UREA-UV

Urea-UV
Urease -GLDH. Kinetic UV

Quantitative determination of urea

CALCULATIONS
IVD
( A ) Sample
x 50 (Standard conc.) = mg/dL urea in the sample
Store at 2-8C ( A ) S tan dard

PRINCIPLE OF THE METHOD 10 mg/L urea BUN divided by 0,466 = 21 mg/L urea = 0,36 mmol/L urea1.
Urea in the sample is hydrolized enzymatically into ammonia (NH3) and
carbon dioxide (CO2). Conversion factor: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
Ammonia ions formed react with -ketoglutarate in a reaction catalysed by QUALITY CONTROL
glutamate dehydrogenase (GLDH) with simultaneous oxidation of NADH to Control sera are recommended to monitor the performance of assay
NAD+:
procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
Urease
Urea + H2O + 2 H+ 2 NH3 + CO2 1002210).
GLDH If control values are found outside the defined range, check the instrument,
2 NH3 + - Ketoglutarate + NADH H2O + NAD+ + L-Glutamate reagents and calibrator for problems.
The decrease in concentration of NADH, is proportional to urea Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
concentration in the sample1. corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
CLINICAL SIGNIFICANCE REFERENCE VALUES1
Urea is the final result of the metabolism of proteins; it is formed in the liver Serum : 15- 45 mg/dL (2,49-7,49 mmol/L)
from its destruction. Urine : 20 - 35 gr/24 h.
It can appear elevated urea in blood (uremia) in: diets with excess of
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
proteins, renal diseases, heart failure, gastrointestinal hemorrhage,
dehydration or renal obstruction1,4,5.
its own reference range.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should PERFORMANCE CHARACTERISTICS
integrate clinical and other laboratory data. Measuring range: From detection limit of 1,82 mg/dL to linearity limit of 500
REAGENTS mg/dL.
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2
R1 TRIS pH 7,8 80 mmol/L with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
Buffer -Ketoglutarate 6 mmol/L Precision:
Urease 3750 U/L
R2 Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
Glutamate dehydrogenase (GLDH) 6000 U/L
Enzymes Mean (mg/dL) 41,9 146 39,96 144
NADH 0,32 mmol/L SD 0,89 2,55 1,10 2,79
UREA CAL Urea aqueous primary standard 50 mg/dL CV (%) 2,13 1,74 2,76 1,93

PREPARATION Sensitivity: 1 mg/dL = 0,0016 A.

Working reagent (WR): Dissolve ( ) the contents of one vial R 2 Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
Enzymes into one bottle R 1 Buffer. systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
Cap and mix gently to dissolve contents. The results obtained using 50 samples were the following:
Stable: 6 weeks at 2-8C or 7 days at 15-25C. Correlation coefficient (r): 0,99.
Regression equation: y=0,99x + 0,01.
STORAGE AND STABILITY The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
All the components of the kit are stable until the expiration date on the
label when stored tightly closed at 2-8C, protected from light and INTERFERENCES
contaminations prevented during their use. It is recommended to use heparin as anticoagulant. Do not use ammonium
Do not use reagents over the expiration date. salts or fluoride1.
Signs of reagent deterioration: A list of drugs and other interfering substances with urea determination has
- Presence of particles and turbidity. been reported 2,3.
- Blank absorbance (A) at 340 nm < 1,00.
NOTES
ADDITIONAL EQUIPMENT 1. UREA CAL: Proceed carefully with this product because due its nature
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 340 nm. it can get contamined easily.
- Matched cuvettes 1,0 cm light path. 2. Glassware and distilled water must be free of ammonia and
- General laboratory equipment (Note 2). ammonium salts1.
3. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in
SAMPLES automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a
- Serum or heparinized plasma1: Do not use ammonium salts or serum Calibrator.
fluoride as anticoagulants. 4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation.
- Urine1: Dilute sample 1/50 with distilled water. Mix. Multiply results 5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
by 50 (dilution factor); Preserve urine samples at pH < 4. analyzers. Instructions for many of them are available on request.
Urea is stable at 2-8C for 5 days;
BIBLIOGRAPHY
PROCEDURE 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
1. Assay conditions: Louis. Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437and 418.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm light path 1995.
Temperature: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. 2001.
3. Pipette into a cuvette: 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Blank Standard Sample
WR (mL) 1,0 1,0 1,0 PACKAGING
Standard(Note 1,3,4) ( L) -- 10 -- Ref: 1001332 R1: 10 x 20 mL, R2: 10 20 mL, CAL: 1 x 5 mL
Cont.
Sample ( L) -- -- 10 Ref: 1001333 R1: 10 x 50 mL, R2: 10 50 mL, CAL: 1 x 5 mL

