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Energietechnik 127

Michael Lebuhn und Andreas Gronauer

Mikroorganismen im Biogasprozess
die unbekannten Wesen
Die Biogasproduktion aus landwirtschaftlichen Produkten hat in den letzten Jahren stark an
Bedeutung gewonnen und soll knftig einen wesentlichen Teil der Energieversorgung abde-
cken. Entsprechend wurde die Forschung ber den eigentlichen Motor der Methanproduktion,
die Mikroorganismen im Fermenter, stark intensiviert. Wichtige Erkenntnisse sollen in ver-
fahrenstechnische Manahmen umgesetzt werden, um die Prozesse zu optimieren. Im vorlie-
genden Artikel werden neue Erkenntnisse aus dem Bereich Mikro- und Molekularbiologie in
der Vergrung nachwachsender Rohstoffe vorgestellt. Diese modifizieren die gngigen Lehr-
buchansichten zu den dominanten mikrobiellen Umsatzwegen von Biomasse zu Biogas. Konse-
quenzen fr eine spezifisch optimierte Prozessgestaltung werden diskutiert.

Schlsselwrter Vergrung zu Biogas, Wrme und Grrest um und gewannen


Mikrobiologie, Molekularbiologie, Biogas, Methanogenese, daraus Energie und Dnger. Durch die Verknappung fossiler
nachwachsende Rohstoffe Energietrger und die Explosion der Preise fr die Energie-
versorgung gewinnt Biogas heute wieder an Bedeutung. Dabei
Keywords kann die Biogastechnologie bei sachgemem Einsatz wesent-
Microbiology, molecular biology, biogas, methanogenesis, lich zur Einsparung fossiler Energietrger und zur Verringe-
trace elements, renewable resources rung der Netto-Emissionen klimarelevanter Gase beitragen.
Von den aktuell rund 4000 Biogasanlagen in Deutschland
Abstract wird die Mehrzahl wegen des hheren Biogas-Ertrags mit nach-
Lebuhn, Michael and Gronauer, Andreas wachsenden Rohstoffen (NawaRo) betrieben, hufig in Co-Ver-
grung mit Wirtschaftsdngern.
Microorganisms in the Ein konomisch und kologisch sinnvoller Betrieb von Na-
waRo-Biogasanlagen ist nur bei grter Effizienz mglich. Dafr
biogas-process the unknown beings muss die prozesstragende Mikroorganismen-Gesellschaft best-
mglich zusammengesetzt und aktiv sein, wofr wiederum ein
Landtechnik 64 (2009), no. 2, pp. 127 - 130, prozessspezifisch optimal ausgelegter verfahrenstechnischer
2 figures, 7references Rahmen essentiell ist. Die Mikrobiologie der Biogasproduktion
aus NawaRo und mikrobiologische Mglichkeiten der Prozess-
The importance of biogas production from agricultural optimierung sind aber ungengend erforscht. Teilweise wurden
products has recently largely increased in Germany. Bio- Erkenntnisse kaum geprft aus den Bereichen Abwasserreini-
gas production is expected to cover a significant portion of gung und Abfallbehandlung bernommen.
energy supply. Consequently, research on the true motor of Erst seit Einfhrung molekularbiologischer Methoden
methane production, the microorganisms in the fermenter, wissen wir um die Existenz dreier Lebenslinien (Domnen
was intensified. Important results are to be implemented by Archaea, Bacteria, Eukaryota). Die Methan produzierenden
engineering to optimize the processes. In the current article, Mikroorganismen zhlen zu den Archaeen. Die vorgelagerten
latest insights from micro- and molecular biology research are Umsetzungen werden im Wesentlichen durch Bakterien durch-
presented modifying established views on dominant microbial gefhrt (Abb. 1). Schtzungen zufolge sind weniger als 1 %
transformation pathways of biomass to biogas. Consequences der an der anaeroben Vergrung beteiligten Mikroorganismen
for specifically optimized process design are discussed. bekannt. Eine Kultivierung, die ein Studium der Leistungen
dieser Organismen erleichtern wrde, ist in diesem Bereich be-
sonders schwierig.
n Bereits vor ber 2000 Jahren setzten Menschen organische Auch bestehen bisher kaum Erfahrungen im Langzeitbe-
Masse durch den mikrobiologischen Prozess der anaeroben trieb von NawaRo-Biogasanlagen. Die meisten Anlagen werden

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als black box nach dem trial-and-error- Abb. 1


