientia Sinica
10, 84 (1961). - - [34] KATSOYANNIS, P. G., K. FUKUDA U. A. TO-
METSKO: J. Am. Chem. Soc. 85, 1681 (t963). - - [35] ZAHN, H., U.
R. ZABEL: Liebigs Ann. Chem. 659, t63 (1962). - - [36] KATSOYAN-
NIS, P. G., A. TOMETSKO U. K. F~:KUDA: J. Am. Chem. Soc. $S,
2863 (t963). - - [37] DIXON, G. H.: Excerpta Mediea Intern. Con-
gress Series No. 83, 1207 (1964). - - [38] MEIENHOFER, J., H. ZAHN,
E. SCHNABEL, H. SCHUSSLER, D. BRANDENBURG, R. ZABEL, T.
OKUDA, W. SROKA, O. BRINKHOFF, H. KLOSTERMEYER U. H. BRE-
MER: Angew. Chem. 75, 1126 (1963). -- [39] MEIENHOFER, J.,
E. SCHNABEL, H. BREMEE, O. BRINKHOFF, R. ZABEL, W. SROKA,
H. I~LOSTERMEYER, D. BRANDENBURG, T. OKUDA 11. H. ZAHN: Z.
Naturforsch. 18b, 1120 (1963). - - ZAHN, H., H. BREI~IER U. R.
ZABEL: Z. Naturforsch. 20b, 653 (1965). - - MEIENHOFER, J., U.
The Dynamic Behaviour of Proteins during Catalysis
H. GUTFREUND
University of Bristol and Max-Planck-Institut ffir physikalische Chemie, G6ttingen*
Approximately ~000 different enzyme catalysed
reactions are known at present, and it is likely that
each of these is mediated by protein molecules of
specifically different structures. A complete study of
anyone of these enzyme proteins must interpret the
three dimensional structure and its flexibility in terms
of the following known properties of enzymes: sub-
strate specificity, chemical catalysis, stabilisation and
specificity for acceptors of reactive intermediates and
specificity for interaction with modifiers which can
activate or inhibit to regulate the rates of specific
metabolic reactions. Although no enzyme has been
completely explored with respect to M1 these proper-
ties we are now in a position to illustrate anyone of
these features with some enzymes.
Although some enzyme have prosthetic groups such
as haem, flavine nucleotides or a variety of other co-
factors as part of their catalytic site, for simplicity we
shall take our examples from enzymes which are of a
pure protein nature, that is all the catalytically active
groups are aminoacid side chains. Clearly in enzymes
* Vortrag anl~filich der 104. V e r s a m m h m g der Gesellschaft Deut-
seher Naturforseher lind Arzte in Wien a m 26. S e p t e m b e r t966.
Naturwissenschaften
E. SC~INABEL: Z. Naturforsch. 20b, 661 (1965). - - ZAHN, H., O.
BRINKHOFF, J. MEIENHOFEE, E. F. PFEIFFER, I7I. DITSCHUNEI% U.
Cn. GLOXHUBEe: ibid. 20b, 666 (1965). -=- [40] KATSOYANNIS, P. G.,
K. FUXUDA, A. TO~ETSRO, K. SUZUKI 11. M. TILAK: J. Am. Chem. Soc.
86, 930 (1964). - - [41] WANG, Y., J.-z. H s o , W.-c. CHANG, L.-1.
CHENG, C.-y. HSlNG, A.-h. Cm, T.-p. LOH, C.-h. LI, P.-t. SHI U.
Y.-h. YIEH: Scientia Sinica 13, 2030 (1964). - - NIu, C.-i., Y.-t.
KUNG, W.-t. HUANO, L.-t. KE, C.-c. CHEN, Y.-C. CHEN, Y.-e. Du,
R.-q. JIANG, C.-1. T s o u , S.-c. H u , S.-q. CHH u. K.-z. WANG:
S c i e n t i a Siniea 13, t343 (I964). - - [4el NIu, C.-i., Y.-t. KUNG,
W.~t. HHANG, L.-t. KE, C.-e. CHEN, Y.-e. CHEN, Y.-c. Do, R.-q.
