Scientia et Technica Ao XX, Septiembre de 2015. Universidad Tecnolgica de Pereira.
ISSN 0122-1701 1
Cintica enzimtica: inversin de la sacarosa
Enzyme kinetics: Inversion of sucrose.
Autor 1: Geanier Guerrero Autor 2: Mayerli Tello
Facultad de qumica, Universidad Tecnolgica De Pereira, Pereira,
Colombia
Resumen Para la prctica de la Cintica enzimtica
inversin de la sacarosa se realizaron una serie de
ensayos, en los cuales se utilizaban diferentes
cantidades y concentraciones de reactivos con el fin de
estudiar a profundidad los comportamientos de la
reaccin en diferentes condiciones. En cada ensayo lo
que se realizo fue un procedimiento estndar que
consista en Pipetear dentro de un tubo de ensayo
solucin de enzima, agua destilada, solucin buffer y
solucin de sacarosa en cantidades diferentes.
Palabras clave cinetica
enzimatica,
Abstract For practicing enzyme kinetics sucrose
inversion a series of assays were performed, in which
different amounts and concentrations of reagents to study
depth behaviors different reaction conditions were used. In
each test which was conducted was a standard procedure
which consisted Pipette into a test tube enzyme solution,
distilled water, buffer solution and sucrose solution in
different amounts.
Key Word enzymatic
kinetic.
I. INTRODUCCIN
La Cintica Enzimtica, se refiere a los procesos en los
cuales participan exclusivamente las enzimas con la
finalidad de acelerar la velocidad de
reaccin.
sta accin enzimtica es denominada catalizadores y
especficamente es un biocatalizador, las enzimas o
fermentos son sustancias proteicas con actividad cataltica
producido por organismos vivos. Las sustancias sobre las
cuales actan se llaman substratos y estas enzimas pueden
actuar tanto en substratos homogneos como heterogneos.
La caracterstica fundamental de un proceso catalizado por
enzimas, es de disminuir la energa de activacin. Dentro
de las reacciones catalizadas por enzimas, tenemos a la
invertasa, Diastasa, Maltasa, pepsina, tripsina, etc.
La Accin Enzimtica de las enzimas, se produce con la
unin de stas con una molcula de substrato, para luego
formar el complejo enzima-substrato y despus del
proceso se forma inmediatamente el producto quedando
libre la enzima, para unirse con el nuevo substrato.
Se entiende por velocidad de reaccin la variacin por
unidad de tiempo de la concentracin de un reactante
o de un producto de la reaccin. La velocidad de una
reaccin depende de la naturaleza de las sustancias, de la
temperatura, de la concentracin de los reactivos, en
algunos casos especiales tambin de la concentracin de
los productos y de la presencia de catalizadores; por lo
tanto, al avanzar la reaccin y modificarse la
concentracin de los productos y reactivos se espera que
vare la velocidad
Un aspecto muy importante de la cintica qumica es
la manera como ocurren las velocidades de reaccin
catalizadas por enzimas. En esta experiencia estudiaremos
la inversin de la sacarosa, catalizada por la enzima
inveraz. La velocidad de la reaccin de la catalisis
enzimtica ser comparada a una reaccin catalizada por
iones hidrgeno[1].
Los principios de cintica enzimtica, puede usarse para
escribir a ecuacin de la velocidad para un modelo de
enzima
substrato y enzima producto, que fue estudiado por
Michailes Menten, es el llamado sistema un reactivo
sencillo con la aproximacin al equilibrio rpido
deducido por M. Menten.
La reaccin ms sencilla catalizada enzimticamente
implica que un nico substrato da lugar a un nico
producto. El sistema se llama uni-uni en la nomenclatura
de Cleland.
La velocidad de las reacciones enzimticas, estn
influenciadas por diversos factores, dentro de los
principales se tiene:
a.-Concentracin del
substrato
b.-Presencia de activadores o
inhibidores c.-pH ptimos para cada
enzima
d.-
Temperaturas
.
 reaccin entre las especies en interaccin, es decir: si hay
enzima o acido se agrega inmediatamente 2mL de la
solucin de DNS que cumple la funcin de bloquear la
reaccin.

