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Por
Dinora Snchez
I.V.I.C.
ALTOS DE PIPE
OCTUBRE, 2012.
La Tesis de Grado de Dinora A. Snchez H., titulada EPIDEMIOLOGA DE LA
INFECCIN POR BATRACHOCHYTRIUM DENDROBATIDIS EN COMUNIDADES
DE ANFIBIOS DE LOS ANDES VENEZOLANOS, ha sido aprobada por el jurado,
quien no se hace responsable de su contenido, pero la ha encontrado correcta en su
calidad y en su forma de presentacin en fe de lo cual firman,
Por
Dinora A. Snchez H.
Margarita Lampo
Tutor de la Tesis de Grado
A mi familia
1
AGRADECIMIENTOS
Al IVIC por el apoyo logstico y financiero que permiti el desarrollo de esta tesis.
A Alex Hyatt por suplir los estndares para la cuantificacin de las zoosporas.
Al Ministerio del Poder Popular para el Ambiente por el apoyo brindado en campo.
A los curadores de las colecciones de reptiles y anfibios de los siguientes Museos por
facilitarme los registros de presencia de Dendropsophus meridensis: Museo de la
Estacin Biolgica de Rancho Grande, Coleccin de Vertebrados de la Universidad de
Los Andes, Coleccin de Anfibios y Reptiles del Laboratorio de Biogeografa de la
Universidad de Los Andes, Museo de Historia Natural La Salle, Museo del Instituto de
Zoologa Agrcola y Museo de Biologa de la Universidad Central de Venezuela.
A Jon Paul Rodrguez y Jess Eloy Conde por la asesora acadmica permanente.
A los investigadores del Centro de Ecologa y a Diego Rodrguez, Csar Molina, Celsa
Searis por la revisin y crticas constructivas realizadas a mi proyecto de tesis doctoral.
A Barbara Han, Jhon Flores, Jos Luis Nava, Horacio Gonzlez, Julio Csar Snchez,
Aldemar Acevedo, Elba Guerrero, Mariella Mrquez, Francisco Nava, Javier Valera-Leal
y a Diego Cadenas por colaborar en los muestreos de campo.
A Fabiola Len, Carmen Garca y Aiskel Rodrguez por contribuir con la realizacin de
los ensayos de PCR para el diagnstico de Bd en muestras de tejido de anfibios.
A mis compaeros: Mara Gabriela, Ada, Jos Rafael, Iliena, Yelitza, Lauri, Jos
Antonio, Antonio, Jorge, Yulimar, Elba, Jeannilet, Jhoan, Angiebelk, Andreina y Hector
por hacer tan ameno m transcurrir acadmico.
A Javier (mi amor) por apoyarme en mi tesis de forma incondicional y por su amor.
A mi hija Valeria (mi sol), por llegar a mi vida y darme el empujn que necesitaba.
A mis padres y hermanos (mis columnas) por estar siempre a mi lado, por todo su amor,
por su paciencia inagotable, por sus palabras de apoyo, por confiar en m.
3
INDICE GENERAL
Pgina
RESUMEN. iii
AGRADECIMIENTOS. vi
LISTA DE TABLAS. x
REA DE ESTUDIO. 9
ESPECIES DE INTERS. 12
Batrachochytrium dendrobatidis. 12
RESUMEN. 31
INTRODUCCIN. 32
MATERIALES Y MTODOS. 35
RESULTADOS. 39
DISCUSIN. 46
RESUMEN. 54
INTRODUCCIN. 55
4
MATERIALES Y MTODOS. 59
RESULTADOS. 72
DISCUSIN. 86
RESUMEN. 93
INTRODUCCIN. 94
MATERIALES Y MTODOS. 96
RESULTADOS. 99
DISCUSIN. 101
ANEXOS. 137
LISTA DE TABLAS
Tabla
Pgina
LISTA DE FIGURAS
Figura
Pgina
Son diversos los factores que pudieran contribuir a las disminuciones en los
tamaos poblacionales la contaminacin (Blaustein et al. 2003; Rohr et al. 2004), la
introduccin de especies exticas (Kupferberg 1997; Kiesecker et al. 2001b), el
incremento en la incidencia de radiacin ultravioleta (Kiesecker et al. 2001a; Blaustein et
al. 2003), la destruccin del hbitat (Stuart et al. 2004; Lips et al. 2005; Cushmann
2006), los cambios climticos (Pounds y Crump 1994; Pounds y Puschendorf 2004), las
enfermedades infecciosas (Laurance et al. 1996; Berger et al. 1998; Lips et al. 2006) y la
sinergia entre algunos de estos factores (Kiesecker et al. 2001a; Blaustein et al. 2003;
Burrowes et al. 2004; Pounds et al. 2006; Lampo et al. 2006b; Alford et al. 2007). La
destruccin del hbitat ha sido la causa ms importante de las disminuciones de especies
de anfibios (Sala et al. 2000; Lips et al. 2005), especialmente aqullas asociadas a tierras
bajas (Young et al. 2001). Se estima que 183 de las especies (42%) cuyas poblaciones
estn disminuyendo rpidamente, lo hacen debido a la prdida acelerada de sus hbitat
(Stuart et al. 2004). Sin embargo, poblaciones de 207 especies (48%) han sufrido
declives drsticos en zonas prstinas -nmero equiparable al de zonas intervenidas (183
especies)- lo cual sugiere un efecto global e indirecto de las actividades humanas sobre
los sistemas naturales (Stuart et al. 2004). Las disminuciones que han ocurrido en zonas
prstinas presentan un patrn no-aleatorio con respecto a las preferencias ecolgicas, los
12
intervalos geogrficos y los grupos taxonmicos de las especies afectadas (Stuart et al.
2004). Entre las hiptesis que cuentan con mayores evidencias para explicar estas
disminuciones, est la de epidemias de una enfermedad infecciosa de anfibios llamada
quitridiomicosis cutnea.
Transcurridos 12 aos del descubrimiento de Bd, son numerosos los trabajos que
se ha publicado sobre el tema (Kilpatrick et al. 2010). Se ha descrito su distribucin
geogrfica, su ciclo de vida, su biologa, y algunos aspectos de su ecologa. Se ha
identificado algunos de sus hospederos y se han desarrollado tcnicas para el diagnstico
de la infeccin y la enfermedad. No obstante, es mucho lo que se desconoce an sobre la
ecologa de este patgeno, la vulnerabilidad de las especies, los mecanismos que
ocasionan la muerte y la dinmica de la interaccin con sus hospedadores. Asimismo,
permanece como tema de debate las hiptesis postuladas para explicar el origen de las
13
epidemias de quitridiomicosis (Lips et al. 2008; Pounds y Coloma 2008; Kilpatrick et al.
2010; Lampo et al. 2011), cuya respuesta es fundamental para predecir dnde, cmo y
cundo podra ocurrir una nueva epidemia. Las consecuencias de nuevos eventos
epidmicos podran suscitar la extincin de otras especies de anfibios, principalmente,
aquellas que poseen distribuciones muy restringidas.
