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VALIDACION DEL METODO BUTIROMETRICO DE GERBER POR

COMPARACION CON EL METODO DE REFERENCIA DE RSE


GOTTLIEB PARA LA DETERMINACION DE MATERIA GRASA EN
LECHE.

Manuel Pinto C., Erwin Carrasco R., Bernardo Fraser L., Carolina Barriga I.
Instituto de Ciencia y Tecnologa de los Alimentos, Facultad de Ciencias Agrarias,
Universidad Austral de Chile. Casilla 567. Valdivia. Chile. mpinto@uach.cl

ABSTRACT

Validity of Gerber butyrometric method compared with Rse Gottlieb method for
milk fat determination.

Key words: Validity Gerber, Rse Gottlieb, milk fat.

A validity methodology of the Gerber method through a comparison study to the Rose
Gottlieb reference method is presented.
The analysis of Gerber (G) and Rse Gottlieb (RG), in a total of 100 raw milk samples,
with a range of 1.80 and 5.50% (m/m) of fat, were carried out according to oificial FIL-
IDF 152 A: 1997 and FIL-IDF ID: 1996 rules respectively. The regression equation
found (RG = 0.9998 G + 0.0278) presented a gradient not significantly different to
1.000 (0.9846 < b < 1.0149) and an intercept not significantly differing from 0 (-0.0274
< a < 0.0830). The residual standard deviation was Sy,x = 0.0853 and the accuracy of
the method was therefore + 0.17g/100 g (+ 1.987 Sy,x) at present conditions. Gerber
method exactuess, expressed as repeatability, presented a repeatability standard
deviation of Sr= 0.0308 and a repeatability of r = 0.087 g/100 g, according to FIL-IDF
128: 1985; thus allowing to estimate both the method reproducibility (R = 2 r) and
confdence nter val, including the mean precisin and accuracy (random error and
systematic error). On the other hand, the analysis of media values indicated the
acceptance of the nule hypotesis, t0.05 = -0.1645 (P = 0.86) and a correlation coefficient
of r = 0.9972.
It is concluded that Gerber Method for milk, carried out according to FIL-IDF 152A:
1997 rule, with a milk volume of 10.77 ml presented acceptable validity parameters, in
lineal, precision and accuracy terms.

RESUMEN

Palabras Claves: Validacin Gerber, Rse Gottlieb, grasa lctea.

Se presenta una metodologa de validacin del mtodo de Gerber mediante un estudio


comparativo frente al mtodo de referencia de Rse-Gottlieb.
Los anlisis de Gerber (G) y Rse-Gottlieb (RG) en un total de 100 muestras de leche
cruda, con un rango entre 1,80 y 5,50%(m/m) de materia grasa, se realizaron segn las
normas oficiales FIL-IDF 152A: 1997 y FIL-IDF ID: 1996, respectivamente la ecuacin
de regresin obtenida (RG= 0,9998G + 0,0278), present una pendiente que no difiere
significativamente de 1,000 (0,9846 < b < 1,0149) y un intercepto que no difiere
significativamente de 0 (-0,0274 < a < 0,0830). La desviacin estndar residual fue S
=0,0853 y la exactitud del mtodo fue, por lo tanto, de0, 17g/100g. (1,987 Sy,x) en las
presentes condiciones. La precisin del mtodo de Gerber, expresada como
repetibilidad, present una desviacin estndar de repetibilidad Sr=0,0308 y una
repetibilidad de r=0,087g/ l00g, segn FIL-IDF 128:1985. Esto nos permite estimar la
reproducibilidad del mtodo (R=2r) y el intervalo de confianza, que incluye el error de
precisin y el error de exactitud de la media (error de azar y error sistemtico). Por otra
parte, el anlisis de los valores medios indic la aceptacin de la hiptesis nula, t0.05= -
0,1645 (P=0,86) y un coeficiente de correlacin r =0,9972.
Se concluye que el mtodo de Gerber, aplicado a leche, realizado en conformidad con la
norma FIL-IDF 152 A: 1997, con un volumen de leche de 10,77ml, present parmetros
de validacin aceptables, en trminos de linealidad, precisin y exactitud.

