EL DESARROLLO DE LAS PLNTULAS DE ARNDANOS INOCULADAS CON

HONGOS FORMADORES DE MICORRIZAS ARBUSCULARES

Daniela Farias Tiempo I ; Marilia Alves Brito Pinto II ; Bruno Carra III ; Marcia Wulff
Schuch IV ; Paulo Vitor Dutra de Souza V
Me
Ing. Agr., Estudiante de doctorado en Ciencia de Plantas, Universidad Federal de Viosa
(UFV), Viosa, Minas Gerais, Brasil. E-mail: dhorafarias@gmail.com
II
Ing Agr, Doctor en Agronoma de la Universidad Federal de Pelotas (UFPel /
ERS) ... Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil. E-mail: ma.agro@gmail.com
III
Ing Agr, Maestra en Agronoma de la Universidad Federal de Pelotas (UFPel /
ERS) ... Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil. E-mail: brunocarra@hotmail.com
IV
Prof. , Departamento de Ciencia Vegetal de la Universidad Federal de Pelotas (UFPel /
ERS). Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil. E-mail: marciaws@ufpel.tche.br
V
Ing Agr, doctor ... Facultad de Agronoma de la Universidad Federal de Rio Grande do
Sul. Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil. E-mail: pvdsouza@ufrgs.br , CNPq beca

RESUMEN

El objetivo de este estudio fue a evaluar el efecto de la inoculacin con micorrizas (

Glomus clarum Nicolson y Schenck, Glomus Glomus Becker y Gerd Gigaspora margarita
Becker y Hall y Scutellospora heterogama Nicolson y Gerd) en plntulas de arndanos
variedad Woodard. El diseo experimental fue de bloques al azar con cinco tratamientos,
cuatro repeticiones por tratamiento y seis plantas por parcela. Las plantas inoculadas con G.
margarita mostraron una mayor altura y la biomasa seca de la raz. El tratamiento con S.
heterogama y G. margarita mostraron mayores resultados para la biomasa verde de las
races. El rendimiento se asoci con la colonizacin de las tasas de races que las plantas
inoculadas con G. margarita y S. heterogama, fueron 48,2 y 45,1%, respectivamente. Para
el contenido nutricional, las plantas inoculadas con S. heterogama, G. etunicatum, G.
clarum y G. margarita proporciona mayores valores de N y P en los brotes de las plantas.

Trminos de indexacin: micropropagacin, Vaccinium sp, endomicorrizas, de crecimiento

`Woodard '(1960 - Georgia) est a mitad de temporada temprano con un requisito de frio
es de 350-400 h. son arbustos vigorosa, difusin y productivo. Los frutos son grandes y de
color azul oscuro, con suave firmeza media, excelente sabor y cicatriz medio. Pobre
cargador y el congelador; a menudo daados por las heladas de primavera. Una vez
cultivada, pero ahora popular slo para los mercados de captacin-su-propio y de granja.
Recin liberado cultivares ojo de conejo

INTRODUCCIN

El arndano (Vaccinium spp.) Es una fruta nativa de los Estados Unidos y Canad, y se
considera un recin explorado por la cultura del hombre, ya que hasta principios del siglo
XX la explotacin minera fue slo en estos pases (Santos, 2004). La cultura est en auge
en los pases de Amrica del Sur, como Chile, Argentina y Uruguay (Antunes et al., 2008).
El crecimiento de las reas cultivadas debido al aumento del consumo de productos
saludables con alto potencial antioxidante (Pannunzio et al., 2011). Blueberry es una fruta
muy populares debido a su sabor extico, su valor econmico y sus poderes medicinales,
siendo conocido como el fruto longevidad, dado caracterstico debido al alto contenido de
antocianinas contenida en el azul prpura pigmento color de la fruta soluble en agua
(Vizzotto et al ., 2012).

La cosecha de arndanos, a pesar de su gran importancia comercial en otros pases, Brasil

es an incipiente, centrndose en el Rio Grande do Sul, Santa Catarina, al sur de Paran y
alrededores de Curitiba, Sao Paulo y el sur de Minas Gerais ( Antunes, 2005). Para esta
cultura se convierta en un gran potencial, hay una necesidad de la disponibilidad comercial
de plntulas de calidad (Pelizza et al., 2011). Segn Ristow et al. (2009), y el bajo arraigo,
el arndano presenta un desarrollo lento y baja tasa de supervivencia de las plntulas
despus de la formacin de races.