Tabla I. Especies de anfibios clasificados en las categoras de riesgo de extincin del Libro Rojo
de la Fauna Venezolana (Rodrguez y Rojas-Surez 2008) y declarados en peligro de extincin
segn el Decreto 1.486 (Presidencia de la Repblica de Venezuela 1996).
Categora de
Nombre comn Nombre cientfico
amenaza
Rana mapurite Aromobates nocturnus En Peligro Crtico
Sapito amarillo de La Carbonera Atelopus carbonerensis* En Peligro Crtico
Sapito amarillo y rojo de Niquitao Atelopus chrysocorallus En Peligro Crtico
Sapito rayado Atelopus cruciger* En Peligro Crtico
Sapito amarillo de Mucubaj Atelopus mucubajiensis* En Peligro Crtico
Sapito amarillo de Mrida Atelopus oxyrhynchus* En Peligro Crtico
Sapito verdirrojo de Piango Atelopus pinangoi* En Peligro Crtico
Sapito anaranjado de San Francisco Atelopus sorianoi* En Peligro Crtico
Sapito arlequn de Guaramacal Atelopus sp. nov. En Peligro Crtico
Sapito arlequn de Tam Atelopus tamaense En Peligro Crtico
Sapito acollarado de Rancho Grande Mannophryne neblina En Peligro Crtico
Rana arborcola del Socop Dendropsophus amicorum En Peligro
Ranita de cristal del vila Hyalinobatrachium guairarepanensis En Peligro
Sapito silbador del Socop Leptodactylus magistris En Peligro
Sapito acollarado del Socop Mannophryne lamarcai En Peligro
Sapito rojo del Yapacana Minyobates steyermarki En Peligro
Sapito niera del Murisipn Colostethus murisipanensis Vulnerable
Sapito acollarado de Churuguara Mannophryne caquetio Vulnerable
Sapito rugoso de cerro El Sol Oreophrynella huberi Vulnerable
Sapito rugoso del Kukenn Oreophrynella nigra Vulnerable
Sapito rugoso del Roraima Oreophrynella quelchii Vulnerable
Sapito rugoso del Il Oreophrynella vasquezi Vulnerable
Rana estefana de Brewer Stefania breweri Vulnerable
Rana estefana del Yuruan Stefania riveroi Vulnerable
Ranita tepuyana del Ptari Tepuihyla rimarum Vulnerable
Salamandra de La Carbonera Bolitoglossa spongai Vulnerable
Las categoras de amenazas empleadas en el Libro Rojo de la Fauna Venezolana (Rodrguez y Rojas-Surez 2008)
se basan en los criterios empleados por la Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza (UICN 2001). Asteriscos
(*) indican las especies incluidas en el Decreto 1.486 (Presidencia de la Repblica de Venezuela 1996).
17
REA DE ESTUDIO
Eusebio, La Azulita y la Osa del Municipio Andrs Bello; Chiguar, San Juan de
Lagunillas y Lagunillas del Municipio Sucre. La temperatura promedio anual vara desde
27C en las zonas ms bajas hasta -2C en las cumbres. Existen dos estaciones climticas
una de sequa entre diciembre y marzo, y una estacin lluviosa entre los meses de abril y
noviembre (Huber 1997; Ataroff y Sarmiento 2004).
ESPECIES DE INTERS
et al. 1998; Longcore et al. 1999). Las especies pertenecientes a este grupo, incluyendo a
Bd, degradan la queratina de los hospederos para su desarrollo. En los anfibios, Bd se
aloja en el stratum corneum y stratum glanulosum de la piel (Berger et al. 1998;
Longcore et al. 1999; Berger et al. 2005a). En los estadios metamrficos,
postmetamrficos y en adultos, el hongo se localiza principalmente en los dedos,
membranas interdigitales y en la regin inguinal. En los estadios larvales, el hongo
infecta slo las estructuras bucales que son las nicas zonas queratinizadas (Berger et al.
1998; Longcore et al. 1999; Pessier et al. 1999).
El ciclo de vida del hongo ha sido descrito a partir de cultivos in vitro (Longcore
et al. 1999; Berger et al. 2005a); sin embargo, se ha determinado que los mismos
estadios ocurren en la piel de los anfibios, aunque se desconoce si se desarrollan a la
misma tasa (Figura 2). Este ciclo tiene una duracin de cuatro a cinco das a 22C y se
puede dividir en cinco etapas: (1) consiste de una zoospora flagelada que puede
movilizarse y dispersarse (2) la zoospora se enquista, reabsorbe el flagelo y se forma la
pared celular (zoosporangio joven); (3) desde el zoosporangio crecen finos rizoides para
la fijacin y absorcin del hongo; (4) ocurren divisiones mitticas en el citoplasma
multinucleado para formar nuevas zoosporas flageladas; (5) se forman una o ms papilas
de descarga por donde saldrn las zoosporas una vez el zoosporangio ha madurado
(Berger et al. 2005a). En cultivos in vitro, los esporangios tienden a alcanzar un mayor
tamao (hasta 40m de dimetro) que en infecciones en la piel (Longcore et al. 1999;
Berger et al. 2005a).
23
.
La tasa de desarrollo de los zoosporangios coincide con la de maduracin de las
clulas epidermales. Los zoosporangios inmaduros estn asociados a las clulas ms
jvenes en las capas ms profundas de la epidermis, mientras que los esporangios
maduros y vacos se localizan en las clulas totalmente queratinizadas en las capas ms
externas, para completar su desarrollo. Los tubos de descarga se unen a la membrana
celular epidermal y la disuelven para liberar las zoosporas sobre la superficie de la clula
y dispersarlas al ambiente (Berger et al. 2005a). Estas adaptaciones especializadas que le
permiten vivir en la piel, sugieren que Bd ha tenido un largo tiempo de evolucin (Berger
et al. 2005a). Sin embargo, an se desconoce el mecanismo de penetracin del hongo en
la piel, aunque se ha sugerido que las zoosporas podran fijarse en la piel e inyectar los
ncleos y contenidos a travs de un tubo germinal (Berger et al. 2005a).
24
larvas, la infeccin con Bd puede causar anormalidades en las estructuras bucales tales
como prdida y despigmentacin de las hileras de dientes y del queratostoma, y
despigmentacin, inflamacin y enrojecimiento de las papilas labiales (Fellers et al.
2001) (Figura 3).
Hiperplasia
Hiperqueratinizacin
1
Postmetamrfico: indiviudo de anuro recien metamorfoseado.
27
et al. 1998; Lamirande y Nichols 2002; Parris y Cornelius 2004; Kilpatrick et al. 2010).