INTRODUCCION

El mtodo butiromtrico de Gerber, que fuera propuesto por el Dr. Nicolais Gerber en
1895, es un mtodo emprico que permite la determinacin del contenido de materia
grasa en leche, en gramos de grasa por 100 gramos de leche o 100 ml de leche
dependiendo de la capacidad de la pipeta usada, y tiene como referencia el mtodo
gravimetrico de Rse Gottlieb (Fleischmann, 1945).
La Organizacin Internacional de Estandarizacin, en su norma ISO N2446: 1976,
sobre la determinacin de materia grasa en leche por el mtodo de Gerber (mtodo de
rutina), recomienda realizar comparaciones peridicas de ste mtodo con el mtodo
gravimtrico de referencia de Rse Gottlieb, para asegurar su validacin. Lo anterior
adquiere relevancia especial en aquellos casos en que el mtodo de Gerber se utiliza
para calibrar equipos instrumentales para la determinacin de materia grasa en leche,
tales como Milko-Tester MKIII (Buxade y Bergmann, 1972) o Milko-Scan (Kernof et
al., 1982, ABD et al., 1986).
Estudios comparativos tendientes a la validacin del mtodo de Gerber, con respecto al
mtodo de referencia de Rse Gottlieb, se presentan en Holanda (Radema y Mulder,
1951), Alemania (Schwarz, 1954), Inglaterra (Crocker et al., 1955), Africa del Sur
(Laboschagne y Vogt, 1960), y Yugoslavia (Slanovec et al., 1971), entre otros. Se
proponen mecanismos de ajustes para deducir el volumen ptimo de leche a utilizar en
la determinacin de materia grasa por el mtodo de Gerber (Brouwer, 1965).
En un trabajo anterior de Pinto et al., en 1973, qued demostrado que los valores de
materia grasa expresados en % (m/m), encontrados por el mtodo de Gerber utilizando
un volumen de leche de 11,00 ml, da valores superiores con respecto al mtodo de
referencia de Rse Gottlieb, encontrndose diferencias significativas, para valores de
materia grasa promedio en el pas. Fue necesario realizar un proceso de validacin del
mtodo y se encontr que el volumen ptimo de leche a utilizar en el mtodo de Gerber
es de 10,77 ml ( volumen vertido en agua destilada a 20C), con el cual se logra una
perfecta concordancia con los valores obtenidos por el mtodo de referencia ( Pinto et
al., 1976). El estudio mencionado contribuy en la elaboracin de la Norma Chilena
Oficial NCh N1016/Of.79. Determinacin del contenido de materia grasa : Mtodo de
Gerber (Instituto Nacional de Normalizacin, 1979).
Dada la recomendacin de la norma ISO N2446 mencionada anteriormente y
considerando que el mtodo de referencia FIL-IDF 1 A: 1969 ha incorporado cambios
importantes, en el tiempo transcurrido hasta su versin actual, FIL-DF ID: 1996, es
altamente recomendable revisar el mtodo de Gerber.
El presente trabajo tiene por objetivo realizar los estudios de validacin del mtodo de
Gerber, en trminos de linealidad, precisin y exactitud con respecto al mtodo de
referencia de Rse Gottlieb.
MATERIALES Y METODOS

Todos los reactivos utilizados son de grado analtico. Las metodologas de anlisis son
las estipuladas en las normas estndares para Gerber y Rse Gottlieb, FIL-IDF 152A:
1997 y FIL- IDF ID: 1996 respectivamente.
La pipeta para leche (10,77 0,02) y los butirmetros (O- 6%), fueron calibrados
previamente, segn las normas internacionales correspondientes ISO N2446: 1976 y
FIL- IDF 105: 1981. Se realiz previamente un estudio acerca de la robustez del mtodo
de Gerber, centrando la atencin en el material volumtrico utilizado, especialmente
pipetas para leche y butirmetros (Ros, 1999).
Se prepararon 100 muestras de leche con un rango de concentracin en materia grasa de
1,80 a 5,50 % (m/m), a partir de adiciones de crema a leche descremada (ISO N2446:
1976), con incrementos de 0,5 %, rango de contenido graso en leche de productores de
las regiones VIII, IX, y X (Pinto et al., 1998). Las muestras se preservaron con
dicromato de potasio (1mg/ml de leche) y fueron mantenidas en refrigeracin hasta el
inicio de los anlisis; luego fueron analizadas en triplicado por el mtodo de Gerber y en
duplicado por el mtodo de Rse Gottlieb.
El estudio de validacin del mtodo de Gerber, con respecto al mtodo de referencia de
Rse Gottlieb, incluye los anlisis estadsticos relacionados con la precisin
(repetibilidad - error de azar; reproducibilidad), exactitud de la media -error sistemtico;
ecuacin de regresin lineal - pendiente, intercepto. La metodologa usada para estas
determinaciones son las recomendadas por la Organizacin Internacional de
Estandarizacin (International Standard ISO N5725:1986) y la Federacin
Internacional de Lechera (FIL-IDF N128: 1985) mantenidas en refrigeracin hasta el
inicio de los anlisis; luego fueron analizadas en triplicado por el mtodo de Gerber y en
duplicado por el mtodo de Rse Gottlieb.
El estudio de validacin del mtodo de Gerber, con respecto al mtodo de referencia de
Rse Gottlieb, incluye los anlisis estadsticos relacionados con la precisin
(repetibilidad - error de azar; reproducibilidad), exactitud de la media -error sistemtico;
ecuacin de regresin lineal - pendiente, intercepto. La metodologa usada para estas
determinaciones son las recomendadas por la Organizacin Internacional de
Estandarizacin (International Standard ISO N5725:1986) y la Federacin
Internacional de Lechera (FIL-IDF N128: 1985)

