Miriam Turiel Miranda

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5.1: Sinapsis neuromuscular

1. Morfologa funcional de la SNM
La sinapsis es la entidad fisiolgica que permite el paso de corriente de una clula a
otra. Su descubrimiento hizo merecedor del Premio Nobel a Santiago Ramn y Cajal, quien es
considerado el mejor neurocientfico de todo los tiempos. Ramn y Cajal observ que las
neuronas no eran una red celular continua como afirmaba Golgi sino clulas individualizadas
separadas y comunicadas por unos espacios a los que denomin sinapsis.

En el organismo existen dos tipos de sinapsis:

Sinapsis neuro-neuronal: conexin entre una neurona y otra

Sinapsis neuro-muscular: conexin neurona-msculo. Estas son las que se estudian en
este tema.

Las fibras de msculo esqueltico estn inervadas por fibras nerviosas mielinizadas
grandes que se originan en las motoneuronas grandes de las astas anteriores de la mdula
espinal. Todas las fibras nerviosas, despus de entrar en el vientre muscular, normalmente se
ramifican y estimulan entre tres y varios cientos de fibras musculares esquelticas. La
proporcin siempre es 1:1, una ramificacin final del axn para una fibra. El conjunto de fibras
inervadas por el mismo axn se llama unidad motora.

Anatoma fisiolgica de la unin neuromuscular: la placa motora terminal

Terminaciones nerviosas

Las fibras nerviosas forman un complejo de terminaciones nerviosas ramificadas que

se invaginan en la superficie de la fibra muscular pero que permanecen fuera de la membrana
plasmtica de la misma. La membrana invaginada se denomina gotiera sinptica o valle
sinptico. Las clulas de Schwann rodean al axn y lo aslan de los lquidos circundantes hasta
que este penetra en la gotiera sinptica.

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La terminacin axnica se denomina botn presinptico. En este botn podemos
encontrar las siguientes estructuras:

I. Canales de sodio, potasio y calcio voltaje dependientes. De estos tres quiz los ms
caractersticos sean los CCaVD.
II. Bombas y protenas para el transporte activo y secundario: SPA, CA y CNX.
III. Mitocondrias para generar la energa que consumen las bombas.
IV. Aproximadamente 300.000 vesculas que contienen a los neurotransmisores.

Vesculas presinpticas

La vesculas presinpticas tienen un dimetro de 50 nm. En su membrana estn

insertas tres grupos de protenas indispensables para que las vesculas puedan realizar su
funcin.

a. Bomba protn ATPasa: introduce protones en la vescula en contra de gradiente.

Aumenta el PH del interior de la misma. Tambin se puede encontrar en otros
orgnulos citoslicos como el aparato de Golgi y los lisosomas.

b. Contransportadores. Aprovechan la salida de H+ a favor de gradiente para introducir

neurotransmisores en el interior de la vescula.

c. Protenas de sinapsis encargadas de mediar la exocitosis de los neurotransmisores.

Espacio sinptico

Las vesculas no liberan su contenido sobre el msculo directamente, sino en unna

cavidad virtual denominada espacio sinptico o lmina basal envolvente (LBE). Tiene un
dimetro de 50 m y est ocupado por fibras de colgeno y polisacridos. Entre las fibras de
colgeno se encuentra una enzima, la acetil-colin esterasa, de origen muscular. La funcin de
esta enzima es hidrolizar la acetil-colina antes de que esta llegue a actuar.

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Hendiduras subneurales

En el fondo de la gotiera sinptica hay

numerosos pliegues ms pequeos
denominados hendiduras subneurales, que
aumentan mucho el rea superficial en la que
puede actuar el transmisor sinptico. En
estos pliegues se encuentra el receptor
nicotnico colinrgico para la acetil-colin. Se
cree que hay 20.000/m2.

Este receptor est formado por cinco

subunidades distintas: 2 (subunidades de
unin a AcCo), , y . Estas tres ltimas
tienen una funcin de sostn estrico.