Este parsito puede permanecer en larvas infectadas, por largos perodos,
asintomticamente, y tornarse patognico cuando la metamorfosis ha terminado
(Lamirande y Nichols 2002). Por esto se ha propuesto a los renacuajos como uno de los
principales reservorios de Bd. Cientos de individuos postmetamrficos del sapo Alytes
obstetricans fueron encontrados muertos en el Parque Nacional Pealara de Espaa a
causa de una epidemia de quitridiomicosis, a pesar de que no se encontraron renacuajos
muertos o moribundos (Bosch et al. 2001). No obstante, infecciones experimentales han
demostrado que Bd puede aumentar la incidencia de anormalidades de las partes bucales
(Blaustein et al. 2005), retardar el desarrollo larval, reducir la masa corporal al momento
de la metamorfosis y exacerbar los efectos adversos de la competencia interespecfica y
la depredacin (Parris y Cornelius 2004; Parris y Beaudoin 2004). No obstante, an
cuando son pocas, existen evidencias experimentales que indican que la quitridiomicosis
puede tambin afectar la supervivencia de las larvas de algunas especies (Kilpatrick et al.
2010). Larvas de Bufo boreas infectadas experimentalmente mostraron incrementos
significativos en su mortalidad (Blaustein et al. 2005).
Berger et al. 2004), aunque todava no existen datos que permitan comparar las
respuestas del hospedero a diferentes temperaturas.
canto de los machos se asemeja al bramido de un toro, de all el nombre comn que se le
ha dado a la especie de rana toro.
1980; Govindarajulu et al. 2006). Los huevos eclosionan entre el cuarto y quinto da
despus de la fertilizacin y las larvas que emergen pueden tardar entre dos a tres aos en
completar la metamorfosis, en lugares en donde pasan por perodos de hibernacin. Los
estadios post-metamrficos alcanzan la madurez sexual a los dos aos siguientes
(Govindarajulu et al. 2006). La rana toro tiene una prolongada estacin reproductiva y
una alta tasa de supervivencia de premetamorfos, lo cual contribuye a que sta sea ms
exitosa que otras especies (Bruening 2002). Puede vivir entre siete y nueve aos
(Bruening 2002).
La rana toro puede depredar a una gran variedad de especies de diversos grupos y,
en algunos casos, su introduccin ha coincidido con la disminucin de sus presas. Este es
el caso de la serpiente Thamnophis eques en Mxico y la tortuga Clemys marmorata en
34
Distribucin: esta especie es nativa del este de los Estados Unidos. Sin embargo,
debido a su comercializacin a nivel internacional ha sido introducida en otros pases,
donde ha establecido poblaciones silvestres. Existen registros de su presencia para 29
pases: Argentina, Alemania, Blgica, Brasil, Canad, China, Colombia, Cuba, Repblica
Dominicana, Ecuador, Espaa, Filipinas, Francia, Grecia, Indonesia, Italia, Jamaica,
Japn, Malasia, Mxico, Los Pases Bajos, Per, Puerto Rico, Singapur, Taiwn,
Tailandia, Reino Unido, Uruguay y Venezuela (Lynch 2005; Crayon 2005;
Govindarajulu et al. 2006; Martn et al. 2006; Avila-Villegas et al. 2007; Santos-Barrera
et al. 2009).
color dorado. El pecho y la regin ventral presentan grnulos de color crema sobre fondo
violceo. Las porciones anteriores y posteriores de los muslos exhiben un patrn de
coloracin similar a la posterior de los flancos (Gottberg et al. 1999). Adems de la
coloracin, existen otras caractersticas morfolgicas que ayudan a diferenciar a D.
meridensis de otras especies del gnero, entre las que se pueden apreciar: 1) un pliegue
supratimpnico que va desde el borde posterior del ojo hasta el margen posterior del
hombro; 2) dedos de las manos con membranas interdigitales basales; 3) el primer dedo
de la mano ms corto que el segundo; 4) los discos ms grandes son casi del mismo
tamao del tmpano, 5) dorso ligeramente granular; 6) vientre con grnulos planos muy
conspicuos y 6) un pliegue pectoral transversal (Rivero 1961; Gottberg et al. 1999). Las
larvas entre los estadios 33-39, miden en promedio 1,434cm de longitud corporal y
4,966cm de largo total (datos obtenidos en este trabajo).
a b
c d e
3
La extensin de la presencia es el rea contenida dentro de los lmites imaginarios continuos ms cortos que pueden
dibujarse para incluir todos los sitios conocidos, inferidos o proyectados en los que un taxn se halle presente, excepto
los casos de vagabundeo. Esta medida puede excluir a las discontinuidades o disyunciones en las distribuciones
generales de los taxones (e.g., grandes reas de hbitat obviamente inadecuado) (UICN 2001).
39
RESUMEN
INTRODUCCIN
Cada vez ms la evidencia sugiere que varios factores pudieran estar involucrados
en la reciente emergencia de la quitridiomicosis (Pounds et al. 2006; Lips et al. 2006;
Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007; Pounds et al. 2007), una enfermedad fngica
vinculada a las disminuciones y extinciones de diversos anfibios en el mundo (Berger et
al. 1998; Berger et al. 1999; Longcore et al. 1999; Daszak et al. 1999; Lips et al. 2006).
Mientras que algunos estudios aseveran que la dispersin reciente del agente causal de
esta enfermedad, Batrachochytrium dendrobatidis (Bd), ha causado mortandad en
poblaciones de ranas sin exposicin previa al patgeno (Berger et al. 1999; Daszak et al.
1999; Lips et al. 2006; Skerratt et al. 2007), otros indican que algunos cambios
climticos ocurridos en dcadas recientes han incrementado la vulnerabilidad de los
anfibios a esta enfermedad, especialmente en tierras altas (Pounds et al. 2006). Tambin
se ha sugerido que las aglomeraciones que se producen durante episodios de sequa y el
estrs fisiolgico debido a condiciones climticas adversas o coinfecciones, pudieran
promover el desarrollo de la quitridiomicosis (Pounds et al. 1999; Lampo et al. 2006b;
Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007; Pounds et al. 2007). Sin embargo, cmo
contribuye cada uno de stos en desencadenar brotes de quitridiomicosis en varias
regiones del mundo es an materia de debate (Alford et al. 2007; Di Rosa et al. 2007;
Pounds et al. 2007; Skerratt et al. 2007; Lips et al. 2008; Pounds y Coloma 2008; Lampo
et al. 2011a).
MATERIALES Y MTODOS
rea de estudio.
Muestreos en campo.
4
Metamorfo: estado de desarrollo, posterior al de larva, donde ocurren los mayores cambios del proceso de
metamorfosis de los anuros. Entre los principales cambios estn la aparicin de los miembros anteriores, la formacin
de la boca y la reabsorcin de la cola (Duellman y Trueb 1994). Este estado comprende los estados 41-46 descritos
por Gosner (1960).
5
Postmetamorfo: este trmino ha sido ampliamente empleado para referirse a los individuos que acaban de concluir el
proceso de metamorfosis; aunque, no es un estado descrito por Gosner (Gosner 1960). En esta fase los ejemplares de
anuros han reabsorvido casi totalmente su cola (Daz de Pascual y Chacn-Ortiz 2002).
46
Diagnsticos de laboratorio.
Anlisis de datos.