4. Mix and read the absorbance after 30 s (A1) and 90 s (A2).

5. Calculate: A= A1 A2 .

BSIS32-I 26/02/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com
 UREA-UV

Urea-UV
Ureasa -GLDH. Cintico UV

Determinacin cuantitativa de urea

CALCULOS
IVD
( A ) Muestra
x 50 (Conc. Patrn) = mg/dL de urea en la muestra
Conservar a 2-8C ( A ) Patrn

PRINCIPIO DEL METODO 10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1.
La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea, presente en la muestra, en
amonaco (NH3) y anhdrido carbnico (CO2).
Factor de conversin: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
El amonaco formado se incorporan al -cetoglutarato por accin de la CONTROL DE CALIDAD
glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidacin paralela de NADH a
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
NAD+ :
SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Ureasa
Urea + H2O + 2 H+ 2 NH3 + CO2 Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar
GLDH el instrumento, los reactivos y el calibrador.
2 NH3 + -Cetoglutarato + NADH H2O + NAD+ + L-Glutamato Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
La disminucin de la concentracin de NAD+ en el medio es proporcional correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
a la concentracin de urea de la muestra ensayada1. tolerancias.
SIGNIFICADO CLINICO VALORES DE REFERENCIA1
La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas; se forma en
Suero: de 15 a 45 mg/dL (2,49-7,49 mmol/L)
el hgado a partir de su destruccin.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso
Orina: de 20 a 35 gr/24 horas
de protenas, enfermedades renales, insuficiencia cardiaca, hemorragias Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
gstricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5. establezca sus propios valores de referencia.
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clnicos y de laboratorio.
CARACTERISTICAS DEL METODO
Rango de medida: Desde el limite de deteccin de 1,82 mg/dL hasta el
REACTIVOS limite de linealidad de 500 mg/dL.
R1 TRIS pH 7,8 80 mmol/L Si la concentracin es superior al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2
Tampn -Cetoglutarato 6 mmol/L con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Ureasa 3750 U/L Precisin:
R2
Glutamato deshidrogenasa (GLDH) 6000 U/L Intraserie (n=20) Interserie (n=20)
Enzimas
NADH 0,32 mmol/L Media (mg/dL) 41,9 146 39,96 144
UREA CAL Patrn primario acuoso de Urea 50 mg/dL SD 0,89 2,55 1,10 2,79
CV (%) 2,13 1,74 2,76 1,93
PREPARACION
Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( ) el contenido de un vial de R 2 Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = 0,0016 A.
Enzimas en un frasco de R 1 Tampn. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. sistemticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
Estabilidad: 6 semanas a 2-8C o 7 das a 15-25C. comerciales (x).
Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes:
CONSERVACION Y ESTABILIDAD Coeficiente de correlacin (r): 0,99.
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad Ecuacin de la recta de regresin: y= 0,99x + 0,01.
indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.
2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar reactivos
fuera de la fecha indicada. INTERFERENCIAS
Indicadores de deterioro de los reactivos: Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningn caso deben
- Presencia de partculas y turbidez. utilizarse sales de amonio o fluoruro1.
- Absorbancia (A) del Blanco a 340 nm < 1,00. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
MATERIAL ADICIONAL determinacin de la urea2,3
- Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 340 nm. NOTAS
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. 1. UREA CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable
- Equipamiento habitual de laboratorio (Nota 2).
tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con
MUESTRAS facilidad.
- Suero o plasma heparinizado1: No usar sales de amonio o fluoruro 2. El material empleado as como el agua destilada que se utilice deben
como anticoagulantes. estar libres de amoniaco y/o sus sales1.
- Orina1: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. 3. La calibracin con el Patrn acuoso puede dar lugar a errores
Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilucin); Evitar el sistemticos en mtodos automticos. En este caso, se recomienda
crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4. utilizar calibradores sricos.
La urea es estable 5 das a 2-8C. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin.
5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
PROCEDIMIENTO aplicacin de este reactivo en distintos analizadores.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 340 nm BIBLIOGRAFIA
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C / 15-25C Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418.
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
3. Pipetear en una cubeta:
4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Blanco Patrn Muestra 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
RT (mL) 1,0 1,0 1,0
PRESENTACION
Patrn (Nota1,3,4) (L) -- 10 --
Muestra (L) -- -- 10 Ref: 1001332 R1: 10 x 20 mL, R2: 10 20 mL, CAL: 1 x 5 mL
Ref: 1001333 Cont. R1: 10 x 50 mL, R2: 10 50 mL, CAL: 1 x 5 mL
4. Mezclar y leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
5. Calcular: A= A1 A2.

BSIS32-E 26/02/13 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com