AO del Buen Servicio al Ciudadano

Facultad de Farmacia y Bioqumica

QUMICA ORGANICA II

Practica N 8:
DETERMINACIN DE LAS PROPIEDADES FSICAS Y QUMICAS DE LA
ALBMINA
Docente:
MARIBEL RODRIGUEZ

Seccin:
FB4N2

Alumno:
-Olivera Caballero ,Gerti Myrella.
-Sanchez Gonzales ,Geraldine.

2017
 MARCO TEORICO

Las protenas son aquellas biomolculas que son de elevado peso

molecular, las cuales cumplen funciones muy importantes en nuestro
organismo como por ejemplo son energticas, estructurales, defensa,
etc. Pero tambin su gran tamao desde el punto de vista clnico nos
indica que no deben estar formando parte de algunos componentes de
nuestro organismo, como es el caso de la orina ya que por su gran
tamao y carga negativa no son filtradas por el glomrulo de los
riones, su presencia indicara una patologa a nivel renal.

Una protena es una cadena de aminocidos cuya secuencia es

especfica. Se forman en los ribosomas por lectura de los genes que
llevan la informacin de la secuencia concreta de aminocidos que da
lugar a una determinada protena. Esta cadena de aminocidos
agrega otros tomos o molculas como cobre, zinc, hierro, etc, para
dar lugar a la protena final que comienza a plegarse sobre s misma
para adoptar la conformacin espacial necesaria para realizar
correctamente su funcin biolgica. La prdida de esta conformacin
espacial hace que la protena no pueda cumplir con su funcin
biolgica en el organismo y es lo que se conoce como
desnaturalizacin de protenas. Por ejemplo, un enzima pierde su
funcin cataltica.

La desnaturalizacin de protenas es consecuencia de algn factor

externo como acidez del medio, temperatura, etc. Es importante saber
que la desnaturalizacin de una protena no afecta a lo que se conoce
cmo estructura primaria, esto es, la secuencia de aminocidos base
de la protena.

Las protenas que se encuentran presentes en nuestro organismo son

muchas ya que cada una cumple una funcin importante, pero de
todas ellas tenemos a la albmina que es muy importante ya que se
encarga de transportar calcio y cidos grasos as como tambin se
encarga de regular el equilibrio hdrico en la sangre (presin onctica)
y su desnaturalizacin en nuestro organismo puede originar diferentes
patologas como enfermedades a nivel del hgado (sndrome
renal), procesos inflamatorios (edema - hinchazn), etc.
MARCO TERICO

2.1. DEFINICION

La albmina es la protena ms abundante en la sangre. Es fabricada

por el hgado pero tambin la proporcionan ciertos alimentos,
especialmente la leche y los huevos. La albmina desempea una
gran variedad de funciones que hacen que sea esencial para el
organismo. De hecho, es necesaria, entre otras cosas, para la
buena distribucin de

los lquidos entre las diferentes estructuras: los vasos sanguneos,

los tejidos y el espacio entre ellos llamado espacio intersticial. Tambin
transporta algunas hormonas, los cidos grasos y la bilirrubina. En la
sangre, la tasa de albmina o albumina disminuye en caso de
malnutricin o de sndrome nefrtico, enfermedad renal que es
responsable de la filtracin de protenas por la orina.

La concentracin normal en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0

gramos por decilitro, supone un 54,31 % de la protena plasmtica. El
resto de protenas presentes en el plasma se llaman en conjunto
globulinas. La albmina es fundamental para el mantenimiento de la
presin onctica, necesaria para la distribucin correcta de los lquidos
corporales entre el compartimento intravascular y el extravascular,
localizado entre los tejidos. La albmina tiene carga elctrica negativa.
La membrana basal del glomrulo renal, tambin est cargada
negativamente, lo que impide la filtracin glomerular de la albmina a
la orina. En el sndrome nefrtico, esta propiedad es menor, y se
pierde gran cantidad de albmina por la orina.

2.2. CLASES DE ALBUMINAS

a) SEROALBMINA: Es la protena del suero sanguneo.

