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PARASITOLOGIA
INTRODUCCIN
Los laboratorios de microbiologa constituyen ambientes de trabajo
especiales, que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas para
las personas que se encuentren en o cerca de ellos. El trabajo diario en el
laboratorio es un trabajo de grupo, en donde la actitud de cada uno de los
integrantes ante las prcticas, as como el entrenamiento que posean en las
tcnicas requeridas para el manejo de material contaminado, determinan su
propia seguridad, as como la de sus compaeros y la de la colectividad en
general.
Es por ello que antes de comenzar con las actividades prcticas, todas las
personas involucradas (estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de
conocer cules son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio de
manera tal, que el trabajo se realice con un riesgo mnimo de exposicin,
tanto para las personas que lo ejecutan como para el medio ambiente. El
objetivo de esta lectura, es ofrecerle al estudiante una gua que contribuya
a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecucin de
las actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa.
PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD
Bioseguridad
La seguridad biolgica o bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de
las tcnicas y de los equipos necesarios para prevenir la exposicin del
personal, del rea de laboratorio y del medio ambiente a agentes
potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes Biopeligrosos
Son todos aquellos agentes biolgicos y materiales que son potencialmente
peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos
podemos citar: bacterias, virus, hongos, parsitos, productos
recombinantes, alrgenos, priones, etc. Riesgo Microbiolgico El Riesgo
Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad
prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy
elevadas y pueden llegar a provocar una infeccin si no son manipulados
adecuadamente.
Para que se produzca un accidente por un agente biolgico deben estar
presente bsicamente 4 elementos: un husped susceptible, un agente
infeccioso, una concentracin suficiente de ste y una ruta de transmisin
adecuada; siendo este ltimo punto el que mejor se puede controlar en el
laboratorio.
Vas de Infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a travs de: la boca, los
pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vas de
contaminacin ms frecuentes en el laboratorio se dan a travs de:
La boca Comer, beber y fumar en el laboratorio. Realizar transferencias
con pipetas sin utilizar ningn tipo de proteccin. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos o utensilios contaminados (lpices,
bolgrafos, etc.).
La piel Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica u otros
instrumentos punzantes o de vidrio. Cortaduras o rasguos.
Los ojos Salpicaduras de materiales infecciosos. Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos contaminados.
Los pulmones Inhalacin de microorganismos transportados por el aire
(aerosoles). En los Laboratorios de Microbiologa de la Facultad de Farmacia
estamos seguros que comprendiendo y teniendo conocimiento de todos
estos posibles riesgos, aprendiendo y ejecutando las tcnicas adecuadas,
contribuiremos con una parte importante e integral del proceso de
educacin, as como tambin a reducir el nmero de accidentes en el
laboratorio y en futuras actividades fuera de l.
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de
que ocurran los siguientes accidentes:
Derrame de material biolgico sobre el cuerpo: Remover la ropa
inmediatamente. Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn
por un minuto. Reportar el incidente al profesor. Buscar atencin mdica si
es necesario. La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin
desinfectante antes de ser lavada.
Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos: Lavar
inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con
abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para
asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los prpados. Reportar
el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
Cortadas menores y heridas por pinchazo: Lavar vigorosamente la herida
con agua y jabn por varios minutos. Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica inmediatamente.
En el caso de derrames: Reportar el incidente al profesor. Colocarse
guantes y cubrir con papel absorbente el rea del derrame. Verter un
desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario. Retirar el
material absorbente junto al material roto y colocarlos en un recipiente para
residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto
con los guantes utilizados. Limpiar y desinfectar nuevamente el rea
empleando nuevas toallas de papel y desinfectante. Lavarse las manos con
abundante agua y jabn
El xito de estas normas depende de la sinceridad, la constancia, la
participacin activa y cooperativa de cada estudiante, por ello antes de
asistir al laboratorio, deben leer el fundamento y las actividades a realizar,
para as evitar posibles accidentes, con el conocimiento y las tcnicas de
trabajo apropiadas.
