CARACTERSTICAS HISTOLGICAS DE LAS FASES

REPRODUCTIVAS DEL ALGA ROJA GRACILARIA

BLODGETTII (GRACILARIACEAE)
Hernel Marn-Salgado1,2, Enrique J. Pea-Salamanca
Enrique J. Pea-Salamanca: Doctorado University Of South Carolina
Biologa, Especializacin Biologa de Plantas no Vasculares, Universidad
Mayor de San Marcos, Pregrado/Universitario Universidad del Valle - Univalle
Biologa.

En las especies del gnero Gracilaria se observa un ciclo de vida haplo-diploide

tpico de las algas rojas, incluyendo dos estados de vida libre, el tetrasporofito
(diploide) y el gametofito (haploide), y las unidades de dispersin, esporas y
gametos respectivamente (Engel et al., 2004). Varias especies han sido
consideradas de importancia econmica, dado que son fuentes importantes de
agar, el principal ficocoloide del mercado mundial (Zemke-Whyte y Ohno, 1999;
Ordua y Robledo, 2002; Smit, 2004; Polifrone, et al., 2006).
El gnero Gracilaria se caracteriza por la presencia de cistocarpos ssiles,
presencia de clulas filamentosas nutritivas desde la base del cistocarpo
creciendo hacia el pericarpio ms interno, carpogonio piriforme a subesfrico y
tetrasporangio generalmente cruciado.
De acuerdo con Daz y Daz (2003), G. blodgettii se reporta para el Caribe
colombiano en las costas de la Guajira, Magdalena, Parque Tayrona, Archipilago
Islas del Rosario y el Golfo del Darin, usualmente en ambiente submareal, sobre
fondos limosos o arenosos, sobre valvas o ripio. Esta especie guarda sinonimia
con G. cylindrica (Daz y Daz,2003; Surez, 2005).
La morfologa de G. blodgettii se caracteriza por talos erectos, arbustivos y
abundantemente ramificados, con ejes principales de 2 mm de dimetro, las
ramillas de 0.5-1.0 mm de dimetro, todas las divisiones cilndricas, las ramillas
adelgazndose excepto en las puntas (Martnez, 1998). Los cistocarpos estn
dispersos en el talo, sobresaliendo de su superficie. Los espermacios se forman
en receptculos, cercanos a la superficie del talo, mientras que los tetrasporangios
son cruciados y se encuentran dispersos en la corteza (Byrne et
al., 2002; Pea 1992). Teniendo en cuenta lo anterior, estudios histolgicos
permitan aclarar aspectos reproductivos de G. blodgettii, y son la base para
esclarecer las controversias manifestadas a nivel taxonmico por otros
investigadores con respecto al gneroGracilaria.
El objetivo de este trabajo, consisti en describir las fases reproductivas del alga
roja G. blodgettii (Gracilariaceae) a partir del anlisis histolgico y morfolgico de
talos reproductivos, provenientes del Caribe Colombiano. Estos resultados
permiten contribuir al conocimiento del ciclo biolgico de las especies del
gnero Gracilaria en el Caribe Colombiano y aporta elementos morfolgicos para
la revisin del gnero en el Atlntico Occidental.