1. EXPERIMENTOS A Y B
Con el fin de obtener la concentracin del producto (P) en la
catlisis enzimtica de la sacarosa, se realizaron varias
reacciones, en la cual no se utiliza enzima. Los datos de estas
Ecuacin 2: reaccin se inversin de la reacciones se confinan en las tablas 1 y 2.
sacarosa catalizada por enzima.
Dnde: E=enzima
S=sustrato
P=productos
ES: complejo sustrato enzima.
Tabla 1: configuracin de cantidades de reactivos para los
ensayos tipo A.
II. CONTENIDO

En la prctica de la catlisis enzimtica para

la reaccin de descomposicin de la sacarosa
en glucosa y fructosa se realizaron varios
experimentos, con el fin de obtener desde
varios puntos de estudio, el comportamiento Tabla 2: ensayos B para la calibracin del mtodo.
de esta reaccin, cuando las variables que la
modifican, se alteran. De las tablas 1 y 2, se usaron los ensayos A2 y B1 a B5, ya
que con los resultados de estos se puede observar el cambio de
la absorbancia respecto del producto P que es glucosa ms
PROCEDIMIENTO:
fructosa (a esta solucin se le denomina GFS en la tabla 2).
Para los experimentos en los cuales se En las tablas 3 y 4, se muestran los datos procedentes de las
aade enzima, agua buffer y sacarosa, se preparaciondes de los ensayos A2, A3 y B1 a B5.
procede de la siguiente manera:

Se aade en un tubo de ensayo, la cantidad de Ensayo Absorbancia

enzima, agua y buffer especificados por la A2 0,0520
configuracin de cada ensayo, luego se aade A3 0,0200
la sacarosa y se agita durante el tiempo Tabla 3: resultados de los ensayos A.
especificado por la tabla de
Ensayo Absorbanc
configuracin de cada ensayo, si
el tiempo no aparece, se agita B0 ia 0,000
durante 5 minutos. Luego se B1 0,180
adiciona 2mL de DNS, que es la B2 0,362
solucin coloreadora y luego se
calienta durante 5min. B3 0,525
Finalmente la solucin se enfra B4 0,533
a temperatura ambiente y se B5 0,673
adicionan 15mL de agua y se
mide la absorbancia en el espectrofotmetro.

Para los experimentos donde se adiciona

acido, se realiza el mismo procedimiento Tabla 4: resultados de los ensayos B
pero en lugar de adicionar enzima, se
adicionara la cantidad de acido especificado
en la tabla de configuracin de cada ensayo.

Para los experimentos donde se lleva a cabo la

reaccin a una temperatura diferente de la
temperatura ambiente, se hacen las adiciones a
la temperatura de trabajo.
Ecuacin 3: ley de Beer.
Los blancos de cada experimento se Donde:
hicieron de tal manera que no se presentara
A
:
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
. Figura 2: absorbancia de los ensayos de la tabla 5
:
Absort
ividad
molar.
C: concentracin molar
del compuesto. d:
ancho de la celda.
I0/I: fraccin de
Fructosa (g) 0,
luz transmitida.
Glucosa (g) 9
0,
Dado que la absortividad o el coeficiente de PM (GF) 9
180,16
absorcin, es una constante cuando se trabaja a (g/mol)
[] sln GF 0,0099911
una misma longitud de onda, en este caso
540nm y el paso ptico o ancho de la celda es
(mol/L) 1942671
constante (1cm) se facilitan los clculos de Tabla 6: datos para la concentracin
la absortividad molar por medio de un mtodo de GF y .
grfico.

Los productos obtenidos son 2, los cuales Apartir del metodo grafico se obtuvo el coeficiente de
serian glucosa y fructosa, sin embargo las absorcion , el cual es un dato de gran importancia para
cantidades obtenidas son estequiometricas, tal realizar los clculos de los ensayos siguientes. La linealidad
como se muestra en la ecuacin 2, por lo tanto del grafico 1 tiene un coeficiente de linealidad alto, el cual
C es igual a X (cantidades corresponde a 0,9812.
estequiometricas de los productos). De
acuerdo a las conclusiones anteriores, la
ecuacin anterior se convierte en la ecuacin
siguiente
3. EXPERIMENTO E.

Ecuacion 4: relacion absorbancia Los ensayos E se configuraron estrictamente con el fin

concentracion. de conocer el comportamiento de la velocidad inicial de
reaccin contra la concentracin de sustrato.