RESULTADOS
Promedio de
No de Prevalencia (%) zoosporas Altitud (m) indv.
Especie N positivos (IC 95%) (IC 95%) positivos (+) Hbitat reproductivo
Dendropsophus meridensis* 42 4.965
(EN) 414 173 (37 47) (2.185-7745) 2.000-2.505 Laguna permanente
Laguna permanente y
Dendropsophus microcephalus 20 0 *** *** *** efmera
Laguna permanente y
Dendropsophus minutus 8 0 *** *** *** efmera
12
Engystomops pustulosus 3 2 *** (11,54-12,79) 98 Laguna efmera
D. meridensis
110
38 L. catesbeianus
100 32
90 119 47
79
80
Prevalencia (%)
70
60
38 272
50
40 13 6
30 85
20
10
0
larvas metamorfos posmetamorfos juveniles adultos
Estados (edad)
de zoosporas se puede atribuir al estado de los ejemplares y las diferencias entre estados
fueron dependientes de la especie (Tabla IV). En D. meridensis, los adultos, los juveniles
y las larvas tuvieron intensidades de infeccin menores que los metamorfos y los
postmetamorfos (Figura 9, Anexo 7a y 8). En L. catesbeianus, por el contrario, no hubo
diferencias entre las medias de los estadios (Figura 9, Anexo 7 y 8). Cuando se
compararon los promedios de zoosporas de los estadios entre especies; en los adultos,
juveniles y larvas de D. meridensis fueron menores que en los estados equivalentes de L.
catesbeianus (Figura 9, Anexo 9). Por el contrario, los metamorfos y postmetamorfos de
D. meridensis mostraron mayores cargas que los mismos estados de L. catesbeianus
(Figura 9; Anexo 9).
D. meridensis
L. catesbeianus
5
Log N zoosporas (1-3 mg de tejido)
-1
Larva Metamorfo Postmetamorfo Juvenil Adulto
Estado de desarrollo
Figura 10. Presencia de Batrachochytrium dendrobatidis en los Andes Venezolanos. Los crculos indican los sitios de muestreo para los cuales se
diagnostic la infeccin por Bd en muestras de tejido de anfibio. En la Figura 12 se puede apreciar el total de lugares para los cuales se recabaron muestras, sin
embargo, slo se diagnosticaron las provenientes de las localiades sealadas en esta figura por circulos rojos y blancos.
55
4.00
3.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
0 500 1000 1500 2000 2500 3000
Altitud (m)
Log promedio zoosporas (1-3 mg de tejido)
Regresin lineal (pronstico del Log zoosporas)
Figura 11. Relacin entre la carga promedio de zoosporas y el punto medio de la distribucin
altitudinal de los individuos infectados con Batrachochytrium dendrobatidis de once especies de
ranas de la Cordillera de Mrida, Venezuela. E. pustulosus P. paradoxa M. collaris H.
crepitans R. marina S. vigilans G. nicefori H. platydacylus L. catesbeianus D. meridensis H.
jahni. El nmero de zoosporas esta expresado en escala logartmica.
DISCUSIN
Cordillera de Mrida por al menos 24 aos (Hanselmann et al. 2004; Lampo et al. 2006a;
Lampo et al. 2006b).
Entre las especies nativas, D. meridensis, la nica especie que comparte hbitat
con L. catesbeianus, mostr la mayor prevalencia de infeccin. Es posible que este
reservorio constituya una fuente importante desde donde la transmisin de zoosporas a
D. meridensis es ms probable. La transmisin entre especies puede jugar un papel
importante en la dinmica de patgenos con hospederos mltiples (Thorne y Williams
1988; McCallum y Dobson 1995). Por ejemplo, la presencia de los perros de pradera
increment la incidencia del virus de moquillo canino en los hurones de patas negras
(McCallum y Dobson 1995). La exposicin a Bd tambin puede ser alta para D.
meridensis por habitar en lagunas; aunque en menor grado que L. catesbeianus. Esta
ltima pasa la mayor parte de su tiempo asociada al cuerpo de agua (Pearl et al. 2004;
Govindarajulu et al. 2006), mientras que D. meridensis, habita dentro de los bosques y se
agrega en las lagunas para su reproduccin slo en la poca de lluvia (La Marca 2004).
En poblaciones de R. areolatus infectadas con Bd, se encontr que la mayor prevalencia,
57
Adems del tipo de hbitat, otra variable fsico-natural del rea de estudio que
puede influir en el tiempo de exposicin o en la vulnerabilidad de las especies es la
altitud. La mayora de las lagunas permanentes presentes en el rea de estudio se ubican a
las mayores altitudes, donde se ha propuesto que las temperaturas son ideales para el
crecimiento de Bd (Daszak et al. 1999; 2003). Aunque nuestros resultados muestran que
las especies hospederas de las mayores altitudes tienen las prevalencia y cargas de
zoosporas ms altas, no es posible separar el efecto de la altitud sobre la prevalencia del
efecto de otras variables como el riesgo de exposicin asociado al tipo de hbitat o de la
respuesta especifica a la infeccin por Bd. Por ejemplo, L. catesbeianus, una especie
capaz de mantener niveles altos de infeccin, habita en lagunas permanentes a
59
elevaciones entre 1.800 m y 2.800 m. Por lo tanto, no es sorprendente que esta especie
tenga la prevalencia y la carga de zoosporas ms alta.
RESUMEN
estudio no permitieron identificar el mecanismo por medio del cual L. catesbeianus est
causando la disminucin de D. meridensis. Tanto la exclusin competitiva como el
incremento en la tasa de trasmisin en D. meridensis a partir de la transmisin por parte
de L. catesbeianus podran generar el mismo patrn de exclusin. Recomendamos
realizar estudios ms detallados sobre el impacto que puede tener L. catesbeianus como
reservorio de Bd sobre las poblaciones de D. meridensis y continuar con los estudios de
monitoreo de la infeccin en D. meridensis.
INTRODUCCIN
(Beard y O'Neill 2005) y Xenopus laevis (Weldon et al. 2004). Es decir, aquellas
comunidades de anfibios en donde existan especies reservorios o cuyas especies tengan
renacuajos de desarrollo muy lento podran ser particularmente proclives a que se
produzcan epidemias.
incrementar con la densidad de los hospederos. Se supone que esta relacin sea ms
marcada en D. meridensis, porque las poblaciones naturales deben tener mayores
fluctuaciones de sus densidades en comparacin con L. catesbeianus, la cual parece
saturar la capacidad de carga de las lagunas que invade. De existir un aporte importante
de la transmisin interespecfica se espera que las poblaciones de D. meridensis que
cohabitan con L. catesbeianus tengan mayores prevalencias y cargas parasitarias que las
poblaciones sin rana toro.
MATERIALES Y MTODOS
rea de estudio.
Figura 12. Ubicacin de los sitios de muestreo dentro del rea de estudio
70
un rea relativamente pequea (< 20 km2) en un intervalo altitudinal que no super los
400 m (2.253 - 2.601 m). La mayora de las lagunas que cumplieron con estos tres
criterios fueron artificiales y, slo unas pocas, fueron naturales pero modificadas para
servir de abrevaderos para el ganado o como fuente de agua para riego.
