INSTITUTO TECNOLGICO DE

ACAPULCO
DEPARTAMENTO DE INGENIERA
QUMICA Y BIOQUMICA

MICROBIOLOGIA GENERAL

M.C MIGUEL ANGEL DIAZ ALDAY

ACTIVIDAD 8

PURIFICACION, AISLAMIENTO E
IDENTIFICACION DE UNA LEVADURA Y
MOHO.

ALUMNO(A): CAMACHO MIRANDA EMILIA

ESTEFANIA

LEVADURA

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INTRODUCCIN
Las levaduras se han definido como hongos microscpicos, unicelulares, la
mayora se multiplican por gemacin y algunas por escisin. Este grupo de
microorganismos comprende alrededor de 60 gneros y unas 500 especies.
Histricamente, los estudios sobre microbiologa enolgica se han centrado en
las levaduras pertenecientes al gnero Saccharomyces, que son las
responsables de la fermentacin alcohlica. Anteriormente se crea que slo
ellas participaban en el proceso de produccin de alcohol, sin embargo, las
diferentes levaduras no-Saccharomyces, especialmente durante la fase inicial
de la fermentacin, pueden influir en las propiedades organolpticas de las
bebidas alcohlicas. El papel de las levaduras como agentes fermentadores no
fue reconocido sino hasta 1856 por Luis Pasteur. Las teoras cientficas de esa
poca reconocan la presencia de stas en la fermentacin alcohlica, pero
eran consideradas como compuestos qumicos complejos, sin vida. Esta era la
teora mecanstica liderada por los qumicos alemanes von Liebig y Whler. Luis
Pasteur, propuso la teora vitalstica y demostr que las clulas viables de
levaduras causan fermentacin en condiciones anaerobias; durante la cual el
azcar presente en el jugo es convertido principalmente en etanol y CO2.

Las levaduras son los agentes de la fermentacin y se encuentran

naturalmente en la superficie de las plantas, el suelo es su principal hbitat
encontrndose en invierno en la capa superficial de la tierra. En verano, por
medio de los insectos, polvo y animales, son transportados hasta el fruto, por
lo que su distribucin se produce al azar. Existe un gran nmero de especies
que se diferencan por su aspecto, sus propiedades, sus formas de
reproduccin y por la forma en la que transforman el azcar. Las levaduras del
vino pertenecen a varios gneros, cada uno dividido en especies. Las especies
ms extendidas son Saccharomyces ellipsoideus, Kloeckera apiculata y
Hanseniaspora uvarum, las cuales representan por s solas el 90% de las
levaduras utilizadas para la fermentacin del vino.

Como todos los seres vivos, tienen necesidades precisas en lo que se refiere a
nutricin y al medio en que viven. Son muy sensibles a la temperatura,
necesitan una alimentacin apropiada rica en azcares, elementos minerales y
sustancias nitrogenadas, tienen ciclos reproductivos cortos, lo que hace que el

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inicio de la fermentacin sea tan rpido, pero as como se multiplican, pueden
morir por la falta o el exceso de las variables mencionadas.. Las levaduras que
pueden reproducirse sexualmente se conocen como verdaderas, este
proceso implica la formacin de ascosporas, sirviendo la propia levadura como
asca, de aqu que ellas se clasifican como Ascomicetos; por el contrario las
falsas que no producen ascosporas, pertenecen a los hongos imperfectos.

CARACTERSTICAS MORFOLGICAS

Los caracteres morfolgicos de las levaduras se determinan mediante su

observacin microscpica. Adems, los criterios morfolgicos se basan en el
modo de reproduccin vegetativa de la morfologa celular, de la formacin de
pseudomicelio y de micelio. La forma de la levadura puede ser desde esfrica a
ovoide, en forma de limn, piriforme, cilndrica, triangular, e incluso alargada
formando un verdadero micelio o un falso micelio. Tambin se diferencan en
cuanto a su tamao, miden de 1-10 um ancho por 2-3 um de longitud. Son
partes observables de su estructura, la pared celular, el citoplasma, las
vacuolas, los glbulos de grasa, y los grnulos, los cuales pueden ser
metacromticos, de albmina o de almidn. Para poder observar el ncleo es
preciso utilizar tinciones especiales. La estructura celular es de tipo eucaritico,
pero sin sistema fotosinttico. La pared rgida, se caracteriza por la presencia,
en su composicin, de dos polisacridos: manano y glucano. Algunas levaduras
producen una cpsula constituida por fosfomanos. El ncleo est rodeado de
una membrana que persiste durante la divisin celular. El nmero de
cromosomas es variable de unas a otras. Las levaduras en ningn caso son
mviles.