Este receptor admite tres conformaciones distintas.

a. No ocupado y cerrado
b. Ocupado y abierto
c. Ocupado y cerrado

Es importante el hecho de
que para que se cierre el canal no
es necesario que se libere la AcCo.
Este se cierra espontneamente al
cabo de 1 ms y posteriormente, la
acetil-colina se disocia.

Estos canales se bloquean por curare y por bungarotoxina.

2. Potencial de placa terminal (PPT)

El potencial de placa terminal es el Elocal despolarizante que se produce en la PT
cuando la AcCo de las vesculas se libera al espacio sinptico y se une al canal nicotncios
provocando su apertura. Cuando el canal est abierto se igualan las conductancias del sodio y
del potasio de manera que el potencial de membrana en esta zona alcanza los -10, -12 mV.

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Valor del PPT

Es posible conocer este valor mediante estudios experimentales, ecuaciones o

mediante una tcnica conjugada voltage clamp patch clamp.

I. Estudios experimentales

Cuando se iniciaron estas invesitgaciones era muy difcil acceder a la placa terminal por
eso se intentaba descubrir el PPT a partir de los cambios de voltaje que experimentaba la fibra
muscular cuando se le inyectaba una corriente. A estas clulas se les administraba una
concentracin cada vez mayor de curare para observar como cambiaban los potenciales de
accin.

Ms tarde ya fue posible estudiar directamente las placas terminales gracias a la

sinapsis del ganglio estrellado de calamar gigante. Fue necesario administrar colagenasa para
que hidrolizase el colgeno de la LBE. Uan vez hecho esto, se inyect un electrodo en la PT y se
aadi acetil colina.

II. Ecuaciones

Una forma ms sencilla de averiguar el potencial en la PT es a travs de las ecuaciones

siguientes:

Ley de Ohm: =

+ = + ( + ) y + = + ( + )

Cuando se abre el canal las + = + e + = + luego

+ + +
( + ) = ( + ) = = 10
2

Ecuacin de Goldman

+
+ [ + ] + + [+ ] [ + ] + + [+ ]

= 61 log = 61 log
+ [ + ] + + [+ ] +
[ ] + + [+ ]
+

+ 51
En la placa terminal con el canal abierto +
= 100
0 51 = 15

Ecuacin de g en paralelo

+ + + (+ + )
= = 12
1 + (+ + )

En la placa terminal con el canal abierto ( + + ) = 1

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III. Patch clamp + voltage clamp

Con la punta de una pipeta que tenga el dimetro de 1 m, cojo un receptor nicotnico
colinrgico y lo sumerjo en una solucin semejante al LIC. La solucin que se encuentra dentro
de la pipeta simula al LEC. Adems intriduzco en la solucin LIC dos electrodos, uno de
corriente y otro unido a un voltmetro para medir el Em en cada caso.

En primer lugar, con el electrodo de corriente introduzco cargas positivas o negativas a

todo el LIC de manera que se despolariza o hiperpolariza respectivamente.

A continuacin, aado acetil colina a la pipeta de maera que se abre el canal durante 1
ms. Se supone que entonces saldr K+ o entrar Na+ dependidiendo del potencial que se haya
fijado.

Para comprobar si esto es as y la conocer la cantidad y el tipo iones que atraviesa el

canal para cada potencial se inyecta una corriente de electrones de signo negativo que
antagonice a la corriente inica. Esto es posible gracias a que, en cuanto el electrodo de voltaje
detecta unn mnimo cambio da la ordn al de corriente para que acte.

As pues lo que se observa es.

Em clampado = + 40 mV
FEMTN del K+ = +40 (-95) = 135
FEMTN del Na+ = +40 (+70) = +30
Balance neto: salida de potasio. Se inyecta una corriente
positiva.

Em clampado = - 15 mV
FEMTN del K+ = -15 (-95) = +80
FEMTN del Na+ = -15 (+70) = -85
Balance neto: misma salida de potasio que de sodio. No se
inyecta ninguna corriente.