Figura 13. Ubicacin de 12 lagunas donde se registraron las densidades de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus durante 2006, en
la regin de Jaj-La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
74
Se hicieron cuatro salidas de campo durante 2006 (febrero, abril, agosto, octubre)
con una duracin aproximada de 17 das cada una, exceptuando la del mes de febrero que
dur slo ocho das. Durante cada salida, se hizo un muestreo en una laguna por noche
obteniendo un total de 43 muestreos (en febrero se visitaron siete de las 12 lagunas) con
un esfuerzo de muestreo de 516 horas/hombre. Estos consistieron en recorridos a lo largo
de una transecta perimetral para contabilizar los individuos de D. meridensis y L.
catesbeianus. El ancho de cada transecta fue de 4 m (2 m a cada lado de la orilla) y el
largo estuvo definido por el permetro de cada laguna (mtodo adaptado de Thoms et al.
(1997)). Los recorridos se llevaron a cabo durante la noche debido a que es ms fcil
avistar y capturar ambas especies. Dendropsophus meridensis permanece refugiada
durante el da, mientras que en la noche se encuentra activa entre la vegetacin (hbitos
nocturnos). Lithobates catesbeianus es ms activa durante el da, sin embargo, fue ms
sencillo observarla (detectando los candiles) y capturarla durante la noche por tener una
conducta menos huidiza. En cada muestreo recolectamos individuos postmetamorfos de
cada especie a los cuales se les tom una muestra de tejido, midi la longitud hocico-
cloaca (LCH) y determin el sexo (ver captulo II). Luego de la toma de muestras y del
registro de datos, los ejemplares de D. meridensis fueron liberados en los mismos sitios
donde se capturaron, mientras que los de L. catesbeianus, fueron sacrificados (antes de la
toma de la muestra) como se seal en el captulo III (pg. 50). La densidad de
individuos en cada muestreo fue determinada por el cociente entre el nmero de
individuos detectados dentro de la transecta y el rea de sta (Tabla IV).
planteada por DiGiacomo y Koepsell (1986). La carga de zoospora para cada muestra fue
estimada a partir del nmero promedio de zoosporas detectada en las tres rplicas
multiplicado por un factor igual a las diluciones realizadas entre la extraccin y la
muestra final (x80) (Rachowicz y Briggs 2007; Snchez et al. 2008; Vredenburg et al.
2010)
Anlisis de datos.
La rana toro estuvo presente en casi todos los cuerpos de agua durante todo el
estudio; slo estuvo ausente en un cuerpo de agua, y en otro desapareci durante el
estudio (Tabla VI). Los registros de presencia de D. meridensis, por el contario, fueron
cambiando; slo el 50% de las lagunas mantuvieron el mismo registro a lo largo del
estudio (Tabla VI). En vista de estos cambios en los patrones de presencia, se consider
cada visita como una muestra independiente. As, el nmero de muestras fue equivalente
al nmero total de visitas a todas las lagunas. Se emplearon tablas de contingencia de dos
vas para analizar los registros de presencia y ausencia de D. meridensis y L.
catesbeianus. Se elaboraron dos tablas de 2x2; una para determinar si la proporcin de
presencias fue similar para ambas especies (hiptesis nula: homogeneidad), y la otra,
para determinar si la presencia de una especie ocurre independientemente de la presencia
de la otra especie (hiptesis nula: independencia). Tambin se elaboraron dos tablas 4x2,
una para cada especie, para determinar si la proporcin de cuerpos de agua ocupados fue
homognea entre los meses de muestreo. Se compararon las frecuencias observadas con
las esperadas, bajo cada una de las hiptesis nulas, mediante pruebas de bondad de
ajuste. Cuando ms del 20% de las frecuencias esperadas fueron mayores a cinco y n> 40
se utilizaron pruebas Chi-cuadrado corregidas por continuidad. Si por el contrario, las
frecuencias esperadas fueron menores a cinco, se emplearon pruebas exactas para
calcular el nivel de significacin del estadstico; la de Fisher para tablas 2x2 y la
estimacin de Monte Carlo para tablas 4x2 (Siegel y Castellan 1995; Agresti 1996;
Milton 2001). Para estos anlisis se emple el programa SPSS versin 17 (IBM 2008).
77
250
Abundancia (n de individuos)
200
150
100
50
0
0 50 100 150 200 250 300 350
-50
Permetro (m)
Ambas relaciones suponen que el modelo que mejor explica la dinmica parsito-
hospedero es el Susceptible-Infectado-Susceptible (SIS) (Anderson y May 1979) y que
las densidades, en cada caso, se aproximan a las de equilibrio. Infecciones
experimentales sugieren que D. meridensis y L. catesbeianus pueden eliminar la
infeccin espontneamente (Villarroel 2011). Es decir, los individuos infectados pueden
curarse y, en teora, volver a ser susceptibles sin desarrollar inmunidad. Otras especies de
anfibios parecen no desarrollar inmunidad sino que sufren reinfecciones (Briggs et al.
2010; Woodhams et al. 2011). Debido a estas caractersticas slo consideraron
individuos susceptibles (S) o infectados (I) en el modelo.
estos ltimos, debido a que a mayores densidades hay mayores posibilidades de acumular
parsitos por continuas reinfecciones. El anlisis de la varianza de la carga de zoosporas
realizado en el captulo III indic que existen diferencias en la carga de zoosporas entre
los estados de D. meridensis. Las larvas, juveniles y adultos mostraron cargas de
zoosporas similares, mientras que los metamorfos y postmetamorfos se comportaron
como otro subconjunto; aun cuando el tamao de muestra para este subconjunto fue
pequeo. Por lo tanto, el anlisis entre carga de zoosporas y la densidad, para el caso de
D. meridensis, se hizo slo para el subconjunto conformado por juveniles y adultos (no
se recolectaron larvas durante los muestreos de 2006). Para ello los datos de zoosporas
fueron previamente transformados a escala logartmica, lo que permiti su
normalizacin. Para conocer si la intensidad de la infeccin de Bd puede contribuir a
explicar la prevalencia observada en D. meridensis y L. catesbeianus realizamos una
regresin lineal simple para cada especie; previa transformacin de los valores de
zoosporas a escala logartmica.
RESULTADOS
Figura 17. rea de distribucin de Dendropsophus meridensis invadida por Lithobates catesbeianus.
86
n= 43 n= 43
100%
80%
Porcentaje (%)
60% Ausencia
40% Presencia
20%
0%
D. meridensis L. catesbeianus
Especie
ambas especies ausentes es menor que el esperado (Figura 19). De hecho, no hubo
lagunas sin alguna de las especies presentes.
