UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Facultad de Ingeniera Ambiental

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN
PLACA PETRI .EXPRESION DE
RESULTADOS .CARACTERIZACION DE
COLONIAS .SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS DE
MEDIO SOLIDO A MEDIO LIQUIDO.

CUARTO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

CUETO YUPA JOSE VENTO 20151384G

ZANABRIA PISCO JAMIL ANGEL 20161379F

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTN MARTNEZ VILA

Lima, Per
06 de abril de 2017

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INDICE

Tabla de contenido
Resumen
..3
Introduccin 3
Objetivos 4
Marco terico 5
Procedimiento experimental7
Resultados 9
Discusion de resultados 10
Recomendacion 10
Fuentes de informacion 10
Anexos 11
Apendice 11

I. RESUMEN

En esta experiencia haremos el clculo estimado del recuento estndar en

placas Petri para las colonias que han crecido, as como tambin la
caracterizacin de las colonias es decir su morfologa (superficie, forma y
borde). Observamos tambin como el profesor sembr en las colonias

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escogidas de la placa Petri en caldo BHI, es decir aprendimos como se

siembra microorganismos de medio solido a un medio lquido, adems de
toma de muestras con hisopo estril de sarro dental y manos para ser
colocados en el caldo Nutritivo previo embebido con el agua peptonada.

Para el recuento estndar en placas seguiremos algunas reglas Y para

colonias las cuales sern usados para la caracterizacin y aislamiento ya que
sern inoculados en el caldo BHI para el crecimiento puro.

II. INTRODUCCIN

En esta unidad de trabajo se tratan de un conjunto de aspectos previos al

anlisis microbiolgico en s. Nos referimos a las tcnicas de seleccin, toma y
preparacin de las muestras, as como a su transporte y conservacin. La
importancia de estas tcnicas no debe ser subestimada, pues un defecto en
cualquiera de ellas puede invalidar los resultados del anlisis microbiolgico.
Dentro del proceso analtico, la influencia del muestreo es la ms crucial, ya que
de nada sirve un anlisis riguroso de la muestra, si esta no representa para nada
al sistema que se quiere medir. Por ejemplo, es obvio que si se quiere analizar el
contenido de un recipiente, se debe de agitar el mismo antes de tomar la
muestra, ya que de no hacerlo, parte del contenido del mismo puede haber
sedimentado. Si lo que se busca se encuentra sobre todo en esa fraccin, el
resultado del anlisis, por preciso y exacto que fuera, informar sobre una
cantidad muy inferior.
Adems para el caso de la microbiologa, se da la circunstancia de que es
relativamente fcil que el proceso de muestreo contamine la muestra (si los
recipientes, utensilios no son estriles) aportndole microorganismos que no
estaban presentes. Tambin puede ocurrir que el proceso de muestreo favorezca
el crecimiento de un microorganismo frente a otros.
Por ejemplo, para realizar un recuento de bacterias en el agua corriente hay que
dejar el grifo abierto durante un tiempo largo antes de tomar la muestra. Si se
toma la muestra nada ms abrir el grifo y este lleva varios das sin abrirse, el
agua del ltimo tramo de caera llevar estancada all el tiempo suficiente para

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que pueda haber habido crecimiento bacteriano. Por lo tanto, la muestra

contendr muchas ms bacterias que el agua corriente de la red general y los
resultados del anlisis no sern ciertos para el agua corriente.

III. OBJETIVOS
Determinar la carga microbiana para evaluar su calidad
higinico sanitaria
Realiza la caracterizacin de colonias.
Aprender la tcnica de siembra de los microorganismos de
un medio solido lquido utilizando un asa de siembra.
Observar el comportamiento de las bacterias en medio
lquido.

IV. MARCO TERICO

Recuento de microorganismos

- Se trata de conocer el nmero total de microorganismos

presentes en el alimento. Este nmero no guarda relacin con
el de microorganismos patgenos por lo que no puede usarse
como ndice de su presencia y slo debe considerarse un
indicador de las caractersticas higinicas generales del
alimento.

- Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado

(medio rico, medio limitado en nutrientes para medida de la
flora no lctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los

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microorganismos analizados sern miembros de poblaciones

diferentes. En general se investiga la presencia de
microorganismos aerobios o Aero tolerantes (anaerobios
facultativos); aunque, en ciertas situaciones (alimentos
envasados al vaco), puede ser de inters hacer recuentos de
anaerobios totales.

