UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA: MEDICINA
CTEDRA: MICROBIOLOGA I
DOCENTE: Dra. CRISTINA TINAJERO

PERIODO ACADMICO: ABRIL 2017 AGOSTO 2017

SEMESTRE: TERCERO
PARALELO: A

GRUPO:3

INFORME N: 2

INTEGTRANTES:

1.- APOLO EDINSON

2.-MEDINA JANINA

3.- MURIEL JOSUE

4.- NIETO NATHALY

5.- VEINTIMILLA STHELLA

1.- TEMA: Introduccin, materiales y seguridad en el
laboratorio de microbiologa conceptos de esterilizacin y
desinfeccin y tipo de muestras bacteriolgicas

2.- OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL

Conocer y aplicar las reglas bsicas de higiene y seguridad para

los laboratorios del rea microbiolgica.
Aprender las tcnicas correctas para una buena extraccin,
manejo y transporte de muestras.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Identificar los distintos instrumentos utilizados en laboratorios

de Microbiologa.
Conocer las reas de trabajo de un laboratorio Microbiolgico.
Conocer las normas de seguridad que deben establecerse en el
laboratorio para evitar la transmisin de infecciones.
Conocer el uso correcto y el material de que esta elaborado
cada instrumento
Determinar los diferentes mtodos de esterilizacin
Conocer los mtodos de obtencin de las muestras ms
caracterizadas como (orina, heces,exudados).
Conocern como se transportan las muestras, y los mtodos
que disponen para ello.

3. FUNDAMENTO TERICO

4. PROCEDIMIENTO

* Ingresaremos al laboratorio aplicando las normas de bioseguridad.

* Socializacin sobre las normas de bioseguridad

* Reconocimiento de las reas de Microbiologa

* Identificacin de los materiales y equipos utilizados en el

laboratorio.

* Conocer la sealetica del laboratorio y de los reactivos a utilizar.

* La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento

con antimicrobianos, ya que este interfiere en la observacin directa
del germen, asi como en posterior aislamiento del mismo en los
medios de cultivo.

* Las muestras deben recoger en cantidades suficientes para permitir

un examen completo; deben colocarse en recipientes estriles y
remitirse ms pronto posible el laboratorio.

5. OBSERVACIONES

Aprendimos sobre las normas bsicas de higiene para mantener

el habitad seguro de un laboratorio
Pudimos conocer ms sobre las tcnicas para la extraccin y las
normas de manejo y transporte de muestras
Logramos identificar de manera inmediata los instrumentos a
utilizar en el laboratorio
Conocimos ms sobre las reas de trabajo de un laboratorio de
microbiologa y las normas bsicas de seguridad que hay que
tener en cuenta en un laboratorio para evitar posibles desastres
Aprendimos ms sobre como esterilizar los instrumentos en el
mechero
Se nos dio a conocer los procedimientos a efectuarse luego de
una toma de la muestra y en qu casos poder preservarlas

6. CUESTIONARIO

3.- Qu es un agente esterilizante, como es su mecanismo,

indique dos ejemplos?

Un agente esterilizantes es un medio que permite la eliminacin o

muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o
sustancia, y que se encuentran a condiciones contaminadas de tal
forma que no pueden contaminarse nuevamente.

En su mecanismo tenemos a agentes fsicos, qumicos y de filtracin,

en el mecanismo fsico se va a presentar:

Calor

Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la

accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas,
fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidativos
irreversibles en los microorganismos.

La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

Temperatura
Tiempo de exposicin
Calor Hmedo

El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de

protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas

estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son
producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto,
reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la
produccin de productos txicos. Adems, las estructuras
secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que
pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas
temperaturas.

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor

mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales
hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los
materiales secos debido a la energa liberada durante la
condensacin.

Calor Seco

El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por

niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de
membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde
los materiales a los microorganismos que estn en contacto con
stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra
ms lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La
accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor
temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del
medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan
mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms
difciles de romper por el calor seco.