RESULTADOS Y DISCUSION

Los valores promedio y los parmetros estadsticos bsicos de comparacin entre los
mtodos de Gerber y Rse Gottlieb se presentan en el Cuadro 1. Cabe destacar que a
nivel de valores promedios para el total de muestras analizadas (n=100), no se encontr
diferencia significativa (P<0,05), situacin esperable dado que dicho valor Gerber
(3,5%m/m) est dentro del intervalo 3,26-4,25 %, que no presenta porcentaje de
correccin con respecto al mtodo de referencia, segn lo establecido en la Norma
Chilena Oficial NCh N 1016/1 (Instituto Nacional de Normalizacin, 1998). Otro valor
que cabe destacar es el coeficiente de variacin o desviacin estndar relativa (DER),
con los valores de 0,6 y 0,21 para Gerber y Rse Gottlieb, respectivamente. Al respecto,
se debe sealar que el mtodo de referencia presenta un valor de repetibilidad del 0,02%
en cambio en el mtodo de rutina se acepta un valor de 0,087%.

Cuadro 1: Parmetros estadsticos bsicos en la determinacin de materia grasa en leche de vaca


por los mtodos de Gerber y Rse Gottlieb.
Table 1: Basic statistical parameters in milk fat determination by Gerber and Rse Gottlieb
mehtods.

Anlisis estadstico Resultado segn mtodo de determinacin

(%)
Gerber Rse-Gottlieb
n = 100 n = 100
1) Promedio Error estndar 3,501 0,112 3,528 0,113*
2) Rango 4,00 4,01
3) DE 1,129 1,132
4) Coeficiente variacin
0,60 0,21
(DER)
5) Desviacin promedio 0,95 0,96
* Diferencia no significativa (P < 0,05)

La Federacin Internacional de Lechera (FIL-IDF 128: 1985) establece la precisin de


un resultado en trminos de repetibilidad y reproducibilidad, los cuales define de la
siguiente manera:
Repetibilidad (r). Es el grado de acercamiento entre resultados de anlisis
independientes, obtenidos por un mismo mtodo, sobre una misma muestra, en un
mismo laboratorio y analista, usando el mismo equipo y dentro de un corto intervalo de
tiempo. En terminos estadsticos se define como r = (2 2 )Sr = 2,8Sr.
Reproducibilidad. Es el grado de acercamiento entre resultados de anlisis, obtenidos
por un mismo mtodo, sobre la misma muestra en diferentes laboratorios y analistas,
usando diferentes equipos. En trminos estadsticos se define como R = 2,8SR =
2,8(2Sr).
La precisin del mtodo de Gerber, expresada como repetibilidad, present una
desviacin estndar Sr = 0,0308 y una repetibilidad r = 0,087 g/100 g de leche, lo cual
permite estimar la reproducibilidad del mtodo (R = 2r), resultando igual a 0,174 g/ l00
g de leche.
Luego un intervalo de confianza de 0,202, para la diferencia entre muestras
individuales, indica que si la diferencia entre los duplicados de valores dados por el
mtodo de Rse Gottlieb y el mtodo de Gerber estn dentro del intervalo mencionado
se puede suponer, con un 95% de nivel de confianza, que el mtodo de Gerber se
encuentra correctamente calibrado y que la composicin de las muestras son normales.
En la determinacin del intervalo de confianza intervienen variables como la varianza
de repetibilidad, varianza de reproducibilidad y desviacin estndar de los residuos,
variables relacionadas estrechamente con la exactitud del mtodo.(PINTO et al., 1998;
FIL-IDF 128:1985).
La frecuencia de las diferencias existentes entre los valores promedios, segn el mtodo
de Gerber, con respecto al mtodo de Rse Gottlieb se presenta en el Cuadro 2. Se
puede observar que la mayor frecuencia se present en el intervalo -0,010 a 0,065 con
un 40% de los valores dentro de dichos lmites. Por otro lado, es posible observar en la
Figura 1, que la mxima diferencia entre ambos mtodos, para muestras individuales, es
similar al intervalo de confianza calculado ( 0,202), con un 95% de confianza.
Cuadro 2: Frecuencia de las diferencias entre los mtodos de Gerber y Rse Gottlieb.
Table 2: Gerber and Rse Gottlieb frequency differences.
Clase Lmite Lmite Punto Frecuencia Frecuencia Frecuencia
inferior superior medio relativa acumulada
- -0,310 0 0,000 0
1 -0,310 -0,235 -0,2725 2 0,020 2
2 -0,235 -0,160 -0,1975 7 0,070 9
3 -0,160 -0,085 -0,1225 6 0,060 15
4 -0,085 -0,010 -0,0475 34 0,340 49
5 0,010 0,065 0,0275 40 0,400 89
6 0,065 0,140 0,1025 8 0,080 97
7 0,140 0,215 0,1775 3 0,030 100
8 0,215 0,290 0,2525 0 0,000 100
0,290 + 0 0,000 100