JIANG, C.-1. T s o u , S.-c. Hu, S.-q. CHI~ u. K.-z. WANG: Seientia
Siniea 14, t386 (t965). - - [43] KUNG, Y.-t., Y.-e. Du, W.-t. HUANG,
C.-e. CHEN, L.-t. KE, S.-e. Hu, R.-q. JIANG, S.-q. CHU, C.-i. NIU,
J.-z. Hsu, W.-e. CHANG, L.-1. CHENG, H.-s. LI, Y. WANG, T.-p. LOll,
A.-h. CHI, C.-h. LI, P.-t. SHI, Y.-h. YIEH, K.-I. TANG U. C.-y.
HSlNG: Seientia Siniea 14, t710 (1965). - - [44] Kexlle Tongbao 17,
24t (1966). - - [45] SCHR6I)ER, E., U. K. LOBKE: The peptides,
vol. I, II. N e w Y o r k u. London: Academic Press 1965, t966. - -
[46] MERRIFIELD, R. B. : F e d e r a t i o n Proc. 21, 412 (t962) ; - - J. Am.
Chem. Soc. 83, 2 t 4 9 (t963); - - E n d e a v o u r 24, 3 (1963); - - Bio-
c h e m i s t r y 3, 1385 (1964); - - Science ls0, t78 ( t 9 6 5 ) . - [47] ZAHN,
H., T. OKUDA U. Y. SI~IMONISHI: Prec. 8th European Peptide
S y m p o s i u m , Noordwijk, Sept. 1966 (ira Druek). - - [48] MERRI-
FIELD, R. B.: Proc. 8th European Peptide Symposillm, Noordwijk,
Sept. t966 (ira Druek). - - [49] BODANSZI~Y, M., S . D . LEVlNE,
V. NARAYANAN, M. A. ONDETTI, ~V!. VON SALTZA, J. T. SHEEHAN U.
N. J. WILLIAMS: Proc. 8th European Peptide Symposium, Noord-
wijk, Sept. 1966 (im Druck). - - [50] HOFMANN, K., M, K. SMITHERS
U. F. M. FINN: J. Am. Chem. Sue. 88, 4107 (t966). - - [51] MARTIN,
A. J. P., u. R. L. M. SYNGE: Bioehem. J. 33, 1358 (i941b). - -
CONSDEN, R., A. H. GORDON U. A. J. P. MARTIN: Biochem. J. 38,
224 (1944). - - [59] ZABN, H., W. DANHO U. B. GUTTE: Z. N a t u r -
forseh. 21b, 763 (t966). - - [53] CARPENTER, F. H.: Amer. J. Med.
40, 750 ( 1 9 6 6 ) . - - [54] SCHNABEL, E. : Z.. Naturforseh. 19b, 120 (1964).
Eingegangen a m 17. Oktober t966
containing co-factors the specific interaction of the
aminoacid side chains is still of critical importance.
Many co-factors will participate in the catalysis of
distinctly different reactions when attached to dif-
ferent proteins (Apoenzyme).
The second order rate of combination of enzymes with
their substrates are all fast, very similar and non
specific. The specificity expresses itself ill the rate of
dissoziation and in the ability of the substrate to
induce conformation changes which result in tighter
binding and in a favourable configuration of the re-
active groups of substrate and enzyme. Examples will
be given which illustrate that chemical catalysis by
enzymes is usually due to spacially specific coopera-
tion of at least two reactive aminoacid residues inter-
acting with the substrate. The flexibility of the
active sites of enzymes is also of importance ill the
regulations involving the protection of reactive inter-
mediates to be passed on to specific acceptors or the
possible choice of passing products on to one of
several enzymes capable of reacting with them.
The conformations of enzyme molecules depend on a
complex balance of forces and steric restrictions. It is