La cra inducida y la cra de larvas

de Surub', Pseudoplatystoma
fasciatum (Linnaeus, 1766), de la
Amazona boliviana

Resumen.
Los brooderos de Surub (Pseudoplatystoma fasciatum) fueron capturados en el ro Ichillo (Amazona
boliviana) y adaptados a condiciones de cautiverio durante 1 ao en las instalaciones de la estacin
experimental de acuicultura de El Prado (Santa Cruz de la Sierra) a temperatura natural Y condiciones
de fotoperiodo. La reproduccin inducida se obtuvo mediante inyecciones de Ovaprims (Syndel,
Canad) y fertilizacin artificial. Los espermatozoides y los vulos se obtuvieron mediante la
separacin suave de criadores machos y hembras. Los huevos fertilizados se incubaron en frascos de
Zug de 60 l. Una media de eclosin de 73,7? Se obtuvo 19,0% despus de 24 h a 26,5C. Para la cra de
larvas, se probaron varios protocolos con diferentes ajustes de fotoperodo, intensidad de luz, tipo de
alimento y perodo de distribucin, y densidad de poblacin.
Las mejores tasas de supervivencia se obtuvieron con nauplios de Artemia alimentndose en total
oscuridad. Se observ un alto nivel de agresividad entre larvas y aparicin precoz de puentes, pero
estos pueden ser controlados con condiciones de cra apropiadas.

introduccion
A pesar de las denuncias de sobreexplotacin de algunas de las especies ms importantes (Reinert &
Winter 2002, Petrere, Barthem, Cocha, Almeida, McGrath & Ru / no, 2001; Rdoba & Gomez 2004).
En este contexto, el desarrollo de la acuicultura es una alternativa viable a la pesca de captura para
proporcionar una fuente sostenible de protenas para las comunidades de pescadores locales y las
poblaciones de las ciudades en desarrollo en la regin del Amazonas. Actualmente, los peces
comercializables de agua dulce en esta zona provienen de la captura continental (667000 TM para
2005) y de la acuicultura (246 000 MT) (FAO 2005; Ru / no 2005). En algunos casos, la necesidad de
sistemas de produccin rpida ha fomentado la introduccin de especies exticas "listas para usar",
esencialmente las tilapias, carpas y bagres africanos (Welcomme 1988), pero a costa de las cuestiones
ambientales relativas a la biodiversidad. El cultivo de especies amaznicas de importancia econmica
debe ser considerado para ofrecer una alternativa a la introduccin de especies exticas en la cuenca
amaznica.
La Amazona boliviana representa un gran potencial para la cra de peces, especialmente en sus partes
norte y centro, donde las altas temperaturas y la buena calidad del agua estn disponibles durante todo
el ao. Uno de los factores limitantes del desarrollo del cultivo de peces es la falta de produccin
sostenida de alevines para las especies comerciales importantes. Dentro de la familia de bagres
Pimelodidae, tres especies, Pseudoplatystoma fasciatum, P. tigrinum y P. coruscans, comparten
caractersticas muy similares y constituyen importantes recursos pesqueros comerciales en el
Amazonas y regiones adyacentes (Almeida 2006). Pseudoplatystoma fasciatum y P. tigrinum ocurren
en toda la cuenca del Amazonas y en la Amazona boliviana (Loubens & Pan li 2000), mientras que P.
coruscans se distribuye en las Cuencas del Ro Sao Francisco y R | o de la Plata (Barthem & Goulding
1997, Tavares 1997). Recientemente, el gnero Pseudoplatystoma se ha subdividido en ocho especies,
tres largamente reconocidas y cinco nuevas especies: P. punctifer (Castelnau), P. reticulatum
Eigenmann & Eigenmann, P. orinocoense n. Sp., P. metaense n. Sp. Y P. magdaleniatum n. (Buitrago ^
Suarez & Burr 2007). Segn la distribucin geogrfica de las especies descritas, la especie estudiada
aqu sera P. punctifer. Sin embargo, en este trabajo, continuaremos usando el nombre anterior, P.
fasciatum, por razones de consistencia con estudios previos sobre la misma especie en la regin. Estos
Pimelodidae se encuentran entre las especies de bagres ms apreciadas y caras en los mercados de
pescado de Amrica del Sur. Debido a la creciente demanda de estas especies, se han emprendido
varios intentos de reproduccin artificial con P. fasciatum (Kossowski y Madrid 1985, Rodrguez,
1996, Padilla Prez, Alca- ntara Bocanegra & Ismino Orbe, 2001, Gervasio Leonardo, Romagosa,
Borella & Batlouni 2004) y P. coruscans (Sato, Cardoso, Sallum & Godinho 1997). Sin embargo, todos
estos estudios informaron bajas tasas de supervivencia de larvas, por lo que la produccin en masa de
alevines no es una realidad comn para estas especies. Adems, estos primeros experimentos pusieron
de manifiesto el alto nivel de agresividad y canibalismo entre larvas de P. fasciatum (Kossowski &
Madrid 1985, Kossowski & Madrid 1991, Kossowski 1996). El comportamiento agresivo de la mayora
de las etapas larvarias de los bagres (Britz & Pienaar, 1992) es uno de los principales factores que
afectan la mortalidad de las larvas (Appelbaum et al. Kamler 2000). El canibalismo es frecuente entre
las larvas de peces cultivados, especialmente en especies piscivorosas, que desarrollan un amplio gape
y dientes bucales en una edad precoz (Baras y Jobling 2002). Entre los factores que rigen el impacto
del canibalismo en los peces, la heterogeneidad del tamao es probablemente la ms llamativa (Qin &
Fast, 1996), Kestemont, Jourdan, Houbart, Melard, Paspatis, Fontaine, Cuvier, Kentouri & Baras, 2003,
Hseu, Huang & Chu 2007, Mandiki, Babiak, Krol, Rasolo & Kestemont, 2007). Otros factores que
modulan el canibalismo, ya sea directa o indirectamente a travs de un aumento de la heterogeneidad
del tamao, incluyen el medio ambiente de alimentacin, la densidad de cra, la temperatura del agua,
el rgimen de luz y la intensidad (Boeuf et al. La cantidad y calidad (o tipo) de alimento y su
disponibilidad tienen una evidencia evidente sobre la supervivencia larvaria y el canibalismo porque la
falta de saciedad o una deficiencia nutricional exacerba este comportamiento natural (Qin & Fast
1996). Si el perodo de alimentacin y la frecuencia de las comidas pueden influir en la supervivencia
de las larvas, tambin se ha informado en varias especies que la duracin de la fase de luz puede influir
directamente en el comportamiento canibal (Appelbaum & Kamler 2000). El presente estudio tiene
como objetivo proporcionar (1) bases ms confiables para la reproduccin inducida hormonalmente de
P. fasciatum, (2) una mejor caracterizacin del efecto de los factores biticos y abiticos en condiciones
larvarias de cra intensiva y (3) la identificacin de alimentos apropiados Y regmenes de alimentacin
para maximizar la supervivencia y crecimiento de las larvas. Se desarroll una metodologa para la cra
inducida de P. fasciatum y tres fuentes diarias de alimento para la primera alimentacin de larvas:
nuplios de Artemia, quistes de Artemia decapsulados y zooplancton de estanque de tierra. Como P.
fasciatum es un animal nocturno, alimentndose principalmente durante la noche, investigamos en
paralelo la influencia de tres factores ambientales importantes (rgimen de luz e intensidad, densidad
de poblacin y perodo de alimentacin) sobre la supervivencia, el crecimiento y la heterogeneidad de
tamao de las larvas.

