Universidad Nacional

Autnoma de Mxico
Facultad de Estudios
Superiores Zaragoza

Laboratorio de Ciencias Bsicas III

Cromatografa (espinaca)
Alumna: Banda Sandoval Nayelli
Jocelyn
Grupo: 4303
Profesora: Q. Ma. Estela Jimnez
Encarnacin
Resumen:
Tenemos espinaca la cual vamos a extraer su pigmento por el
mtodo se maceracin sin agregar algn disolvente hasta
tenerla de manera cmo masa le agregamos acetona para
empezar a disolverla ms, lo agregamos a un embudo de
decantacin donde ya posteriormente agregamos ter de
petrleo, ya haciendo los lavados se dejara en reposo con
sulfato de sodio que funciona como absorbente, en ese tiempo
del reposo se har una suspensin preparada con gel de slice y
acetato de etilo, se preparan 10 placas que cada una ser para
cada disolvente. Ya habiendo reposado un cierto tiempo vamos a
filtrar el extracto de la espinaca, puntearemos las placas y
dejaremos que cada disolvente suba por la placa. Elegimos los
eluyente correspondientes para volver hacer cromatografa en
capa fina, as podemos elegir el eluyente ms adecuado para
seguir con la cromatografa en columna; empacamos la columna
adecuadamente (hexano, algodn, gel de slice para columna,
sal, pigmento vegetal y la mezcla de eluyentes ya elegida
posteriormente) esperamos que el pigmento baje a punto de
salir de la columna para poder colocar un mililitro en los tubos
de ensayo para volver a hacer la cromatografa en capa fina
punteando en cada placa el extracto principal y el extracto
obtenido por la cromatografa en columna que se encuentra en
los tubos de ensayos ya terminado esto solo seleccionamos el
eluyente ms adecuado.
Abstric
We have spinach which we are going to extract its pigment by
the maceration method without adding some solvent until
having it in a way as we add acetone to begin to dissolve it
more, we add it to a funnel of decanting where already later we
add ether of petroleum, already doing The washes are allowed
to stand with sodium sulfate as an absorbent, at which time a
suspension prepared with silica gel and ethyl acetate is made,
10 plates are prepared which will each be for each solvent.
Having rested for some time we will filter the extract of the
spinach, we will tap the plates and let each solvent go up the
plate. We choose the corresponding eluent to return to make
thin layer chromatography, so we can choose the most suitable
eluent to continue with column chromatography; We packed the
column properly (hexane, cotton, silica gel for column, salt,
vegetable pigment and the eluent mixture already chosen later)
we expect the pigment to come down from the column in order
to place a milliliter in the test tubes To re-do the thin layer
chromatography by puncturing in each plate the main extract
and the extract obtained by the column chromatography that is
in the finished test tubes, this only selects the most suitable
eluent.
Objetivos
Extraer los pigmentos de un producto natural asignado
(espinaca) haciendo uso de la tcnica de ms adecuado.
Elegir mediante la capa fina el eluyente o mezcla del eluyente
para separacin los diferentes pigmentos de la espinaca por
cromatografa.
Verificar en la cromatografa capa fina que se logr la
separacin de pigmentos en cromatografa de columna.

Hiptesis
Se seleccionar un buen sistema de eluccin a partir de la
cromatografa en capa fina por lo tanto se obtendr los
compontes vegetales (clorofilo) de la espinaca promedio de la
cromatografa en columna.

