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ACTIVIDADES DE

PRCTICA

Biologa
2016-00

Ms. Pablo
Chuna
Mogolln
PRCTICA N 2

ACTIVIDAD ENZIMTICA

1. OBJETIVOS
1.1 Conocer el mecanismo por el cual transcurren las reacciones catalizadas por
enzimas.
1.2 Comprender cmo influyen la concentracin de enzima, concentracin de sustrato,
temperatura, pH, y la presencia de inhibidores sobre la velocidad inicial y la
concentracin de producto formado en reacciones catalizadas por enzimas
Michaelianas.
1.3. Interpretar el significado de las constantes cinticas KM y Vmax.
1.4 Valorar la importancia del trabajo prolijo y ordenado para la obtencin de resultados
confiables.

2. INTRODUCCIN
Las reacciones qumicas aumentan su velocidad en presencia de catalizadores, los
cuales se clasifican en inorgnicos que son inespecficos y orgnicos catalizadores
biolgicos que son muy especficos y comprenden a las enzimas y las ribozimas.
Las clulas producen y utilizan enzimas, porque stas tienen la propiedad de reducir al
mnimo la energa de activacin y ser reciclables (reutilizables).
Las enzimas son producto de la expresin de los genes; actan sobre sustratos para
transformarlos a productos. La actividad de las enzimas vara si se modifica: el pH, la
temperatura, la concentracin salina, la cantidad de la enzima del sustrato y la
presencia de inhibidores o activadores

3. CUESTIONARIO

1. En la figura se representa la estructura de una enzima y el detalle de su sitio


activo. Los R His 94, 96 y 119 de la enzima estn prximos en un lugar de la
molcula: el sitio activo.
a. Cmo explica que aminocidos distantes en la estructura primaria estn
espacialmente tan cercanos en el espacio?
b. Qu funciones cumplen en la reaccin los R del sitio activo?
c. Resuma las caractersticas estructurales del sitio activo.
2. Es frecuente que las enzimas requieran molculas orgnicas (vitaminas, por
ejemplo) o metales como Mg++, Fe++ para catalizar reacciones.
a. Cmo se denominan genricamente esas molculas no proteicas?.
b. Cul es su papel en la actividad enzimtica
c. Identifique el metal en la enzima de la figura anterior.
3. Las enzimas se agrupan segn el tipo de reaccin que catalizan. En los ejemplos
que figuran a continuacin, reconozca cundo acta una hidrolasa, una isomerasa
y una ligasa. Defina cada una de ellas. De 3 ejemplos de tres enzimas ms de
cada tipo.

4. La grfica A muestra la variacin de la actividad de dos enzimas medida a distintos


pH. La grfica B muestra la actividad de una misma enzima a distintas
temperaturas luego de ser sometida a distintos tratamientos.
a. Qu conclusiones puede sacar respecto al efecto del pH sobre la actividad de
las enzimas 1 y 2 del grfico A?
b. Por qu una misma enzima tiene distinta actividad a 30C en el grfico b?
c. Considerando los enlaces que estabilizan las enzimas, explique los grficos A
y B.
5. La velocidad con la que un sustrato (S) se convierte en producto (P), en una
reaccin catalizada por una enzima, se mide en los primeros minutos de reaccin y
se llama velocidad inicial (vo).

Estudiando la reaccin catalizada por la sacarasa, Michaelis y Menten encontraron


que, cuando la concentracin de enzima era constante y no limitante, la variacin
de vo con respecto a la [S] se ajustaba a una curva hiperblica.
a. Represente grficamente el resultado obtenido.
b. Identifique en la representacin grfica realizada en a:
etapas sustrato-dependiente y sustrato-independiente,
la velocidad mxima de la enzima (Vmx)
la [S] necesaria para logra Vmx/2, es decir la KM
c. Relacione las distintas situaciones que se representan en el cuadro que
aparece a continuacin con las regiones de la grfica que realiz en a.

d. Por qu cuando se alcanz la Vmx, la velocidad no vara aunque aumente la


[S]?
6. En la grfica se representa la actividad de una enzima con dos sustratos distintos.
a. Indique en el grfico la KM de la enzima para cada sustrato.
b. Cmo relaciona la Km con la afinidad de la enzima por los sustratos?
Las constantes cinticas (Vmx y KM) de una enzima para su sustrato pueden
variar en presencia de otros compuestos, los inhibidores.
7. La siguiente reaccin es catalizada por la succinato deshidrogenasa, una oxido-
reductasa:

a. En la figura siguiente, la curva 2 representa la velocidad de la enzima de la


reaccin anterior en presencia de su sustrato y la curva 1 cuando adems del
sustrato, est el oxalacetato. Indique el Km en cada caso y plantee cmo
actu el oxalacetato.

b. La presencia de cido malnico tiene, sobre la actividad de la enzima, una


accin similar al oxalactico (curva 1), sin embargo la presencia de palmtico o
tirosina no tienen efecto sobre la actividad de la enzima. Las frmulas de los
compuestos se presentan abajo, en funcin de estos datos explique los
resultados.

c. A partir de las constantes cinticas de la succinato deshidrogenasa en


presencia de oxalactico, identifique el tipo de inhibicin que produce.
8. Se observ que una enzima que cataliza la transferencia de un grupo fosfato a
otro compuesto es inhibida por el ATP. En la tabla se presentan los valores de [S] y
vo de la reaccin en ausencia (A) y en presencia (B) de ATP.

[ S] (mM) Vo experiencia A Vo experiencia B


0.15 2.6 1.3
0.25 3.9 1.9
0.35 4.8 2.4
0.5 5.9 3.0
1.0 8.1 4.2

a. Calcule el valor de Km en cada caso a partir de la representacin grfica


adecuada.
b. Indique el tipo de inhibicin que produce el ATP en la enzima.
c. Defina inhibicin competitiva y no competitiva y, a partir de su definicin,
identifique el tipo de inhibicin planteado en el problema.
9. A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de que
manera est actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.
[S] mM g producto/h g producto/h
(sin inhibidor) (6 mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313
10. Aprender utilizar los conceptos de Km, Vmax: Ingresar a la pgina siguiente
http://csm.jmu.edu/biology/courses/bio220/aotw3.html
Pulsar la tecla kinetics_model.xls, despus regresa a la pgina inicial y contesta las
preguntas que se te hacen.