Pruebas serologicas

Las pruebas de laboratorio para la deteccin de la infeccin por el VIH se

denominan pruebas serolgicas. Tales pruebas se basan en la deteccin de
anticuerpos frente al VIH, ya estn presentes o no lo estn en la muestra del
paciente. En los adultos infectados dichos anticuerpos suelen aparecer en la
sangre entre 4 y 12 semanas despus de la infeccin.
En nios menores de 18 meses es difcil interpretar los resultados de las pruebas
serolgicas. Un resultado positivo en las muestras de nios menores de 18 meses
no necesariamente indica que est infectado, pues los anticuerpos detectados
podran ser de la madre y no del beb. Las pruebas serolgicas utilizadas para el
diagnstico de la infeccin por el VIH son el ELISA, la inmunofluorescencia
indirecta, la inmunotransferencia y el Western Blot.

Prueba de inmunoensayo enzimtico: La principal prueba utilizada en el

diagnstico serolgico del VIH es el inmunoensayo enzimtico, tambin llamada
ELISA. Esta prueba utiliza antgenos virales (protenas) producidos en cultivo
celular (pruebas de primera generacin) o mediante tecnologa molecular
(recombinantes). Los antgenos virales son absorbidos en las cavidades existentes
en las placas de los kits de plstico, donde luego se agrega el suero del paciente.
Si el suero contiene anticuerpos frente al VIH, estos se unirn a los antgenos
(protenas del VIH). Ese fenmeno puede ser verificado con la adicin de un
reactivo denominado conjugado. En caso positivo, se da una reaccin de color al
aadir un sustrato. El uso de esta tcnica est muy extendido como prueba inicial
para detectar anticuerpos frene al VIH, debido a su alta sensibilidad.

Inmunofluorescencia indirecta para el VIH-1: Fijadas en portaobjetos de

microscopio, las clulas infectadas con el VIH-1 (portadoras de antgenos) se
incuban con el suero que se desea examinar, es decir, sobre el que se investiga la
presencia de anticuerpos. Dicha presencia se revela mediante microscopa de
fluorescencia. La inmunofluorescencia se usa como prueba de confirmacin de la
infeccin por el VIH.

Inmunotransferencia: En esta prueba se inmovilizan sobre una tira de nailon

protenas recombinantes y/o pptidos sintticos, representativos de regiones
antignicas del VIH-1 y del VIH-2. Adems de las fracciones virales, las tiras
contienen regiones de bandas de control (no virales) que se utilizan para
establecer, por comparacin, un umbral de reactividad para cada banda viral
presente.

Western blot: Esta prueba consiste en primer lugar en la separacin de las

protenas virales mediante electroforesis en gel de poliacrilamida, seguida de una
transferencia electrofortica de los antgenos a una membrana de nitrocelulosa. El
suero del paciente en el que se investiga la presencia de anticuerpos frente al
VIH se pone en contacto con esa membrana. Las reacciones antgeno-
anticuerpo se detectan por la reaccin con antiinmunoglobulina humana,
conjugada con una enzima. Despus de una reaccin de oxidorreduccin y de
precipitacin, se observan protenas virales en la tira de nitrocelulosa. Esta prueba
se utiliza para confirmar el resultado reactivo del ELISA, o sea, es tambin una
prueba de confirmacin de la infeccin. Tiene una alta especificidad y sensibilidad.
Western blot

El Western blot o electrotransferencia, es una tcnica analtica usada

en biologa celular y molecular para identificar proteinas especficas en una
mezcla compleja de proteinas, tal como la que se presenta en
extractos celulares o tejidos. La tcnica utiliza tres etapas para lograr esto:
separacin por tamao, transferencia a un soporte slido y, finalmente,
visualizacin mediante la marcacin de protenas con el uso de anticuerpos
primarios o secundarios apropiados.