Prinzip betrieben. Entsprechend hufen
sich Berichte zu Prozessstrungen, Proble-
men im Anfahrbetrieb oder gar Havarien
insbesondere bei Mono-NawaRo-Betrieb.
Zur Vorbeugung oder Abhilfe werden von
einigen Betreibern Zauberplverchen
als Prozesshilfsstoffe nach dem Motto viel
hilft viel zugesetzt. Die Folgen knnen fr
Betrieb und Umwelt fatal sein.
Aus diesen Grnden wurde jngst die
Forschung zur Mikrobiologie und zu Ur-
sachen der Prozessstrungen auch am
Institut fr Landtechnik und Tierhaltung
der LfL stark intensiviert. Einige relevante
Erkenntnisse sind bereits entstanden,
die nicht zu den gngigen Lehrbuchmei-
nungen ber die dominanten anaeroben
mikrobiellen Umsetzungen von Biomasse
Anaerober Abbau von nachwachsenden Rohstoffen im einphasigen Biogasprozess mit betei-
zu Biogas passen.
ligten Mikroorganismen (systematische Gruppen, Taxa)
Fig. 1: Anaerobic degradation of organic matter (renewable resources, silages) in one-phase
Bei hherer Raumbelastung mit biogas process with participating systematic groups (taxa) of microorganism
nachwachsenden Rohstoffen domi-
niert der Abbauweg ber die Archaeen-Ordnungen Methanobacteriales, Methanomicrobiales)
syntrophe Acetat-Oxidation und die hydrogenotrophe zu finden, Methanosarcinen gingen dafr stark zurck [2, 3].
Methanogenese Acetat wurde offenbar kaum noch zu CH4 und CO2 gespalten,
Der Lehrbuchmeinung nach werden etwa 70 % des Methans im die Methanbildung erfolgte praktisch ausschlielich ber den
Biogas ber Essigsure (Acetat) und dessen Spaltung (acetoklas- hydrogenotrophen Weg (Abb. 1). Auch in einer mit Rinderglle
tischer Weg) und 30 % ber die Reaktion von Wasserstoff mit und Maissilage betriebenen Praxisbiogasanlage dominierten
Kohlendioxid (hydrogenotropher Weg) gebildet (Abb.1). Diese hydrogenotrophe Methanogene [4]. Der Anteil der Methanbil-
Verteilung ist typisch fr die in der Abwasserreinigung einge- dung aus H2 und CO2 an der Biogasbildung aus NawaRo wurde
setzten Hochleistungsreaktoren mit langen Verweilzeiten der offensichtlich bisher stark unterschtzt.
Mikroorganismen (die von der Verweilzeit der flssigen Phase In diesem Zusammenhang besonders interessant sind Be-
entkoppelt sind) und eher geringen Acetat-Konzentrationen. funde, dass Essigsure bei Abwesenheit von Methanosaeten so-
Dort knnen sich die obligat acetoklastischen Methanosaeten, wie hheren Gehalten an flchtigen Fettsuren und Ammoniak
sich nur relativ langsam vermehren knnen [1], wegen ihrer verstrkt ber die syntrophe Acetat-Oxidation (SAO, Abb.1) zu
hohen Affinitt zu Acetat durchsetzen. Wasserstoff und CO2 umgesetzt wird; entsprechend erfolgt die
Bei hheren organischen Raumbelastungen mit typischer- Methanbildung in bereinstimmung mit den eigenen Befun-
weise hheren Acetatgehalten (> 60 mg * L-1) bekommen die den vorwiegend hydrogenotroph [5]. Nun verluft die bergabe
schneller wachsenden Methanosarcinen, die sowohl acetoklas- von CO2 und insbesondere H2 von den SAO-Bakterien zu den
tisch als auch hydrogenotroph Methan bilden knnen, einen hydrogenotrophen methanogenen Archaeen nur dann effizient,
Vorteil. Eigenen Erfahrungen nach ist das (zumindest bei wenn sich die beiden Partner in engster Nhe befinden, und
Maissilage) in den typischen Rhrkessel-Fermentern bereits die Methanogenen erst durch Entfernen von H2 aus dem Reak-
bei einer organischen Raumbelastung (BR) von etwa 1,5 g tionsgleichgewicht die Produktion von H2 und CO2 durch die
oTS * (L*d)-1 der Fall. Methanosaeten werden im Durchfluss- SAO energetisch ermglichen [6]. Eine Konsequenz daraus ist
Betriebsverlauf, wohl wegen ihres langsamen Wachstums, beispielsweise, dass Rhren zwar zum Schaffen frischer Ober-
schlielich vllig ausgednnt. flchen fr den Substratabbau ntig ist, die bergabe des Was-
In Versuchen mit Maissilage im Mono-Betrieb waren Me- serstoffs vom einen zum anderen Partner aber nicht durch zu
thanosarcinen bei gnstigen ueren Bedingungen (vor allem schnelles Rhren gestrt werden sollte. Der gesamte Prozess
optimale Spurenelement-Versorgung, s. unten) und Acetat-Kon- kann sonst zum Erliegen kommen.
zentrationen bis zu 3 g * L-1 noch bei BR 4 g oTS * (L * d)-1 Solche Syntrophien (symbiosehnliche Verhltnisse) haben
dominant [2, 3]. Bei hheren Gehalten flchtiger Fettsuren sich in der Evolution besonders unter anaeroben Verhltnissen
infolge von Spurenelementmangel waren praktisch nur noch herausgebildet, da der Energiegewinn beim anaeroben Substrat-
obligat hydrogenotrophe Methanogene (vor allem Vertreter der abbau wesentlich geringer ist als beim aeroben, wo Sauerstoff