NIVELES
Relacin de los grupos de riesgos con los niveles de Bioseguridad
Nivel 1. Bsico.
Nivel 2. Bsico.
Nivel 3. Contencin.
Nivel 4. Contencin Mxima.
Nivel de Bioseguridad 1 (Bsico)
Los laboratorios BSL-1 trabajan con agentes menos peligrosos y que no
representan una amenaza para la salud humana; es decir, que requieren
menos precauciones.
Dentro de los agentes estudiados en los laboratorios de nivel de
Bioseguridad 1, se incluyen:
Bacilus subtilis.
Naegeria gruberi.
Virus de hepatitis canina infecciosa.
Especies de E. coli.
Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades
programadas, antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar
materiales que se sabe o se sospecha que son contaminantes.
manipulacin y desecho.
Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de
microorganismos.
RECONOCIEMTO DEL MATERIAL DEL LABORATORIO
La seguridad del laboratorio est relacionada con la naturaleza del material,
el instrumental y la actitud del educando frente a su uso y manifestaciones.
Es muy importante que los materiales y equipos de uso comn en el
laboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especfico que
tiene cada uno, pero ms importante es saber manejarlo correctamente en
el momento oportuno, teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales
para el uso de aquellos que as lo requieran.
MATERIALES, INSTRUMENTOS Y EQUIPOS
1. POR SU USO ESPECIFICO
b) Instrumentos de Medicin
Balanza de dos platillos y marco de pesas: son palancas de primer
gnero de brazos iguales que permiten medir masas, cuyo
funcionamiento se basa en compensar el momento del cuerpo a
pesar y el momento antagonista del patrn de masa, de manera que
se determina la masa del objeto comparndola con un baremo
conocido y equilibrando sus momentos.
Fluxmetro:
Vernier
Balanza granataria
Dinammetro
Termmetro
Barmetro
Brjula
Multmetro
c) Materiales de Separacin
Embudos
Matraces
Papel filtro
Tamices metlicos
d) Equipos de Separacin
De absorcin:
- columna de absorcin
- tubos desecadores
De secado
Centrifugas
Decantadores
De extraccin
De destilacin
- Foco: Este control sirve para enfocar el objetivo, para tener mejor nitidez
y observar los detalles.
c) Enfocamos la muestra:
Tipos de Microscopios
Un microscopio simple es uno que utiliza slo una lente para ampliar,
como una lente de aumento. Un microscopio compuesto utiliza dos o ms
lentes para ampiar la muestra.
Hay muchos otros tipos de microscopios, incluyendo los que utilizan rayos
X, gases y lseres.
Alguien descubri tambin que se puede enfocar los rayos del sol con una
de estas lentes especiales y provocar un incendio. Estas primeras lentes
fueron llamados lupas o lentes de quemar. La palabra "lente", por cierto,
deriva de la palabra lentejas, porque se parecan a la forma de un grano de
lenteja.
Estas lentes no se utilizaron mucho hasta el final del siglo XIII, cuando los
fabricantes de gafas estaban produciendo lentes para usarlas como gafas.
Los primeros microscopios sencillos, que eran realmente las gafas, slo
aumentaban 6 o 10 veces el tamao real. Una cosa que era muy comn e
interesante, era usarlas para mirar pulgas y otros insectos diminutos.
COLORACIONES
Las Sustancias Colorantes
Prout (1855) tuvo la brillante idea de hacer reaccionar los cidos ntrico y
rico para obtener murexide, primer colorante sinttico y Perkin, en 1856,
produce un colorante anilnico: el mauve, ao en que comienza la
produccin industrial de distintas anilinas sintticas.