La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los

laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor
temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura
vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de
exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin,
mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.

Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no

pueden ser esterilizados a ms de 160C.

Radiaciones
Su accin depende de:

Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis

Ionizantes

Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales
para la viabilidad de los microorganismos.

Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales

termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas,
etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.

No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque

producen alteraciones de los componentes.

Ultravioletas

Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que

forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores en la
duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.

Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.

En el mecanismo qumico:

Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes

esterilizantes, desinfectantes y antispticos.

La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las

que actan.

Concentracin: vara con el tipo de agente y de

microorganismo, pues una misma concentracin del agente
puede producir un efecto diferente en distintos
microorganismos.

Tiempo: los microorganismos no son susceptibles a un agente

en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos
mueren al mismo tiempo.

pH: afecta tanto a los microorganismos como a los agentes

qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la
carga negativa de los microorganismos afectando la
concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el
 grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a
menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Antispticos
Alcoholes

Lesionan la membrana celular de los microorganismos y

desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la estructura
fosfolipdica.

No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los

alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que los de
cadena larga.

Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son

el etanol e isoproplico.

Iodo

Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y

cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los
grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles,
etc.

Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo

molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante.

Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de

iodo libre.

Agentes inicos y anfteros

Son sustancias que lesionan la membrana celular debido a que

desordenan la disposicin de las protenas y de los fosfolpidos, por lo
que se liberan metabolitos desde la clula, se interfiere con el
metabolismo energtico y el transporte activo.

No son esporicidas ni tubercolicidas an en altas concentraciones. Sus

principales ventajas se hallan en que son inodoros, no tien, no son
corrosivos de metales, estables, no txicos y baratos.

Catinicos: Sales de amonio cuaternarias. Tienen mayor

actividad a pH alcalino y los Gram + son ms susceptibles.
Aninicos: Jabones y cidos grasos. Tienen mayor actividad a
pH cido y son eficaces contra Gram +.
Anfteros: Actan como catinicos o aninicos segn el pH.

O rg an o Me rcu ri al e s
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las
protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos
se encuentran el metafen y el mertiolate.

Tambin encontramos filtracin

Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado.

El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la
muestra. Hay que tener en cuenta que los filtros que se utilizan
generalmente en los laboratorios no retienen virus ni micoplasmas,
estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de
poro que se utilice.

Existen tres tipos bsicos de filtros:

Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten

de un material fibroso o granular prensado, plegado,
activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este
tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por
una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la
matriz.

Membranas filtrantes: tienen una estructura continua,

y la retencin se debe principalmente al tamao de la
partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro
quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos
electrostticos.

Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son

pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas
por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias
qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que
atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como
tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao
mayor al del poro.

La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones

termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de
pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas
diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y
soluciones de antibiticos y vitaminas.

Ejemplos:

El momento de utilizar el calor vamos a efectuar una

desnaturalizacin y coagulacin de protenas.
El calor seco nos va a permitir una esterilizacin de sustancias
en polvo y no acuosas y de sustancias viscosas.
 Eliminar agentes patgenos de los instrumentos que vamos a
utilizar con cloro o sustancia qumica.(Morse)

4.- Describa los niveles de seguridad biolgica?

La Seguridad Biolgica del personal y las instalaciones en laboratorios

de microbiologa se fundamenta en tres elementos bsicos: 1) Las
tcnicas de laboratorio, 2) El equipo de seguridad y 3) El diseo de las
instalaciones.