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der Elektronen-Endempfnger ist. Vor allem die oben genannte hohen Konzentrationen in NawaRo-Fermentern vor. Fr andere
Oxidation bestimmter Fettsuren kann nur syntroph ber der Schwermetalle wie zum Beispiel Cadmium, Arsen, Quecksilber,
Grenze thermodynamisch mglicher Energiegewinnung durch- Silber und Blei sind bisher nur toxische Wirkungen bekannt.
gefhrt werden [6]. Entsprechend ist der gesamte Prozess hin- Co, Ni, Mo und Se knnen in zu hohen Konzentrationen
sichtlich der Energieausbeute extrem effizient, einzelne Schritte auch toxisch wirken. Dies ist insbesondere bei der Weiterver-
knnen aber ohne spezifische Eingriffe nur relativ langsam wertung der Grreste zu beachten vor allem wenn die Gl-
verlaufen. Diesen energetisch ungnstigen Reaktionen, den tigkeitsbereiche der Dngemittel- oder Bioabfallverordnung
Flaschenhlsen, gilt unsere besondere Aufmerksamkeit, hier betroffen sind. Spezifisch fr die einzelnen Spurenelemente
kann der Prozess verfahrenstechnisch optimiert werden. (und die anderen Schwermetalle) sind also Optima zwischen
Mindest- und Hchstkonzentration einzustellen.
Die Methanogenese bentigt bestimmte Aus dem Bereich Abwasserreinigung ist bekannt, dass eine
Spurenelemente in einem ausreichende Versorgung mit Spurenelementen fr eine funkti-
optimalen Konzentrationsbereich onsfhige Methanisierung essentiell ist. Allerdings ist hier eine
Die Grundlagenforschung zur Methanbildung konnte mittler- Mangelversorgung bei der Beschaffenheit der Substratstrme
weile einzigartige Reaktionswege aufdecken und die Essentia- weniger ein Thema als eventuelle toxische Wirkungen, des
litt ungewhnlicher Spurenelemente wie zum Beispiel Kobalt Klrschlamms. Es ist zu bedenken, dass sich die Konzentration
(Co), Nickel (Ni), Molybdn (Mo) und Selen (Se) fr Teilprozesse der Schwermetalle im Grrest wegen des Masseverlusts bei der
im anaeroben Abbau nachweisen. Co, Ni, Mo und Se sind zen- Biogasproduktion erhht, weil die Metalle nicht in die Gaspha-
trale Bestandteile von Stoffwechselwegen der methanogenen se bergehen.
Archaeen (zum Beispiel Elektronentransportkette, ATP-Gewin- Die Biogas-Szene war erstaunt, als erste Berichte zu mangel-
nung, Methanbildung, Wasserstoff- und CO2-Aufnahme, Acetat- hafter Prozessleistung oder gar zu Havarien von landwirtschaft-
spaltung, Methylgruppen-Verwertung) oder von essentiellen lichen NawaRo-Biogasanlagen auftauchten. Im Langzeitver-
Cofaktoren zum korrekten Ablauf dieser Wege. such, in sechs 32-L-Labor-Durchflussfermentern nachgestellt,
Die Bedeutung zum Beispiel von Bor, Vanadium Wolfram verringerten sich trotz relativ geringer alleiniger Ftterung mit
und Aluminium ist umstritten. Zink, Eisen und Kupfer sind Maissilage etwa nach 200 Betriebstagen die Biogasproduktion,
zwar wichtig, sie kommen aber insbesondere bei Coverg- der Methangehalt und der oTS-Abbau. Die Gehalte flchtiger
rung mit Wirtschaftsdngern typischerweise in ausreichend Fettsuren stiegen stark an, die Fermenter versuerten.