El color de un agente colorante est relacionado con su estructura
molecular y la percepcin del color es consecuencia de un conjunto de
mecanismos psicolgicos y fisiolgicos a las radiaciones emitidas
por los colorantes, cuando stas impactan en la retina del ojo. Si las
radiaciones de todas las longitudes de onda inciden simultneamente en la
retina se percibe el color blanco. Cuando impacta un rango estrecho de
longitudes de onda se observa un solo color y si no se percibe radiacin
alguna sentimos la sensacin de oscuridad, color negro, ya que ninguna
energa fotnica impacta sobre la retina (Berne & Levy 1986, Christie et al.
1999). De esta manera, si la percepcin de la imagen coloreada involucra
mecanismos fisiolgicos y psicolgicos interrelacionados, por tanto, del
estado funcional de la visin del observador y de cmo tal individuo aprende
a determinar y definir un color, comenzaremos por abordar algunos
conceptos referidos a visin.
Sin embargo, tras agregar unas gotas de cido actico a dicha solucin, el
equilibrio cido-base se desplaza de manera tal, que la carga neta de los
iones de la alanina se vuelve cero (0). El pH al cual un aminocido no
presenta carga inica se lo conoce como punto isoelctrico del aminocido:
Por otra parte, las protenas globulares y fibrosas exhiben propiedades y mecanismos de
tincin diferentes. Ambos tipos de protenas pueden, dependiendo del pH, ser coloreadas con
tintes aninicos (acidofilia) o colorantes catinicos (basofilia). Solamente, la tincin con tintes
aninicos son de importancia prctica, ya que los colorantes catinicos se reservan para la
tincin combinada de cidos nucleicos y poder observar simultneamente, adems de las
protenas tisulares, los ncleos celulares. No obstante y a diferencia de las protenas fibrilares,
se supone que la mayora de las protenas globulares retienen ligeramente sus plegamientos
estructurales tras la fijacin, deshidratacin e inclusin de la muestra. Asimismo, si bien la
solucin colorante es en si misma desnaturalizante de protenas y causa su desplegamiento
parcial, no afecta demasiado las propiedades tintoriales. Esto se observa tambin en que los
cortes de tejido tanto por congelacin como de parafina conservan caractersticas colorantes
similares.
La coloracin de protenas globulares hecha con soluciones acuosas se lleva a cabo,
fundamentalmente, por interacciones hidrofbicas. El pH bajo empleado en la mayora de los
mtodos de tincin promueve el incremento de la repulsin de cargas, durante la cual se abren
las estructuras secundarias, aumentando la tensin mecnica de las protenas inmovilizadas en
el corte de tejido. Este pH es determinado, por supuesto, por el disolvente adicionado
comnmente con cido actico y, posteriormente, una vez producida la unin del colorante
aninico con los residuos no polares disminuye dicha repulsin permitiendo, como
consecuencia, que la tensin se alivie y se reestablezcan las estructuras secundarias de las
protenas ya coloreadas. En el siguiente se esquematiza el fenmeno de repulsin de cargas
en una protena hipottica: a pH 7.0 observamos la disposicin espacial de la cadena
polipeptdica, la cual muestra en sus residuos laterales grupos qumicos con carga positiva (+),
negativa (-) y grupos no polares (#):
Al sumergir la protena en una solucin cida (pH 3.0), se produce la siguiente secuencia de
eventos:
1. las cargas negativas se neutralizan (el potencial de hidrogeniones est por debajo del punto
isoelctrico de la protena),
En los cidos nucleicos, la carga neta est determinada por los grupos fosfatos, los cuales se
unen a la mayora de colorantes catinicos, una vez ionizados. Ejemplos de colorantes
catinicos: hematoxilina, azul de metileno, azul de toluidina, etc. Un caso particular en la
coloracin de cidos nucleicos, lo presenta el ADN en la Tcnica de Feulgen-Rossenbeck
(1924), ya que este cido se tie especficamente por oxidacin fuerte de la desoxirribosa con
liberacin de un grupo aldehdo que se colorea con la Fucsina bsica de Schiff.
