ENZIMAS PROTEOLITICAS

INTRODUCCIN

Las enzimas proteolticas rompen enlaces peptdicos, algunas de estas se

encuentran en el tubo digestivo que transforman progresivamente las protenas en
pptidos y stos en aminocidos.

Dentro de estas enzimas proteolticas, la que se encuentra en mayor cantidad es

la papana, de la que se distinguen la papaina I y la quimopapaina, que es ms
estable en medio cido, pero su actividad proteoltica es cuantitativamente menos
marcada que la de la anterior, pues slo coagula la leche.

La papana es una enzima de baja especificidad que hidroliza tanto las protenas
como los pptidos de pequeo tamao, amidas y steres. Su accin enzimtica
esta relacionada con la presencia de grupos sulfidrilo de la cistena en el centro
activo.

Esta es activada por la cisteina (aa), el tiosulfato (compuesto de azufre), el

glutatin y el EDTA (agente alquilante); y es inhibida o inactivada por iones
metlicos (zinc, cadmio, hierro, plomo mercurio), oxidantes (H2O2, radicales
libres, etc.) y por agentes que reaccionan con los tioles (cido ascrbico).

Las reacciones qumicas en nuestras clulas no ocurren espontneamente. Si as

fuera, el metabolismo sera catico. En lugar de ello, muchas reacciones en la
clula son controladas por protenas llamadas enzimas. El nombre de enzima,
propuesto en 1867 por el fisilogo alemn Wilhelm Kuhne (1837-1900), deriva de
la frase griega en zyme que significa en fermento.

La mayora de las reacciones qumicas requieren un ingreso inicial de energa

para comenzar y desarrollarse a un ritmo razonable. La energa aadida
incrementa la energa cintica de las molculas, permitiendo que un mayor
nmero de ellas adquiera la fuerza suficiente no slo para superar su repulsin
mutua, sino tambin para romper los enlaces qumicos existentes en su interior.
La energa que deben poseer las molculas para iniciar una reaccin se conoce
como energa de activacin. En el laboratorio, la energa de activacin se
obtiene a menudo como calor. Pero en una clula ocurren muchas reacciones
diferentes al mismo tiempo y el calor las afectara a todas indiscriminadamente.
Adems, el calor rompera puentes de hidrgeno y producira en la clula otros
efectos generalmente destructivos. Las clulas evitan este problema utilizando
enzimas, que son protenas globulares especializadas para actuar como
catalizadores.

Un catalizador es una sustancia que disminuye la energa de activacin necesaria

para una reaccin formando una asociacin pasajera con las molculas que
reaccionan (Figura 1). Esta asociacin temporal acerca a las molculas que
reaccionan y tambin pueden debilitar los enlaces qumicos existentes, facilitando
la formacin de otros nuevos. La disminucin en la energa de activacin debida a
la accin del catalizador es similar a la cantidad de energa que posee la mayora
de las molculas que intervienen en una reaccin qumica. Como resultado, la
reaccin ocurre ms rpidamente en presencia de un catalizador. El catalizador
mismo no sufre ninguna alteracin permanente en el proceso y se puede volver a
utilizar repetidamente.

En la actualidad se conocen ms de dos mil enzimas diferentes, cada una de las

cuales es capaz de catalizar una reaccin qumica especfica. Sin embargo,
diversos tipos de clulas elaboran diferentes tipos de enzimas; ninguna clula
contiene todas las enzimas conocidas, las enzimas particulares que pueden
fabricar una clula son uno de los principales factores que intervienen en la
determinacin de las actividades biolgicas y funciones de esa clula. Una clula
puede efectuar una reaccin qumica dada a una velocidad razonable solamente si
posee una enzima especfica que puede catalizar una reaccin. La molcula o
molculas sobre la cual acta una enzima se conoce como su sustrato.

Figura 1. Mecanismo de catlisis. Tomado de: www.100ciaquimica.net

Estructura y Funcin de las enzimas

Las enzimas son protenas globulares complejas de gran tamao, formadas por
una o ms cadenas polipeptdicas. Estn plegadas un surco o bolsillo en el que
encajan la molcula o las molculas reactivas (el sustrato) y donde tiene lugar las
reacciones. Esta regin de la enzima se conoce como sitio activo, solo pocos
aminocidos de las enzimas estn involucrados en un sitio activo en particular;
algunos de ellos pueden ocupar posiciones contiguas en la estructura primaria,
pero es mas frecuente que esa proximidad de los aminocidos del sitio activo, la
cause el intricado plegamiento de la cadena de aminocidos que da origen a la
estructura terciaria. En una enzima con estructura cuaternaria, los aminocidos del
sitio activo pueden encontrarse en diferentes cadenas polipeptdicas.

El sitio activo no slo tiene una configuracin tridimensional complementaria a la

del sustrato, sino tambin tiene una distribucin complementaria de cargas y de
zonas hidroflicas o hidrofbicas sobre la superficie de unin. Si una regin
particular del sustrato tiene una carga negativa, es probable que el sitio activo
tenga una carga positiva en la zona correspondiente. De tal modo el sitio activo no
solamente reconoce y confina a la molcula de sustrato, sino que tambin la
orienta en una direccin particular.

MATERIALES

MATERIALES BIOLGICOS

leche fresca
zumo de papaya

MATERIALES NO BIOLGICOS

5 tubos de ensayo
pinzas para tubos de ensayo
mortero
pipetas de 1-5 y 10 ml
gradilla
beaker de 300 ml
REACTIVOS

Bicloruro de mercurio
Agua destilada
EDTA
Cisteina 0.2M neutralizada

METODOLOGA

1. En un tubo de ensayo pipetear 0.5ml de cualquiera de las soluciones

enzimticas y adicionar 3 ml de leche e incubar a 50C hasta la formacin del
coagulo. Agitando suavemente notar el incremento de viscosidad.

2. Efecto de sustancias qumicas sobre la actividad de la papaina.

Preparar los siguientes tubos:

REACTIVOS (ml) 1 2 3 4 5
Dilucin
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
enzimtica
Agua destilada 0.1 0.1 - - 0.1

Bicloruro de Hg - - 0.1 0.1 -

Mezclar y dejar
reposar durante
10 minutos
Agua destilada 0.4 - 0.4 - 0.4

EDTA - 0.2 - 0.2 -

cisteina - 0.2 - 0.2 -

Mezclar y luego de 15 minutos de reposo realizar el ensayo de actividad

enzimtica a cada uno. Registrar los resultados.

BIBLIOGRAFIA

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QUMICA ORGNICA BSICA. Bonner W. Ed. Alhambra. Madrid-Espaa.1978
CONN, Erick. Bioaumica Fundamental. Ed. Limusa. Mxico. 1984
BUITRAGO, J.M. Fndamentos de bioqumica. Ed. Doyma. Barcelona-Espaa.1994
BIOQUMICA PARA LAS CIENCIAS DE LA SALUD. Lozano J.A., Galindo J.D.
ed. Mc Graw-Hill. Madrid Espaa. 1996.