material y mtodos
Cra de peces
Cincuenta peces de 2 a 12 kg fueron capturados con redes y anzuelo y lnea por pescadores locales en
2002 en el ro Ichilo y sus afluentes (Fig. 1) cerca de Puerto Villaroel
(161520 S, 641460 W). Los peces fueron transportados en tanques aireados a las instalaciones de la
estacin de investigacin 'El Prado', a unos 150 km al sur de su lugar de captura, etiquetados
individualmente con etiquetas PIT y transferidos a 2000 m2 de estanques al aire libre para
aclimatacin. Durante el ao siguiente, los criadores de Surub | fueron criados a una baja densidad de
poblacin (1 pez por 40 m2) y alimentados con hgado de cerdo y hgado de carne viva (Prochilodus
nigricans, Aequidens sp.) Y pienso comercial peletizado.

Seleccin masculina y femenina

Durante la temporada reproductiva (de noviembre a marzo), se verific la madurez sexual de cada
reproductor cada mes despus de la anestesia en 2-fenoxietanol (0,4 mL L 1) para minimizar el
traumatismo en el fishel y los operadores (Surubin posee pectorales fuertes). Para los machos, la
emisin de espermatozoides despus de la suave presin abdominal se verific. La madurez de las
hembras se determin mediante el examen de las muestras foliculares tomadas por una biopsia
intraovrica. Las muestras ovricas se colocaron en solucin salina fisiolgica y se observaron bajo el
estereomicroscopio (magnificacin? 20) para determinar la proporcin de ovocitos atreticos. A
continuacin, se retir la solucin salina y se aadi la solucin de Serra para examinar la posicin de
la vescula germinal. Se conserv una submuestra (que contena al menos 50 oocitos) de cada biopsia
durante 24 h en solucin salina fisiolgica con formalina al 2% y se fotografi bajo el
estereomicroscopio. Las distribuciones de dimetro de ovocitos se determinaron a partir de fotografas
digitales, utilizando el paquete de software IMAGE J (NIH). Para cada hembra, se calcul el dimetro
medio de ovocitos y su coeficiente de variacin.