La seroalbmina se encarga de transportar sustancias

de naturaleza qumica muy diversa, como cidos grasos, aminocidos,
esteroides, metales (como el calcio), y numerosos frmacos,
facilitando la transferencia de muchas de ellas desde la circulacin
sangunea a rganos como el hgado, el rin, el intestino y el cerebro.
Por este motivo existen receptores de superficie para seroalbmina en
las clulas de estos rganos. Su principal funcin es regular la presin
coloidosmtica de la sangre, y presenta una gran afinidad por
pequeas molculas hidrofbicas cargadas negativamente. La
seroalbmina est formada por 585 aminocidos.

b) OVOALBMINA: Es la albmina de la clara del huevo.

La albmina es una sustancia orgnica nitrogenada, viscosa, soluble

en agua, coagulable por el calor, contenida en la clara de huevo.La
clara, tambin conocida como albumen, tiene un 88 por ciento de agua
y el resto est constituido bsicamente por protenas de la clara,
siendo la principal la ovoalbmina, que representa el 54 por ciento del
total proteico.

La albmina de huevo se obtiene al separar mecnicamente la clara

de la yema y posteriormente se efecta un deshidratado de la clara, la
cual proporciona protenas sin elevar el nivel de colesterol, debido a
que se encuentra separada de la yema (principal fuente de grasa),
conteniendo la clara por si sola cerca de uno por ciento de grasa.

Los principales usos que tiene la albmina de huevo estn en la

panadera y la repostera, en donde se utiliza como agente
espumante, estabilizador, para preparar merengue o como
complemento alimenticio para las personas que practican alguna
actividad deportiva, ya que el producto tiene entre 78 y 90 por ciento
de protena lo que permite aumentar el rendimiento y masa muscular.
c) LACTOALBMINA: Es la albmina de la leche.

Es una protena que favorece la unin de la glucosa con la galactosa

para la formacin de la lactosa. Se encuentra en la leche de vaca y en
la humana. Forma parte de la capa de nata que aparece en la
superficie de la leche hervida. Tcnicamente es llamada alfa-lacto
albmina, es un componente importante de esta protena. El suero es
una protena de la leche formada por 8 componentes de las protenas
individuales. Segn el instituto de la protena de suero, la alfa-lacto
albmina es la protena fundamental en la leche materna y la segunda
protena ms abundante en la leche de vaca.

Especialmente los culturistas, usan la protena de suero de leche para

un obtener mejor rendimiento. La protena de suero, cuando se utiliza
combinndola con el ejercicio, puede provocar un aumento de peso de
masa muscular y una prdida de grasa corporal. La alfa-lactoalbmina
es una de las principales protenas del suero de la leche. Esta protena
es importante para ayudar al cuerpo a digerir la lactosa. Tambin es
una portadora de calcio y una luchadora potencial del cncer.

Las prestaciones de la alfa-lacto albmina, triptfano y cistena, dos

aminocidos principales. El triptfano es necesario para la formacin
de serotonina del cerebro, importante en la regulacin del estado de
nimo y el control del estrs. La cistena es esencial para la sntesis de
glutatin, importante en el mantenimiento y la reparacin celular.
Adems, la alfa-lacto albmina tambin dispone de aminocidos de
cadena ramificada, importante para el crecimiento del tejido muscular.

2.3. CONCENTRACIN EN EL ORGANISMO

El contenido total de albmina en el organismo est sobre los 300

gramos, de los cuales 120 g (40%) estn en el plasma sanguneo. Por
cada 500 ml de sangre perdida, solamente se pierden 12 g de
albmina (4% de la albmina corporal total) y es reemplazada por
sntesis normal en 3 das. En condiciones normales, la concentracin
de protenas totales del plasma vara entre 6,2 y 7,9 g/dl, siendo la
concentracin de albmina entre 3,6 y 5,2 g/dl. Cuando la
concentracin de albmina es inferior a 2 g, habitualmente se presenta
edema.
 La albmina ejerce entre el 75% y 85% de la presin onctica de la
sangre, que es de 20 mmHg. (Equivalente a una concentracin de
albmina de 5,2 g/dl).