Abb. 2

Methanausbeute und organische Raumbelastung der 6 versuert/ausgehungerten Mono-Mais-Fermenter B1 bis C3 nach Spurenelement-
(SpE-)Zusatz und Wiederanfahren
Fig. 2: Methane yield and organic loading rate (OLR) of the 6 acidified/starved mono maize fermenters B1 C3 after addition of a trace element
(SpE) cocktail and feeding restart
Reprinted from Water Science and Technology, volume 58, issue number 8, pages 1645-1651, with permission from the copyright holders, IWA.

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Ein Wiederanfahren war nicht erfolgreich, die Ftterung thanogenen Archaeen) vorhanden ist, oder ob Vernderungen
musste schlielich eingestellt werden. Aufgrund der Vermu- eingetreten sind, die knftige Schwierigkeiten im Betrieb an-
tung, dass ein Mangel an Spurenelementen fr die methano- deuten knnen.
genen Archaeen die Ursache des Prozesszusammenbruchs war,
wurde ein Spurenelement-Cocktail (SpE) zusammengestellt [7] Ausblick
und nach Abbau der berschssigen Fettsuren in unterschied- Zur Analyse der methanogenen Archaeen im Fermenter sind
licher Konzentration mit der geftterten Maissilage zu 4 Fer- noch eine Reihe von Fragen zu klren:
mentern zugesetzt (Abb. 2). Schon bald brach der Prozess bei Wie hngt die Populations-Zusammensetzung von der Art
den 2 Kontrollen (ohne SpE-Zusatz) wieder zusammen, wh- der geftterten Substrate und vom Futterzustand ab?
rend mit SpE-Supplementierung ein stabiler Hochleistungsbe- Sind die ber DNA-Analytik gefundenen Organismen auch
trieb erreicht wurde (Abb. 2). entsprechend ihrer Anzahl im Fermenter aktiv?
Erste Ergebnisse weisen auf einen Mangel an den Verdch- Gibt es biologische Marker fr einen guten und einen
tigen Ni, Mo, Se und insbesonder Co hin. schlechten Prozesszustand, und reicht es aus, diese Leitorga-
Den ICP-OES- bzw. ICP-MS-Analysen der Fermenterinhalte nismen ber quantitative PCR-Analytik zu messen?
zufolge waren unter etwa 20 g Co * L-1 (ca. 300 g Co * kg Welche Organismen spielen in den der Methanogenese
TS-1) Mangelerscheinungen deutlich sichtbar. Ein Gehalt von vorgelagerten Prozessen wichtige Rollen, und welche dieser
etwa 50 g Co * L-1 (ca. 750 g Co * kg TS-1) erscheint fr einen Organismen sollten in der Routine erfasst werden?
stabilen Betrieb gnstig zu sein. Die entsprechenden Konzen- Auch bei der Frage der Versorgung mit Makro- und Mikronhr-
trationen lagen fr Selen etwa 5-fach niedriger fr Mo etwa um stoffen bzw. Prozesshilfsstoffe sind Fragen offen:
den Faktor 10 und fr Ni etwa um den Faktor 40 hher. Aus Welche (Mikro-)Nhrstoffe sind fr welche Prozesse in wel-
Abb.2 geht auch deutlich hervor, dass viel mehr (10-fache SpE- chen Konzentrationen ntig und gleichzeitig fr die gesamte
Dosierung) nicht viel mehr bringt. Die Methanausbeuten waren Bioznose im Fermenter sowie die Umwelt tolerierbar?
fr beide SpE-Zusatzvarianten gleich. Wichtig ist es ausschlie- Welche nachhaltigen Strategien knnen zur Ammoniak-
lich, optimale Konzentrationsbereiche einzustellen! Entgiftung beitragen?
Aus den Analysen der geftterten Maissilage ergab sich Derzeit ist eine Bilanzierung der Spurenelemente im Fermenter
auch, dass im Langzeitbetrieb Mangelerscheinungen auftreten in Arbeit. Dabei werden die optimale Versorgung des Prozesses,
mussten. Die Frachten der Spurenelemente reichten ohne einen die Gehalte in den Substraten und die Erfordernisse von Seiten
Zusatz nicht fr die Einstellung der erwnschten Konzentrati- der Umwelt bercksichtigt. Dies soll eine sachgerechte land-