Las distintas especies de

levaduras pueden ser muy
diferentes en cuanto a su
fisiologa, la mayora necesitan ms humedad para crecer y desarrollarse. El
intervalo de temperatura de crecimiento de las levaduras es en general,

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parecido al de los hongos, con una temperatura ptima en torno a los 25 a
30C y una temperatura mxima en torno a los 35 a 47C. Una reaccin cida
del medio, prxima a un pH de 4 a 4.5, estimula el crecimiento de la mayora
de las levaduras, mientras que en medios bsicos, no crecen bien a no ser que
se hayan adaptado a los mismos, crecen mejor en aerobiosis, aunque las
especies de tipo fermentativo son capaces de crecer, aunque lentamente, en
anaerobiosis.

REPRODUCCIN

La mayora de las levaduras se reproducen por gemacin multicelular o por

gemacin polar, que es el mecanismo en el cual una porcin del protoplasma
sobresale de la pared de la clula y forma una protuberancia, la cual aumenta
de tamao y se desprende como una nueva clula de levadura. En las
levaduras que forman pelcula, la yema crece a partir de una prolongacin
tubuliforme de la clula madre. El material nuclear replicado se reparte entre la
clula madre y la clula hija (Frazier y Weathoff, 1998).

La reproduccin sexual de las levaduras verdaderas (Ascomycotina) da lugar a

la produccin de ascosporas, desempeando la funcin de asca, la propia
clula de la levadura. En la mayora de las especies de levaduras verdaderas,
la formacin de ascosporas tiene lugar tras la conjugacin de dos clulas,
aunque algunas pueden producir ascosporas sin que exista conjugacin previa,
teniendo lugar despus la conjugacin de las ascosporas. Tanto el nmero y el
aspecto de esporas por asca, son tpicos de cada especie de levadura, y se
pueden diferenciar por su color, rugosidad o lisura de su pared y por su forma
(redondeada, ovalada, arrionada, falciforme, forma de saturno o de sombrero,
hemisfrica, angular). Las clulas de algunas levaduras se transforman en
clamidosporas mediante la formacin de una gruesa pared alrededor de la
clula, tal como ocurre, por ejemplo, en las especies de los gneros Candida,
Rhodotorula y Cryptococcus.

CARACTERSTICAS DE CULTIVO

En la mayora de los casos, el crecimiento en masa de las levaduras no resulta

apropiado para su identificacin. En los cultivos con agar, es difcil diferenciar

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las colonias de levaduras de las colonias bacterianas, por lo que la observacin
microscpica es la nica forma segura que existe para poderlas diferenciar. La
mayora de las colonias jvenes de levaduras son hmedas y algo mucosas, y
es posible que tengan aspecto harinoso. La mayora de las colonias son
blanquecinas, algunas tienen un color crema o rosado. Algunas colonias
cambian poco de aspecto cuando envejecen, otras se secan y se vuelven
rugosas. Las levaduras son oxidativas, fermentativas, o bien su actividad
metablica es a la vez de ambos tipos. En la superficie de un lquido, las
levaduras oxidativas pueden crecer en forma de pelcula, de velo, o de
espuma, y por ello se denominan levaduras formadoras de pelcula. Las
levaduras fermentativas suelen crecer en toda la masa del lquido y producen
dixido de carbono.

CLASIFICACIN E IDENTIFICACIN

La clasificacin de las levaduras es compleja, no obstante el desarrollo de

nuevas tcnicas basadas en Biologa Molecular, ha permitido separar o
reagrupar las especies. Las levaduras pertenecen al Reino Fungi y dentro de l
a la divisin Eumicota que agrupa a los hongos verdaderos. En esta divisin, las
levaduras se incluyen en 2 de las 5 subdivisiones de los Eumicetos (Tabla 1), la
Ascomycotina representada por las levaduras capaces de producir ascosporas,
llamadas por ello esporgenas, y la Deuteromycotina representadas por las
levaduras incapaces de formar esporas llamadas no esporgenas. Los gneros
de las levaduras esporgenas englobados todos ellos en la familia
Saccharomycetaceae, se distribuyen en 3 subfamilias. Los gneros de las
levaduras no esporgenas constituyen la familia Cryptococcaceae. Adems las
levaduras pueden ser clasificadas por debajo de los taxones gnero y especie,
en subespecies y variedades, que a menudo adquieren rango de especie tras
nuevas revisiones taxonmicas, o varias especies son unificadas en una sola
como subespecies de la misma, con lo que la clasificacin se complica an ms
y se incrementa el nmero de sinonimias. Los principales criterios utilizados
para la clasificacin e identificacin de las levaduras son los siguientes:

1.- Produccin de ascosporas.