Slo los machos que daban esperma despus de un suave masaje abdominal fueron inyectados con
Ovaprim (Syndel, Qualicum Beach, Canad).
Tratamiento hormonal, fertilizacin artificial e incubacin
Las hembras fueron inyectadas intraperitonealmente con Ovaprim a una dosis total de 0,5 ml kg \ Delta
1 de peso corporal, administrada como dos inyecciones; Una cebadura al 10% de la dosis total y, 12 h
despus, una solucin al 90% de la dosis total. Las hembras fueron examinadas individualmente por un
suave masaje abdominal comenzando 6 h despus de la segunda inyeccin, y luego cada hora hasta la
ovulacin. Cuando los huevos ovulados estaban presentes, la hembra se despoj despus de secar la
papila con una toalla de papel y los vulos se recogieron en recipientes de plstico secos.
Los machos fueron tratados con el 50% de la dosis total femenina en una sola inyeccin administrada
al mismo tiempo que la inyeccin de cebado femenino. Los espermatozoides se recogieron en jeringas
limpias y secas antes del primer chequeo femenino para fertilizar los huevos ovulados directamente
despus de su recoleccin. Las fracciones de esperma se almacenaron en hielo en tubos de ensayo
secos y limpios. Una muestra de cada fraccin de esperma recogida se ensay en cuanto a motilidad
antes de ser utilizada para
Fertilizacin artificial. La prueba de rutina consisti en la observacin bajo un microscopio (aumento \
Delta 400) de activacin de esperma despus de una dilucin 1: 100 en agua destilada.
Los lotes de huevos ovulados (100 g) se mezclaron suavemente con 5 ml de NaCl 0,154 M y 200 ml de
leche durante 60 s, y despus se aadieron 30 ml de agua destilada con agitacin suave constante
durante otros 60 s. Los huevos fertilizados se enjuagaron tres veces con 100 ml de agua del circuito de
incubacin, y luego se transfirieron a recipientes cilndricos cnicos de Zug de 60 l en un sistema de
agua recirculante y termorregulado (26,5 \ sim 2,0 1C). En el resto del manuscrito, nos referimos a la
edad de los peces por referencia al momento de la eclosin (es decir, horas o das despus de la
eclosin, hph y dph, respectivamente), que tuvo lugar 24 h despus de la fecundacin. A 24 hph, los
embriones se recogieron, se contaron por un mtodo volumtrico y se distribuyeron en tanques de 60 l
en un sistema de agua de recirculacin termorregulada (temperatura media de 26,5 2,0 lC). La
distribucin de alimentos se inici generalmente a 4 dph.
Efectos del tipo de alimento sobre el crecimiento y la supervivencia de las larvas
Se probaron tres tipos de alimentos diarios: quistes decapsulados de camarones de salmuera, nauplios
de camarn de salmuera y zooplancton natural. El zooplancton natural (principalmente Moina y
coppodos) fue proporcionado por el bombeo continuo de agua de un estanque enriquecido en plancton
en las proximidades de los tanques experimentales. El agua fue filtrada a travs de una malla de 200
mm para evitar la entrada de larvas de insectos en los tanques experimentales . Todas las dietas se
distribuyeron en exceso (controlando la presencia de alimentos vivos 30 minutos despus de la
distribucin) cinco veces al da (8:00, 10:00, 12:00, 14:00 y 6:00 horas). Los ensayos de comparacin
de alimentos se realizaron utilizando 100 larvas de Surubin de hermano completo de 4 dph. Las larvas
se contaron y se distribuyeron en nueve tanques circulares de 60 litros (tres repeticiones por tipo de
alimento) conectados a un sistema de recirculacin de agua (60 L h? 1) (para quistes de Artemia y
tratamientos de nauplios) o agua de estanque a 60 L h \ Tratamiento natural del zooplancton). Las
concentraciones de amonaco y nitrito fueron monitoreadas durante el experimento y nunca excedieron
0.3 y 0.05 mg L? 1 de N ^ NH _ {4} y N _ {2} NO _ {2}, respectivamente. La temperatura media se
mantuvo casi constante a 27,0 \ 1,2 1C durante el experimento y as fue el oxgeno disuelto (entre 8 y 9
mg L \ Delta 1) por aireacin continua. El experimento se realiz bajo un fotoperodo natural: 12 h de
luz y 12 h de oscuridad (12L: 12D). Se realizaron tres controles a 15, 28 y 35 dph para determinar las
tasas de supervivencia; Longitud estndar se midi slo a 28 dph por anlisis de imagen.

Efectos de la intensidad de la luz en el crecimiento y Supervivencia de las larvas

En su medio natural, el Surubin, P. fasciatum, se conoce como peces de alimentacin nocturnos
(fototaxis negativo). Se observ que las larvas se convirtieron en fotofbicas muy rpidamente despus
de la absorcin del saco vitelino cuando adquirieron las capacidades de natacin. Por esta razn, hemos
probado tres niveles de intensidad de luz durante la crianza de larvas (o0.01, 1 y 10 lx),
correspondientes a luz oscura, sombreada y baja, respectivamente, bajo un rgimen de fotoperiodo 12L:
12D (excepto 24 h Oscuro tratamiento). No se prob ninguna intensidad de luz ms brillante que 10 lx
para evitar una tensin adicional debido a una intensidad de luz excesiva.
Doce series de 1900 larvas de 2 dph fueron distribuidas en doce tanques de 60 L (tres tratamientos con
cuatro repeticiones). La temperatura promedio en los tanques fue de 28,5? 1,0 1C. Todos los tanques
recibieron la misma cantidad de alimentos en ligero exceso (nauplios de Artemia), distribuidos seis
veces al da (3:00, 7:00, 11:00, 15:00, 19:00 y 21:00 horas), con la mitad de control Una hora despus
de cada distribucin para asegurarse de que el nmero de presas disponibles estaba en exceso. A 9 dph,
las larvas fueron muestreadas para la supervivencia y la determinacin del tamao mediante el anlisis
de imgenes.