onen aus. Die aufgetretene Versuerung lsst sich so erklren: wirtschatliche Verwertung der Grreste ermglichen.
Durch die nach wie vor aktive Hydrolyse, Acido- und Acetoge-
nese wurden zwar noch Fettsuren gebildet, diese konnten aber Literatur
[1] Jetten, M. S. M., A. J. M. Stams and A. J. B Zehnder: Methanogenesis from
wegen des Ausfalls der Methanogenese infolge des Spurenele-
acetate: a comparison of the acetate metabolism in Methanothrix soehn-
mentmangels nicht mehr abgebaut werden (Abb.1), und es er- genii and Methanosarcina spp. FEMS Microbiol. Rev. 88 (1992), 181198.
gab sich ein Surestau. Eine erneute Versuerung nach dem [2] Lebuhn, M., C. Bauer und A. Gronauer: Probleme der Biogasproduktion
aus nachwachsenden Rohstoffen im Langzeitbetrieb und molekularbiolo-
Wiederanfahren konnte nur durch Reaktivierung der Methano- gische Analytik. In: VDLUFA-Schriftenreihe 64 (2008), 118-125, ISBN978-
genese, die die Suren abzieht, verhindert werden. 3-941273-05-4.
[3] Bauer, C., M. Korthals, A. Gronauer and M. Lebuhn: Methanogens in bio-
gas production from renewable resources a novel molecular population
Eine regelmige Analytik ist wichtig analysis approach. Water Sci. Tech. 58(7) (2008), 1433-1439.
[4] Nettmann, E., I. Bergmann, K. Mundt, B. Linke and M. Klocke: Archaea
Anderen Berichten zufolge reicht auch eine Cofermentation mit diversity within a commercial biogas plant utilizing herbal biomass
Wirtschaftsdngern nicht in allen Fllen aus, die gewnschten determined by 16S rDNA and mcrA analysis. J. Appl. Microbiol. 105(6)
(2008), 1835-1850.
Konzentrationen der Spurenelemente im Fermenter herzustel-
[5] Schnrer A and A. Nordberg: Ammonia, a selective agent for methane
len. Zudem knnen sich die zu ftternden NawaRo in ihren production by syntrophic acetate oxidation at mesophilic temperature.
Spurenelement- und Schwermetallgehalten je nach Art und Water Sci. Tech. 57(5) (2008), 735-740.
[6] Schink, B.: Energetics of Syntrophic Cooperation in Methanogenic Degra-
Herkunft (Standorteigenschaften) deutlich unterscheiden. dation. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 61(2) (1997), 262280.
Regelmige Analysen der geftterten Substrate (insbeson- [7] Lebuhn, M., F. Liu, H. Heuwinkel and A. Gronauer: Biogas production
from mono-digestion of maize silage long-term process stability and
dere bei Substrat- und Chargenwechseln), eine Bilanzierung requirements. Water Sci. Tech. 58(8) (2008), 1645-1651.
der Spurenelementgehalte und etwa monatliche Analysen auf
Spurenelemente sind also wichtig fr ein frhzeitiges Erken- Autoren
nen von Mangelzustnden. Je nach Status kann ein spezifisch Dr. Michael Lebuhn ist wissenschaftlicher Mitarbeiter am Institut fr
zusammengestellter SpE-Zusatz definiert werden. Landtechnik und Tierhaltung der Bayerischen Landesanstalt fr Landwirt-
Weiterhin erscheint es ratsam, in regelmigen Abstnden schaft (LfL) und leitet die Arbeitsgruppe Mikrobiologie im Arbeitsschwer-
punkt Biogas der LfL. E-mail: michael.lebuhn@lfl.bayern.de
den Fermenterstatus molekularbiologisch untersuchen zu las-
Dr. Andreas Gronauer koordiniert den Arbeitsschwerpunkt Biogas der
sen, um festzustellen, ob die gewnschte Zusammensetzung LfL sowie den Arbeitsbereich Umwelttechnik in der Landnutzung. Adresse:
der Mikroorganismen und ihre Anzahl (insbesondere der me- Vttinger Str. 36, 85354 Freising, E-Mail: andreas.gronauer@lfl.bayern.de

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