- Se han desarrollado tcnicas que hacen posible la

automatizacin del proceso.

- Hay cuatro tcnicas biolgicas bsicas tcnicas de recuento

de viables:.

a Contaje en Placa Standard (Standard Plate Count).

b Determinacin del nmero ms probable.
c Mtodos basados en la reduccin de colorantes por
viables.
d Contaje microscpico directo.

1.Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo de una muestra

de volumen conocido del alimento que se analiza. El resultado
es funcin de una serie de factores como son el mtodo de
muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las
caractersticas del medio de cultivo. Los cultivos pueden
hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay que
considerar que los cultivos en masa son letales para la flora
psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el
plaqueo puede hacerse en una placa normal o por medio de
un plaqueador en espiral que va depositando concentraciones
progresivamente ms diludas de la muestra.

2 Filtros de membrana: utilizados cuando el nmero de

bacterias es bajo. Son filtros con un poro de 0,45 mm que
retienen las bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca el
filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado. La
muestra puede haber sido procesada para epifluorescencia
previamente, lo que facilita el recuento (la epifluorescencia se
puede provocar con naranja de acridina que tie
especficamente los cidos nucleicos).

3.Microcolonias en DEFT: DEFT son las iniciales en ingls

de Direct Epifluorescence Filter Technique (tcnica
deepifluorescencia directa en filtro). En esta tcnica las
bacterias se filtran para retenerlas en una membrana
apropiada que posteriormente se trata con un agente
fluorescente (como la naranja de acridina) para teir las
clulas bacterianas (se somete el filtrado a un tratamiento
previo con detergentes para destruir las clulas somticas). La
deteccin de los microorganismos ha de hacerse mediante

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microscopa de fluorescencia o por cualquier otro mtodo de

medida de la epifluorescencia. En ciertos casos, las
membranas se incuban para producir colonias que son ms
fcilmente dtectables.

4.Contaje de microcolonias al microscopio: Se aade un

pequeo volumen de agar-cultivo a un porta y se incuba para
seguir la formacin de microcolonias al microscopio.

5.Gotitas de agar: Se hacen diluciones de la muestra

(solucin madre) y se depositan gotitas de 10 ml en una placa
Petri (gotitas de cultivo + agar). Se examina el crecimiento de
las colonias en las gotitas tras la incubacin.

6.Films secos (Petrifilm): Son pelculas deshidratadas de

medios de cultivos generales o selectivos en las que se
deposita 1 ml de la muestra que rehidrata el medio. Tras la
incubacin se hace el recuento.

7.Mtodo del nmero ms probable: Basado en series de

diluciones y clculo estadstico del nmero de bacterias
presentes en las diluciones ms altas. Se puede hacer con 3
5 tubos. El mtodo es popular aunque poco excto.

8.Mtodos basados en la reduccin de colorantes:

Usando azul de metileno o resazurina. Colorantes reducidos
por las bacterias; al reducirse cambian de color y esto es
medible. Usado en medios lquidos (lcteos).

9.Tubos rodantes: son tubos hermticamente cerrados en

los que hacindolos girar se forma una fina capa de agua.
Utiles para recuento de anaerobios.

10.Contaje microscpico directo: Usando cmaras de

cuenta, se coloca un volumen determinado y se recuentan las
bacterias

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

: a) Materiales, medios de cultivo y equipos

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11 tubos de ensayo
Mechero Bunsen, fosforo y marcador
Hisopo estril
Contador de colonias
.Asa en argolla o anillo,
Incubadora
Refrigeradora
Caldo BHI
Agua peptonada

b) Metodologa.

Calculo del recuento estndar en placas

Seleccionar la placa correspondiente a una dilucin que contenga entre

30 y 300 colonias usando contador de colonias.
Hallar la media aritmtica de los dos recuentos y multiplicarlos por el
factor de dilucin. Reportar como numero de microorganismos mesofilos
aerobios viables por g de muestra.
Si las placas de dos diluciones consecutivas presentan recuentos
menores a 30 y mayores de 300 colonias tomar el promedio de los dos
recuentos y multiplicarlos por el factor de dilucin.
Si el nmero de colonias de colonias de las placas consecutivas estn
dentro del rango de 30 -300 computar el recuento para cada una de las
diluciones y establecer la relacin de los dos recuentos .si el cociente es
menor que 2, reportar el promedio de los valores: A/B>2(A ms B)/2.si
el recuento mayor contiene contiene dos o ms veces el menor en este
caso se reportara el recuento del menor : A/B <2 .A o B (recuento
menor ).