La introduccin de hongos micorrcicos (AMF) se ha convertido en una tecnologa

interesante en los programas de produccin de plntulas buenas calidad, ya que permite
acortar el tiempo de formacin de los cambios de diversas frutas como la papaya (Martins
et al., 2000) fruta dulce pasin (ngeles et al., 2005), anacardo (Weber et al., 2004), pltano
(Lins et al., 2003), melocotn (Nunes et al., 2011) y la vid (Anzanello et al., 2011 ).
asociaciones de micorrizas arbusculares (MAS) se producen en la mayora de las especies
de plantas. Una vez establecida la simbiosis entre AMF y los sistemas de races de las
plantas, esto normalmente proporciona aumentos en la absorcin de nutrientes del suelo,
contribuyendo al crecimiento de las plantas, particularmente en los suelos con bajo
contenido de nutrientes (MIRANDA, 2008 ;. Kiriachek et al, 2009 ). Los beneficios de esta
simbiosis se deben a factores nutricionales, principalmente al aumento de la absorcin de
nitrgeno (Souza et al., 2005), fsforo y potasio (Calvet et al., 2003). Adems de mejorar el
estado nutricional de las plantas, la AMF acelerar el crecimiento y mejorar el vigor de la
misma, en su etapa de formacin (Calvet et al 2003;. Souza et al., 2005).

El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la inoculacin de las cuatro especies de
HMA en las plntulas de arndanos en el crecimiento vegetativo y el contenido de
macronutrientes en el cv. Woodard.

MATERIAL Y MTODOS

El experimento se llev a cabo en el Laboratorio de micropropagacin de frutas rboles

