LABORATORIO N08:

FISIOLOGA INMUNOLOGICA

ALUMNO:
CASTRO PUELLES ARTHUR EDWARD

DOCENTE:
WILSON BECERRA

GRUPO:
11.45 1.15

CICLO:
V

Domingo 14 de mayo del 2017

EXPERIMENTO N O1: TIPIFICACIN SANGUNEA

1. Procedimiento:

Despus de limpiarse el dedo con alcohol y algodn se les pincho el

dedo cada uno de los estudiantes de la mesa correspondiente , sobre
un portaobjetos previamente marcado se colocaron tres goititas de
sangre de aproximadamente 0.5 cm de dimetro y en cada una de las
gotas se puso un tipificador anti A ,uno anti B , y uno anti RH (D) ,
mezclar urante un minuto con una paletita y observar si hay aglutinacin
o no y dar los resultados, despus determinar la frecuencia del grupo
sanguneo de los estuiantes y compararla con la frecuencia
establecida .

ANTI A ANTI D

ANTI B

Sueros tipifica dores anti-A, anti-B y anti-D

2. Resultados:
 GRUPO 11.45 1.15
NUMERO
ALUMNOS A B AB O RH + RH -

1 ARBOLEDA + +

+
2 BARBOZA +

3 CASTRO + +

4 HORNA + +

5 IPANAQUE + +

6 MONTEZA + +

7 MURO + +

8 ORELLANA + +

9 PAUCAR + +

10 RAMIREZ + +

11 VILCAMANG + +
O
12 WONG + +

13 GIL + +

14 DAVILA + +

15 GARCIA + +
 16 DIAZ + +

GRUPO
SANGUINEO : O
FACTOR RH+

GRUPO SANGUINEO :A
FACTOR RH +

GRUPO SANGUINEO :B
FACTOR RH +

3. Discusin:

Segn el libro GUYTON hay varios grupos de antgenos eritrociticos

pero el principal es el sistema ABO , una persona de grupo sanguneo
A solo puede tener sobre el eritrocito antgenos A pero tiene anticuerpos
 en el plasma anti B , el de grupo sanguneo B sobre el eritrocito tendr
antgenos B y en el plasma anticuerpos anti A, al tipo AB se le denomino
como el receptor universal, ya que al no poseer aglutininas (anticuerpos) en
el plasma, as recibiera sangre tipo A, B y O no habra reaccin alguna
porque los antgenos nunca se encontraran con los anticuerpos del receptor
y al grupo sanguneo O como el donante universal ya que al no poseer
aglutingenos de tipo A ni de tipo B, esta no reaccionar con la sangre del
receptor, si tuviera sangre tipo A, B AB; ya que aun teniendo anticuerpo el
receptor en su plasma estos no se activaran porque nunca encontraran el
antgeno.(1)
Una diferencia entre el sistema ABO y el Rh seria en cuanto a sus
aglutininas. Con respecto al sistema ABO, las aglutininas comienzan a
formase despus del nacimiento (a partir de los 2-8 meses) pero con el
sistema Rh estos anticuerpo no se hayan ya que se necesita de una
exposicin previa para la formacin de estos anticuerpos (anti - Rh). As, con
mltiples exposiciones al factor Rh, una persona Rh- finalmente llega a
sensibilizarse con ms fuerza al factor Rh.
En base a los resultados obtenidos de los estudiantes de medicina del grupo
de 11:45 - 1:15 de laboratorio de fisiologa, siendo el total de alumnos 16,
decimos que existe una mayor prevalencia por el grupo sanguneo O, con
un total de 9 alumnos con este grupo sanguneo ,precedido por el grupo
sanguneo A con 5 alumnos quedando el grupo sanguneo AB con un
total de 2 alumnos .comparando con la prevalencia ya establecida de grupo
sanguneo O+ con un porcentaje de 56.25% y el grupo sanguneo A+ con
un porcentaje de 31.25% y el grupo sanguneo AB con un porcentaje de
+12.5% se puede decir que cumple .

4. Conclusin :

Saber el tipo de factor de RH tiene una particular importancia cuando

las madres RH a a luz a lactantes RH+ no afecta el primer embarazo
puesto que no hay el contacto sangre materna y la fetal pero durante el
parto podra darse este contacto y la madre podra formar anticuerpos
para RH + afectando el segundo embrazo por ende el lactante podra
nacer anmico afeccion llamada eritroblastosis fetal.
Hacer una tipificacion sangunea para saber el grupo sanguneo y a que
grupo RH pertenecemos es de suma importantancia puesto que si se
necesita una transfucion sanguinea o un transplante tendra que ser del
mismo grupo y factor puesto que se presentara una incompatibilidad
provocando problemas de rechazo e incluso hasta la muerte.