Em clampado= -40 Mv
FEMTN del K+ = -40 (-95)= +55 mV
FEMTN del Na+= -40 (+70) = -110 Mv
Balance neto: entrada de sodio. Se inyecta una corriente negativa

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Corrientes de placa terminal

Existen tres tipos de corrientes de placa terminal aunque todas ellas estn muy
relacionadas.

I. Corriente de un solo canal

Gracias a la tcnica del patch clamp se pudo saber adems cunto vala la corriente
electrotnica generada al abrir un canal. En 1 ms se genera una corriente media de 2 a 3 pA
(picoamperios = 10-12).

Este dato permiti averiguar la conductancia del canal:

2 1012
= = = 30
[80 (15)] 103

II. Corriente de una sola vescula

Una vescula contiene 8.000 10.000 molculas de AcCo. El 50% de estas es hidrolizado
por la acetil-colina esterasa de LBE. Luego a la placa terminal llegan 4.000-5.000 molculas. En
la placa terminal hay en torno a 2000 receptores por lo que la corriente generada por la
liberacin de una vescula espontnea es 2000 veces mayor que la generada por un canal

= 21012 2000 = 4109 = 4

III. Corriente de PT producida por un solo Ea

Un Ea produce la liberacin de aproximadamente 100 200 vesculas. As pues se

liberan (200 10.000 ) = 2.000.000 . El 80% de estas es
hidrolizado por la AC de la LBE (dinmica de Michaelis-Menten), es decir, solo sobrevive el
20%. Esto es igual a 400.000 Ac. Co que activan 200.000 receptores. Por tanto, cabe esperar
que la Ea sea 100 veces mayor al generado por una vescula.

= 4 100 = 400

Finalmente, la corriente total de la placa terminal ser igual a

= ( )

n = nmero total de receptores nicotnicos

P= probabilidad que determina el nmero de canales abiertos

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3. Sntesis, almacenamiento y liberacin

de acetilcolina.
Sntesis de acetilcolina
La acetilcolina es sintetizada en el citoplasma neuronal a partir de colina y
acetilcoenzima A por la enzima colin-acetiltransferasa (enzima limitante de la sntesis). Una vez
sintetizada, la acetilcolina se almacena en alta concentracin en vesculas de la terminacin
nerviosa.

Almacenamiento en vesculas

Liberacin de vesculas
1. Liberacin espontnea (sin potencial de accin presinptico)

Causas:

Aumento de la concentracin de magnesio o de manganeso

Hiperpotasemia
Alteraciones del potencial de membrana (-80 mV -60 mV)

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Lo que ocurre es que se generan potenciales de membrana miniatura. Comparten la
caracterstica de que unos son mltiplos de otros. Es decir, si se libera una vescula se genera
un potencial de n mV y si se liberan dos vesculas, se genera un potencial de 2n mV. Esto se
debe que con cada vescula se liberan unas cantidades concretas de acetilcolina.

2. Liberacin por efecto de un potencial de accin

Cuando un potencial de accin llega a la terminacin nerviosa, abre muchos canales de

calcio en la membrana de la terminacin nerviosa porque esta terminacin tiene muchos
canales de calcio activados por voltaje. En consecuencia, la concentracin de iones calcio en el
interior de la membrana terminal aumenta aproximadamente 100 veces, lo que a su vez
aumenta la velocidad de fusin de las vesculas de acetilcolina con la membrana terminal
aproximadamente 10.000 veces. Esta fusin hace que muchas de las vesculas rompan,
permitiendo la exocitosis de la acetilcolina hacia el espacio sinptico. Con cada potencial de
accin habitualmente se produce la lisis de 200 vesculas. Posteriormente, despus de algunos
milisegundos, la acetilcolina es escindida por la acetilcolinesterasa en ion acetato y colina. La
colina se reabsorbe activamente en la terminacin neural para ser reutilizada y sintetizar de
nuevo acetilcolina.