Plantas e invernadero del Departamento de Ciencias del Suelo de la Facultad de Agronoma
Eliseu Maciel, de la Universidad Federal de Pelotas, en el trmino municipal de Len (RS),
el perodo de 09 mayo de 2011 hasta el 10 de octubre de 2011.
Para la produccin de plntulas, se utilizaron segmentos de vstago como explantes
arndano cv. Woodard, Rabbiteye perteneciente al grupo de siete hojas y brotes producido
en micropropagacin Laboratorio de plantas frutales en WPM medio nutriente - Wood Plant
Media (Lloyd, McCown, 1980) ms 100 mg L -1 de myo-inositol, 30 g L -1 de sacarosa y 6
g L -1 agar. El pH del medio de cultivo se ajust a 5,0 antes de la adicin de agar. En la
etapa de multiplicacin, se aadieron 5 mg de 2iP (citoquinina).
Enraizamiento se realiz in-vitro, en un invernadero durante un perodo de dos meses. Los
explantes con cinco a ocho pares de hojas se sumergieron en una solucin de cido indol
butrico (IBA) en una concentracin de 250 mg L -1 durante 10 minutos para promover su
enraizamiento. A continuacin, se transfirieron y se embalan en bandejas transparentes de
plstico cerrada (cuencos de plstico) que contienen vermiculita expandida de tamao
medio de partcula. El IBA se diluy con NaOH 1 N y alcohol etlico al 70%. Las bandejas
se colocan en un invernadero a una temperatura controlada (25 C). Despus de dos meses,
hemos arraigado explantes ex vitro se transfirieron a bolsas de polietileno (tamao 10 x 15
cm) que contienen un sustrato comercial Carolina , compuesto de cscaras de turba,
vermiculita y arroz canadienses.
Inmediatamente antes de la transferencia, la adicin procedido de inculos FMA al sustrato
(5 g / una bolsa de plstico), la regin central del substrato. El inculo consista en races y
Brachiaria suelo de la rizosfera (Brachiaria decumbens Stapf.), Especies de plantas
utilizadas para multiplicar a travs del cultivo monosprico, cada uno de la AMF. AMF
especies ensayadas fueron Gigaspora margarita (Becker & Hall), G. clarum (Nicolson y
Schenck), Glomus etunicatum (Becker & Gerd) y heterogama Scutellospora (Nicolson y
ERGE). El control de plantas no recibi la inoculacin. El riego se realiza con rociador de
mano, de acuerdo con su necesidad, con el pH del agua de aproximadamente 5,0, que se
reduce con el uso de la SolP30 producto comercial @.
Para medir la influencia de la micorriza en plntulas de arndanos se analizaron altura de la
planta, nmero de brotes, disparar longitud, lanzamiento de peso en seco y la raz, las hojas
de anlisis de macronutrientes y determinar la colonizacin de la raz con AMF.
Inicialmente, las evaluaciones de altura de la planta, el nmero de brotes y longitud del
tallo se llevaron a cabo durante once semanas con el fin de identificar el momento exacto
de la actuacin de los HMA en plantas y ms tarde va a evaluarlos cada dos semanas
durante tres meses.
A la altura de las plantas y la longitud del tallo, la medicin se realiz utilizando una regla
milimtrica. Y, por el momento, la evaluacin se hizo desde el cuello hasta el pice del tallo
principal. El nmero de brotes se analiz contando el mismo. Para la evaluacin de la
biomasa seca, las plantas se dividen en sistema areo y la raz, donde fueron completamente
lavaron con agua destilada y se pesaron. Despus, las muestras se colocaron en bolsas de
papel y llevados a un horno con circulacin forzada de aire donde se procedi al secado
hasta peso constante a 70 C y se pes en una balanza analtica.
Para evaluar colonizacin de las races por AMF, las races de arndanos se recogieron en la
base y el borde de la corona que se separa del sustrato con agua y se clarificaron de acuerdo
con la tcnica descrita por Phillips y Hayman (1970), modificado por Gianinazzi y
Gianinazzi Pearson ( 1992). Las races se colocaron en un vaso de precipitados con
solucin de hidrxido de potasio (KOH) al 10% durante 20 minutos a 90 C en un bao de
agua. Despus de fase de KOH, se aadi una solucin de perxido de hidrgeno (H 2 O
2 ) al 10% durante 5 minutos. En sucesin, las races se lavaron cinco veces en agua
destilada durante 5 minutos y se acidific con solucin de cido actico al 5%. Para el
proceso de coloracin, las races se tieron con azul de tripano (0,075 g tripn azul
mezclado con 500 ml de glicerol, 450 ml de agua, 50 ml de cido clorhdrico al 2%) y se
incubaron durante 1 minuto a 90 C . Posteriormente, las races teidas se lavaron con
agua destilada para eliminar el exceso de colorante y se almacenan en lactoglicerol. La
observacin de la colonizacin de AMF fue tomada bajo el microscopio ptico de acuerdo
Giovannetti y Mosse (1980). raz de cinco palas para cada muestra se estableci, que
contiene diez segmentos de races de aproximadamente un centmetro en cada hoja. El
porcentaje de races colonizadas se obtuvo por la relacin: nmero de segmentos infectados
/ total de analizarse.
El diseo experimental fue un diseo de bloques al azar con cinco tratamientos
(inoculacin de cuatro especies de AMF y sin inoculacin), cuatro repeticiones y seis
plantas por parcela, para un total de 120 plantas. Los datos se sometieron a anlisis de
varianza (ANOVA) de las caractersticas evaluadas, y por lo tanto, cuando es significativo
para la comparacin de los promedios, las pruebas Tukey se aplicaron en el nivel 5% de
probabilidad para comparar los tratamientos de inoculacin y la Dunnet, un nivel de
significacin del 5%, para comparar los tratamientos de inoculacin con el testigo.

En todos los anlisis, se utiliz el software estadstico SAS (Statistical Analysis System,
1985).

RESULTADOS Y DISCUSIN

Los hongos formadores de micorrizas arbusculares, fueron eficaces en el aumento de la

altura, la longitud de brotes y longitud de la raz de las plantas ( Tabla 1 ).
Tabla 1.- Altura, nmero de brotes, longitud de brotes y longitud de races de las plantas de
arndanos cv. Woodard, inoculado con cuatro especies de hongos micorrcicos arbusculares
(Scutellospora heterogama, Glomus etunicatum, Glomus clarum e Gigaspora margarita)

Las medias seguidas por la misma letra en la columna no difieren en el nivel de 5% de

probabilidad mediante la prueba de Tukey.
ns: Hubo signiicativa diferencia entre el tratamiento y el control, en 5% de probabilidad
mediante la prueba de Dunnet.
*: Diferencia Signiicativa entre el tratamiento y control, en 5% de probabilidad mediante la
prueba de Dunnet.
Entre la AMF, G. margarita fue superior a los otros tratamientos, incluyendo el control. En
cuanto al nmero de brotes, tratamientos Scutellospora heterogama, Glomus Glomus, G.
Clarum y margarita Gigaspora no difirieron entre s incluso cuando se compara con el
control. Con respecto a la longitud de los brotes, todos los tratamientos mostraron un
comportamiento similar entre s. Sin embargo, slo el tratamiento Gigaspora margarita fue
mayor en comparacin con el control. Para la longitud variable de las races, los
tratamientos no fueron diferentes. Sin embargo, en comparacin con el control, todos los
tratamientos fueron superiores.