Antecedentes:
Un rasgo caracterstico de la cromatografa es la presencia de dos fases;
dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del
sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de l (fase mvil). La
clave de la separacin en cromatografa es que la velocidad con la que se
mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases
(equilibrio de distribucin). En el experimento de Tswett, la separacin de los
pigmentos vegetales se logr gracias a que cada uno de ellos tena una
afinidad diferente por las fases. En general, los componentes ms afines a la
fase estacionaria avanzan lentamente (ms retenidos) mientras que los ms
afines a la fase mvil (menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por
consecuencia, el medio cromatogrfico (columna, placa o papel) funciona como
un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla,
logrando as su separacin y mediante el uso de un detector, su caracterizacin
qumica. Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra
clasificar los mtodos cromatogrficos segn el estado fsico de la fase mvil:
Cromatografa lquida. La fase mvil es un disolvente o mezcla de disolventes y
la fase estacionaria un slido que interacta con las sustancias que se desea
separar (cromatografa lquido-slido), o bien un lquido inmiscible con la fase
mvil, depositado en la superficie de un slido (cromatografa lquido-lquido).
Esta forma de cromatografa puede realizarse con diferentes arreglos
experimentales: en columna, en capa delgada o en papel. En el primer caso, la
fase estacionaria se encuentra rellenando un tubo; en el segundo, se dispersa
sobre una lmina de vidrio o aluminio formando un lecho de espesor uniforme;
en la cromatografa en papel, la fase estacionaria es la solucin acuosa
contenida en el interior de las celdas formadas por las fibras de la celulosa, y
es por tanto una forma de cromatografa lquido-lquido Cromatografa de
gases. En este caso la fase mvil es un gas inerte (helio o nitrgeno) y la fase
estacionaria es un slido (cromatografa gas-slido) o un lquido sostenido
por un slido inerte (cromatografa gas-lquido). Este tipo de cromatografa
siempre es en columna, ya que es la nica manera de que la fase mvil
gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La columna
puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la
cromatografa lquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las
paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de dimetro) y largo (hasta 100m).
Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la
mayor capacidad de separacin. De acuerdo con el mecanismo de retencin, la
cromatografa se puede clasificar en los siguientes tipos:

adsorcin (normal, de fase reversa)

particin lquido-lquido
intercambio inico
permeacin sobre gel
de afinidad

Las reas de aplicacin son muy diversas y abarcan prcticamente todas las
actividades en las que interviene la qumica, por ejemplo: se emplea en: El
anlisis de drogas y frmacos en fluidos biolgicos como la saliva, la sangre, la
orina; Seguir la transformacin de las sustancias responsables de la
transmisin neurolgica; Determinar la presencia de contaminantes en el
medio ambiente; Descifrar la composicin de los combustibles fsiles; Realizar
el control de calidad de los productos qumicos y farmacuticos
manufacturados; en fin, la lista de ejemplos es interminable.

Cromatografa en capa fina

La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa,

uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro
soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio,
un dispositivo que mantenga las placas durante la extensin, otro para aplicar
la capa de adsorbente, y una cmara en la que se desarrollen las placas
cubiertas. Es preciso tambin poder guardar con facilidad las placas
preparadas y una estufa para activarlas. La fase mvil es lquida y la fase
estacionaria consiste en un slido. La fase estacionaria ser un componente
polar y el eluyente ser por lo general menos polar que la fase estacionaria, de
forma que los componentes que se desplacen con mayor velocidad sern los
menos polares. Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente:

hidrocarburos < olefinas < flor < cloro < nitro < aldehdo < ester < alcohol <
cetonas < aminas < cidos < amidas

La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros

mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el
utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir
las separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor.
Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el
cromatograma. El mtodo es simple y los resultados son fcilmente
reproducibles, lo que hace que sea un mtodo adecuado para fines analticos.

Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao de las

partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est mayor ser su
adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir un adherente. En la
eleccin del eluyente influyen varios factores:

Precio.
Pureza.
No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
No utilizar compuestos muy voltiles.
Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).
La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la
polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.

Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos

coloreados con los componentes orgnicos (con tonos amarillo-marrn), pero
las manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente sealar las
manchas aparecidas. Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido
sulfrico, que reacciona con los componentes orgnicos produciendo manchas
negras. Sin embargo debe tenerse en cuenta que el tamao de las manchas no
est relacionado con la cantidad de componente separado.
Para mejor claridad vamos hacer de manera individual cada proceso
para llevar acabo la cromatografa.
Proceso 1.
Material Reactivos
Mortero con pistilo ter de petrleo
Probeta de 50mL Acetona
Embudo de decantacin Sulfato de Sodio
300mL
Soporte Universal
Anillo de hierro
Embudo de tallo corto
Matraz Erlenmeyer 125mL
Frasco de vidrio

Pasos a seguir:
1. Pesar 20gramos de
espinaca ya limpia y seca.
Observar la ilustracin 1

Ilustracin 1
2. Empezar a macerar la
espinaca sin ningn
disolvente.
Observar la ilustracin 2

Ilustracin 2
3. Agregar 50mL de acetona
al mortero.
Observar la ilustracin 3

Ilustracin 3
 4. En el embudo de
decantacin el ter de
petrleo 100mL .

