FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS

BIOQUMICA

ASIGNATURA:

BIOQUIMICA II

PRCTICA:

ACCIN COMPARATIVA DE LAS ENZIMAS FRENTE A CATALIZADORES

NO BIOLGICOS Y CINTICA ENZIMTICA

ALUMNOS:

PALOMINO MARIACA ANGEL

PATIO MAYTA CARLA

CICLO: VII

DOCENTE: Q.F. JAVIER JACK CALDERN GMEZ

LIMA PER

2017
 FUNDAMENTO TERICO

Las enzimas son catalizadores biolgicos de naturaleza proteica. Estosignifica que son protenas
cuya funcin es acelerar las reaccionesbioqumicas. Aunque se trata de
protenas muchas requieren, para ser activas, un componente no proteico conocido
como coenzima o grupoprosttico, segn se encuentre dbil o firmemente asociado a
la matrizproteica. La estructura de este componente no proteico va a variar desdeun
ion (Ca+, Mg+, Mn+, y otros) hasta molculas complejas como NAD+,NADP+ y FAD.
En estos casos la actividad enzimtica va a depender de lapresencia simultnea de
una porcin proteica (apoenzima) y una porcinno proteica (coenzima) y el conjunto
activo apoenzima ms coenzima, seconoce como holoenzima. La actividad enzimtica
se estudia en elequilibrio, donde no hay cambio neto en la cantidad de sustrato o
deproducto. En los sistemas biolgicos, las enzimas abaten la energa deactivacin y
permiten que se produzcan reacciones, que de otro modo,no ocurriran a velocidades
mesurables. Las enzimas no se consumen en elproceso y las reacciones catalizadas
no alteran la naturaleza de lareaccin, solo disminuyen la energa de activacin.Una
consecuencia del hecho de que las reacciones bioqumicas seancatalizadas por
enzimas es la especificidad de stas hacia el substrato: unaenzima cataliza la
transformacin de un solo tipo de molcula o de unostipos diferentes de molculas
estructuralmente muy relacionadas, laespecificidad representa una ventaja para la
clula. Las enzimasdependiendo de las reacciones que catalizan, se han clasificado
por lacomisin internacional de enzimas (E.C) en cuatro dgitos que antecedenal
nombre recomendado para la enzima, este nombre est compuesto por uno corto
unido al nombre de la reaccin que cataliza, los dgitos son: elprimero se refiere a la
clase y van del 1 al 6, representan la reaccingeneral catalizada, el segundo la sub-
clase, el tercero la sub-subclase y elcuarto designa a cada enzima especifica.Como
protenas que son, las enzimas, son molculas de uso delicado por ser fcilmente
desnaturalizables. Debido a esto, deben manipularse bajocondiciones que no
favorezcan la desnaturalizacin puesto que staconduce a la inactivacin.
OBJETIVO:

Producir la Hidrlisis del Sustrato Problema (Solucin salina de Almidn).

La Hidrlisis va a ser efectuada por los catalizadores Biolgicos y No
Biolgicos.
Realizar la comparacin de catalizadores Biolgicos (Amilasa) frente a otros
Catalizadores de tipo no Biolgicos (H20 dest., y el HCl 10 %.).
Determinar cules de los Catalizadores produce cada tipo de Hidrlisis.

Materiales:

PROCEDIMIENTOS

1) PROCEDIMIENTOS

Materiales:

3 tubos de ensayo

Cocinilla

Para obtener la amilasa tomamos 20

ml de agua destilada y hacemos
enjuague por 2 minutos y luego
ponemos la muestra en un becker.

El almidn ha sido diluido en una solucin salina de cloruro de sodio al 0.3%,a

concentracin 1g de almidon sobre 100ml de agua
 No enjuagar la boca con agua para luego botarlo y volverse a enjuagar
nuevamente, ya que de sta manera se reduce la concentracin de amilasa
que es la Solucin madre que queremos obtener para el ensayo, ya que si
enjuagamos y desechamos va a tener menor actividad.
Agitar por inversin con diferentes dedos los tubos para homogenizar.
La muestra siempre debe estar bien cubierta por el agua para que el calor sea
homogneo.
La Reaccin slo dura hasta observar cambio de coloracin.
Muestra.- Va a ser el catalizador Biolgico. Amilasa en condicin de Ayuno.
- Trabajamos con Acido Muritico en vez de HCL 10%: 20 ml de Ac. Muritico en
100 ml de H20 destilada.

1er Tubo 2do Tubo 3er Tubo luego

Agua 1ml homogenizamos
con
HCl 10% 1ml calentamiento
por completo el
Amilasa 1ml almidn en el
sistema y de
esta manera
Almidn 4ml 4ml 4ml
tenemos este
Bao mara 15 minuto B.M. Hervir x 15 15 minuto
reactivo que es
38C min
el

Para el 1er y Para el 2do

3do tubo es a tubo se hace
bao maria hervir

sustratoproblema, este almidn se hizo en solucin salina ya que esta es una

conservadora de almidn.

En este paso hemos sometido al sustrato a una hidrolisis

utilizandocatalizadores biolgicos (agua) y no biolgicos (agua, y el HCl).