EXPERIMENTO N O2: EVALUACIN DEL TIEMPO DE SANGRA

1. Procedimiento
Con la ayuda de tres alumnos , se realiz con la lanceta una puncin en el
dedo y obtener una gota de sangre para ponerlo en el pocillo de muestra del
kit ,luego se adiciona una gota de diluyente de muestra inmediatamente ,la
lectura debe realizarse despus de 15 minutos e interpretarlo .

2. Resultados

CASTRO ARBOLEDA BARBOZA

INDICA QUE NO HAY INDICA QUE NO

INDICA QUE NO HAY PRESCIENCIA DE HAY PRESCIENCIA
PRESCIENCIA DE ANTGENO DE ANTGENO
ANTGENO

Negativo o no reactivo :si solo se colorea la banda C

Positivo o reactivo: cuando se colorea las bandas C y T
Invalido : colorea la banda T

3. Discusin :

La hepatitis B es la causa ms comn de viremia e infeccin persistente

crnica del hgado y carcinoma hepatocelular , el antgeno de la hepatitis
B es el primer marcador que aparece en la sangre en un paciente
infectado por hepatitis B , pero se detecta si estuvo expuesto hace dos
meses atrs de la realizacin de la prueba o si hay presencia de
 sntomas,, es de vital importancia que la persona que se realiza la
prueba no hay sido inmunizada un tiempo antes de la realizacin de la
prueba puesto que nos dara falsos positivos ya que tendra al antgeno
de hepatitis B pero el de manera artificial. (2)
Los alumnos voluntarios fueros vacunados hace tres aos por eso no
presentan el antgeno artifical provocando en la prueba falsos positivos.

4. Conclusin
El tiempo de espera de los 15 minutos es de suma importancia
puesto que el resultado puede ser otro .
Los portadores crnicos del virus de la hepatitis B ocupan un
lugar muy importante en las estrategias para el control y la
erradicacin de la enfermedad. Los conocimientos que comienzan
a acumularse sobre los mecanismos inmunolgicos de respuesta
ms efectivos e inocuos, as como de los defectos responsables
de la incapacidad para eliminar el virus, contribuirn a curar,
aliviar y mejorar la calidad de vida de los ms de 300 millones de
enfermos crnicos de hepatitis B que existen en el mundo, cifra
que supera diez veces la magnitud de la epidemia del Sndrome
de Inmunodeficiencia Adquirida.
Esta prueba es rpida lo cual nos ayuda a realizarla antes de
alguna transfusin sangunea evitando posibles contagios del
virus

5. Cuestionario:

5.1La ausencia del Ags VB en la sangre de una persona que estuvo

expuesta al virus B es suficiente para descartar la infeccin o estado
portador ?
El anticuerpo de superficie se forma en respuesta al virus de la hepatitis B.
El organismo puede producir este anticuerpo si usted es vacunado, o si se ha
recuperado de una infeccin de hepatitis B. Si el resultado es positivo, su
sistema inmunolgico ha desarrollado con xito un anticuerpo protector contra
el virus de la hepatitis B, que le brindar proteccin a largo plazo contra
infecciones futuras del mismo. Las personas que obtienen un resultado positivo
en el anticuerpo de superficie no estn infectadas y no le pueden contagiar el
virus a los dems.

Cuando hay ausencia del antgeno de superficie o sea sale negativo , significa
que la persona no est infectada pero aun corre el riesgo de posibles
infecciones futuras ,requiere de una inmunizacin.

5.2 Cmo estimulan los linfocitos T a los linfocitos B para el cambio de

isotipo y maduracin de afinidad de inmunoglobulinas ? Cules son la
citoquinas que promueven la maduracin de la sntesis de cadenas
pesadas de psilon ,ganma y alfa?