2.4. FUNCIONES DE LA ALBMINA

Una de las principales funciones de la albmina normal es la de

transportar y almacenar una amplia variedad de sustancias de bajo
peso molecular como la bilirrubina, cortisol, hormonas sexuales,
cidos grasos libres y algunos medicamentos. En los neonatos
hiperbilirrubinmicos, la bilirrubina se combina con la albmina
limitando as su ingreso a los tejidos hidrofbicos del cerebro,
atenuando con ello la toxicidad en los procesos hemolticos graves
que se presentan a esa edad. La mitad del calcio circulante est
combinado con la albmina, por lo que la interpretacin clnica de la
disminucin del calcio srico depende de la concentracin de la
albmina. Esto se debe a que la fraccin biolgicamente activa del
calcio es la forma ionizada o libre.

Siendo sus funciones principales:

Mantenimiento de la presin onctica.

Transporte de hormonas tiroideas.

Transporte de hormonas liposolubles.

Transporte de cidos grasos libres. (Esto es, no esterificados)

Transporte de bilirrubina no conjugada.

Transporte de muchos frmacos y drogas.

Unin competitiva con iones de calcio.

 Control del pH.

Funciona como un transportador de la sangre y lo contiene el

plasma.

Regulador de lquidos extracelulares, efecto Donnan.

2.5. ALBUMINAS EN LA SANGRE

a) DETERMINACIN DE ALBMINA EN LA SANGRE

El anlisis de albmina en la sangre es un anlisis que se realiza por

separado o en una peticin general del anlisis bioqumico en la
sangre. Mide la cantidad de albmina presente en el suero.

La albmina es la protena de ms concentracin en la sangre. La

albmina transporta muchas molculas pequeas (bilirrubina,
progesterona, y medicamentos), y tiene tambin la funcin de
mantener la presin sangunea ya que favorece la presin osmtica
coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y que no
pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio. Por ello la
concentracin de albmina en la sangre es mucho mayor que la del
sodio o cloro, a diferencia de los tejidos en los que ocurre lo
contrario.La albmina representa el 60% de las protenas que contiene
el suero, el resto son las globulinas.

b) PARA QU DETERMINAR LA ALBMINA EN LA SANGRE?

La determinacin de albmina se realiza para evaluar la posible

presencia de enfermedades del rin o del hgado, o bien que el
cuerpo no absorba bien suficientes protenas.
 El hgado es la principal fuente de sntesis de albmina, si las
clulas hepticas estn daadas la albmina en el suero disminuir.

Si el rin funciona mal se perder albmina por la orina,

apareciendo baja la concentracin de la misma en el suero.

En estados carenciales por dietas exageradas o por malnutricin

tambin se puede encontrar baja la albmina en el suero.

Haya medicamentos que pueden alterar la determinacin de la

albmina en el suero, y puede aparecer ms elevada si se estn
tomando esteroides anabolizantes, andrgenos, hormona del
crecimiento y la insulina. Si se est administrando sueros en cantidad
puede ocurrir lo contrario.

c) OBTENCIN AMBULATORIA U HOSPITALIZADA

Para realizar este anlisis no se precisa estar en ayunas.

Se puede realizar la toma en un lugar apropiado (consulta,

clnica, hospital) pero en ocasiones se realiza en el propio domicilio del
paciente.

Para realizar la toma se precisa de localizar una vena apropiada

y en general se utilizan las venas situadas en la flexura del codo.
La persona encargada de tomar la muestra utilizar guantes sanitarios,
una aguja (con una jeringa o tubo de extraccin) .

Le pondr un tortor (cinta de goma-ltex) en el brazo para que

las venas retengan ms sangre y aparezcan ms visibles y accesibles.

Limpiar la zona del pinchazo con un antisptico y mediante una

palpacin localizar la vena apropiada y acceder a ella con la aguja.
Le soltarn el tortor.

Cuando la sangre fluya por la aguja el sanitario realizar una

aspiracin respectiva (mediante la jeringa o mediante la aplicacin de
un tubo con vaco).
 Al terminar la toma, se extrae la aguja y se presiona la zona con
una torunda de algodn o similar para favorecer la coagulacin y se le
indicar que flexione el brazo y mantenga la zona presionada con un
esparadrapo durante unas horas.

d) PROBLEMAS Y POSIBLES RIESGOS

La obtencin mediante un pinchazo de la vena puede producir

cierto dolor.