Efectos de la densidad de poblacin sobre el crecimiento y Supervivencia de larvas.

Se evaluaron tres densidades de poblacin utilizando pasos (casi) logartmicos entre densidades (es
decir, 10, 30, 100 larvas L \ beta 1). Se evaluaron dos regmenes de luz (12L: 12D y 0L: 24D) para
evaluar la interaccin entre las dos variables ambientales (seis tratamientos, tres repeticiones por
combinacin de tratamiento). Los peces fueron alimentados cinco veces al da (8:00, 10:00, 12:00,
14:00 y 16:00 horas) en ligero exceso con nauplii recin nacidos de Artemia. La temperatura del agua
se mantuvo a 26,7 \ 1,0 1C.

Efecto del fotoperodo y del calendario de distribucin de alimentos en el crecimiento y supervivencia

de larvas Se evaluaron tres regmenes de luz: 0L: 24D; 12L: 12D y 24L: 0D. Los nauplios de Artemia
se distribuyeron en ligero exceso seis veces al da, durante un perodo de 24 o 12 h. En este ltimo
caso, los alimentos se suministraron durante el perodo correspondiente a la fotofase. Todos los tanques
recibieron la misma cantidad de comida diariamente. La temperatura del agua se mantuvo a 26,6 \ 0,6
1C. Se utiliz un diseo factorial completo para las dos variables (alimentacin con dos modalidades y
fotoperiodo con tres niveles) utilizando 18 tanques experimentales. Cada grupo del fotoperodo
consisti en una lnea de seis tanques de 60 L cubiertos con una cortina plstica negra opaca. Los
grupos 12L: 12D y 24L: 0D estaban equipados con bombillas de luz diurna situadas a 1,5 m por encima
de los tanques, dando una intensidad de luz de 10 lx en la superficie del agua. Cada combinacin de
fotoperiodo y perodo de alimentacin se realiz 8 das en triplicado con 6000 2 dph larvas por tanque,
lo que equivale a una densidad de poblacin de 100 larvas L? 1. A 10 dph, se contaron los
supervivientes y se determin la longitud estndar mediante anlisis de imgenes de fotografas
digitales de una sub-muestra de 30 larvas para cada uno de los 18 tanques experimentales.

anlisis estadstico

Los datos se procesaron usando ANOVA, ANOVA Factorial o funciones de anlisis de diseo. Cuando
el efecto del tratamiento fue significativo y cuando la interaccin entre los factores no fue significativa,
se realizaron las pruebas post-hoc de Bonferroni. Las hiptesis nulas fueron rechazadas en Po0.05.
Aquaculture Research, 2008, 39, 764 ^ 776
Figura 2 Distribucin tpica de frecuencia de tamao unimodal de ovocitos de una hembra madura de
Pseudoplatystoma fasciatum muestreada por canulacin ovrica. Las mediciones de dimetro de
ovocitos se realizaron usando el paquete de software IMAGE J (aqu, dimetro de ovocitos: 0,81 mm y
CV% 5 7,7%, n 5 94).

Que correspondi aproximadamente a 8,5 h de latencia despus de la segunda inyeccin de ovaprim.

La latencia se correlacion significativamente y negativamente con la temperatura del agua (R $ $
50,49; Po0,001), Fig. 3a. La fecundidad observada mostr una correlacin positiva (R 2 50,75) con el
peso corporal femenino (Fig. 3b), con una pendiente de 147 000 huevos kg \ leq 1. La fertilizacin
media y las tasas de eclosin alcanzaron 84,0? 20,8% y 73,7? 19,0% respectivamente (Tabla 1). Efecto
del tipo de alimento sobre la supervivencia larvaria