1
Residuales
-1
-2
-3
n = 43
-4
Porcentaje (%)
mes
60%
D. meridensis ausencia
40%
D. meridensis presencia
20%
0%
Febrero Abril Agosto Octubre
Mes
Figura 20. Proporcin de lagunas con Dendropsophus meridensis durante 2006 en el sector Jaj-
La Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
100%
El nmero sobre las
barras indica el
80%
nmero de lagunas
muestreadas en el
Porcentaje (%)
12 12
60% 12 mes
7
L. catesbeianus ausencia
40%
L. catesbeianus presencia
20%
0%
Febrero Abril Agosto Octubre
Mes
Figura 21. Proporcin de lagunas con Lithobates catesbeianus durante 2006 en el sector Jaj-La
Carbonera, estado Mrida, Venezuela.
89
Tabla VII. Densidades de Dendropsophus meridensis durante 2006 en 12 lagunas del sector Jaj-
La Carbonera, estado Mrida.
Laguna Febrero Abril Agosto Octubre Media
Antes del Sr. Beto 0,1400 0,0805 0,0550 0,0230 0,0746
Canta Rana 0,0000 0,0018 0,0000 0,0000 0,0005
El Roco 0,0000 0,0204 0,0000 0,0016 0,0055
Frente a San Onofre **** 0,1281 0,1568 0,0950 0,1266
La Esmeralda **** 0,1166 0,1325 0,0572 0,1021
La Granzonera 0,0000 0,0365 0,0000 0,0000 0,0091
Los Camachos 1 0,0020 0,0000 0,0000 0,0000 0,0005
Los Camachos 2 0,0013 0,0064 0,0000 0,0013 0,0023
Mistaj **** 0,1643 0,0800 0,0175 0,0873
La Cuchilla Alta **** 0,0813 0,0481 0,0148 0,0481
Sr. Beto 0,0000 0,0148 0,0021 0,0000 0,0042
Villa Juanita **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
Media 0,0205 0,0542 0,0395 0,0175 0,0344
Asteriscos (*) indican los muestreos no realizados.
Tabla VIII. Densidades de Lithobates catesbeianus durante 2006 en12 lagunas del sector Jaj-La
Carbonera, estado Mrida.
Laguna Febrero Abril Agosto Octubre Media
Antes del Sr. Beto 0,0029 0,0014 0,0050 0,0014 0,0027
Canta Rana 0,0712 0,0566 0,0931 0,0821 0,0758
El Roco 0,0094 0,0157 0,0236 0,0079 0,0142
Frente a San Onofre **** 0,0008 0,0000 0,0000 0,0003
La Esmeralda **** 0,0022 0,0011 0,0043 0,0025
La Granzonera 0,0026 0,0156 0,0260 0,0156 0,0150
Los Camachos 1 0,0417 0,0815 0,0596 0,0616 0,0611
Los Camachos 2 0,0167 0,0386 0,0489 0,0245 0,0322
Mistaj **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
La Cuchilla Alta **** 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
Sr. Beto 0,0233 0,0359 0,0275 0,0359 0,0307
Villa Juanita **** 0,0391 0,0681 0,0549 0,0540
Media 0,0240 0,0240 0,0294 0,0240 0,0253
Asteriscos (*) indican los muestreos no realizados.
91
100
90
80
Prevalencia (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
0.0000 0.0500 0.1000 0.1500 0.2000
2
Densidad (ind/m )
120
100
Prevalencia (%)
80
60
40
20
0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
2
Densidad (ind/m )
Prevalencia Regresin lineal (pronstico prevalencia)
4.50
Log zoosporas (1-3mg tejido)
4.00
3.50
3.00
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
0.0000 0.0200 0.0400 0.0600 0.0800 0.1000 0.1200 0.1400 0.1600 0.1800
2
Densidad (ind/m )
100
90
80
70
Prevalencia (%)
60
50
40
30
20
10
0
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
Log. N de zoosporas 1-3 mg de tejido
DISCUSIN
RESUMEN
INTRODUCCIN
MATERIALES Y MTODOS
laboratorio del captulo III. Entre las variables registradas durante los muestreos
referidos y empleadas en este captulo, se incluyen el tipo de hbitat, el mes de colecta, la
presencia de L. catesbeianus y el estado de desarrollo de D. meridensis.
Anlisis estadstico
RESULTADOS
Tabla XII. Diagnstico de modelos de Regresin Logstica empleados para evaluar el efecto de
variables biticas y abiticas sobre la probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis
con el hongo Batrachochytrium dendrobatidis.
Desviacin N Delta
2
Modelo AICc (G ) parmetros QAICc AICc
Y 0 1 (mes) X i 2 ( P _ A _ ranatoro) X i 513,94 499,94 8 383,98 0
Y 0 1 ( mes ) X i 2 (estado ) X i 3 ( P _ A _ ranatoro ) X i 514,10 496,00 10 385,35 0,16
Y 0 1(mes) 2 (hbitat) X i 3 (estado) X i 4 ( P _ A _ ranatoro) X i 516,59 494,60 12 388,49 2,65
Y 0 1 ( mes ) X i 520,20 508,20 7 387,96 6,26
Y 0 1 ( P _ A _ ranatoro ) X i 528,60 524,63 2 391,81 14,66
Y 0 537,31 1 23,37
Y : probabilidad de infeccin de cada individuo dado un valor de las diferentes variables, con respecto a la probabilidad de no estar
infectado.
0 : intercepto que expresa el cociente de probabilidad relativa (odds), en un caso particular de referencia.
1 , 2 , 3 y 4 : son coeficientes de regresin parciales de las variables consideradas en los modelos que expresa en cunto cambian
los chances de infeccin, en relacin al valor de referencia, con un cambio en las variables ecolgicas o atributos individuales .
Tabla XIV. Diagnstico del modelo de regresin logstica seleccionado para determinar la
probabilidad de infeccin de Dendropsophus meridensis con el hongo Batrachochytrium
dendrobatidis.
Variable gl Desviacin (G2) LRT Pr (Chi)
Intercepto 499,94
Fecha 5 524,63 24,6842 0,0001***
Presencia L. catesbeianus 1 508,20 8,2575 0,0041**
*** Significancia a un nivel de 0,001
** Significancia a un nivel de 0,01
DISCUSIN
Los resultados sugieren que al menos dos variables, el mes y la presencia de rana
toro, inciden sobre el riesgo de infeccin en D. meridensis en las lagunas de Jaj-La
Carbonera. Los cambios temporales en las probabilidades de infeccin pueden atribuirse
a las variaciones estacionales en algunos de los parmetros climticos que inciden
directamente sobre el patgeno o a los cambios temporales que ocurren en las
poblaciones de hospederos que pudieran incidir sobre la transmisin de ste. Algunos
autores han registrado cambios temporales en las prevalencia como producto de los
cambios en la humedad, la temperatura o en las precipitaciones (Berger et al. 2004;
Retallick et al. 2004). Esto ha sido reportado principalmente para regiones donde la
temperatura y precipitacin promedio cambia notoriamente entre las estaciones
climticas, existiendo estaciones que favorecen ms el crecimiento de Bd que otras. En la
zona de estudio, las condiciones climticas parecen favorecer el crecimiento de Bd
durante todo el ao. La temperatura anual es de 19C en el lmite inferior de la
distribucin de D. meridensis (Estacin Climtica Aeropuerto-Mrida, 1470 m s.n.m.,
83556 y 710925) y de 15C hacia el lmite superior (Estacin Climtica La
Cuchilla, 2280 m s.n.m., 083800 y 712110). Por lo tanto, posiblemente los
cambios observados en las probabilidades de infeccin estn ms asociados a cambios
temporales que ocurren en las poblaciones hospederas. El efecto del mes posiblemente
est asociado a los cambios temporales que ocurren en las densidades de D. meridensis,
los cuales influyen a su vez en el proceso de transmisin de Bd. A medida que la
111
En las zonas montaosas, donde las condiciones ambientales son ideales para Bd,
ms de 60% de las especies de anfibios diagnosticadas son hospederas. Sin embargo, la
enorme variacin observada en la prevalencia, desde 3% hasta 85%, sugiere que la
susceptibilidad, la exposicin o la vulnerabilidad no son igual para todas las especies.