La posible dificultad en encontrar la vena apropiada puede dar

lugar a varios pinchazos

Aparicin de un hematoma (moratn o cardenal) en la zona de

extraccin, suele deberse a que la vena no se ha cerrado bien tras la
presin posterior y ha seguido saliendo sangre produciendo este
problema. Puede aplicarse una pomada tipo Hirudoid o Trombocid en
la zona.

Inflamacin de la vena (flebitis), a veces la vena se ve alterada,

bien sea por una causa meramente fsica o por que se ha infectado.
Se deber mantener la zona relajada unos das y se puede aplicar una
pomada tipo Hirudoid o Trombocid en la zona. Si el problema
persiste o aparece fiebre deber consultarlo con su mdico.

e) VALORES NORMALES DE ALBMINA

Los valores normales son entre 3,4 y 5,4 gramos por decilitro.

f) DIAGNSTICOS POSIBLES EN VALORES ANORMALES

Puede aparecer baja la albmina en suero en:

Ascitis,

Enfermedades renales (glomerulonefritis, sndrome nefrtico),

 Enfermedades del hgado (hepatitis, cirrosis,etc.)

Enfermedades intestinales con malabsorcin (Enfermedad de

Crohn, enfermedad de Whipple)

Quemaduras,

Malnutricin.

2.6. CONCENTRACIN DE ALBMINA EN LA SANGRE

La albmina es sintetizada en el hgado, rgano que adems sintetiza

otras protenas plasmticas como transferrina, ceruloplasmina,
haptoglobina, alfa 1 glicoprotena cida, factores de la coagulacin,
algunos factores del complemento, etc. Los niveles de estas protenas
son muy variables, de manera que sus concentraciones en el plasma
podran no reflejar el grado de enfermedad heptica, excepto en la
insuficiencia heptica en estado terminal.

Puede resultar til la medida de la albmina srica como ndice del

grado de enfermedad heptica crnica o del avance de una
enfermedad aguda en el curso de varias semanas. Por otro lado, los
niveles de albmina en la sangre no son generalmente un ndice
sensible de la funcin heptica, porque la degradacin de la albmina
circulante disminuye siempre que est deprimido el ndice de sntesis,
cualquiera sea el mecanismo del efecto anterior.

Por lo comn, los niveles de albmina en el suero son bajos en

pacientes con enfermedad crnica del hgado. Los cambios de
la velocidad de degradacin permitirn la concentracin normal de
albmina en la sangre a pesar de las alteraciones de la sntesis. La
deficiencia de albmina y otras protenas reflejan nicamente la
severidad de la enfermedad heptica. El hgado normal produce de 12
a 15 gramos de albmina por da y puede aumentar la produccin en

ms de 2 gramos por da cuando hay prdidas mayores de 3,5 gramos

por da (Sndrome Nefrtico) para prevenir la hipoalbuminemia.
2.7. OBTENCIN DE LA ALBMINA PARA TRANSFUSIONES
SANGUNEAS

La albmina humana se puede obtener de plasma o placentas

humanas. A nivel industrial se prepara por fraccionamiento
de mezclas de plasma obtenido de cientos de donantes sanos. Todas
las unidades de plasma utilizadas en el proceso son sometidas
individualmente a un despistaje serolgico para el antgeno de
superficie de la hepatitis B (HBsAg), y anticuerpos para el virus de la
hepatitis C (HCV), el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2
(HIV 1 y 2), el Tripanosoma cruzi (Enfermedad de Chagas) y el
Treponema pallidum (Sfilis).

El mtodo utilizado en su obtencin fue desarrollado por Cohn en

1940, durante la II Guerra Mundial, y consiste en someter el plasma
humano a un proceso de fraccionamiento con etanol fro a diferentes
concentraciones y variaciones de temperatura, fuerza inica y pH para
obtener diferentes fracciones o pastas. La fraccin I contiene factor
VIII y fibringeno, la fraccin II contiene inmunoglobulinas y la fraccin
V, albmina. Las fracciones III y IV contienen otras protenas y factores
de la coagulacin.