Los linfocitos T colaboradores o linfocitos T cooperadores, tambin conocidos

como linfocitos T efectores o simplemente linfocitos Th, son un subgrupo de
linfocitos que tienen un papel muy importante en establecer y maximizar las
capacidades de defensa del sistema inmunitario. La actividad de estas clulas
es inusual, en tanto no son capaces de producir efectos citotxicos o
fagocitarios, es decir, no pueden aniquilar la clula husped o patgenos. Sin la
ayuda de otras clulas inmunitarias se consideran intiles contra una infeccin.
Los linfocitos Th estn involucrados en la activacin y direccin de otras clulas
inmunitarias, y son particularmente importantes en la respuesta inmune
adaptativa. Son esenciales en el proceso de conmutacin para la posterior
formacin de anticuerpos por parte de los linfocitos B, en la activacin y
crecimiento.
Los linfocitos T cooperadores dirigen la activacin de los linfocitos B y
estimulando el cambio de isotipo ,el ligando para el CD40 situado en la
superficie de los linfocitos T activados cooperadores y las citosinas secretadas
por este linfocito son los principales impulsadores moleculares que inducen a
los linfocitos B a realizar el cambio de isotipo . la maduracin de la afinidad
tambin depende de la activacin de los linfocitos B por el CD40L situado en
los linfocitos T , implica la mutacion somatica de genes V de Ig reordenados en
los linfocitos B activados y la seleccin posterior de linfocitos B con elevada
afinidad por el antgeno original tiene lugar todo esto en los centros
germinales.(3)

L-4 y la L- 13 interviene el el cambio de isotipo de la IgE

L-5 y el TGF-beta son las citocina con rango de accin ms reducido al inducir
la generacin de Inmunoglobulina A (IgA)
L-14 interviene en la induccin de la IgG
IFN-gamma, induce cambio en las clulas B para sintetizar IgG.

5.3Qu clula de la respuesta inmune adaptativa es responsable de la

destruccin de los hepatocitos infectados por el virus de la hepatitis B ?
cules son los mecanismos de lisis celular ?

Se definen como hepatotropos primarios aquellos virus que tienen un tropismo

especial por los hepatocitos y por lo tanto, los infectan en forma preferencial lo
cual no quiere decir que no infecten otros tipos celulares; y se definen como
hepatotropos secundarios aquellos virus que infectan primariamente a otros
tipos celulares pero que pueden, en el contexto de una infeccin generalizada
infectar los hepatocitos.
Una particularidad del VHB es su escaso efecto citoptico sobre el hepatocito:
el virus no suele destruir a las clulas que infecta; 12 sin embargo, es la
respuesta inmune que se desencadena tras la infeccin y encargada de la
eliminacin del agente patgeno, la responsable de las principales
manifestaciones de la enfermedad. Para ambos brazos del sistema inmune
adaptativo, anticuerpos y linfocitos T, se cumple en el caso de la hepatitis B la
peculiar ambigedad de ser arma de doble filo: proteccin y dao separados
por una lnea poco definida.
El poder antiviral de los linfocitos T es mayor que su capacidad destructora en
muchos rdenes de magnitud. El IFN, una de las molculas protagonistas en
esta respuesta inocua, interrumpe la unin del ARN viral y las protenas que a
l se asocian durante el ensamblaje de la cpsida infecciosa; parte de este
efecto parece ser mediado por los proteasomas, organitos celulares
encargados de degradar protenas citoplasmticas, y se ha encontrado que la
presencia de inhibidores de los proteasomas en clulas infectadas por el VHB,
bloquea el efecto antiviral del IFN. Un segundo mecanismo mediado por esta
citocina es la destruccin de una protena celular que protege al ARN viral, lo
cual permite la degradacin de este ltimo por las ribonucleasas que se
encuentran en el citosol. Adems, el IFN y el FNT polarizan la respuesta T
hacia el desarrollo de sus funciones efectoras antivirales, 18 potencian el
procesamiento antignico y el transporte y expresin local de molculas del
SPH.

. deficiencias del reconocimiento de linfocitos T4, frente a antgenos virales, con

menor produccin de IL-2, INF garruna y menor actividad de linfocitos NK (por
anomalas de linfocitos intrnsecos);
. menor produccin de inmunoglobulinas por linfcitos B, y por ello menor
produccin de anticuerpos (anti-HBc y anti-HBs). Defecto relativo de actividad
de Te, por menor produccin de INF por clulas polinucleares, linfocitos y
fibroblastos; con menor expresin de la membrana HLA- 1, que es necesaria
para la lisis del hepatocito (1,2). En la membrana del hepatocito, se presenta:
menor citotoxina de linfocitos T y menor expresin del HBcAg. Este es el
antgeno diana de clulas inmunocompetentes, no el HBsAg. El grado de
actividad histolgica est en relacin al grado de expresin citoptica y de
membrana del HBcAg y HBeAg, e inversamente con grado de replicacin. La
respuesta inmune es adecuada con la elevacin de transaminasas, pre-
seroconversin del HBcAg, linfocitos T supresoras disminuidos, con accin
eficaz del INF en etapa de replicacin(4)