Agente biolgico del grupo 1. Aqul que resulta poco probable

que cause una enfermedad en el hombre.
Agente biolgico del grupo 2. Aqul que puede causar una
enfermedad en el hombre y puede suponer un peligro para los
trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad
y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Agente biolgico del grupo 3. Aqul que puede causar una
enfermedad grave en el hombre y presenta un serio peligro para los
trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y
existiendo frente a l generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
Agenete biolgico del grupo 4. Aqul que causando una
enfermedad grave en el hombre supone un serio peligro para los
trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la
colectividad y sin que exista generalmente frente a l profilaxis o
tratamiento eficaz.
Existen cuatro niveles de contencin o de seguridad biolgica en
funcin de la combinacin de los tres elementos descritos.
Nivel 1. Es el nivel de seguridad requerido para los agentes
biolgicos del grupo 1, es decir, los que no producen enfermedad en
el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los
antimicrobianos. Es el utilizado habitualmente en los laboratorios de
prcticas de universidades o centros docentes donde se emplean
cepas no patgenas.
Nivel 2. Es el obligado para agentes del grupo 2 como algunos que,
perteneciendo a la propia flora habitual del hombre, son capaces de
originar patologa infecciosa humana de gravedad moderada o
limitada. Deben ser manipulados por personal especializado y son los
que con ms frecuencia se estudian en el Laboratorio de Microbiologa
Clnica.
Nivel 3. Cuando se manipulan agentes biolgicos del grupo 3,
microorganismos que causan patologa grave, de difcil y largo
tratamiento, que pueden curar con secuelas y a veces producir la
muerte. El mayor y ms frecuente peligro que entraan stos es la
infeccin adquirida a travs de aerosoles y por fluidos biolgicos. Por
ello, las principales medidas a tomar en este caso son la correcta
manipulacin y la utilizacin de cabinas de seguridad. En este grupo
estn: M. tuberculosis, Brucella, Coxiellaburneti, etc. Slo pueden ser
procesados por personal cualificado y en una zona con la
infraestructura apropiada para el Nivel de Contencin 3, es decir, con
aire acondicionado independiente, sin recirculacin de aire, con
gradiente de presin, cabinas de bioseguridad, etc.
Nivel 4. Nivel requerido cuando se procesa con certeza o se
sospecha un agente especialmente patgeno e infectocontagioso,
extico o no, que produce alta mortalidad y para el que no existe
tratamiento y/o es poco fiable. Normalmente son microorganismos de
dosis infectiva baja y alta contagiosidad. Este nivel tambin puede
utilizarse para trabajar con animales de experimentacin infectados
por microorganismos del grupo 4. En este grupo estn los virus de la
fiebre de Lassa, virus Machupo, virus Ebola, etc. Adems, deben
incluirse en este nivel de contencin los microorganismos del grupo 3
que adquieran propiedades patgenas que los eleven al grupo 4
(Mycobacterium multirresistente).(BUTEL)
5. Defina agente bactericida y agente bacteriosttico,
coloque dos ejemplos?

Agente bactericida

Producto especialmente estudiado para reaccionar con las fibras por

su efecto letal al ser ingerido o al entrar en contacto con los
microorganismos y que acta por modificacin qumica de aqullas.
Del griego baktheria, y del latn caedere, matar). Que mata las
bacterias.

El poder bactericida no es ms que la ms dbil concentracin de una

sustancia capaz de provocar la destruccin definitiva de la vitalidad
de un microbio. Provocan la lisis y muerte de microorganismos.

Ejemplo: Penicilinas, Cefalosporinas, Polipeptdicos.

Agente bacteriosttico

Bacteriosttico se refiere a filtros de agua que no permiten la

reproduccin de microorganismos. Esto no quiere decir que los
destruya, solo que no permite su reproduccin, es decir, si al filtro
entran 50 bacterias, no se podrn desarrollar ms, pero en ningn
caso las elimina. Normalmente, son los filtros de carbn activado con
algn contenido de plata o de KDF, a los que se les conoce como
bacteriostticos. Bactericida son los sistemas que s matan a los
microorganismos que causan enfermedades. Los purificadores
ultravioleta son los bactericidas ms eficientes.

Ejemplo: cido lctico, cloranfenicol, laxtoperoxidasa

6. Qu caractersticas debe tener una muestra indique 6?

1) Ser obtenida del lugar donde asiente la patologa.