Calculo estimado del recuento de placas

Si las placas de todas las diluciones muestran ms de 300 colonias,
dividir cada duplicado de placas de la dilucin ms alta en secciones

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radialmente comnmente (2 ,4 y 8 ) y contar todas las colonias obtenidas

en cada caso por el factor adecuado con el fin de lograr una estimacin
del total de colonias presentes en placa .promediar los estimados de las
placas duplicadas y multiplicar por el factor de dilucin
correspondiente .Reportar el resultado como el estmulo del nmero de
colonias por gramo

(numero de bacterias)numero de cuadrantes (factor de dilucin)

CARACTERIZACIN DE COLONIAS

Se vio la caracterizacin de las colonias escogidas para su posterior

sembrado, es decir la morfologa segn su superficie, forma y borde.

Expresin de resultados

si el recuento de caja se utiliza para la aceptacin y rechazo de un lote de

alimento, nicamente se considera un recuento estndar en placa nunca
el estimado de recuento, este es til solamente como una aproximacin
primaria en la determinacin d la calidad microbiolgica de alimentos.

Siembra de microorganismos de medio solido a liquido

Las 9 colonias escogidas fueron extradas con el asa de argolla y

sembradas en tubos ya rotulados de BHI.
El sarro de la boca y mano son colonias mixtas estn fueron colocadas
en el caldo muntitivo para su crecimiento.

VI. RESULTADOS

observaciones

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Colonia 1 Nulo crecimiento de colonias, el BHI se

mantiene igual como se dej.
Colonia 2 Poca turbidez, ligero crecimiento de
colonias en la superficie y base.
Colonia 3 Alta turbidez, poco crecimiento de
colonias en la superficie y base.
Colonia 4 Alta turbidez, poco crecimiento de
colonias en la superficie y base
Colonia 5 Regular turbidez, formacin de una
colonia en forma de algodn, por
debajo de la superficie del BHI
Colonia 6 Poca turbidez, abundante crecimiento
en la superficie, colonia de aspecto seco
y slido.
Colonia 7 Poco crecimiento de colonias en la
superficie y en la base del tubo, alta
turbidez.
Colonia 8 Regular turbidez, no existe crecimiento
de colonias en la superficie ni en la
base.
Colonia 9 Regular turbidez, no existe crecimiento
en la superficie, poco crecimiento de la
colonia en la base del tubo.
Boca Regular turbidez, no hay formacin de
colonias en la superficie del BHI, existe
abundante crecimiento de colonias en la
base del tubo.

Mano Poco crecimiento de la colonia, solo

creci alrededor del tubo. Alta turbidez.

VII. DISCUSION DE RESULTADOS

El recuento nos determina la vida til del producto a

examinar
5
En ( 10 se observa una contaminacin externa, eso
se debe por utilizar instrumentos no esterilizados

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VIII. RECOMENDACIONES

Usar instrumentos esterilizados.

Hacer las siembras cerca de un mechero para evitar
contaminacin externa

IX. FUENTES DE INFORMACIN

Microbiologa Alimentaria escrito por Mara del Rosario Pascual Anderson,

Vicente Caldern y Pascual
Ediciones Daz de Santo, ao de publicacin 1999

Prcticas. Microbiologa de alimentos escrito por Vicente Sanchs Almenar,

Corrie Allaert Vandevenne, Inmaculada Vias Almenar, Nria Sala Mart, Merc
Torres Grifo publicado por Universidad de Lleida, ao 1997

ANEXOS
Figura n1: Siembra de medio solido a medio liquido (BHI) realizada por el
profesor

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Figura n2: escogiendo las colonias para el sembrado

APENDICE

DATOS ORIGINALES Y OBSERVACIONES

El recuento nos determina la vida til del producto a
examinar
En ( 103 fue nuestra muestra con la que trabajamos e
inoculamos en los a 9 tubos de ensayo.

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