Observar la ilustracin 4

Ilustracin 4
5. Filtramos el extracto
(acetona y espinaca) y lo
vertimos en el embudo de
decantacin.
Observar la ilustracin 5

Ilustracin 5
6. Mezclarlo de forma que al
terminar se pueda
distinguir el extracto.

Observar la ilustracin 6

Ilustracin 6
7. Volver a hacerlo ahora con
dos lavados de 25mL de
acetona.

Observar la ilustracin 7

Ilustracin 7
8. Al extracto ya recuperado se le agregar sulfato de sodio el
cual servir como desecante, pero este se dejar reposar por
unos das asegurndose que donde se coloca este cubierto por
papel aluminio.

Preparacin de las placas para la cromatografa en capa fina.

 Material Reactivos
Frasco Transparente Gel de Slice para capa fina
Porta Objetos ter de petrleo
Papel aluminio Hexano
Papel Filtro Tolueno
Pipeta Graduada 10mL Benceno
Capilares Cloroformo
Cloruro de etileno
Acetato de etilo
Acetona
Etanol
Metanol

Cmo se prepara?
1) En el frasco colocar acetato de etilo y gel de slice tapar y
agitar bien para que los componentes se incorporen de
manera homognea.
2) Meteremos las placas
dejando libre
aproximadamente 1 cm las
limpiamos de los lados y el
extremo (Metemos dos
Ilustracin 8 placas al ingresarlas al
frasco).
Observar la ilustracin 8
3) Lo colocamos dentro de la
estufa para activar las
placas por 30 min.

Observar la ilustracin 9
Ilustracin 9
4) Filtramos el extracto que
dejamos reposado con el
sulfato de sodio. Observar
la ilustracin10

Ilustracin 10
5) Punteamos las placas con
el extracto de manera que
no se expanda el punto en
la placa.
Observar la ilustracin 11

Ilustracin 11
 6) Lo adentramos a los 10
cmaras cada una con
10mL de cada sustancia.
Observar la ilustracin 12

Ilustracin 12
7) Antes que el disolvente
llegue al final del gel de
slice debemos sacar la
placa.
Observar la ilustracin 13

Ilustracin 13
8) Elegimos algunos disolventes para poder mezclaros de los
cuales tenemos que guiarnos por la polaridad de la sustancia
para volver hacer la cromatografa en capa fina y poder elegir
el ms adecuado. Observar la ilustracin 14

Ilustracin 14
Las combinaciones adecuadas son las siguientes:
ter de petrleo + Acetona
Hexano + Acetato de etilo
El cual se harn las siguientes mezclas
(5+5), (9+1), (1+9), (8+2), (2+8), (7+3), (3+7), (6+4) y (4+6)
Resultados de ter de Petrleo ms acetona. Observar la
ilustracin 15

Ilustracin 15

Resultados de Hexano y Acetato de etilo. Observar la

ilustracin 16

Ilustracin 16

Con los resultados que obtuvimos decidimos utilizar a mezcla de 7

hexano + 3 acetato de etilo. Ya con esto podemos iniciar la
cromatografa en columna. Observar la ilustracin 17
 Ilustracin 17

Cromatografa en Columna
Material Reactivos
Bureta Sal
Matraz Erlenmeyer Hexano
Algodn Acetato de etilo
Vidrio de Reloj Gel de slice para columna
Matraz de bola
Embudo
Esptula
Varilla
Pipeta
Gradilla
Tubos de ensayo

El proceso a seguir es el siguiente:

A. Colocar el disolvente menos
polar (hexano) para sacar el
aire de la punta de la bureta.
Observar la ilustracin 18

Ilustracin 18
 B. Se adentra un pedazo
de algodn sin dejar
alguna burbuja de
aire.
Observar la ilustracin
19

Ilustracin 19
C. Se pesa 12 gramos de gel de
slice en columna.
Observar la ilustracin 20

Ilustracin 20
D. En el matraz de bola de 100mL se agrega el gel de slice y
hexano aproximadamente medio dedo arriba del gel de slice.
Con ayuda de un embudo lo
agregamos con una constante
agitacin.
Observar la ilustracin 21

Ilustracin 21
E. Agregamos hexano
para quitar los
residuos de las
paredes.
Observar la ilustracin
22