Resultados
Seleccin femenina y masculina e induccin de la maduracin final del ovocito y de la espermiacin
Slo las hembras presentan una distribucin unimodal con un dimetro modal de oocito entre 0,8 y 0,9
mm (Fig. 2), un alto porcentaje de ovocitos translcidos (470%) con una vescula germinal migratoria y
Se seleccion una baja variabilidad del dimetro de los ovocitos (CV% o15%) para inducir la
maduracin del ovocito. Para los machos, si los espermatozoides estaban contaminados con orina
durante el paso de separacin, se observaron espermatozoides mviles incluso despus de la dilucin
en solucin de NaCl al 9%. Tal orina contaminada espermatozoides rpidamente perdi su capacidad
de fertilizacin y se descart.
Bajo estas condiciones, se observaron 23 respuestas de ovulacin en un total de 31 inducciones
(74,2%) de 19 hembras ( ve mujeres inducidas dos, tres o cuatro veces durante el estudio). En
promedio, los huevos se recogieron a 230,0? 32,6 grados-hora (d-h) a 27,6? 1,7 1C, 768. Se determin
el efecto del tipo de alimento (nuplios de Artemia, quistes de Artemia decapsulados y zooplancton
natural) 15, 28 y 35 das despus de la eclosin (Figura 4). Hubo un efecto significativo del tipo de
alimento (ANOVA unidireccional, F 2, 24 55,01, P 5 0,015). Las tasas de supervivencia a 15 dph
fueron altas con todos los tipos de alimentos: 91% para Nauplii de Artemia, 73% y 65% para
zooplancton natural y quistes de Artemia decapsulados respectivamente. Las comparaciones
individuales entre los tipos de alimentos que utilizan las pruebas post-hoc de Bonferroni a 15, 28 y 35
dph se indican en la Fig. 4. En general, los nauplios de Artemia dieron las mejores tasas de
supervivencia en cada momento de muestreo y la supervivencia permaneci casi constante y ms del
55% a 28 y 35 dph. Los quistes de Artemia descapsulados proporcionaron tasas de supervivencia
significativamente ms bajas en comparacin con los nauplios en cada momento de muestreo,
disminuyendo por debajo del 50% a 28 dph y por debajo del 40% a 35 dph. En el tratamiento natural
del zooplancton las tasas de supervivencia fueron similares a las de los nauplios de Artemia a 15 dph,
pero disminuyeron bruscamente despus hasta el 2% a 28 dph. A 28 dph, los nuplios de Artemia
fueron significativamente ms grandes (tamao promedio de 24,44 vs. 18,8 mm SL, t 511,85,
Po0,0001, df 5309) y ms homogneos que aquellos alimentados con quistes decapsulados (CV del
16,60% Vs. 23,24%, respectivamente). Con ambos tipos de alimentos, las distribuciones de frecuencia
de tamao (Figura 5) comprendan puentes, que eran casi dos veces mayores que el tamao medio de
los supervivientes y ciertamente lo suficientemente grandes para canibalizar a los individuos ms
pequeos en sus respectivos tanques . Los raros supervivientes de los FIsh criados en aguas verdes eran
individuos esencialmente grandes y, por lo tanto, probablemente canbales, en referencia a las muy
bajas tasas de supervivencia en estos grupos de 28 dph a 0% a 35 dph.

Efecto de la intensidad de la luz sobre el crecimiento y la supervivencia

La reduccin de la intensidad luminosa tuvo un efecto positivo significativo sobre el crecimiento (F 2,6
539,38, Po0,0001) y supervivencia (F 2,6 516,06, P 5 0,0039) (Figura 6). De hecho, la supervivencia y
el tamao de las larvas de Surubin a 9 dph fueron inversamente proporcionales a la intensidad de la luz.
La supervivencia fue significativamente mayor en la oscuridad que en los otros dos tratamientos, pero
no difiri significativamente entre la luz baja y sombreada. Las larvas fueron significativamente ms
grandes en los tratamientos sombreados de luz y oscuridad que en poca luz. Adems, las larvas
subieron por debajo de 10 lx fueron ms heterogneas y comprendieron 'puentes', en contraste con los
criados bajo oscuridad permanente (CV 511.37% y 9.1% respectivamente).

Effect of light intensity on growth and survival

The reduction of light intensity had a positive significant effect on growth (F 2,6 539.38, Po0.0001) and
survival (F 2,6 516.06, P 5 0.0039) (Fig. 6). Indeed, the survival and size of larvae of Surubin at 9 dph
were inversely proportional to light intensity. Survival was significantly higher in the dark than in the
other two treatments, but did not dier significantly between low and shaded light. Larvae were
significantly larger in the shaded light and dark treatments than in low light. Furthermore, the larvae
raised under 10 lx were more heterogeneous and comprised jumpers, in contrast to those raised under
permanent darkness (CV 511.37% and 9.1% respectively).