2.- Aspecto de las clulas vegetativas: forma, tamao, color, inclusiones.

3.- Forma de reproduccin asexual.

4.- Produccin de micelio.

5.- Forma de pelcula en medio lquido.

6.- Color de la colonia.

8.- Propiedades fisiolgicas: produccin de cido, actividad uresica.

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Propiedades bioqumicas

Fermentacin de glucosa, galactosa, sacarosa, maltosa, lactosa y

rafinosa.
Crecimiento en 18 sustratos carbonados:
Pentosas: D-xilosa, L-arabinosa, D-ribosa, L-ramnosa.
Hexosas: D-glucosa.
Disacridos: sacarosa, maltosa, celobiosa, trehalosa, lactosa.
Trisacridos: rafinosa.
Polisacridos: almidn.
Alcoholes: eritriol, ribitol, D-manitol, inositol.
cidos orgnicos: cido succnico, cido ctrico.
Asimilacin de nitratos.
Crecimiento a 37C.
Crecimiento en medio con vitaminas.
Produccin de almidn.

MOHO

INTRODUCCION

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El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en lugares
hmedos y con baja luminosidad. Existen muchas especies de mohos que son
especies microscpicas del reino fungi, que crecen en formas de
filamentos pluricelulares o unicelulares. El moho crece mejor en condiciones
clidas y hmedas; se reproducen y propagan mediante esporas. Las esporas
del moho pueden sobrevivir en variadas condiciones ambientales, incluso en
extrema sequedad, si bien sta no favorece su crecimiento normal.

Los tipos de mohos ms comunes son:

Cladosporium

Penicillium

Alternaria

Aspergillus

Mucor

La penicilina (cuyo nombre deriva del hongo Penicillium) es un antibitico. Fue

descubierto por Alexander Fleming.

Los mohos se encuentran prcticamente en cada ambiente y pueden ser

detectados, tanto en interiores como al aire libre, durante todo el ao.

Las condiciones hmedas y clidas favorecen el crecimiento del moho. Al aire

libre pueden encontrarse en reas o lugares hmedos sombreados donde hay
descomposicin de hojas o de otro tipo de vegetacin.

En los interiores pueden encontrarse en lugares donde los niveles de humedad

son altos como los alrededores del lavavajillas.

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ESTRUCTURA

Recibe el nombre de moho una estructura filamentosa de ciertos hongos

multicelulares que se forma sobre ciertos alimentos o sustratos, se conoce por
su aspecto algodonosos o terciopelado, puede tener colores que van del color
humo al blanco, verde. Ciertos mohos presentan estructura coloriada que tien
hasta el sustrato.

A veces cuando la estructuras no son aptas el hongo engrosa las paredes de

las hifas y forma un esclerocio. Es una estructura de hifas enredadas muy dura,
y q le permite resistir las malas condiciones ambientales, estos hay que
tenerlos en cuenta cuando hacemos esterilizacin de alimento porque son muy
difcil de eliminar. Presentan el aspecto de una suave pelusa griscea o verdosa
que se desarrolla en la superficie de la materia orgnica en descomposicin
sobre la que viven. Vistos al microscopio presentan un MICELIO formado por
abundante cantidad de hifas blanquecinas y sin tabiques. En el extremo de
algunas hifas se desarrollan los ESPORANGIOS de forma y nmero variado
segn las especies. Las ESPORAS contenidas en los esporangios son
generalmente negras o verdosas. Cuando quedan libres dan origen a la
formacin de nuevos MICELIOS.

Presentan un MICELIO formado por abundante cantidad de HIFAS blanquecinas

y sin tabiques, que son largas clulas en forma de tubos llenos de
PROTOPLASMA con abundantes NCLEOS.