tabla 7: cantidades de reactivos para preparar

tabla 5: absorbancias de los ensayos A2 y
B1 a B5, con la concentracin respectiva de
GF.
los ensayos E.
Se prepararon todos los ensayos de la tabla 7 y luego se
llevaron los ensayos al espectrofotmetro. Las
absorbancias obtenidas se muestran en la tabla 8.
Tabla 8: absorbancias para cada inverso de la concentracin inicial y el
uno de los ensayos E.
Ensayo Absorbanci inverso de la velocidad inicial
E0 a 0,0000
E1 0,5040
42671 E2 0,2330
vol 3,0000 E3 0,2230
[] de E0 2,33333E- E4 0,1500
Tabla 9: datos para lin-weaver Burck
E5 0,0754
clculos.
E6 0,0500 1/s0 1/r0
A partir de la ecuacin 4
10 528106,43
se calcularon las
50 56
810311,43
concentraciones del producto obtenido para
cada ensayo, la constante se extrajo del 10 18
956748,87
experimento A, en donde se calcula la 0
20 89
1422366,6
absortividad molar. Para determinar la 0
50 67
2829641,
velocidad de cada reaccin se dividi las 0
100 914267100
cantidades de producto obtenidas con el Tabla 011. resultados del inverso de la
tiempo de reaccin transcurrido. Los concentracin inicial del sustrato con la
resultados de los clculos se confinaron en la velocidad inicial de reaccin
tabla 10

Absorbanci X (mol/L) t (min ) r( mol/L*mi S0

a 0,0000 0 5 n) 0 (mol/L))
0,4040 9,46779E- 5 1,89356E- 0,1
0,2633 06
6,17047E- 5 06
1,23409E- 0,02
0,2230 06
5,22603E- 5 06
1,04521E- 0,01
0,1500 06
3,51527E- 5 06
7,03054E- 0,00
0,0754 06
1,76701E- 5 07
3,53402E- 5
0,00
0,0500 06
1,17176E- 5 07
2,34351E- 2
0,00
06 07 1
Tabla 10: velocidades y concentraciones iniciales
calculadas para cada ensayo.

Para estudiar a profundidad el

comportamiento de la concentracin inicial
del sustrato con la cintica de reaccin, se Figura 3: grafico de los datos confinados en
la tabla 11
hace imperativo conocer el constante Km o
constante de Michaelis-Menten y el nmero Por medio de la ecuacin obtenida de la
de rotacin k2. regresin de los datos de la tabla 23, se
calcul Km y K2, utilizando la ecuacin de Lin
Weaver Burck.
lin-weaver Burck
m 3795,4
Ecuacin 9: constante de Michaelis- b 625814
Menten. k2 (min^- 6,84822373
1)km (M) 1
0,00606474
Ecuaciones 10 y 11: lin-weaver Burck y 1
Eadie-Hofstee.
Tabla 12: resultados de los clculos para la
Con el fin de estudiar el
obtencin de las constantes k2 y km por medio
comportamiento de la de la ecuacin de Lin Weaver Burck.
concentracin respecto a la Eadie Hofstee
cintica de la reaccin, se r0 r0/s0 Se extrajeron r0 y S0 de la tabla 22 y se
aplicaron las ecuaciones 10
1,89356E- 1,89356E- calcul ro/S0, para aplicar la ecuacin de
y 11, para ello se calcul el
06
1,23409E- 6,17047E- Eadie Hofstee.
05
06
1,04521E- 05
0,0001045
06
7,03054E- 21
0,0001406
07
3,53402E- 11
0,0001767
tabla 13: resultados de los clculos
de r0/s0 para aplicar la ecuacin de 07
2,34351E- 01
0,0002343 Figura 4: grafico de los datos confinados en la
Eadie Hofstee. 07 51 tabla 13.
 Eadie Hofstee
m -122,9
b 2,00E-04
km (M) 0,00813669
K2 (min^- 7 6,97E+00
1)

tabla 14: resultados de los clculos para km y k2 a partir de

la ecuacin de Eadie Hofstee.

Para los resultados de los clculos de K m y K2 obtenidos

por medio de los mtodos propuestos por Weaber Burck y
Eadie Hofstee, los valores de las constantes halladas son
parecidos, sin embargo la regresin tipo Weaber Burck,
muestra mayor linealidad respecto a la regresin tipo Eadie
Hofstee.

4. EXPERIMENTO F.

En el experimento F se configuro una serie de cantidades

de cada reactivo para cada ensayo, con el fin de
estudiar la manera en que ocurre la hidrolisis de la
sacarosa catalizada por acido. En la tabla 27 se muestran
los ensayos tipo F que se realizaron en el laboratorio con
sus correspondientes cantidades de reactivo.

Tabla 15: cantidades de reactivos para los

ensayos tipo F.
A cada uno de los ensayos F se les aplico el
proceso descrito en el procedimiento para
la catlisis acida. Se midi la absorbancia
para cada ensayo, los resultados se
tabularon en la tabla 16
Muestra Absorbancia
F0 0,0000
F1 0,1156
F2 0,2590
F3 0,2320
F4 0,5590
42671