Effect of photoperiod and density on growth and survival

Three dierent densities have been tested (600, 1800 and 6000 larvae per 60 L tank) corresponding to
10, 30 and 100 larvae L # 1 , with two dierent photoregimes: one corresponding to natural photoperiod
(12L:12D) and the other (0L:24D) corresponding to complete darkness (Fig. 7a). Survival rates at 12
dph were significantly higher in complete darkness than under a natural photoperiod (F 2,14 5 21.22, P
5 0.004), whereas density had no signiffcant effect on survival (F 2,14 5 0.06, P 5 0.92).
Photoperiod had no significant effect on the mean length of larvae (F 2,14 53.63, P 5 0.077), whereas
density did have a significant effect (F 2,14 5 4.48, P 5 0.032)
(Fig.7b). Larvae were significantly longer at low density (10 larvae L # 1 ) than at high density (100
larvae L #1 ). At intermediate density (30 larvae L # 1 ), sh size was intermediate but not significantly
diferent from those at low and high densities.
Effect of photoperiod and feeding regime on survival Two feeding regimes were tested (the same
amount of food distributed over 12 or 24 h, from 4 to 10 dph) in combination with three photoperiods
(24D:0L, 12D:12L and 0D:24L). Survival data (Fig. 8) were analysed using an experimental design
analysis procedure. The design comprised two factors: a photoperiod with three levels (0, 12, 24 h of
dark) and a feeding regime with two levels (12 and 24 h). Both the photoperiod (F 2,11 56.66, P 5
0.035) and the feeding regime (F 2,11 512.80, P 5 0.0095) had a significant eect on survival (Fig. 8).
No significant interaction was detected between photoperiod and feeding regime (P 5 0.183).
Maximum survival (38%)was obtained with the 24-h dark and 24 h feeding regime combination, while
lower survival (15%) corresponded to larvae reared under the permanent illumination and 12-h feeding
regime combination.
Neither photoperiod (F 2,12 52.52, P 5 0.12) nor feeding regime (F 2,12 50.13, P 5 0.72) had a
signficant effect on standard length (Fig. 9a), whereas both factors had a signicant eect on mean
weight (F 2,12 59.05, P 5 0.004 for the photoperiod and F 2,12 512.44, P 5 0.004 for the feeding
regime) (Fig. 9b). There was no interaction between the two factors (P 5 0.35). The highest mean
weights were observed inthe 24-h feeding regime, although the dierence was significant only in
complete darkness (0L:24D, P 5 0.004). However, for both feeding regimes, the highest mean weights
were observed under a natural photoperiod (12L:12D) and the lowest in complete darkness (0L:24D).
The mean body weights were similar for larvae raised under natural photoperiod and permanent
illumination (24L:0D), but diered significantly from those maintained in permanent darkness.

Discussion
Female and male selection and induction of final oocyte maturation and spermiation In this study, we
describe a reliable method to induce final oocyte maturation in the Surub| , P. fasciatum, using
ovaprim at there commended dosage(0.5 mL kg #1 ). This result further supports the finding that the
combination of LH-RHa and an anti-dopamine factor, here domperidone, is a potent inductor of final
oocyte maturation in a broad rangeof fish species (Lin, van der Kraak, Liang, Peng, Li, Lu, Zhou,
Chang & Peter 1986; Peter, Lin & Van der Kraak 1988) and particularly in catfish species (De Leeuw,
Goos, Richter & Eding 1985; Goos, Joy, De Leeuw,Van Oordt, Van Delft & Gielen 1987; Richter,
Eding, Goos, De Leeuw, Scott & Van Oordt 1987; Legendre, Linhart & Billard 1996; Alok,
Krishnan,Talwar & Garg 1998). One of the advantages over carp pituitary extract (CPE), which is
frequently used in fish farms, is that the biological activity of ovaprim or other LH-RHa preparations is
standardized and constant if the products are stored properly. It is also most likely that a part of the
success in inducing the final maturation of females emerged from the determination of objective
criteria for female selection. These criteria were based on the direct observation of oocytes obtained by
an intra-ovarian biopsy as already reported for this species (Gervasio Leonardo et al. 2004) and for
other cultured African and Asian catfish (Gilles, Duguef & Slembrouck 2001; Slembrouck, Komarudin,
Maskur & LegNdre, Linhar & Billard 1996; Alok, Krishnan, Talwar y Garg, 1998).
Una de las ventajas sobre el extracto de pituitaria de carpa (CPE), que se utiliza frecuentemente en
pisciculturas, es que la actividad biolgica de ovaprim u otras preparaciones de LH-RHa es
estandarizada y constante si los productos se almacenan adecuadamente. Tambin es muy probable que
una parte del xito en inducir la maduracin natural de las hembras surgi de la determinacin de
criterios objetivos para la seleccin femenina. Estos criterios se basaron en la observacin directa de
ovocitos obtenidos por una biopsia intraovrica como ya se inform para esta especie (Gervasio
Leonardo et al., 2004) y para otros bagres africanos y asiticos cultivados (Gilles, Dugue y
Slembrouck 2001, Slembrouck, Komarudin, Maskur & Legendre 2004). Hemos observado que altas
tasas de fertilizacin y eclosin se asociaron con altas proporciones de oocitos translcidos con
vescula germinal migrante y coeficientes bajos de variacin del dimetro modal de ovocitos
postvitellognicos.
Una vez que se ha logrado la seleccin femenina, otro factor importante es el tiempo de latencia, que
debe considerarse con mucho cuidado porque determina altas tasas de fertilizacin y eclosin
(resultados no mostrados). Recomendamos utilizar el nmero de dh en vez del tiempo transcurrido, ya
que el clculo dh integra todas las variaciones de temperatura durante el proceso de maduracin y es,
por tanto, ms preciso. Se observ en ensayos de induccin diferentes que en las hembras
sobremaduradas (4250 dh) Fcil, pero las tasas de fertilizacin y eclosin fueron muy bajas. Por el
contrario, la extraccin antes de 180 d-h era generalmente improductiva. Sin embargo, hemos obtenido
excepcionalmente vulos ovulados tan pronto como 130 d-h para las mujeres de respuesta temprana y
hasta 270 d-h para las mujeres de respuesta tarda (ver Tabla 1). En este estudio, tuvimos una
proporcin global de 74,2% de respuesta a la ovulacin (n 5 31 inducciones). Esta recoleccin de
espermatozoides de los machos no requiri induccin hormonal, pero se recomienda inyectar a los
varones el 50% de la dosis total femenina con el fin de aumentar el volumen de la leche y facilitar su
coleccin. La atencin debe centrarse en el procedimiento de colector de esperma para evitar la
contaminacin de la orina, lo que puede activar la motilidad de los espermatozoides. Es preferible
recoger el esperma en fracciones separadas y probar cada fraccin separadamente antes de su uso para
la fertilizacin artificial.

