UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRCOLAS

INGENIERA AGRONMICA
Nombre: Steven Cuasaps, Paola Cachago
Semestre: Segundo A
Fecha: 7 de junio de 2017
Tema: Aislamiento de Azotobacter sp.
Introduccin:
Azotobacter sp es una bacteria cuya principal caracterstica consiste en la
fijacin del nitrgeno presente en la atmsfera, de manera que quede accesible
para la planta, lo que significa un aporte natural de nitrgeno.
Las Azotobacter sp. es un gnero de bacterias usualmente mviles, esfricas
que forman quistes (estado de reposo o inactividad que ayuda al organismo a
sobrevivir a condiciones ambientales desfavorables) de pared gruesa, y pueden
producir grandes cantidades de baba capsular. Tiene una tasa respiratoria
efectiva y rpida a nivel superficial. Utilizan azcares, alcoholes y sales
inorgnicas para crecer.
Es de vida libre, adems del uso de Azotobacter sp. como organismo modelo,
tiene aplicaciones biotecnolgicas. Ejemplos de su uso son la produccin de
alginatos y de nitrgeno en fermentaciones. Azotobacter sp. es una bacteria
Gram-negativa. (Dixon, 2004)
Objetivo:
Permitir al estudiante tener el conocimiento sobre el aislamiento de Azotobacter
sp., a partir de una muestra de suelo.
Marco Terico
Actualmente la mayora de cultivos agrcolas dependen de los fertilizantes
qumicos sintticos, los cuales proporcionan nutrimentos asimilables por las
plantas. Sin embargo, su uso prolongado ocasiona contaminacin ambiental y
daos ecolgicos, adems de un incremento en el costo de produccin y el
impacto negativo en la salud animal y humana. Una alternativa es utilizar
biofertilizantes para promover la agricultura orgnica y las tecnologas limpias y
seguras. Las bacterias fijadoras de nitrgeno (diaztrofas) fueron las primeras
en producirse comercialmente con fines de biofertilizacin. De este grupo, las
ms utilizadas como biofertilizantes corresponden al gnero Azotobacter sp., el
cual comprende siete especies:
 a) A. chroococcum
b) A. vinelandii
c) A. beijerinckii
d) A. paspali
e) A. armeniacus
f) A. nigricans
g) A. salinestris

Los mtodos ms utilizados para aislar bacterias del gnero Azotobacter

incluyen el aislamiento en medio libre de nitrgeno, enriquecimiento en solucin
de Winogradsky y posterior siembra en medio libre de nitrgeno, y siembra de
grnulos individuales de suelo en medio libre de nitrgeno. Para su
identificacin preliminar se emplean pruebas bioqumicas como la fermentacin
de diferentes azcares. [ CITATION Gal13 \l 12298 ]

Materiales, equipos y medios de cultivo:

Muestro 2 de suelo hmedo
de nogal Pipetas
Cinta para medir PH
Agua estril (90 ml en frasco) Frasco con tapa (90ml)
Tubos de ensayo con 9 ml de Agitador vortex
agua estril Incubadora 30
Agar B de King Micropipeta 200ul
Balanza mecnica Cmara de flujo laminar
Cajas Petri PDA (3) Mechero de alcohol
Micropipetas de 100 1000 Papel aluminio
ul
Mtodos y Procedimiento:
1. Colectar muestras de suelo de la rizsfera , preferentemente de plantas
donde no se hayan aplicado agroqumicos
2. Colocar 10g de suelo de nogal en un frasco que contenga 90ml de agua
destilada esterilizada, dilucin ( 101 ).
3. Agitar la suspensin durante 15 minutos.
4. Hacer diluciones seriadas, hasta la 105
5. Sembrar 100 L de la solucin 105 en el medio B de King.
6. Incubar las cajas a 30 C durante 48 a 72 horas.
7. Purificar la bacteria a partir del aislamiento primario, rayar con el asa de
platino en una caja conteniendo el medio Ashby.
8. Realizar pruebas bioqumicas para comprobar el gnero de la bacteria

Composicin del medio de cultivo B de Ashby.

Componentes g/litro
K2HPO4 0,2g
MgSO4.7H2O 0,2g
NaCl 0,2g
CaSO4.2H2O 0,1g
Manitol 10 g
Bacto agar 15 g
CaCO3 5g
Agar 15 g
Agua destilada 1L
Resultados
Medio Repeticin pH Resultado
Ashby I 6 Azotobacter sp
Ashby II 6 Azotobacter sp
Ashby III 6 Azotobacter sp

Discusin de Resultados:
Segn (Flores; Gonzlez; Aguilar; Herrara, 2014) el gnero azotobacter, el cual
se encuentra en la rizosfera del suelo con alto contenido de materia orgnica,
fosfatos y valores de pH cercanos a la neutralidad, las bacterias del gnero
Azotobacter son fijadores de nitrgeno de vida libre, el mtodo ms utilizado
para aislar bacterias de este gnero, implica el aislamiento en medios de cultivo
libre de nitrgeno como el Ashby, Burk y Jensen, para su identificacin
preliminar se emplean pruebas bioqumicas as como la morfologa colonial y
celular , requieren de una temperatura optima de 30 C son susceptibles a pH
acido, concentraciones de cloruro de sodio altas y temperaturas mayores de
35C, el gnero Azotobacter posee clulas en reposo conocidas como quistes
estos se producen como mecanismo de resistencia por agotamiento de a
fuente de carbono y la deshidratacin.
Segn lo expuesto anteriormente la muestra tomada de nogal es una muestra
adecuada por su grado de humedad, el pH 6 obtenido es tambin el
adecuado por no llegar a su grado de neutralidad brindado posibilidades de
encontrar aun la bacteria y el medio Ashby es el adecuado por ser libre de
nitrgeno, conociendo que la cantidad de siembra depende del lugar donde se
va a sembrar, porque la cantidad de siembra pudiera interferir en la
identificacin de microorganismos. Por lo cual se pudiera decir que todos los
requerimientos para el aislamiento de Azotobacter fueron los adecuados.
Conclusiones:
- Se conoci el aislamiento del Azotobacter sp, ya que las muestras
dieron positivas demostrando que se realiz un buen procedimiento para
el aislamiento.

- Se identific que la muestra realizada tena un pH de 6 por lo que se

pudo presentar las Azotobacter sp, ya que estas se desarrollan en un pH
cercano a la neutralidad.

- Se diferenci que el Azotobacter sp, solo se presentan en suelos con

altos contenido de materia orgnica y nitrgeno, la que dio positiva en la
muestra de suelo de Nogal.

Bibliografa:

Dixon. (2004). Regulacin Gentica de la fijacin Biolgica de Nitrgeno. Nat Rev Microbiol.
2(8) 621 - 31.

Gallegos. (2013). AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE CEPAS NATIVAS DEL

SUELO. Obtenido de
http://www.posgradoeinvestigacion.uadec.mx/Documentos/AQM/AQM8/4.pd

Flores.A, Gonzlez.V, Aguilar.C, Herrera.R, (2014), Biofertilizantes Microbianos,

Universidad Autnoma de Coahuila, Saltillo-Coahuila-Mxico. Obtenido de:

https://www.researchgate.net/publication/274638111_Azotobacter_una_bacteria_con
_potencial_como_biofertilizante_eco-amigable