Dendropsophus meridensis y L. catesbeianus parecen ser las especies ms susceptibles o
con el mayor riesgo de exposicin al patgeno. Ambas habitan en charcas o lagunas entre
1.600 y 2.600 m de altitud, en donde las condiciones son ideales para el crecimiento de
Bd. Sin embargo difieren en que L. catesbeianus mantiene infecciones aclnicas con muy
altas prevalencias y, por consiguiente acta como un reservorio de Bd, mientras que D.
116
Alford RA, Dixon PM y Pechmann JHK. 2001. Global amphibian population declines.
Nature 412: 499-500.
Ataroff M y Sarmiento L. 2004. Las unidades ecolgicas de los Andes de Venezuela. En:
Reptiles de Los Andes de Venezuela. La Marca E y Soriano PJ (eds.) Pp 9-26.
Fundacin Polar, Conservacin Internacional, CODEPRE-ULA, Fundacite Mrida,
BIOGEOS., Mrida, Venezuela.
122
Ayres M, Ayres M Jr., Murcia C, Santos dos Santos AA. 2000. Bioestat versin 2.
Aplicaciones para las Ciencias Biolgicas y Mdicas. Sociedad Civil Mamirau,
Para, Brasil.
Barlow N. 1995. Critical evaluation of wildlife disease models. En: Ecology of infectious
diseases in natural populations. Grenfell B y Dobson A (eds.) Pp. 230-259,
Cambridge University Press, Cambridge, Uk.
Begon M, Townsend CR y Harper J. 2006. Parasitism and disease. En: Ecology. From
individuals to ecosystems. Begon M, Townsend CR y Harper J (eds.) Pp 347-380.
Blackwell Publishing Ltd, United Kingdom.
123
Berger L, Hyatt AD, Speare R y Longcore JE. 2005a. Life cycle stages of the amphibian
chytrid Batrachochytrium dendrobatidis. Diseases of Aquatic Organisms 68: 51-63.
Berger L, Speare R, Hines HB, Marantelli G, Hyatt AD, MacDonald KR, Skerrat LF,
Olsen V, Clarke JM, Gillespie G, Mahony M, Sheppard N, Williams C y Tyler MJ.
2004. Effect of season and temperature on mortality in amphibians due to
chytridiomycosis. Australian Veterinary Journal 82: 31-36.
Berger L, Speare R y Hyatt A. 1999. Chytrid fungi and amphibian declines: overview,
implications and future directions. En: Declines and disappearance of Australian
frogs. Campbell A (ed.) Pp 23-33. Environment Australia: Canberra.
Blaustein AR, Romansic JM, Kiesecker JM y Hatch AC. 2003. Ultraviolet radiation,
toxic chemicals and amphibian population declines. Diversity and Distribution 9:
123-140.
Blaustein AR, Romansic JM, Scheessele EA, Han BA, Pessier AP y Longcore J. 2005.
Interspecific variation in susceptibility of frog tadpoles to the pathogenic fungus
Batrachochytrium dendrobatidis. Conservation Biology 19: 1460-1468.
Boyle DG, Boyle DB, Olsen V, Morgan JAT y Hyatt A. 2004. Rapid quantitative
detection of chytridiomycosis (Batrachochytrium dendrobatidis) in amphibian
samples using real-time Taqman PCR assay. Diseases of Aquatic Organisms 60:
141-148.
Bradley GA, Rosen PC, Sredl MJ, Jones TR y Longcore JE. 2002. Chytridiomycosis in
native Arizona frogs. Journal of Wildlife Diseases 38 (1): 206-212.
Briggs CJ, Knapp, RA. y Vredenburg VT. 2010. Enzootic and epizootic dynamics of the
chytrid fungal pathogen of amphibians. Proceeding of the National Academy of
Sciences of the United States of America 107: 9695-9700.
Burrowes PA, Joglar RL y Green DE. 2004. Potential causes for amphibian declines in
Puerto Rico. Herpetologica 60: 141-153.
Cushmann SA. 2006. Effects of habitat loss and fragmentation on amphibians: a review
and prospectus. Biological Conservation 128: 231-240.
Daszak P, Lips K, Alford R, Carey C, Collins JP, Cunningham AA, Harris R y Ron S.
2007. Infectious Diseases. En: Amphibian Conservation Action Plan. Gascon C,
Collins JP, Moore RD, Church DR, McKay JE, Mendelson II JR (eds.) Pp. 21-25.
IUCN/SSC Amphibian Specialist Group, Switzerland and Cambridge, UK.
Davidson EW, Parris M, Collins JP, Longcore JE, Pessier AP y Brunner J. 2003.
Pathogenicity and transmission of chytridiomycosis in Tiger Salamanders
(Ambystoma tigrinum). Copeia 3: 601-607.
126
Alstad DN .2001. Basic populus models of ecology. Prentice Hall, Inc, United States of
America. Pp. 115-131.
Duellman WE. 1989. New species of hylid frogs from the Andes of Columbia and
Venezuela. Occasional Paper Museum of Natural History 131: 1-12.
ESRI. 1992-2002. ArcView GIS 3.3. Environmental Systems Research Institute (ESRI),
Redlands, California, USA.
Fellers GM, Green DE y Longcore JE. 2001. Oral chytridiomycosis in the mountain
yellow-legged frog (Rana muscosa). Copeia 4: 945-953.
Garner TWJ, Walker S, Bosch J, Hyatt A, Cunningham AA y Fisher MC. 2005. Chytrid
fungus in Europe. Emerging Infectious Diseases 11(10): 1639-1641.
Gosner K. 1960. A simplified table for staging anuran embryos and larvae with notes on
identification. Herpetologica 16: 183-190.
Greer AL, Briggs C y Collins JP. 2008. Testing a key assumption of host-pathogen
theory: density and transmission. Oikos 117:1667-1673.