Ilustracin 22
F. Agregamos a prximamente
3cm de sal.
Observar la ilustracin 23

Ilustracin 23
G. Colocamos de nuevo
hexano, pero lo
volvemos a quitar
goteo por goteo.
Observar la ilustracin
24
Ilustracin 24
H. Sin dejar saca la sal pero si con un mnimo volumen de
hexano.
 La ilustracin I. Colocar 2mL del
27 nos muestra extracto alrededor de
como el toda la sal.
Observar la ilustracin
extracto
25
recorrer por
toda la bureta Ilustracin 25
hasta llegar al la mezcla (hexano-
J. Vertimos
acetato de etilo) en la bureta y
se volver a dejar en el goteo.
Observar la ilustracin 26

Ilustracin 26

Ilustracin 27
K. Cuando el extracto
llega al final
empezamos a extraer
1mL en los tubos de
ensayo.
Observar la ilustracin
Ilustracin 28 28
De nuevo realizaremos cromatografa en capa fina, pero comparando
el extracto original y lo obtenido en la cromatografa en columna.
Estos fueron los resultados:
 Ilustracin 29

Observar la ilustracin
29 del lado derecho se
encuentra el punteo de
los tubos de ensayo y del
lado izquierdo el punteo
del extracto original.
CUESTIONARIO DE CROMATOGRAFA
A qu grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?
Carotenoides y xantofilas.
A qu se debe que estos compuestos sean coloridos?
Carotenoides: son los responsables de la gran mayora de los colores amarillos, anaranjados y rojos pres
entes en los alimentos vegetales. Entre mayor sea la intensidad de
color, mayor ser el contenido de carotenoides.
Xantofilas: son compuestos qumicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o ms
tomos de oxgeno en su estructura. Se encuentran de forma natural en muchas plantas y presentan tam
bin accin fotosinttica. Estos pigmentos, ms resistentes a la oxidacin que las clorofilas, proporcionan
sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas.
Explique la diferencia entre cromatografa de adsorcin y particin.
Cromatografa de particin: La mayora de las sustancias tendrn distinta solubilidad en diferentes solve
ntes. Si una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se mezclan entre s, se distribuir e
ntre los dos solventes en relacin a su solubilidad en cada uno. Se llama efecto de particin a la distribuci
n de un soluto entre dos o ms solventes que no se mezclan. El solvente o el lquido que es atrapado po
r el medio del sostn sea este papel, gel, slice o almina, se llama fase estacionaria. Al solvente revelad
or se le llama fase mvil.
Cromatografa de adsorcin: La cromatografa de adsorcin o liquido-slido, es la forma clsica de croma
tografa de lquidos. La adsorcin se lleva a cabo cuando hay una concentracin ms alta en la superficie
de un slido que en la solucin circundante. La adsorcin se refiere al enlace de una sustancia a la superf
icie de otra. Generalmente los adsorbentes usados en cromatografa son el carbn mineral, el gel de slic
e, y la almina.
Cules son las ventajas y desventajas de la cromatografa en capa fina en comparacin co
n la cromatografa en columna?
Cromatografa en columna: Las separaciones en la cromatografa en columna pueden realizarse por repa
rto, adsorcin o intercambio inico. El estado fsico del adsorbente ha de ser de tal manera que
permita el empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a travs de ella.
Cromatografa en capa fina: Cromatografa en papel y electro cromatografa. En todos los casos se emple
a una capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien que recubre u
na superficie de vidrio, plstico o metlica. La fase mvil se mueve a travs de la fase estacionaria por ca
pilaridad, a veces ayudada por gravedad o por aplicacin de un potencial elctrico. En la actualidad la cro
matografa en plano se centra en la tcnica de la capa fina, que es ms rpida, tiene mejor
resolucin y es ms sensible que su alternativa en papel.

Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografa en capa delg
ada y el de columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad.