Efecto del tipo de alimento sobre la supervivencia de larvas Se demostr que los nauplios de Artemia
son adecuados para alimentar a las larvas de Surubi tan pronto como comienzan la alimentacin
exgena. Las larvas alimentadas con quistes decapsulados de Artemia sobrevivieron casi igualmente
bien, pero su crecimiento fue ms lento, posiblemente porque los quistes inertes son menos atractivos
que las presas vivas, lo que conduce a una menor ingestin o porque son menos digeribles que los
nauplios, especialmente para una especie que comienza Alimentndose a un tamao relativamente
pequeo (aproximadamente 4,5 mm SL). Los cclidos decapsulados y los nauplios de Artemia se usan
ahora ampliamente para una gran variedad de especies cultivadas. Sin embargo, pueden utilizarse otras
alternativas ms viables para iniciar la alimentacin de las larvas de las presas vivas hasta el destete.
Los trabajos previos sobre esta especie mostraron un buen crecimiento con presas zooplanctnicas
naturales durante los primeros 10 das de cra de larvas (Padilla Perez et al., 2001), pero no hubo
indicacin de si la supervivencia era baja o alta.

Este estudio proporcion pruebas de que la cra de Surubi lar vae en agua verde hasta la edad de 15 dph
no comprometi su supervivencia. Despus de este perodo, el zooplancton natural aparentemente ya
no era suficiente para sostener la supervivencia de las larvas. Esto resulta en otras perspectivas para
evaluar los programas de destete justo despus de la alimentacin del plancton. Sin embargo, se sugiere
fuertemente que la cra de larvas en aguas verdes est restringida a bajas densidades de poblacin; De
lo contrario, las fuentes de plancton pueden convertirse rpidamente en limitantes, causando as
heterogeneidad de crecimiento y canibalismo, como se observ durante este estudio. El destete
temprano de larvas de 15 dph despus de la alimentacin natural del zooplancton an no se ha probado
en esta especie. Sin embargo, esta posibilidad se ha probado exitosamente en especies marinas como
Pagrus pagrus, con un protocolo de destete (co-alimentacin) de presas vivas y dietas secas
(Aristizabal & Suarez 2006), o Sole (S. senegalensis) , Engrola & Dinis 2005).

Efecto de la intensidad de la luz sobre el crecimiento y la supervivencia

El efecto de la intensidad de la luz ya ha sido probado en especies cultivadas de agua dulce y marina, y
generalmente existe una correlacin positiva entre crecimiento y supervivencia con la intensidad de la
luz ambiental en la mayora de las especies estudiadas (Boeuf y Le Bail, 1999). Sin embargo, en el
bagre la situacin parece ser di- ferente porque, la mayora de los estudios reportaron una mejor
supervivencia y algunas veces crecimiento bajo fotoperiodos cortos o incluso en oscuridad permanente
(Sundararaj, Nath y Halberg, Kerdchuen y Legendre 1991, Britz & Pienaar 1992, Baras, Tissier ,
Westerloppe, Melard & Philippart 1998, Giri et al., 2002, Almazn-Rueda, van Helmond, Verreth &
Schrama 2005). Esta caracterstica parece estar asociada con su comportamiento natural de
alimentacin, ya que los adultos generalmente se alimentan alrededor del atardecer o durante la noche
(Belbenoit, Moller, Serrier & Push 1979, Sundararaj et al., 1982, Rodrguez, Richardson y Lewis Jr
1990, Kerdchuen y Legendre 1991 , Ezenwaji 1999, Hossain, Batty, Haylor y Beveridge 1999, Spotte,
Petry y Zuanon 2001, Almazan-Rueda, Schrama & Verreth 2004, Pohlmann, Atema & Breithaupt
2004). Las larvas de pez gato se convierten en fotofbicas tempranas durante el perodo larval y
exhiben un fototaxis negativo (Blackshaw y Snyder, 1997; Hossain et al., 1999), pero bajo condiciones
artificiales las larvas de muchas especies pueden alimentarse ya sea en la luz o en oscuridad completa .
Al igual que en algunas otras especies, en la mayora de los bagres, las larvas exhiben un
comportamiento agresivo, que conduce a numerosas lesiones y canibalismo frecuente (Britz & Pienaar,
1992; Giri et al., 2002). Los largos perodos de luz en el bagre africano, Clarias gariepinus, pueden
inducir un aumento de los niveles plasmticos de cortisol, lo que indica una respuesta fisiolgica a
condiciones estresantes (Almazan-Rueda et al., 2005). Segn nuestras observaciones, el
comportamiento agresivo en P. fasciatum podra ser responsable de una parte significativa de la
mortalidad de larvas durante las primeras 2 3 semanas de vida. Observamos que la cra de larvas en la
oscuridad asegura una menor competencia por el espacio, ya que las larvas son principalmente
Distribuidos en la columna de agua en lugar de concentrarse en las partes ms oscuras del tanque. Por
lo tanto, hay contactos limitados entre ellos, lo que finalmente mejora las tasas de supervivencia, y en
cierta medida el crecimiento. Como las larvas de Surub | siguen alimentndose normalmente en
oscuridad completa, las tasas de supervivencia se mejoran en estas condiciones. Recomendamos
encarecidamente el uso de condiciones oscuras completas para la crianza de larvas de Surubin.