La albmina as preparada tiene una pureza del 95% mientras que por
otros mtodos la pureza es del 85% o menos. Luego, el producto es
sometido a pasteurizacin, calentndolo a 60C por 10 horas. El
fraccionamiento con etanol es de probada actividad viricida y
bactericida, y la pasteurizacin garantiza an ms
la seguridad transfusional del producto. La solucin de albmina est
ajustada a pH fisiolgico (6,7-7,3), no contiene preservativos y ha sido
esterilizada durante el proceso de filtracin (7, 10). Se encuentra
disponible en tres presentaciones: solucin al 5%, 20% y 25%.

2.8. USOS DE LA ALBMINA

Luego de su administracin la albmina humana tiene una vida media

de 16 horas. Se requiere de 48 horas luego de su administracin para
alcanzar el equilibrio entre los compartimientos intravascular e
intersticial. La albmina cuenta con alrededor del 75 al 85% de la
capacidad intravascular osmtica, ya que 1 g de albmina se une a
alrededor de 18 ml de agua.
La solucin al 5% es isosmtica con el plasma y puede ser usada
como expansor de la volemia. Las soluciones al 20% y 25% tienen
concentraciones 4 y 5 veces mayores que la del plasma. Por lo tanto,
cuando se administran por va intravenosa, por cada volumen de
solucin se incrementa la volemia en 3,5 veces en un lapso de 15
minutos (2, 7, 10, 11).

Ello es debido al paso de lquido del espacio intersticial al intravascular

pudiendo ocasionar sobrecarga circulatoria e incrementando la
deshidratacin intersticial. Por este motivo se recomienda que en
casos de deshidratacin se deba infundir al mismo tiempo soluciones
salina normal o ringer lactato. Dada la capacidad osmtica de la
albmina, por cada 100 ml de albmina al 20% se deben infundir unos
360 ml de solucin salina.

PROCEDIMIENTO

PRUEBA XANTOPROTEICA:
Los compuestos que presentan bencenos sustituidos (con grupos
unidos3al anillo bencnico), al reaccionar con el cido ntrico
concentrado forman compuestos nitrados4de color amarillo, el cual se
intensifica en medio alcalino
PRUEBA BIURET
Mediante esta prueba hacemos determinacin de protenas o pptidos .Se basa
en la reaccin del sulfato de cobre con compuestos que tengas mas de dos
enlaces peptdicos ,como en el caso de la albumina que realizamos .Se coloreo de
violeta fuerte.
PRUEBA DE NIHIDRINA :
Esta reaccin es bastante importante ya que se emplea para determinar
cualitativamente y cuantitativamente los aminocidos .Usamos en nuestro caso la
fenilananina.En nuestro caso hubo un cogulo ya que se ubico los aminocidos
presentes.
DISCUSION:
En las reacciones de desnaturalizacin de protenas tienen que ver dos agentes:
fsicos y qumicos. Ambos rompen los enlaces peptdicos. En la prctica
observamos que el tubo N 0 1 al que se le aplico temperatura formo una ligera
espuma, al tubo N 0 2 se formo una fase coloidal cuando se le agrego 10 gts.
HCl .en el tubo N0 3 se observo un ligero precipitado cuando se le agrego NaOH
al 40% en el tubo, aqu se genera la ruptura de los enlaces disulfuro y los puentes
de hidrgeno, generando la exposicin de estos. Cuando la protena es
desnaturalizada pierde sus funciones cmo viscosidad, velocidad de difusin y la
facilidad con que se cristalizan la albumina se coagula . N0 4 al adicionar sulfato
de amonio al 75% se form una fase coloidal. Y finalmente en el tubo N 0 5 al
agregarle acetona se visualiz la presencia de dos fases. Lo cual nos indica que
los aminocidos no son solubles en solventes apolares.
En la reacciones de precipitacin mediante aniones en el tubo N 2 al adicionar las
gotas de cido clorhdrico al 10% forma una solucin coloidal, en el tubo N 3 el
hidrxido de sodio al 10% tambin forma una solucin coloidal transparente,
presencia de esferas con aire en la parte superior.