EXPERIMENTO N O3 ENSAYO INDIRECTO DE

INMUNOABSORCIN LIGADO A ENZIMAS (ELISA)
 1. Procedimiento:
Se realiz mediante el software PhysioEx. En este experimento se tom:
cinco muestras que se encuentran en el armario de las muestras:
paciente A, paciente B, paciente C, un control positivo y un control
negativo; una microplaca con 96 pocillos; una pipeta multicanal; una
pipeta automtica de 100 ml; un lector de placas; una caja
suministradora de puntas de pipeta desechables; solucin tampn de
lavado; solucin del antgeno VIH; solucin tampn de revelado
anticuerpo secundario conjugado con una enzima; solucin del sustrato;
papel secante se usa para secar; un recipiente para la recogida de
residuos biolgicos peligrosos .

2. Resultados:

Resultado de elisa indirecto

MUESTR Densidad Resultado

A ptica del test de
VIH
Paciente 0.054 Negativo
A
Paciente 0.432 Intermedio
B
Paciente 1.99 Positivo
C
Control 1.624 Positivo
positivo
control 0.154 Negativo
negativo

Densidad ptica Resultado

<0,300 Negativo
0,300-0,499 Intermedio(es necesario repetir la prueba)
>0,500 Positivo

3.Discusin:

Es el Virus de la Inmunodeficiencia Humana: Su anlisis indica, que

el individuo que da POSITIVO, si no se trata, desarrollar el SIDA
 (Sndrome de Inmunodeficiencia Adquirida) en un periodo aproximado
de 4 a 10 aos.se puede detectar mediante una prueba de Elisa

La tcnica ELISA : (ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas) es

una tcnica de inmunoensayo en la cual un antgeno inmovilizado se
detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de
generar un producto detectable, como cambio de color o algn otro tipo;
en ocasiones, con el fin de reducir los costes del ensayo, nos
encontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al
antgeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que
lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparicin de
colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometra el
antgeno en la muestra.

Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo

particular est presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque
el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran nmero de
variables, tales como seleccin de reactivo, temperatura, medicin de
volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente, puede afectar los
pasos sucesivos y el resultado de la prueba

La intensidad del color se mide con la Densidad ptica, esta densidad al

medir la intensidad del color mide indirectamente la cantidad de
anticuerpos en el ELISA; debido a que estas 2 variables son
directamente proporcionales.
El Paciente A presenta una densidad ptica por debajo de 0,300
entonces podemos decir que no hay presencia del virus del VIH en su
plasma, lo cual nos dice que el paciente A es una persona sin la
enfermedad (sana)
El paciente B presenta una densidad ptica entre 0,300-0,499 lo que nos
indica un resultado indeterminado; no se puede decir si el paciente esta
infectado o no por es un resultado incierto .
El paciente C presenta una densidad ptica mayor a 0,500 siendo
positivo lo cual nos indica que hay presencia del virus ; pero siempre es
necesario respaldarlo con una prueba mas especifica la prueba del West
Blotting

4. Conclusin:

La prueba de Elisa consiste en la deteccin de los anticuerpos del virus.

Esta prueba debe realizarse 3 semanas despus de la prctica de riesgo
y permite, en muchas ocasiones, la deteccin precoz del VIH.
 En el caso de obtener un resultado positivo con la prueba del ELISA,
este debe confirmarse mediante una prueba ms especfica denominada
Wester Blot.

La deteccin precoz de la infeccin te permitir ponerte lo antes posible

en manos de tu mdico para que este pueda valorar cual es el mejor
tratamiento para ti y evitar la posible transmisin del VIH.

En el caso de un resultado negativo como el paciente A , esta prueba es

suficientemente fiable como para poder descartar la infeccin por VIH.
No obstante se recomienda realizar la prueba al cabo de 3 meses para
verificar que no se trata de un falso negativo, y si sale positivo no hay
que alarmarse porque tendra que hacerse una prueba mas especifica.