4. Funcin del calcio en la SNM.

La nica funcin del Ea presinptico es activar los CCaVD del botn presinptico y
posibilitar la entrada de Ca++ al LIC de ese botn

4.1 Experimentos del calcio de Katz y Miledi

Examen

Estos investigadores estudiaron la actividad elctrica en la sinapsis neuromuscular

gigante del calamar.

1. Si no hay calcio, no hay sinapsis

Al introducir la clula en una solucin sin calcio, no se generan potenciales de placa terminal.

2. La amplitud del potencial de placa terminal (y por tanto de la liberacin de acetilcolina) est
en funcin de la intensidad del Ea.

3. Papel del sodio en la sinapsis

Estos investigadores se preguntaron si era preciso que entrara Na+ en botn

presinptico para que ocurriera el PPT. Para resolver esta duda introdujeron una la SNM en
una solucin con TTX (bloquea la entrada de Na+) y TEA (bloquea la salida de K+), es decir,

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anularon la corriente inica. A continuacin, introdujeron un pulso de corriente aninica1
produciendo as una despolarizacin de la membrana y registrando un potencial de accin.

Conclusin: En la sinapsis, lo importante no es tanto que entre entre sodio, si no que entre
cargas positivas que despolaricen la membrana. El ion sodio no est implicado en la sinapsis.

4. Funcin fisiolgica del Ea presinptico

Configuracin del experimento:

Se introducen tres electrodos en la SNM. El primero es un electrodo que inyecta pulsos

de corriente, el segundo es un electrodo de voltaje que registra los potenciales de membrana
en el botn presinptico y el tercero es una electrodo de voltaje que registra el potencial de
placa terminal.

Al inyectar pulsos de corriente despolarizante, se objetivan cambios del potencial de

membrana presinptico que empiezan y terminan suavemente. a corrientes inicas.
Caractersticas:

Comienzan al despolarizarse la membrana

No depende del sodio ni del potasio.
Si no hay calcio en la solucin circundante, no se genera PPT.
Los canales de calcio son voltaje dependientes. Se activan e inactivan suavemente a -
40 mV.

Por tanto, la nica funcin del Ea presinptico consisnte en aumentar la conductancia

de los canales de calcio entrada de calcio migracin de vesculas exocitosis
generacin de un potencial de placa terminal de intensidad proporcional.

4.2 Mecanismos por los que el calcio produce la exocitosis

de vesculas de acetilcolina
En zona no activa (en el centro del botn presinptico)

El calcio se una a la apocalciomodulina, sensor del calcio en esta va. La calciomodulina

es capaz de activar la PK-II (protein-kinasa), la cual fosforila micotbulos de sinapsina que
forman parte del citoesqueleto. Como consecuencia, se produce la desinsercin de vesculas y
la migracin a la zona activa

1
Quita electrones de los proteinatos intracelulares aumento la cantidad de cargas positivas no
compensadas.

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En zona activa (prxima a la membrana)

4.3 Endocitosis de vesculas. Reciclado vesicular

El nmero de vesculas disponibles en la terminacin nerviosa es suficiente para
permitir la transmisin de slo algunos miles de impulsos desde el nervio hacia el msculo. Por
tanto, para la funcin continuada de la unin neuromuscular se deben volver a formar
rpidamente nuevas vesculas.

2 mecanismos:

Mecanismo lento: endocitosis de vesculas recubiertas de clatrina

Mecanismo rpido: modelo por contacto reversible. Kiss and run

Mecanismo lento: endocitosis por vesculas recubiertas de clatrinas

En un plazo de algunos segundos, despus de que haya terminado cada uno de los
potenciales, aparecen hendiduras revestidas en la membrana de la terminacin nerviosa,
producidas por las protenas contrctiles de la terminacin nerviosa, especialmente la protena
clatrina que est unida a la membrana en las zonas de las vesculas originales. En un plazo de
aproximadamente 60 s las protenas se contraen y hace que las hendiduras se rompan hacia el
interior de la membrana, formando de esta manera nuevas vesculas. En un plazo de alguno
segundos la acetilcolina es transportada hacia el interior de estas vesculas y ya estn
dispuestas para un nuevo ciclo de liberacin de acetilcolina.