2) Generalmente tomada de los bordes de la lesin.
3) Ser cualitativamente ptima para su estudio.
4) Alcanzar cuantitativamente un volumen razonable.
5) Perfectamente envasada, evitando recipientes que
potencialmente pueden producir contaminaciones accidentales.
6) Enviar inmediatamente al laboratorio para su estudio o si tiene
que transcurrir algn tiempo ser enviada en recipientes
especiales o en medios de cultivo de transporte.
7) Debe ser obtenida con material esterilizado y en condiciones de
asepsia.

7. Por qu es importante refrigerar la muestra de orina

inmediatamente despus de la extraccin?

La orina es un medio apropiado para el crecimiento bacteriano, por lo

que las muestras de orina se contaminan con facilidad. Es bien
conocido que el retraso en el procesamiento de los urocultivos
permite la multiplicacin de la flora contaminante, lo que afecta a la
validez de los resultados. Para evitar este problema se recomienda
procesar la orina lo antes posible. Sin embargo, en pacientes
ambulatorios es difcil evitar cierta demora desde la recogida de la
orina hasta su procesamiento. Para evitar la contaminacin puede
recurrirse a medios fsicos (refrigeracin) o qumicos (adicin de
conservantes).

Sin embargo, existen dudas sobre si el empleo de estos medios

influye en la calidad de las muestras. Por ello, a la hora de interpretar
un anlisis de orina deben tenerse en cuenta las condiciones en las
que la muestra fue recogida, conservada y transportada, ya que
pueden influir en la validez tanto del cultivo como de los parmetros
del perfil urinario (tira reactiva o examen microscpico).

Interesa, pues, establecer las condiciones ms recomendables de

conservacin y transporte de las muestras de orina recogidas para
cultivo, con consideraciones sobre el tiempo de demora permitido, la
utilidad de las distintas tcnicas fsicas y qumicas de conservacin,
as como las consecuencias que los anteriores factores tienen sobre la
interpretacin de los resultados, tanto del urocultivo como de los
parmetros del perfil urinario (Eriksson I, 2002) Cuando la muestra
no se refrigera, despus de varias horas de la toma, se producen
cambios en su composicin: las bacterias desdoblan la urea,
convirtindola en amoniaco y aumentando el pH; los cilindros
urinarios suelen descomponerse despus de varias horas; los
eritrocitos son lisados en orinas hipotnicas

8.- Cul de las siguientes muestras no deben guardar en la nevera

cuando se requiere realizar un cultivo microbiolgico? Subraya la
respuesta y justifcala
Esputo
Orina
Liquido cfalo raqudeo
Heces
Todas las muestras deberan enviarse rpidamente al laboratorio para
que fueran procesadas antes de las dos primeras horas desde su
recogida.
Esta situacin es vital en el caso de los LCR en meningitis agudas.
La mayora de las bacterias resisten bien las temperaturas bajas, por
lo que las muestras pueden mantenerse unas horas en nevera,
EXCEPTO: LCR, Exudados, Heces y muestras para cultivo de
Anaerobios.(Escribano Garaizbal & Lorente Ortuo, 2016)
9.- Para qu estudio se emplea la puncin cutnea o capital?

Es utilizada para extraer pequeas cantidades de sangre para

determinaciones de hemoglobina, hematocrito y frotes perifricos.
Hay tres lugares de donde realizar esta puncin: el lbulo de la oreja,
la yema del dedo y el taln del pie.
La muestra capilar es la recoleccin de sangre que se obtiene
punzando la piel. Los capilares son diminutos vasos sanguneos que
se encuentran cerca de la superficie de la piel.
Razones por las que se realiza el examen