Figura 1: Histograma de frecuencia de las diferencias entre los mtodos de Gerber y Rse Gottlieb
en la determinacin de materia grasa en leche de vaca.
Figure 1: Frequency chart of difference between Gerber and Rse Gottlieb methods in the
determination of milk fat content.

Una alternativa confiable para estudiar el comportamiento entre los mtodos de Gerber
y Rse Gottlieb es la regresin lineal como modelo matemtico. Alternativa utilizada
por varios autores, entre los cuales cabe destacar a Radema y Mulder (1948), en
Holanda (RG = 0,9615 G + 0,07), recomendando una pipeta de 10,77 ml para Gerber;
Crocker et al., (1955) en Inglaterra (RG = 0,9652 G + 0,097 ), sugiriendo un volumen
de pipeta de 10,94 ml en remplazo de la anterior de 11,04. En el presente trabajo se
dedujo la siguiente ecuacin de regresin lineal RG = 0,9998 G + 0,0278, ulizando una
pipeta para Gerber de 10,77 ml, en conformidad con la Norma Chilena Oficial NCh
N1016/98 (Instituto Nacional de Normalizacin, 1998).
Un estudio de las cualidades de la ecuacin de regresin lineal obtenida se presenta en
el Cuadro 3. Cuando un mtodo de rutina (Gerber) est debidamente ajustado al mtodo
de referencia (Rse Gottlieb), la desviacin estndar de las diferencias es
aproximadamente igual a la desviacin estndar residual (S2x-y = S2y,x)(Grappin,
1984). En el caso presente la desviacin estndar de las diferencias encontradas fue Sx-
y = 0,0852, muy similar a la desviacin estndar residual Sy,x = 0,0853 (exactitud). Por
otro lado el alto grado de asociacin entre los mtodos est reflejado por el coeficiente
de correlacin obtenido (r = 0,9972).
La Figura 2 explica en forma grfica el comportamiento lineal de los resultados de
Gerber y de referencia. Se observa en el comportamiento de los residuales, en relacin a
la lnea de regresin, una dispersin homognea incluso en los valores extremos de la
curva (exactitud).
La ecuacin de regresin obtenida (RG = 0,9998 G + 0,0278) fue analizada segn la
norma estndar FIL-IDF 128: 1985. Se encontr que su pendiente no difiere
significativamente de 1,000 ( 0,9846 b 1,0149) y el intercepto no difiere
significativamente de cero ( 0,0274 a 0,0830). Conocida la desviacin estndar
residual (Sy,x = 0,0853), la exactitud del mtodo es, por tanto, de 0,17 g/l00g ( 1,987
x Sy,x) en las presentes condiciones. Por otro lado, la precisin del mtodo present una
desviacin estndar de repetibilidad de Sr = 0,0308 y una repetibilidad de r = 0,087
g/100 g. Esto nos permite estimar la reproducibilidad del mtodo (R = 2r), R = 0,174 g/
l00g.
Se concluye que el mtodo de Gerber, aplicado a leche, realizado en conformidad con la
norma FIL-IDF 152A: 1997 la cual se corresponde con la Norma Chilena Oficial NCh
N1016/Of 98), realizado con la pipeta para leche de 10,77 0,02 ml (volumen vertido
en agua destilada a 20C), presenta parmetros de validacin aceptables, en trminos de
linealidad, precisin y exactitud.

Cuadro3: Tabla resumen anlisis de regresin.


Table 3: Summary table lineal regresion analysis

Modelo lineal Y = a + bX
Ec. Regresin lineal RG =0,9998G + 0,0278
Coef. Correlacin de los mtodos (r) 0,9972
Coef. de Determinacin entre mtodos (R2) 0,9944
D.E. de Estimacin (Residual) SY,X 0,0853
D.E. de las diferencias SX-Y 0,0852
Figura 2: Regresin lineal del mtodo de referencia (Rse Gottlieb) v/s mtodo de Gerber en la
determinacin de materia grasa en leche de vaca.
Figure 2: Reference method of lineal regresion (Rse Gottlieb) v/s Gerber method in determination
of milk fat.

AGRADECIMIENTOS

Financiado por la Universidad Austral de Chile, proyecto DID-UACH N 199940 y


FONDECYT N 1961046

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2005 1973 Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Austral de Chile

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Valdivia-Chile