Materiales y mtodos
El material vegetal para el estudio proviene de poblaciones naturales de G.
blodgettii ubicados en el sector de Playa Cocal, Baha Santa Catalina en la isla
Providencia, Caribe colombiano (1320'N y 8118'W), a 480 millas de la costa
colombiana. Se extrajeron talos vegetativos, y ejemplares de las fases
cistocrpicas y esporoftica, por medio de buceo autnomo, entre 12 y 20 m de
profundidad, entre los meses de Mayo a Octubre de 2006 y Septiembre a
Diciembre de 2008. El material fue lavado y transportado posteriormente al
laboratorio de la Universidad del Valle para estudios morfolgicos y clasificacin
sistemtica, de acuerdo al protocolo propuesto por West y Calumpong (1988).
Para el mantenimiento y desarrollo de los talos en cultivo de laboratorio, se
siguieron los procedimientos empleados por Collantes et al., (1995), los cuales
permitieron la obtencin de explantes, procedentes de diferentes partes de la
planta. Para el anlisis histolgico se trabaj con la tcnica propuesta
por Sass (1968) y Prez-Cortz et al., (2003) siendo este un mtodo sencillo
para el estudio anatmico de macroalgas, que consiste en deshidratar la
muestra en una seria ascendente de alcohol, Posteriormente se procedi a
infiltrar el material vegetal en parafina, para luego procesar en micrtomo de
rotacin. Las lminas fueron rehidratas en serie descendente de alcohol
hasta una concentracin final al 50%. Finalmente las lminas permanentes
se colorearon con una mezcla de safranina 1% y azul de toluidina 1% en
relacin 3:1.
Se realizaron cortes semifinos con la tcnica de Microscopia ptica de Alta
Resolucin (MOAR). Para esto, porciones del talo fueron sumergidos en solucin
de Glutaraldehido 0,1 M y solucin reguladora de fosfatos a pH 7,4.
Posteriormente se sumergieron en solucin fijadora de tetrxido de osmio 2%. La
deshidratacin se llev a cabo en series ascendentes, empezando con etanol a
25% y terminando con etanol al 100% por periodos de 30 minutos cada uno. Los
tejidos se sometieron a una pre-imbibicin con resina y acetona, hasta la inclusin
definitiva en resina Epoxica. Una vez obtenidos los bloques, se cortaron en
Ultramicrtomo Ultracut Leica con cuchilla de vidrio en grosores de 1 a 3.5 m, los
cuales se tieron con azul de toluidina. Los anlisis morfomtricos se realizaron
con un Sistema de Anlisis de Imgenes NIS Elements Nikon versin 2.3.
(Torres et al., 2007)
Resultados Plantas vegetativas Hbito: Plantas colectadas sobre fondo arenoso
entre 10 y 15 m de profundidad. Ramas filamentosas derivadas de una rama nica
inicial (Figura 1A). Caractersticas morfolgicas: Talos rojos oscuros a pardos y/o
verdosos en algunos extremos apicales, 20-21 cm de altura, ramificacin irregular
alternada o pinnada, y generalmente con apariencia de serie de hilos, frondas
cilndricas de longitudes variables y dimetro constante, base no constreida y
pice agudo. Eje principal aproximadamente entre 2 y 3 mm de dimetro cerca de
la base, ramificacin en mltiples niveles con algunos extremos apicales
entrelazados y consistencia flcida, dimetros ms reducidos que el eje principal.
En la Tabla 1 se presenta el promedio de dimetros del talo de ramificacin
secundaria y terciaria, en varios niveles del mismo. Caractersticas histolgicas: El
talo presenta tejido vegetativo con una seudo-corteza de pequeas clulas
dispuestas radialmente y clulas medulares de mayor tama- o, las cuales
albergan cuatro capas de clulas parenquimticas con tamao aproximado de
27,5 m de dimetro (Figura 1B). Clulas corticales son ms pequeas, 2 -3 capas
celulares, donde se observa una transicin gradual con incremento de dimetro
hacia las capas ms internas dos a tres veces ms densas. Fase carposporoftica
Esta fase es caracterizada por talos con crecimiento filamentoso, ramificacin
irregular, derivados de una rama principal, altura aproximada de 15 cm, con
presencia de cistocarpos distribuidos sin distincin del nivel de ramificacin,
excepto en la base del talo. Morfolgicamente, el cistocarpo es una estructura
oblonga, con presencia de clulas nutritivas transversales o filamentosas que
descienden hacia la base del mismo. En la figura 2-A, se observa el lado adaxial
de un grupo de cistocarpos maduros, cuyas dimensiones para la base oscilan de
1,12-1,23 mm de dimetro, 0,44-0,51 mm en el pice, y 0,60-0,64 mm de altura. A
