Sie sind auf Seite 1von 2

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO

INTRODUCCIN INTERPRETACION DE RESULTADOS

Los plsmidos son molculas de DNA extracromosomal El recorrido de DNA en el gel de agarosa con azul de
los cuales estn presentes en algunas clulas bromofenol puede ser de diferentes maneras, esto
bacterianas, levaduras y hongos. Los mismos poseen depender de la calidad con que se realiz el
DNA de doble hebra, mayormente son circulares pero
procedimiento de aislamiento de DNA plasmdico. En el
tambin se han encontrado plsmidos lineales. La
replicacin de los plasmidos es independiente de la extremo inferior de la imagen donde se observa en
replicacin del cromosoma del husped ya que los corrimiento de DNA se pueden observar los fragmentos
plasmidos poseen su propio origen de replicacin. de RNA, los cuales viajan ms rpido atravesando la
malla que crea la agarosa, de manera ascendente se
Los plsmidos poseen un inters singular en Ingeniera puede observar la zona perteneciente a el DNA
Gentica por ser uno de los sistemas vectores ms plasmdico con su estructura sper enrollada, despus
sencillos de usar. Un vector de clonacin es un sistema
la estructura lineal, luego la relajada y en el extremo
que permite introducir en una clula hospedadora un
fragmento de DNA que se pretende clonar; en esta superior se encuentra la zona de aplicacin junto con
clula hospedadora el vector se replica y expresa, en su fragmentos de DNA cromosmico.
caso. La molcula que resulta de la unin de un DNA
vector con el DNA de inters (denominado entonces DISCUSION
"inserto") se denomina molcula de vector recombinante.
La utilizacin de bromuro de etidio es fundamental para
Existen diversos mtodos para el aislamiento de poder colorear y observar el recorrido de DNA a travs
plasmidos. Las tcnicas de Minipreps o mini
del soporte de agarosa, se pone de manifiesto con luz
preparaciones de plasmidos, permiten la recuperacin
de plasmidos de DNA circular sobre el DNA cromosomal. UV, aprovechando las propiedades de irradiacin que
El tratamiento de las clulas con una base de pH alto o genera con el DNA. El corrimiento de DNA plasmdico
un detergente interrumpe el apareamiento de las bases que obtuvimos fue el penltimo, se observa una mayor
nitrogenadas, ocasionando que el DNA cromosomal se cantidad de RNA, despus de DNA con estructura sper
desnaturalice y se separe. Por el contrario la enrollada, seguida de la estructura lineal y por ltimo la
configuracin superenrrollada del plasmido se mantiene relajada. La estructura sper enrollada viaja ms rpido
estable. La lisis alcalina es el mtodo mayormente
a travs del soporte de agarosa ya que se mantiene
utilizado para el aislamiento de plasmidos circulares
proveniente de clulas bacterianas. intacta su estructura. La estructura lineal de DNA se
debe a que una hebra del ADN se rompi haciendo que
OBJETIVOS su recorrido sea ms lento que el anterior mencionado y
por ltimo la estructura relajada corresponde a que el
Obtener el DNA del plsmido pUC18. DNA se qued muy daado y se fragmenta ocasionando
Realizar una electroforesis en gel de agarosa que su recorrido sea ms lento que las otras dos
del plsmido obtenido. estructuras.
Discutir acerca de las formas moleculares
obtenidas en el desarrollo experimental.

RESULTADOS CONCLUSIONES

En la siguiente imagen se observa la electroforesis Es posible aislar DNA plasmdico y ponerlo de manifiesto
realizada en un soporte de agarosa y se ve el con bromuro de etidio y luz UV en una placa de agarosa
corrimiento del DNA plasmdico que obtuvimos. con azul de bromofenol, mediante el empleo de la
electroforesis.

Se puede observar la calidad del aislamiento de DNA,


debido a la observacin de las zonas de recorrido, este
depender de la estructura del mismo, que puede ser
sper enrollada, lineal y relajada.

Obtuvimos mayor recorrido de DNA conservando su


estructura sper enrollada, por lo que se concluye que el
asilamiento fue de buena calidad.

Ilustracin 1.Corrimiento de DNA


plasmdico en un soporte de agarosa.

1
INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO

PREGUNTA EXTRA

Estructura Bromuro de Etidio. Se trata de un compuesto


intercalante, es decir, que tiene afinidad para unirse al
DNA, pues se introduce entre sus bases apiladas. Esto
se debe a su geometra plana y su estructura aromtica,
que interacciona favorablemente con el interior hidrfobo
de la doble hlice. En menor medida, interacciona
tambin con DNA monocatenario.
Su utilidad deriva asimismo de su fluorescencia, exaltada
al encontrarse en un entorno hidrfobo, es decir, al estar
unido al DNA. Se excita con luz ultravioleta de onda
corta, 254 nm, y emite su fluorescencia como luz visible,
de color rosado-anaranjado.
En la electroforesis, se utiliza para "teir" el DNA, para
revelar su posicin en el gel. Se puede baar el gel tras
la electroforesis en una disolucin de bromuro de etidio, BIBLIOGRAFA
o bien incorporar ste a la disolucin de agarosa con la
que se prepara el gel. Lenhinger AL, Nelson DL. Principios de
Bioquimica. 5 Ed.Barcelona: Ediciones
Omega; 2005
http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/r
eactivos.htm
Fundamentos de bioqumica estructural; Jos
Mara Teijn; Editorial Tebar.
https://bacteriologiaclinica.wikispaces.com