Bttenbender (2001) encontr que para rizoma vid, los tratamientos con Glomus clarum y
Scuttelospora heterogama no difieren del control, es decir, sin efecto sobre el crecimiento.
Silva et al. (1998), trabajando con las plantas de semillero de palma melocotn (Bactris
gasipaes) inoculado con Glomus clarum y Glomus Glomus, mostr que las plntulas
inoculadas tenan ms altos que las plantas no inoculadas. Este resultado no es compatible
con los datos obtenidos en este estudio, ya que los resultados de crecimiento se obtuvieron
en diferente altura entre el AMF y se inocularon a crecer, y slo Gigaspora margarita fue
superior a la del control. Segn algunos estudios, el hongo margarita Gigasopra se
encuentra entre la AMF que tienen ms grandes respuestas de crecimiento promovidos de
frutas como la manzana (KON, 1995), guayaba (SAMARO; Martins, 1999). Todava
Samaro y Martin (1999) mostraron respuesta de crecimiento significativo de las plantas de
guayaba cuando es desafiado con Gigaspora margarita, en comparacin con G. clarum.

De acuerdo con los resultados obtenidos para la longitud del sistema de la raz, donde las
plantas inoculadas fueron ms alentadores la formacin de races en comparacin con las
plantas no inoculadas, Gendiah (1991) tambin encontr que los esquejes de vid, a ser
inoculados con hongos micorrcicos tienden a que tiene una mayor longitud de la raz y el
crecimiento de brotes en comparacin con no sometidos a inoculacin. Segn Silveira et al.
(2002), la afinidad de cada especie de HMA en plantas de fruta inoculada es el factor
principal para causar un incremento caracterstico en estas plantas.

No hubo interaccin entre el efecto de AMF y la produccin de biomasa verde y seco del
vstago inoculado con Gigaspora margarita, y el mismo superior a los otros tratamientos
( Tabla 2 ). En comparacin con el control, todos los tratamientos difirieron en 5% de
probabilidad mediante la prueba de Dunnet. Con respecto a la biomasa verde de las races,
las plantas inoculadas con Scutellospora heterogama y Gigaspora margarita mostraron los
resultados ms altos. Cuando se compara con el control, tratamientos Scutellospora
heterogama Glomus etunicatum y Gigaspora margarita diferan en 5% de probabilidad
mediante la prueba de Dunnet. En relacin a la biomasa seca de las races, Gigaspora
margarita difiere de otros tratamientos y fue superior a la del control. La colonizacin por el
hongo en las races Scutellospora heterogama y margarita Gigaspora difieren 5% de
probabilidad mediante la prueba de Tukey otros tratamientos. Sin embargo, todos los
tratamientos fueron ms altos en comparacin con el control.

Trinidad et al. (2001) observaron un gran aumento de la materia seca de los brotes en las
plantas de las variedades de papaya inoculadas con Glomus clarum y margarita Gigaspora.
Silva et al. (2004), trabajando con fruta de la pasin dulce, observaron que la AMF tiene la
capacidad de aumentar la tasa fotosinttica de la planta, el aumento de la materia seca de la
zona. Silva et al. (1999), trabajando con rizoma vid micropropagado, observado mayor peso
de la biomasa seca de races hongos cuando se inocula Scutellospora heterogama y G.
clarum. Sin embargo, entre la AMF, slo se evalu heterogama Scutellospora, Glomus
Glomus y Gigaspora margarita diferan de otros tratamientos para estos parmetros. Los
resultados demostraron una vez ms que los beneficios de la simbiosis dependen de las
especies de HMA utilizados. Estas diferencias pueden explicarse tambin por el tiempo que
las plantas de arndanos se mantuvieron en contacto con la AMF. Algunas especies de
hongos probablemente necesitan ms tiempo para adaptarse y demostrar as sus efectos.

De acuerdo con los resultados del estudio de la intensidad de la colonizacin de la raz,

todas las especies probadas de arndanos colonizado races ( Tabla 2 ). Sin embargo
Gigaspora margarita (48,2%) y heterogama Scutellospora (45,1%) tenan la intensidad ms
alta. Este potencial de colonizacin de las races de las plntulas de arndanos puede
explicar los importantes resultados obtenidos en los parmetros evaluados relacionados con
la promocin del crecimiento.