Al agregar la tiroxina mas la ninhidrina en un tubo de ensayo, esta reacciona ms

rpido en el aminocido libre a diferencia de la reaccin de la tiroxina mas el rvo.
De biuret que no ingresa porque el reactivo biuret slo funciona para detectar la
presencia de protenas, mas no incluye aminocidos, puesto que el biuret
reacciona con enlaces peptdicos formados por la unin de aminocidos propios
de las protenas.
Al agregar la albumina mas la ninhidrina aqu reacciono lento porque es aa y
protenas en cambio en tubo de ensayo que contena la albumina ms el reactivo
de biuret la coloracin se present primero porque la reaccin se da en el enlace
ah es donde forma el complejo.
La prueba de biuret sirve para detectar la presencia de enlaces peptdicos, los
cuales son iones especificas entre los aminocidos. Se basa en la formacin de
sales complejas de color violeta
La reaccin con la ninhidrina produce colores que sirven como base para la
cuantificacin de todos los aminocidos primarios.

CONCLUSION
Se determin las propiedades fsicas y qumicas de la albumina.

Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo comprobar

experimentalmente efectivamente que se trata de una protena.

Se concluye que las reacciones que las protenas presentan dependen de

los aminocidos que compone la protena.

La ninhidrina identifica a los 20 aminoacidos que forman alas proteinas,

esto es debido a que todos presentan un grupo amino libre.en nustro caos
la fenilananina.

La reaccin con la ninhidrina produce colores que sirven como base para la
cuantificacin de todos los aminocidos primarios.

La Reaccin de Biuret da positivo con la albumina debido a que la albumina

es una protena y tiene uniones peptdicas, esto se debe a que la albumina
presenta los 20 aminocidos principales
 El reactivo biuret slo funciona para detectar la presencia de protenas, mas
no incluye aminocidos, puesto que el biuret reacciona con enlaces
peptdicos formados por la unin de aminocidos propios de las protenas.

CUESTIONARIO

1.- QUE OTROS MTODOS SE PUEDEN EMPLEAR PARA LA OBTENCIN DE

ALCALOIDES. MENCIONAR 2 MTODOS?

Extraccin de alcaloides con solvente orgnico apolar en medio alcalino.

Extraccin con agua en medio cido, droga + etanol + cido,

posteriormente se da la ebullicin, nos va a dar como resultado solucin

alcohlica cida, luego por evaporacin se obtiene el residuo con los

alcaloides en forma de sal.

 Destilacin por arrastre de vapor, aplicable a alcaloides voltiles, que son

los que no tienen oxgeno (espartena, nicotina). Agua + muestra Sol. cida

(fija alcaloide) (sal). (3)

CUESTIONARIO
1.-Reacciones qumicas en protenas y
aminocidos.
2.- Indique otras tcnicas por las cuales se pueda identificar
aminocidos o protenas
Encontramos otras 2 tcnicas.

2)Reaccion de los aminoacidos azufrados

Se pone de manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de
sulfuro de plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un
lcali, del azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una
solucin de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo

Tecnica
1. Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3 cc. de albmina de huevo
(clara de huevo).

2. Aadir 2 cc. de solucin de hidrxido sdico al 20%.

3. Aadir 10 gotas de solucin de acetato de plomo al 5%.

 4. Calentar el tubo hasta ebullicin.

5. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se

ha formado sulfuro de plomo, utilizndose el azufre de los
aminocidos, lo que nos sirve para identificar proteinas que
tienen en su composicin aminocidos con azufre.

2b)Tcnicas de separacin e identificacin de

Aminocidos, pptidos y Protenas.

rganos como el cerebro y fluidos como sangre y fluido

cerebroespinal contienen una alta concentracin de pptidos
que requieren separacin antes de la MS. Algunos fluidos
corporales y rganos contienen una concentracin muy baja
de pptidos, lo que requiere preconcentracin de las muestras
antes de ser sujetas al anlisis por MS.