5. Cuestionario :
5.1Cmo puedes afirmar que el ensayo realizado es
directo o indirecto?

Un ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzimas (ELISA) implica la reaccin

de un complejo anticuerpo-enzima con un antgeno o anticuerpo que se
mantiene inmvil sobre una superficie slida. En la incubacin de la enzima
conjugada con un sustrato adecuado, un producto es formado. La formacin de
un producto ayuda a detectar la presencia del antgeno o anticuerpo y su
cantidad proporciona una medida de la cantidad de antgeno-anticuerpo de la
reaccin que se produjo. La prueba de ELISA se puede realizar de dos formas:
directa e indirecta.

En la prueba de ELISA directa, un anticuerpo primario se lleva a cabo en

las paredes de una placa de microtitulacin. Cuando la muestra se
sospecha que contienen el antgeno se aade, hay una reaccin
antgeno-anticuerpo. A continuacin, un anticuerpo secundario ligado a
una enzima que es capaz de reaccionar con el antgeno se aade. Si el
antgeno est presente en la muestra, se une a este anticuerpo ligado a
enzimas. Cuando un sustrato incoloro se aade, un color se desarrolla,
indica la presencia de antgeno.
En el ELISA indirecto, el antgeno se lleva a cabo en las paredes de la
placa de microtitulacin. Cuando una muestra sospechosa de contener
anticuerpos se aade, una reaccin antgeno-anticuerpo se produce. A
continuacin, un anticuerpo secundario ligado a enzimas capaces de
reaccionar con la regin no unida del anticuerpo, se aade. Cuando el
 sustrato incoloro se aade, conduce al desarrollo de color si la muestra
utilizada contiene anticuerpos.

Una amplia gama de anticuerpos secundarios marcados estn

disponibles comercialmente. Adems, es posible crear varios
anticuerpos primarios en una especie dada y utilizar el mismo anticuerpo
secundario para la deteccin. Esto hace que el ELISA indirecto sea fcil
de realizar. En el ELISA directo, los anticuerpos primarios tienen que ser
especficamente preparados para reaccionar con el antgeno especfico
que estn presentes en la muestra. Esto hace que el ELISA directo sea
desventajosa en comparacin con la prueba indirecta. La prueba de
ELISA directa es rpida en comparacin con la prueba indirecta, ya que
slo utiliza un nico anticuerpo. El ELISA indirecto requiere una etapa
adicional de incubacin con un segundo anticuerpo durante el
procedimiento de ensayo, lo que provoca un retraso en la obtencin de
resultados.
La prueba directa de ELISA es menos sensible que la forma indirecta de
la prueba porque no es la amplificacin de la seal mucho menos.
Adems, el etiquetado de la primaria de anticuerpos con una enzima
puede afectar a su perfil de immonoreactividad. En el caso del ELISA
indirecto, el anticuerpo primario no se etiqueta y, por tanto, conserva su
inmunorreactividad. Adems, cada anticuerpo primario tiene muchos
eptopos que pueden unirse con el anticuerpo secundario, lo que permite
la amplificacin de la seal, la mejora de la sensibilidad del mtodo. Sin
embargo, hay una posibilidad de reactividad cruzada entre el antgeno y
el anticuerpo secundario, dando lugar a un error en los resultados. No
hay posibilidad tal en el mtodo de ELISA directo.(5)

5.2indique a que se a unido el AC secundrio o porque ?

El anticuerpo secundario est unido qumicamente a una enzima, los cuales
reaccionan con los anticuerpos especficos aadidos anteriormente y que se
encuentran fijados a los antgenos.
El sistema de deteccin emplea dos anticuerpos: uno primario contra el
antgeno y uno secundario marcado contra el primario. La deteccin tiene
mayor sensibilidad por presentar una amplificacin de seal debida a la unin
de dos o ms anticuerpos secundarios por cada primario.
El marcador enzimtico que se emplea en estos anlisis se conjuga con un
ligando, que puede ser un antgeno, un anticuerpos especfico para el antgeno
de inters o un anticuerpo para el anticuerpo primario.

BIBLIOGRAFA

(1) Guyton A, Hall J. Tratado de la fisiologa mdica. 12 ed. Espaa: Elsevier;

2011. Pg. 445 450.

(2) http://www.plb.gba.gov.ar/gba/plb/pdf/HEPATITIS.pdf

(3)Abbas inmunologa celular y molecular .septima edicin pag 244 -245

(4)http://www.fihu-diagnostico.org.pe/revista/numeros/1998-
99/novdic99/265-270.html
(5)http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-
protocolos.pdf