En columna: Puede usarse cualquier medio adsorbente siendo los ms generales la

celulosa,gel de slice, almina oxido de magnesio, oxido de clcico y carbn activo (para
separaciones por adsorcin y de intercambio inico). Se emplea para la separacin de mezclas o pur
ificacin de sustancias a escala preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sli
ce o almina dentro de una columna. La eleccin del disolvente es crucial para una buena separaci
n. Dicho disolvente pasa a travs de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de pr
esin (cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente

Capa delgada
Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
xido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica)
Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
Poliamidas
Estos adsorbentes deben tener las siguientes caractersticas:
o Tamao de partcula pequeo
o Dimetro de poro grande
o rea superficial grande
o Homogeneidad
o Alta pureza
Hacer una lista de los eluyentes usados comn menteen cromatografa en columna y capa
delgada en orden creciente de polaridad
Cloruro de metilo
ter de petrleo
Acetato de etilo
Hexano
Acetona
Tolueno
Etanol
Benceno
Metanol
Cloroformo

Lista de la capacidad de adsorcin de los grps. funcionales de los

compuestos orgnicos
COOH >OH >NH 2>SH >CHOC=O>COOR>OCH 3 >CH =CH

Qu compuesto es ms retenido una amina o un alqueno, ejemplifique en un

a capa Cromatogrfica?
Un alqueno, por su polaridad
Cmo se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca?
Se le aplica calor para as poder romperlo cuidando que quede un orificio no muy grande.
Por qu es necesario que la cmara de elusin est saturada con los
vapores deleluyente?
Por que as ser ms fcil el arrastre de los pigmentos y no se secar la placa
Explique cada uno de los siguientes trminos:
Eluyente: solvente que se usa en tcnicas de cromatografa para extraer un compuesto que se quier
e separar de otra fase.
Eluato: la sustancia que se separa o sale de la columna despus de cada extraccin.
Elucin fraccionada: Aparato de elucin fraccionada electrofortico tiene una columna con una
rotacin conjunta de sello en el que un delgado chorro de elucin bfer es dirigido a travs de la luz de la
columna electrofortica en una direccin perpendicular a la de migracin electrofortica. El contenido de l
a columna se gira en relacin con el jet estacionario o se gira el jet con respecto a la columna. El sistema
puede emplear electroforesis en solucin libre o en columnas empaquetadas.
Adsorcin: Es un proceso por el cual tomos, iones o molculas son atrapados o retenidos en la su
perficie de otra sustancia o material.
Particin: La separacin se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla
en las fases estacionaria y mvil.
Elucin: se produce por el flujo de una fase mvil a travs de la fase estacionaria.
Adsorbente: es un slido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente pres
ente en corrientes lquidas o gaseosas. Se caracteriza por una alta superficie especfica y por su inercia
qumica frente al medio en el que se va a utilizar.
Actividad del adsorbente: El nivel de actividad de la adsorcin depende de la concentracin de la s
ustancia en la solucin, la temperatura y la polaridad de la sustancia.
Afinidad por el adsorbente: es que la sustancia ceda a la capacidad de capilaridad del adsorbente
y eluya a travs de l.
Cmo se clasifica la cromatografa en funcin de su fase estacionaria?
Naturaleza de la fase Clasificacion
estacionaria
Naturaleza de La fase Liquido Lquido-lquido: particin
Lquido-slido: adsorcin, cambio
movil inico, exclusin,afinidad
Gas Gas-lquido (CGL)
Gas-slido (CGS)

Cul es la funcin de la fase mvil y como se lleva a cabo la separacin en la cromatograf

a de adsorcin?

Su funcin es eluir los componentes de la mezcla a separar a travs de la fase estacionaria. La crom
atografa de adsorcin se lleva a cabo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observar l
a elucin de los componentes de la mezcla, los cuales sern eluidos por el disolvente, que es la fase
mvil.

Cmo se prepara la papilla para la cromatografa en capa fina?, por lo menos dos
mtodos.

Se machaca con ayuda de un mortero y pistilo hasta hacer polvo la slica, luego se aade el disolvent
e. Tambin se puede hacer en un vaso de precipitados y con una varilla de vidrio, agitando constante
mente hasta formar la papilla.

Cundo es conveniente activar una placa y cmo se activa?

Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que
acta como una impureza y evita una buena separacin. La magnitud de calor depende del tipo
de separacin que se requiere para compuestos hidrfilos o polares, el secado al aire o con un secad
or de pelo son generalmente suficiente; para los compuestos hidrofbicos o no polares es necesario
un calentamiento ms intenso. Las placas de xido de aluminio y de gel de slice con adhesivo requie
ren ser secadas al aire durante aproximadamente 30 min. Y despus ser activadas en un horno a 10
0C alrededor de 30 min. Las placas de celulosa debern secarse al aire libre durante 30 min. y
activarse al horno durante 10 min. a 105C.