Tcnica de anlisis cualitativo, de amplia utilizacin para la

determinacin de estructuras orgnicas.
Identificacin de Pptidos.
El anlisis de datos de MS requiere software sofisticado para
obtener, almacenar e interpretar los datos y para
eventualmente transformarlos en informacin biolgica til.
Algunas Aplicaciones
Separacin de Pptidos por HPLC
HPLC
La mezcla de pptidos ya separada por electroforesis se
somete a cromatografa.

-La electroforesis puede ser llevada acabo por capilaridad o en

gel.

-La fase estacionaria es la celulosa (polar) y la fase mvil una

mezcla ms o menos hidrfoba de disolventes orgnicos.
 "Normal": butanol:piridina:actico:agua en proporcin
97:75:15:60
Cubre bien la separacin de pptidos muy hidrfobos hasta
muy hidrfilos.

A la salida de la columna se coloca un detector (generalmente

de absorcin ultravioleta o de fluorescencia) y si se desea
recuperar las moleculas que eluyen de la columna, se
requiere un colector.

HPLC de fase inversa, lo que permite que los analitos

permanezcan en la fase

lquida.
La recuperacin de pptidos puede ser posible en una forma
molecular sin cambio, dado que la mayora de los pptidos no
contienen estructuras secundarias y terciarias complejas.
Mezcladora de solventes en el inyector.
Bomba que inyectan lquido a la columna.
Solvente en la fase mvil y el inyector permite la aplicacin de
la muestra
Los picos se relacionan segn su "tiempo de retencin" con
estndares, que permiten identificar los Pptidos presentes en
la mezcla. La cantidad relativa de cada uno de ellos se
determina calculando el rea la curva del pico
correspondiente.
Cromatografa en capa fina
Los pptidos contribuyen directamente al sabor de los
alimentos y son precursores de los componentes aromticos y
las sustancias coloreadas que se forman mediante las
reacciones trmicas y/o enzimticas que ocurren durante la
obtencin, preparacin y almacenamiento de los mismos.

La fase estacionaria es la celulosa (polar) y la fase mvil una

mezcla ms o menos hidrfoba de disolventes orgnicos.
Los pptidos ms hidrfobos se desplazan ms rpidamente
que los ms polares.
Por ultimo se lleva acabo la comparacin cualitativa y
cuantitativa por medio del Rf y el color y tamao de las
manchas presentes en la placa cromatogrfica
comparandolos con los Rf reportados en la literatura.
Se toma la muestra (metabolitos en muestras de plasma ) se
coloca en la placa cromatografca (papel, columna o capa
fina) posteriormente se coloca dentro de la cmara
cromatagrfica para que la fase mvil eluya a travs de ella
dandose

la separacin de los pptidos en nuestra muestra a identificar.

Electroforesis

2.c) Tcnica de separacin

separa especies cargada (iones)

Se separan en funcin de su distinta velocidad de migracin

en un campo elctrico.
Identificacin de Pptidos
Metodologa
Inyeccin de la muestra
Pasa un flujo liquido transportador a travs de la columna
El flujo pasa a travs de los detectores
La deteccin se da por detectores de fluorescencia o
conductimetricos
Los resultados se dan en un Electroferograma en donde
Los compuestos separados forman picos saliendo a tiempos
caractersticos.
Los geles son obtenidos por polimerizacin de acrilamida o
agarosa
La separacin se da por las velocidades de migracin y
tamao de los iones.
Los Pptidos presentan varias cargas al cambiar el pH.
Electroforesis en Gel
Identificacin
La Poliacrilamida se utiliza para Pptidos y Protenas.

Se da una primera separacin segn su punto isoelctrico

y despus por el peso molecular.

BIBLIOGRAFIA

1.

VEJAR EVA IRMA. Prcticas de Bioqumica Descriptiva. Editorial UniSon.

2005. Pag 169.

2.

GIRALDO GERMAN ANTONIO. Laboratorio de Bioqumica: Una visin

prctica. 24 Universidad del Quindo. 2010. Pag 97 Libro 10

3.

Mataix verdu, J, Protenas(capitulo 5),