2) PROCEDIMIENTO
Materiales:

3 tubos de ensayo

Cocinilla

TUBO N 4 TUBO N 5 TUBO N 6

0,5 ml de 1 0,5 ml de 2 0,5 ml de 3
+ + +
I gota Lugol I gota Lugol I gota Lugol
Azul Marino Rojo Concho de Azl Violceo
Intenso Vino
Hidrlisis Hidrlisis Parcial Aparentemente
Negativa Incompleta Hidrlisis Parcial
(Por que (Hay Glucosa en Esperamos
proviene del baja proporcin encontrar la
Digerido 1 el en con Maltosas y Hidrlisis Total,
cual hay H20. Dextrinas en con una coloracin
mayor proporcin) pardoso
amarillento
translcido, color
caramelo

Resultados:

En este caso vamos a ver qu tipo de hidrolisis se forma ya sea unahidrolisis parcial que
como producto se forma glucosas en bajaproporcin ms presencia de maltosas
y dentinas, como productode hidrolisis negativa el almidn se encuentra intacto, pero
comoproducto de una hidrolisis total glucosas se van a dar en proporcinabundante
por que la degradacin ha sido completa el productofinal de sistema de hidrolisis cual
ser obviamente que la glucosas
 3) PROCEDIMIENTO

Materiales:

3 tubos de ensayo

Cocinilla

Con sta prueba se corrobora la Hidrlisis Parcial, de la Hidrlisis Negativa y de la

Hidrlisis Total
Observacin con la
TUBO N 7 TUBO N 8 TUBO N 9 Revelacin del
0,5 ml de 1 0,5 ml de 2 0,5 ml de 3 producto:
+ + +
2 ml Rvo. 2 ml Rvo. 2 ml Rvo.
Fehling. Fehling. Fehling.
Azul Marino pp. Rojo ladrillo pp. Rojo ladrillo
Intenso (muy poco pp.) (en mayor
cantidad)
Hidrlisis Hidrlisis Parcial Hidrlisis Total.
Negativa Poca glucosa, es Productos
No hay formacin decir poco azcar formados:
de pp porque no reductor libre Glucosas.
hay azcar
Reductor libre

Fin del los procesos y resultados visibles de los cambios fsicos de los procesos
(1,2,3,4,5,6,7,8,9 )
CONCLUSINES:
Se cumpli con el objetivo de la prctica slo con la observacin de la
Revelacin del producto final con la amilasa que aparentemente sala
Hidrlisis Parcial con el sustrato, pero con el Producto + Rvo. Fehling)
obtuvimos una hidrlisis Total.

Con Rvo. Fehling se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador

que el agua y el cido.

o Rvo. Fehling hay una oxidacin del Cu+2 (color azl) a Cu +1
(rojo)

Con stas pruebas se corrobora que la amilasa es el mejor catalizador

que el agua y el cido.

Fundamento:

Reaccin con Rvo. Fehling

- El Reactivo de Fehling, resulta al mezclar una solucin de CuSO4 con una

solucin alcalina de tartrato de sodio y potasio, formndose un complejo del in
Cu++ de color azul intenso, que oxida a los aldehidos, reducindose a Cu2O de
color rojo ladrillo.

- La reaccin de Fehling est basada en la accin reductora que tienen los

azucares sobre los iones cpricos en medio alcalino.

HC=O C=O
++ - -
+ 2 Cu + 5 OH O + Cu 2O + 3 H 2O
R
R

- Sustrato Problema: Solucin Salina de Almidn (Bien Diluda y Transparente):

Solucin Conservadora de Almidn.
- El Cloruro impide que el almidn se hidrolice con facilidad

Cintica Enzimtica

A 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160

1ml/amil 1ml 1/10 1ml 1/20 1ml 1/40 1ml 1/80
asa
+ + + + +
9ml/H2O 9ml/H2O 9ml/H2O 9ml/H2O 9ml/H2O
 Sacamos de a 1ml de cada tubo de la parte inicial para designar a
un nuevo tubo determinada concentracin de aquel tubo
B 1ml /10 1ml /20 1 m l/ 40 1ml / 80 1 ml /
160
1ml /10 1ml /20 1 m l/ 40 1ml / 80 1 ml /
160
+ + + + +
4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml
almidon almidon almidon almidon almidon
BM 38 C tomar el T C/10 comparando lahidrolisis

Encontramos que C/10m el primer tubo de la primera columna (1/10) reacciona

con mayor rapidez x ser ms concentrado

Vrrc T

Pasos 1er Tubo 2do Tubo 3er Tubo

1 1ml amilasa 1ml amilasa 1ml amilasa

+ + +

2 BM hirv x5m 4ml almidon BM de hielo x 5m

+ + +

3 4ml almidon Bm 38C X 15m 4ml almidon

4 BM37 C X10M BM de hielo X10M

Mayor Menor aceleracin
aceleracin de la de la Rx
Rx
COMPARAR HIDROLISIS

En el primer tubo es ms rpido la reaccin por el catalizador que se acelera

debido al aumento de temperatura ( a mayor temperatura habr una mayor
aceleracin)
La baja temperatura causa un desarrollo lento o nulo en la actividad enzimtica
La amilasa requiere una temperatura de 37c para realizar un optima actividad
enzimtica
RX PH
Pasos 1er Tubo 2do Tubo 3er Tubo
1 1ml amilasa 1ml amilasa 1ml amilasa
+ + +
2 1 gts HCl 10% 4 ml almidon 1gts NaoH 10%
+ +
3 4ml almidon 4ml almidon
4 Medio acido Medio base
BM 38 C/10m Comparamos la hidrolisis

La amilasa es un catalizador que degrada el almidn a glucosa para ser

absorbido
Tubo 1 La amilasa no degrado al almidn totalmente porque fue
desnaturalizada por el HCL por lo tanto se produjo una degradacin del
almidn parcial (hidrolisis parcial )
Tubo 2 el PH es ptimo y efectivo dndose una hidrolisis completa ya que la
amilasa acta a un pH 5 a 7 casi neutro y T|37c (color caramelo)
Tubo 3 no hay una desnaturalizacin que se observa al principio en la parte
superior del tubo pero luego de una agitacin se vuelve incoloro la RX debido
a:

Alidon + KI + NaoH almidon + KoH+ NaI (incoloro)