Qu espesor debe tener la fase estacionaria en una C.C.D.?

No debe ser espesa ni muy aguada, debe deslizarse solo por la placa al momento de prepararla.

Al comparar los Rf de dos componentes se encontr que eran iguales, podra pensars
e que se trata del mismo compuesto? Explique brevemente.

Si, esto se concluye debido a que si ambos componentes eluyen de la misma manera, significa
que tienen una polaridad muy semejante, por lo tanto podra inferirse que se trata del mismo
componente.

Explique brevemente si existe una relacin entre la cantidad de adsorbente y las dimension
es de la columna para una mezcla.

Entre ms grande sea una columna, ms adsorbente se necesitar, esto para observar mejor la sepa
racin de los componentes; adems de necesitar ms disolvente para continuar la elucin y evitar la
sequedad del sistema.

Cmo debe de ser la polaridad del eluyente al empacar una columna?

 La polaridad del eluyente debe ser mayor

Con relacin al R x : Cundo se usa el R x en cromatografa en capa delgada?

Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad conocida, y por lo tanto elusin conocida, que
se pueda usar como referencia en la C.C.D.

Qu significa la obtencin de R x igual a uno?

Que el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso hasta mayor la de este ltimo.

Cul es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografa en

columna?

En la cromatografa de columna las molculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de
las molculas por la fase estacionaria o por la fase mvil. Si una molcula A tiene ms afinidad por la
fase estacionaria que la B, B bajar ms rpido que A.

ter de petrleo
Hexano
Tolueno
Benceno
Cloroformo
Cloruro de metilo
Acetato de etilo
Acetona
Etanol
Metanol

A qu se le llama frente del eluyente en cromatografa en capa

delgada? Demustrelo en una placa.

Es la lnea donde acaba la elusin, si se rebasa dicha lnea se corre el rie

sgo de que los componentes separados se esparzan a lo largo de la
parte posterior de la placa.

Cmo se controla la salida de los componentes en una cromatografa

en columna?

Se controla con la llave de la bureta, se va colocando los distintos

pigmentos en tubos de ensayo, a los que se les denominar como
fracciones.

Por qu no debe dejarse secar la columna cromatografa? En caso de

que se fracture
qu se recomienda hacer?

Porque de no ser as la fase estacionaria se contraera y agrietara. Se de

be

rehidratar conms eluyente si esto ocurre.

Por qu es importante que las muestras a separar por cromatografa

deban estar lo

ms secas posible?

Para que no interfiera el agua con la elucin, por medio del disolvente, d
e los

componentes de la muestra.

Por qu al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la

mnima cantidad de disolvente?

Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de

3a

4mL/min. en una columna de 40 cm de altura aprox.

Qu pH presenta la almina? Mencione los tres casos.

Presenta tres pH: almina cida pH de 4.5, almina bsica pH de 10.0 y

almina neutra pH de 8.0.

Por qu cuando se usa almina como adsorbente no se recomienda

usar acetona como eluyente?

Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna.

Cules son los pasos a seguir para la preparacin de una placa

preparativa?

Las separaciones en capa fina caractersticas se realizan en placas de vi

drio o

plstico que se recubren con una capa delgada y adherente de partcula

s finamente divididas, esta capa constituye Ia fase estacionaria. Las part
culas son semejantes a Ias de Ia cromatografa en columna. Las capas fi
nas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas
simplemente.
Cul es la aplicacin de la cromatografa en placa preparativa?

La eleccin de un eluyente ideal para cromatografa en columna.

Qu diferencia existe entre cromatografa en capa delgada analtica

y cromatografa

en placa preparativa?

La preparativa se emplea generalmente para elegir un eluyente o mezcl

a de

eluyentes ideal para cromatografa en columna. La analtica ya cuenta c

on un eluyente ideal y registra Rx es decir, se analiza la elusin de los
componentes para arrojar un valor numrico final.

Cmo se clasifican los reveladores en forma general?

Qumicos y fsicos.

Cuando una sustancia orgnica no se revela con I2 o luz UV, qu ot

ros reveladores pueden usarse para observar la sustancia?

Con reveladores qumicos especficos para los componentes separados.