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Mecanismo rpido: Modelo de contacto reversible. Kiss and run

Gracias al desarrollo de nuevas tcnicas electrofisiolgicas, en la actualidad es evidente

que el proceso de endocitosis a travs de vesculas recubiertas del clatrina no es el nico sino
que existe una va paralela mucho ms rpida de gran importancia funcional. Esta se va se
basa en un contacto reversible entre la vescula y la membrana del botn presinptico durante
un tiempo muy breve (50-100 ms). La vescula libera el neurotransmisor (kiss) y luego se retira
(run).

Este mecanismo presenta muchas ventajas para la clula:

No hay destructuracin del botn presinptico

Rapidez
Las vesculas pueden reutilizarse fcilmente.

5. Agentes relajantes musculares

Los agentes relajantes musculares se utilizan...

En casos de hipotona muscular: miastenia gravis

Como coadyuvantes en procesos anestsicos
Si se consigue una adecuada relajacin muscular, se necesitarn dosis ms
bajas de anestesia y con ello se consigue menor toxicidad, mejor control del proceso
anestsico y una recuperacin de la consciencia ms rpida.

Tipos

1. Neurotoxinas

La reina de las neurotoxinas es la toxina botulnica

Neurotoxina de estructura protena compuesta por 7 tipos de inmunologicos con

tropismo por los botones presinpticos.
Modo de accin: interfiere con el proceso de liberacin cuntica de la acetilcolina
o Las isoformas A y E bloquean la SNAP-25
o La isoforma F bloquea la SNB (sinaptobrevina)
Aplicaciones
o Tratamiento de la hipertona en casos de parlisis cerebral infantil.
o Cosmtica: relajante musculas que se inyecta por va subcutnea para quitar
las arrugas2.

Nota sobre el ttanos

El ttanos es una enfermedad que causa 1 milln de muertes al ao por fallo

respiratorio. Es responsable del 50% de la mortalidad infantil en pases no desarrollados.

2
Con el tiempo piede su efecto porque se desarrollan anticuerpos anti-toxina botulnica.

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La enfermedad est causada por la bacteria Clostridium tetani. Esta bacteria excreta
toxina botulnica despus de haber infectado el organismo a travs de heridas punzantes,
quemaduras o el cordn umbilical. La toxina es captada por las neuronas perifricas y
transportada retrgradamente hasta destruir la neuronas de Reslow (neuronas de inhibicin
presinptica). Esto es como quitar el freno. Se produce una hiperdescarga que ocasiona una
contraccin muscular demasiado intensa. La contraccin tetnica de los msculos respiratorios
ocasiona la muerte por fallo respiratorio.

2. Sustancias que disminuyen la sntesis de acetilcolina

Hemicolinio. Inhibe la captacin de colina

3. Sustancias que disminuyen la velocidad de propagacin del Ea

Anestsicos locales

4. Sustancias que disminuyen la liberacin de acetilcolina en la sinapsis.

Antagonistas del calcio.

5. Sustancias que compiten con el receptor de acetilcolina

Agentes relajantes musculares no despolarizantes3: curarina, tubocurarina...

6. Sustancias que tienen una accin anloga a la acetilcolina pero que no son hidrolizadas por
acetil-colinesterasa.

Agentes relajantes musculares despolarizantes: succinilcolina

7. Sustancias que retrasan la accin de la colinesterasa

Fisiostigmina, neostigmina.
Se emplean en casos de intoxicacin por curare (decurarizar) y en casos de
miastenia gravis.

3
No afectan al potencial de membrana

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