Efecto del fotoperiodo y la densidad en el crecimiento y la supervivencia

El efecto del fotoperodo y la densidad sobre la supervivencia y el crecimiento en larvas de sh ha sido

demostrado en algunas especies cultivadas (Kaiser, Weyl & Hecht, 1995; Almazan-Rueda et al., 2005).
Sin embargo, en nuestros experimentos, con una variacin de 10 veces, el efecto de la densidad sobre la
supervivencia no fue significativo. La supervivencia a bajas densidades fue ligeramente mejor slo en
condiciones completamente oscuras, pero esto podra estar ms relacionado con el fotoperiodo
(duracin del da) que con la propia densidad. Sin embargo, el crecimiento larvario fue
significativamente afectado por la densidad: las larvas ms grandes se observaron en la densidad ms
baja. Esta situacin es bastante comn entre las especies cultivadas porque cada larva tiene ms espacio
y gasta menos energa compitiendo por alimentos con otros congneres. En este estudio, el rango de
variacin inicial de la densidad de las larvas (10 ^ 100 larvas L \ alpha 1 correspondiente a 600 ^ 6000
larvas m ^ {2}) fue relativamente alto comparado con las densidades iniciales reportadas para las
especies marinas (0,1 ^ 30 larvas L \ (Hitzfelder, Holt, Fox y McKee, 2006), pero similar a otras
densidades de cra reportadas para agua dulce, Shander s (2007) o Clarias batrachus (1000 ^ 5000 m ^
{2} ) (Sahoo, Giri & Sahu 2004), lo que indica que P. fasciatum puede ser criado en condiciones de alta
densidad, pero tambin que la supervivencia probablemente ser mejorado usando densidades ms
bajas.
Efecto del fotoperiodo y del rgimen alimentario sobre la supervivencia
Hubo un efecto sorprendente de ambos regmenes de alimentacin y luz. El efecto de la fotofase larga
generalmente tiene un efecto positivo en el crecimiento y la supervivencia (Barlow, Pearce, Rodrigers y
Clayton, 1995; Ronzani Cerqueira y Macedo Brugger 2001, Downing & Litvak 2002, Fielder,
Bardsley, Allan & Pankhurst 2002, Puvanendran & Brown 2002, Trotter, Battaglene & Pankhurst2003,
Moustakas, Watanabe & Copeland 2004, Pedro Canavate, Zerolo & Fernandez-Diaz 2006). Como en
otras especies de bagres (Appelbaum & McGeer 1998, Appelbaum & Kamler, 2000, Giri et al., 2002),
la supervivencia de las larvas de Surubin fue mayor bajo oscuridad completa y con una distribucin
continua de alimentos. En completa oscuridad, la actividad de las larvas se dedica principalmente a la
alimentacin y su comportamiento agresivo es muy reducido porque permanecen en silencio durante
largos perodos de tiempo despus de la alimentacin. La distribucin continua de los alimentos (ms
de 24 h) tambin impide largos perodos de privacin de alimentos, que tienden a estimular el
comportamiento de forrajeo y aumentar los contactos entre los peces. En algunas especies, estas tasas
de supervivencia ms altas tambin se asociaron con un crecimiento ms rpido debido a que los costos
de la actividad de natacin y el comportamiento agresivo se reducen. Sin embargo, esta ganancia
potencial de crecimiento no pudo detectarse en las presentes condiciones experimentales.
En conclusin, hemos desarrollado una metodologa fiable para la seleccin de SH y la cra inducida
para esta especie amaznica muy importante pero poco estudiada. La tasa de supervivencia global
obtenida bajo las condiciones experimentales en este estudio fue de alrededor del 40% a 35 dph, lo que
es compatible con la produccin en masa de alevines debido a la alta fecundidad de esta especie. Estos
resultados preliminares deben ayudar a promover la cultura de esta especie prometedora, que ser la
nica manera de aliviar la creciente presin pesquera que perdura en la mayora de los pases
amaznicos y ofrecer un nuevo candidato para la acuicultura de especies nativas. Los futuros estudios
de investigacin deberan centrarse, entre otras cosas, en el desarrollo de protocolos de destete con
alimentos secos eficientes, para aumentar las tasas de crecimiento y lograr un nmero sostenible de
alimentos para la produccin de crecimiento de esta especie.