Causantes de infecciones

Algunas personas son sensibles a los mohos. La exposicin a los mohos en

estas personas puede causarles sntomas como congestin nasal, irritacin de
los ojos o resuello. Otras personas que tienen graves alergias a los mohos
pueden experimentar reacciones ms severas. Las reacciones severas pueden
ocurrir entre trabajadores expuestos a grandes cantidades de mohos en los
lugares de trabajo, como en el caso de los granjeros que trabajan todo el da

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alrededor del heno mohoso. Algunas reacciones severas pueden incluir fiebre y
dificultad para respirar. Las personas con enfermedades crnicas, como
enfermedad obstructiva de los pulmones, pueden presentar infecciones de
moho en los pulmones. Algunos mohos son txicos porque
producen micotoxinas que pueden afectar gravemente a humanos y animales.

Las personas sensibles deben evitar reas que tienen ms probabilidad de

tener moho como los lugares donde se apila el abono, el prado cortado y las
zonas boscosas. Al interior de las casas, el crecimiento del moho puede
disminuirse manteniendo los niveles de humedad por debajo del 50% y
ventilando las duchas y los lugares donde se cocina. Los crecimientos de moho
pueden eliminarse de las superficies duras con productos comerciales, agua y
jabn, o con una solucin de blanqueador preparada con una mezcla de no
ms de 1 taza de cloro y 1 galn de agua. Las personas sensibles deben
ponerse una mscara ajustada en la cara en los casos en que no pueda
evitarse la exposicin de si mismo al moho.

El consumo del moho del pan en pequeas cantidades es altamente txico

para el organismo. El cuadro aparece lentamente y consiste inicialmente en
manifestaciones prodrmicas (nuseas, cefalea, vmitos), y alcanza su pico a
las 20 horas, cuando se presentan: disfuncin erctil irreversible,
hipogonadismo progresivo, convulsiones, alucinaciones y sndrome de Cushing.

IDENTIFICACIN MACROSCPICA:

De las colonias individuales desarrolladas en el medio, podemos de deducir:

Velocidad y forma de crecimiento Tamao y color de cuerpos fructferos e hifas
Elevacin y densidad de las distintas partes de la colonia Presencia o ausencia
de peritecios Variaciones en la forma y el tamao de los ncleos de mohos
Consistencia de la superficie de la colonia, el plegamiento, la nitidez del borde
y la presencia de pigmentos en la superficie o el reverso o su difusin hacia el
medio circundante. Invirtiendo la placa de Petri puede observarse el color del
fondo de la colonia, as como cualquier coloracin producida en el medio.

IDENTIFICACIN MICROSCPICA:

Para la observacin microscpica deberemos observar una porcin del cultivo

de un hongo filamentoso directamente al microscopio. Existen tres mtodos
generales para poder realizar esta observacin: Toma de una porcin de medio
con crecimiento fngico. Tcnica de microcultivo. Tcnica de la cinta adhesiva:
es el procedimiento ms rpido para llevar a cabo el estudio de los caracteres
microscpicos de un hongo filamentoso, por esta razn, ser el que
desarrollamos en este procedimiento. Cortar un pequeo fragmento de cinta

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adhesiva, de aproximadamente 1 cm. x 1 cm. Sujetar la cara adhesiva con
unas pinzas, poner en contacto la cara adhesiva con el crecimiento fngico.
Colocar en un portaobjetos, una gota de azul algodn de lactofenol. Apoyar la
parte adhesiva de la cinta, que lleva adherido el crecimiento fngico sobre el
colorante colocado en el portaobjetos. Colocar una gota de azul algodn de
lactofenol encima de la cinta adhesiva depositada en el portaobjetos. Colocar
un cubreobjetos encima de la preparacin y se observa con un microscopio a
diferentes aumentos.

Referencias Bibliogrficas:
Libro Consultado: Microbiologia. Pelczar/Reid/Chan.Editorial McGraw-
Hill.

Libro Consultado: Prescott. Harley. Klein. Microbiologia . Mcgraw-Hill.

Interamericana, Cuarta edicion. 2000

Libro Consultado: BROCK, TH. D: 1998. Biologa de los

Microorganismos. Editorial Prentice Hall.

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Libro Consultado: KIMBALL, Y. 1986. Biologa. Cuarta edicin. Addison -
Wesley Iberoamericana. Wilmington, EU.

http://www.azc.uam.mx/cbi/quimica/microbiologia/p15.pdf

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