El cuerpo utiliza la sangre para el transporte de oxgeno, nutrientes,

productos de desecho y otros materiales en su interior, as como
tambin para regular la temperatura del cuerpo. La sangre est
constituida por una porcin lquida llamada plasma y una porcin
celular. El plasma contiene varias sustancias disueltas en el lquido y
la porcin celular consta principalmente de glbulos rojos, pero
tambin tiene glbulos blancos y plaquetas.
Debido a que la sangre se utiliza para mltiples funciones dentro del
cuerpo, los exmenes de sangre o de sus componentes pueden
suministrar indicios claves para el diagnstico de muchas condiciones
mdicas.
La muestra de sangre capilar tiene muchas ventajas, tales como:
Es relativamente fcil de obtener (usualmente es muy difcil extraer
una muestra de sangre de las venas, especialmente en los bebs).
En el cuerpo existen diversos sitios de recoleccin (el taln , la punta
de los dedos) que se pueden rotar.
Esta muestra se puede extraer en la casa y con un entrenamiento
mnimo. Los diabticos, por ejemplo, deben chequear sus niveles de
azcar en la sangre varias veces al da utilizando una muestra
sangunea capilar.(Garcia, 2016)
10.- De qu espacio intervertebral se obtiene la muestra del
liquido cefalorraqudeo y porque?

La puncin lumbar es un procedimiento mdico donde se extrae una

pequea muestra de lquido cefalorraqudeo para analizarla. El lquido
cefalorraqudeo es incoloro y su funcin consiste en proporcionar
nutrientes y actuar como protector del cerebro y de la mdula
espinal, o sistema nervioso central.

Durante la puncin lumbar, se introduce con mucho cuidado una

aguja en la parte inferior de la columna vertebral para tomas la
muestra de lquido cefalorraqudeo. (J. Fernandez, 2008)

11.- Indique como debe ser la seleccin de una muestra

Las muestras fecales deben ser recolectadas directamente del recto

para evitar contaminacin, puestas en un envase hermtico y
enviadas en refrigeracin al laboratorio. Debido a la alta probabilidad
de contaminacin se debe evitar el envo de excretas expuestas al
medio ambiente.

12.- Indique cuales son los mtodos de transporte de

muestras

Como medio ideal de conservacin, se utiliza la refrigeracin, con

hielo natural, hielo seco o gel refrigerante en fundas hermticas
(existen excepciones descritas en los procedimientos de recoleccin
de muestras).

2. La totalidad de las muestras recolectadas debe enviarse utilizando

un sistema de empaque en doble caja: La caja interna,
preferentemente debe ser de un material aislante de temperatura
externa, siendo las ms recomendadas las cajas de espumaflex
(icopor) por su bajo peso y fcil manipulacin. Las muestras
debern ser enviadas en recipientes individuales y bien identificadas.
Entre cada funda, frasco o recipiente que contenga la muestra, se
coloca un material que amortige los golpes, mantenga fijas las
muestras y absorba la humedad (especialmente cuando se usa hielo
natural o hielo seco como refrigerante). Puede usarse tambin
espumaflex para ste fin. La informacin bsica que acompaa las
muestras se enva debidamente protegida, dentro de un sobre y en
funda plstica, entre la caja interna y la caja externa. La caja
externa se cierra de tal manera que todas las esquinas y/o tapas
queden selladas con cinta adhesiva (aumenta la resistencia del
recipiente y garantiza el aislamiento de las muestras). Si las
condiciones lo permiten, envolver la caja externa con papel empaque,
sellar con cinta adhesiva y colocar con letra grande y clara:

7. BIBLIOGRAFIA

BUTEL. (s.f.). Microbiologia. Obtenido de Microbiologa general :

http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/lab
v/LabMicro/practica2.html

Escribano Garaizbal, E., & Lorente Ortuo, S. (2016). Laboratorio de

Microbiologia. Obtenido de
http://www.chospab.es/area_medica/microbiologia/docTomaMuestras/
1_Manual_recogida_transporte_conservacion_muestras_microbiologia.
pdf

Garcia, C. (2016). Flebotomia. Obtenido de

http://lasangreesvi.blogspot.com/p/puncion-capilar-fundamento-
teorico-es_17.html

Morse. (s.f.). Microbiologia. Obtenido de Lange:

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm

Eriksson I, Lindman R, Thore M. Microbiological

(Morse)

(BUTEL)