Los lpidos son compuestos fuertemente apolares y presentan slo algunos escasos sitios
polares: carboxilos y fosfricos, que son insuficientes para producir una coloracin intensa. Por
ello, se recurre a la naturaleza no polar de los lpidos, utilizando colorantes apolares tales
como: Sudn III, Oil Red, Sudn black B, etc. Los hidratos de carbono neutros se colorean tras
oxidacin previa de sus grupos 1-2 glicoles; mientras que los proteoglicanos se tien a travs
de sus sitios carboxilados y sulfatados con colorantes bsicos, tal como sucede con los cidos
nucleicos pero a pH ms cido (0.5 -2.5).
Los resultados de coloracin pueden ser infructuosos debido a diferentes razones y una de
ellas es por el uso del colorante inadecuado. As por ejemplo, cuando se emplea el Verde
rpido C.I. 61570 en vez de C.I. 42053 en la coloracin de Gomori para patologa muscular, la
Fucsina cida C.I. 17200 en vez de C.l. 42685 en la tricrmica de Masson para diferenciar
tejido muscular y conectivo o el Rojo congo C.I. 22150 en vez de C.I. 22120 en la tcnica de
Benhold para la coloracin de amiloide, pueden obtenerse resultados de tincin dbiles,
inespecficos o falsos negativos. Por ello, es conveniente recordar que existen diferentes
variedades de una misma molcula colorante y que, por supuesto, tienen el mismo nombre.
Estas molculas, cuyo cromgeno es el mismo, difieren unas de otras en los grupos
modificadores y/o auxcromos presentes. Por ello, la Comisin Americana para la
Estandardizacin de Colorantes Biolgicos, ha elaborado una lista con todos los colorantes
utilizados en Tcnica Histolgica, identificados con un nmero, precedido de la sigla C.I.
(Colour Index) para cada uno de ellos (Rowe 1924, Conn 1953, Lillie 1977). Por ejemplo, si
comparamos los colorantes tipo Orange (CI 16230 vs. CI 15510), tanto la geometra como la
cantidad de grupos sulfnicos presentes, intervienen de manera decisiva en la selectividad e
intensidad de la coloracin de Bensley (1911) para diferenciar clulas A y B en los islotes de
Langerhans del pncreas:
Asimismo, el Colour Index evita el uso de sinnimos empleados para un mismo colorante y que
fueron acuados por diferentes autores en distintos trabajos, sin saber que se trataba de la
misma sustancia qumica. Retomando el ejemplo anterior, el Orange G se lo conoce tambin
como Wool Orange 2G o Crystal Orange GG, mientras que el Orange R es llamado Orange II,
Orange extra, Mandarin G o Tropaeolin OOO N 2.
Por otra parte, cada colorante tiene un nmero conocido como CAS (Chemical Abstract
Service), el cual permite la correcta identificacin de cada colorante en funcin de todas las
sustancias qumicas conocidas. En el siguiente cuadro se detallan algunas caractersticas que
figuran en la etiqueta de un mismo colorante expendido por tres marcas comerciales
reconocidas internacionalmente. El Chromeazurol B es tambin conocido como, Mordant blue
1, Solocrome azurine B, Chromoxane pure B, Chrome fase blue y Azurine B (Lillie 1977). De
todos los datos, el CAS "debe" figurar y es el que confirma cul es la molcula colorante que
compramos.
BIBLIOGRAFIA
http://www.chlaep.org.uy/pdf/normas_de_bioseguridad.pdf
https://es.slideshare.net/rohanpianist/niveles-de-bioseguridad-en-el-
laboratorio-16719185
http://www.monografias.com/trabajos82/seguridad-laboratorio-
reconocimiento-material/seguridad-laboratorio-reconocimiento-
material.shtml
http://www.areaciencias.com/El_Microscopio.htm
http://educacionhistotecnologiacoloracio.blogspot.pe/