nivel histolgico, el cistocarpo est conformado por pericarpo interno medular,
clulas de soporte y del gonimoblasto en el rea central; hacia la periferia se
encuentran clulas nutritivas y de fusin, presencia de clulas transversales o
filamentosas que surgen desde la base del cistocarpo, entre 8 y 10 capas (Figuras
2B-C). En la figura 2-D y 2-E se observa detalle del cistocarpo en etapas iniciales
del desarrollo, correspondiente a una rama carpogonial, clulas del gonimoblasto
en formacin y c- lulas de soporte, contrastando con la figura 2-F, donde es
notable la presencia de un par de cistocarpos en diferentes etapas de desarrollo.
Fase tetrasporoftica Talos de vida libre, con ramificacin filamentosa irregular.
Corresponde a la generacin diploide que presenta tetrasporangios productores
de tetrasporas haploides. Talos entre 18 y 20 cm de altura aproximadamente.
Morfologa basada en el desarrollo de tetrasporangios comnmente de tipo
cruciado, clulas reproductoras que originan 4 esporas por meiosis (Figura 3). Los
tetrasporangios cruciados, son de forma ovalada u ocasionalmente cbicos,
distribuidos en la zona cortical del talo, con una divisin media a lo largo de un eje
corto (Figura 3A). En corte de la rama tetrasporangial se destacan clulas madre
de las tetrasporas antes de iniciar divisin por meiosis, contrastando con la
finalizacin de la telofase I (figuras 3B-3D). Cortes longitudinales de esporangios
en anafase II y telofase II (figuras 3E-3F).
Discusin De acuerdo a las observaciones fenolgicas en el rea de estudio, la
fase reproductiva predominante en los bancos naturales de Gracilaria,
corresponde a la fase tetrasporoftica, lo cual permiti profundizar en la
descripcin morfolgica e histolgica de esta fase. Igual evento es reportado por
Thornber (2006) en G. dominguensis y G. gracilis, as como para otras especies
de rhodophytas. Los resultados encontrados a partir del estudio morfohistolgico,
son consistentes con las observaciones expuestas por otros autores para las
especies del gnero Gracilaria (Bellorin et al., 2002; Gurgel et al., 2004b; Martnez-
Lozano, 1998; Guzmn et al., 2002; Ye et al., 2006). Byrne et al. (2002) en su
estudio anatmico y morfolgico de tres especies de Gracilaria, encontraron que
G. chilensis de Tasmania y Victoria (sureste Australiano) es morfolgicamente
similar a G. chilensis de Nueva Zelanda y Chile, cuyas caractersticas morfo-
histolgicas de los cistocarpos, son contrastantes con los expuestos en el
presente estudio. Desde los estudios de Abbott (1983) sobre el gnero Gracilaria
se reporta una controversia desde el punto de vista taxonmico, en gran parte por
los caracteres morfolgicos, la aplicacin incorrecta de eptetos y la falta de
referencia a los especmenes tipo. Abbott et al., (1991) y Bellorin et al., (2004),
sugirieron el traslado del gnero Hydropuntia al clado Gracilaria dada la
conformacin espermatangial y disposicin de clulas nutritivas en la base del
cistocarpo, en cuanto a criterios morfolgicos y moleculares similares para ambos
grupos. Gracilaria se diferencia de los otros grupos por la presencia de clulas
nutritivas tubulares conectando el gonimoblasto con clulas internas del pericarpo,
de origen gametoftico en la base del cistocarpo, las cuales fueron encontradas en
los cortes histolgicos realizados al material carposporoftico colectado, presencia
de tetrasporangios basales y carposporangios en cadena (Tabla 2). Abbott et al.,
(1991) plantea los mismos parmetros de diagnstico para diferenciar los gneros
Gracilaria, Gracilariopsis e Hydropuntia. Por su parte en Gracilariopsis se
observan carposporangios en agrupaciones y los tetrasporangios en clulas
terminales. Segn Bellorin et al., (2002), las caractersticas morfolgicas y
moleculares del gnero Hydropuntia, as como la disposicin espermatangial (del
tipo henriquesiana) y la produccin de clulas nutritivas tubulares en la base del
cistocarpo (Abbout et al., 1991), son argumentos para transferir las especies de
este gnero a Gracilaria, donde se propone adems una sinonimia entre ambos
gneros. A partir del anlisis molecular en las secuencias rDNA de Gracilaria y
Gracilariopsis, corroboran la teora de linajes evolutivos divergentes, aunque se
encuentran caractersticas morfolgicas a nivel de cistocarpo y espermatangio
similares (Fredericq y Hommersand, 1989)