Como se inform por Costa et al. (2001), la eficacia de asociacin de las plantas FMA y de
la fruta est regulada por los genotipos que participan en la interaccin con el medio
ambiente (Silveira et al., 2002). Sin embargo, adems de las respuestas al suelo y los
factores climticos, la compatibilidad entre los genotipos de la AMF y plantas es
fundamental para el inicio de la infeccin y el proceso de colonizacin de la raz (Silveira,
2002). Segn Silva et al. (2004), el AMF, cuando se utiliza en la produccin de plantas de
semillero de la fruta en condiciones homogneas de sustrato y el medio ambiente, los
beneficios proporcionados por la simbiosis se puede atribuir a la combinacin FMA X
anfitrin, hay una mayor compatibilidad funcional entre la fruta y la especie AMF.

El contenido de macronutrientes en la parte area de los tratamientos AMF se muestran en

la Tabla 3 . Los tratamientos con Scutellospora heterogama Glomus etunicatum, clarum
Glomus y Gigaspora margarita proporcionan valores ms altos de N y P en los brotes de las
plantas. Con respecto a K, todos los tratamientos fueron superiores a la de control, y
Gigaspora margarita dieron el mayor contenido de hoja, y G. clarum, valor intermedio. En
cuanto a Ca y Mg contenido que se encuentra en los tejidos de brotes, todos los
tratamientos mostraron resultados similares, incluyendo no diferir de la de control. Las
plantas colonizadas por HMA mostraron una mejor absorcin de los nutrientes en
comparacin con los no - colonizado. Este resultado explica un buen desarrollo temprano
de plantas de arndanos micorrizas, como se describe por Ozdemir et al. (2010) Anzanello
et al. (2011). De acuerdo con Smith et al. (2002), esta diferencia en el crecimiento de las
plantas inoculadas inoculados y no se puede atribuir al efecto de hifas externa de AMF
hacer posible, el sistema radicular de las plantas husped, una mayor asimilacin de
nutrientes.

La mayor absorcin de nitrgeno por las plantas inoculadas con AMF contribuy a estos
tratamientos proporcionan una mayor altura, longitud en ciernes, la biomasa fresca y seca
de brotes y races, en comparacin con el control ( Tablas 1 y 2 ).

Los resultados de los nutrientes que se encuentran en este estudio muestran que, adems de
los tratamientos con AMF tienen mayores niveles de macronutrientes en los tejidos
vegetales en comparacin con el control, el contenido de N, P y K han alcanzado los
valores ptimos para el cultivo de arndanos, como sugiere Freire (2004). Se puede decir
entonces que el periodo experimental total de 150 das fue suficiente para explotar las
micorrizas y el sustrato.

Segn Minhoni y Auler (2003), los hongos micorrcicos son vitales para las plantas, que
pueden proporcionar aumentado en un 25% la absorcin de N, 80% de la absorcin de P
(Marschner (Siqueira et al, 2002);. Dell, 1994 ) y 60% para K (Siqueira et al., 2002).
Tambin de acuerdo Minhoni y Auler (2003), el AMF es de importancia fundamental para
las plantas, debido a su capacidad para inducir una mayor absorcin de fsforo y potasio.
Con la significativa en comparacin con los resultados de control obtenidos en este estudio,
se puede relacionar el resultado de que las buenas condiciones fueron proporcionados
principalmente el pH, que recibi la colonizacin AMF de las races, fsforo
proporcionando una mayor absorcin del soporte. Segn Tedesco et al. (2004), el fsforo y
el potasio son los elementos con alta movilidad en el tejido vegetal, pero son menos
mviles en el suelo, adems de que tiene una baja solubilidad.

De acuerdo a Silveira (1999), magnesio y calcio son esenciales en procesos fisiolgicos

tales como la regulacin de la hidratacin, la activacin de las enzimas, y en el caso de
magnesio, en la fotosntesis. De acuerdo con los resultados obtenidos por Souza (1995) de
los rboles frutales, se encontr que el AMF tiene el poder de reducir la absorcin de calcio
y magnesio. Segn Souza et al. (2005), la concentracin de calcio y magnesio en plantas de
ctricos sometidos a inoculacin micorrcica es similar a la concentracin presente en no
inoculado, mediante la inhibicin de la absorcin de estos elementos, debido a un efecto
tampn causado por la AMF. Ng et al. (2008) observaron rizoma melocotn inoculado con
AMF, bajos niveles de calcio y magnesio en los tejidos vegetales. Este resultado corrobora
los resultados obtenidos con las especies de HMA analizados en este trabajo.