El Western blot es la prueba de confirmacin ms comn para el VIH ya que

identifica los anticuerpos anti-VIH en funcin de su peso molecular. La prueba
se realiza generalmente de tres a cinco semanas despus de la exposicin
inicial, que es el tiempo requerido para que los anticuerpos anti-VIH aparezcan
en la sangre del paciente. Este perodo es conocido como el "perodo ventana".
La muestra ms comn para todas las pruebas confirmatorias de VIH, incluidos
los de Western blot, es la sangre, aunque otros fluidos corporales, tales como
fluidos lquidos y la orina se utilizan en circunstancias especiales. En promedio,
requiere alrededor de una a dos semanas para procesar los resultados de una
prueba de confirmacin de VIH. Los pacientes suelen tener
una seleccin limitada, ya que la mayora de las pruebas no estn comnmente
disponibles. El Western blot es muy especfico y rara vez da resultados
positivos falsos. A veces puede ser concluyente, sobre todo si el paciente no
tiene la concentracin de anticuerpos suficientes en su sangre. En tales casos,
se repite la prueba despus de un mes.
Criterios de positividad de la prueba Western Blot

Actualmente en las diferentes guas europeas se recomienda preferentemente

la utilizacin de las tcnicas de Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA)
de cuarta generacin, que incluyen la determinacin simultnea de anticuerpos
(anti-VIH-1 y antiVIH-2) y de antgeno p24 del VIH-1. Tienen la ventaja con
respecto a los ELISA de tercera generacin (que slo detectan anticuerpos) de
reducir a dos-cuatro semanas el tiempo entre la adquisicin de la infeccin y la
deteccin de un resultado positivo al VIH. Diferentes estudios han demostrado
que estas tcnicas presentan una excelente sensibilidad (99,78-100%).

Un resultado negativo en un anlisis de cribado excluye la infeccin por VIH,

salvo exposicin reciente a la infeccin y/o primoinfeccin. Teniendo en cuenta
las caractersticas de las tcnicas de cribado, se considera que no existe
infeccin por VIH tras una exposicin de riesgo si el ELISA es negativo a las 6
semanas (en el caso de pruebas de cuarta generacin) o a los 3 meses (en el
caso de pruebas de tercera generacin o de haber realizado profilaxis post-
exposicin).
Como alternativa a los mtodos de ELISA convencionales, en determinadas
circunstancias o contextos es posible el uso de pruebas rpidas. Se definen
como pruebas de fcil realizacin, de interpretacin subjetiva (ya que la lectura
no est automatizada) y capaces de proporcionar un resultado en un corto
periodo de tiempo (generalmente en menos de 30 minutos). La mayora de las
pruebas rpidas disponibles son de tercera generacin, aunque actualmente
existen en el mercado tambin pruebas rpidas de cuarta generacin. Se
pueden realizar a partir de diferentes fluidos corporales, como sangre, suero,
plasma y fluido oral. Todos los resultados positivos, al igual que los obtenidos
mediante ELISA convencionales, requieren una confirmacin posterior.

En entornos sanitarios el mtodo de eleccin ser, generalmente, la tcnica

ELISA, aunque en determinadas circunstancias en las que se necesite un
resultado en poco tiempo, o cuando el paciente rehse la extraccin de sangre,
se puede recurrir a la utilizacin de las pruebas rpidas.

Los resultados positivos obtenidos en las pruebas de cribado deben ser

confirmados siempre. Las tcnicas de confirmacin ms utilizadas son el
Western Blot (WB) y el Inmunoblot Recombinante (LIA). Estas tcnicas
permiten la deteccin de anticuerpos especficos frente a las diferentes
protenas del virus. Es recomendable que permitan la discriminacin entre las
infecciones producidas por VIH-1 y VIH-2, debido a las diferencias en la
patogenicidad y el tratamiento de ambos virus. Los criterios de interpretacin
de WB
o LIA no han variado y existen recomendaciones de diferentes organismos,
aunque las ms utilizadas son las de la OMS y las de la Cruz Roja Americana.

Solo se considera que una persona tiene infeccin por VIH cuando el resultado
de la prueba de confirmacin es positivo. Las pruebas de deteccin directa de
componentes del virus (antgeno p24 o genoma viral), estn indicadas en los
casos de un resultado de laboratorio de infeccin del VIH no concluyente. No
se recomienda la utilizacin de estas tcnicas como mtodos de cribado, ya
que no se ha demostrado que presenten ventajas sobre los mtodos de cuarta
generacin y pueden dar lugar a resultados falsamente positivos.
Una persona con diagnstico positivo debe ser derivada siempre para
seguimiento y valoracin del tratamiento.