Guyatt HL, Bundy DAP, Medley GF y Grenfell BT. 1990. The relationship between the
frecuency distribution of Ascaris lumbricoides and prevalence and intensity of
infection in human communities. Parasitology 101: 139-143.
Haddad CFB y Prado CPA. 2005. Reproductive modes in frogs and their unexpected
diversity in the Atlantic Forest of Brazil. BioScience 55: 207-217.
Han BA, Bradley PW y Blaustein AR. 2008. Ancient behaviors of larval amphibians in
response to an emerging fungal pathogen, Batrachochytrium dendrobatidis.
Behavioral Ecology Sociobiology 63: 241-250.
Hethcote HW. 1989. Three basic epidemiological models. En: Levin S, Hallam T y
Gross, L (eds.) Applied mathematical ecology. Biomathematics Texts 18: 119-144.
Hilton-Taylor C, Pollock CM, Chanson JS, Butchart SHM, Oldfield TEE y Katariya V.
2009. State of the worlds species. En: Wildlife in a Changing World - An Analysis
of the 2008. Vi JC, Hilton-Taylor C y Stuart SN (eds.) Pp. 15-42. IUCN Red List
of Threatened Species. IUCN, Gland, Switzerland.
Houlahan JE, Findlay CS, Schmidt BR, Meyer AH y Kuzmin SL. 2000. Quantitative
evidence for global amphibian population declines. Nature 404: 752-755.
Hyatt AD, Boyle DG, Olsen V, Boyle DB, Berger L, Obendorf D, Dalton A, Kriger K,
Hero M, Hines H, Phillott R, Campbell R, Marantelli G, Gleason F y Colling A.
2007. Diagnostic assays and sampling protocols for the detection of
Batrachochytrium dendrobatidis. Diseases of Aquatic Organisms 73: 175-192.
IBM. 2008. IBM SPSS Statistic para Windonws versin 17. International Business
Machines (IBM), Nueva York, Estados Unidos.
James TY, Litvintseva AP, Vilgalys R, Morgan JAT, Taylor JW, Fisher MC, Berger L,
Weldon C, du Preez L y Longcore J. 2009. Rapid global expansion of the fungal
disease chytridiomycosis into decling and healthy amphibian population. PLoS
Pathogens 5: 1-12.
Kaefer IL, Boelter RA y Cechin SZ. 2007. Reproductive biology of invasive bullfrog
Lithobates catesbeianus in Southern Brazil. Annales Zoologici Fennici 44: 435-
444.
Kats LB y Ferrer RP. 2003. Alien predators and amphibians declines: Review of two
decades of science and the transition to conservation. Diversity and Distributions 9:
99 110
Kinney VC, Heemeyer JL, Pessier AP y Lannoo MJ. 2011. Seasonal pattern of
Batrachochytrium dendrobatidis infection and mortality in Lithobates aerolatus:
affirmation of Vredenburg's 10,000 zoospore rule. PLoS One 6: 1-10.
Kriger KM y Hero J-M. 2006. Survivorship in wild frogs infected with chytridiomicosis.
EcoHealth 3: 171-177.
Kriger KM, Hines HB, Hyatt A, Boyle D y Hero JM. 2006. Techniques for detecting
chytridiomicosis in wild frogs: comparing histology with real-time Taqman PCR.
Diseases of Aquatic Organisms 71: 141-148.
Lampo M y De Leo GA. 1998. The invasion ecology of the toad Bufo marinus: from
South America to Australia. Ecological Applications 8: 388-396.
Laurance WF, McDonald KR y Speare R. 1996. Epidemic disease and the catastrophic
decline of Australian rain forest frogs. Conservation Biology 10: 406-413.
Lawson TD, Jones ML, Komar O y Welch AM. 2011. Prevalence of Batrachochytrium
dendrobatidis in Agalychnis moreletii (Hylidae) of El Salvador and association
with larval sheath depigmentation. Journal of Wildlife Diseases 47 (3): 544-554.
Lips K. 1999. Mass mortality and population declines of anurans at upland site in
Western Panama. Conservation Biology 13: 117-125.
Lips K, Brem F, Brenes R, Reeve JD, Alford R, Voyles J, Carey C, Livo L, Pessier A y
Collins JP. 2006. Emerging infectious disease and the loss of biodiversity in a
Neotropical amphibian community. Proceeding of the National Academy of
Sciences of the United States of America 103: 3165-3170.
134
Lips KR, Diffendorfer J, Mendelson JR. III y Sears MW. 2008. Rinding the Wave:
Roconciling the roles of disease and climate change in amphibian declines. Plos
Biology 6: e72.
Lips KR, Green DE y Papendick R. 2003. Chytridiomycosis in wild frogs from Southern
Costa Rica. Journal of Herpetology 37: 215-218.
Lips KR, Reaser JK y Young BE. 1999. El monitoreo de anfibios en Amrica Latina:
manual de protocolos. Society for the Study of Amphibians and Reptiles.
Herpetological Circular 30: 1-115.
Lynch J. 2005. An alert concerning a possible threat to the amphibian fauna east of the
Andes: discovery of the American Bullfrog in Eastern Colombia. Revista de la
Academia Colombiana de Ciencias XXIX: 589-590.
Manzanilla J y La Marca E. 2004. Museum records and field sampling as sources of data
indicatings populations crashes for Atelopus cruciger, a proposed critically
135
Martn P, Baldo D y Krauczuc ER. 2006. La "rana toro" en la selva atlntica interior
argentina: un nuevo problema de conservacin. Cuadernos de Herpetologa 20: 37-
40.
Mendelson III JR, Lips KR, Gagliardo RW, Rabb GB, Collins JP, Diffendorfer JE,
Daszak P, Ibez DR, Zippel KC, Lawson DP, Wright KM, Stuart SN, Gascon C,
da Silva HR, Burrowes PA, Joglar RL, La Marca E, Ltters S, du Preez LH,
Weldon Ch, Hyatt A, Rodriguez-Mahecha JV, Hunt S, Robertson H, Lock B,
Raxworthy ChJ, Frost DR, Lacy RC, Alford RA, Campbell JA, Parra-Olea G,
Bolaos F, Calvo DJJ, Halliday T, Murphy JB, Wake MH, Coloma LA, Kuzmin
SL, Stanley PM, Howell KM, Michael L, Pethiyagoda R, Boone M, Lannoo MJ,
Blaustein AR, Dobson A, Griffiths RA, Crump ML, Wake DB y Brodie Jr.ED.
2006. Confronting amphibian declines and extinctions. Science 313: 48.
Microsoft. 2003. Excel versin 11 para Windonws (Office 2003). Microsoft, USA.
136
Monello RJ, Dennehy JJ, Murray DL y Wirsing AJ. 2006. Growth and behavioral
responses of tadpoles of two native frogs to an exotic competitor, Rana
catesbeiana. Journal of Herpetology 40: 403-407.
Moyle PB. 1973. Effects of introduced Bullfrogs, Rana catesbeiana, on the native frogs
of the San Joaquin Valley, California. Copeia 1: 19-23.
Murray KA, Skerratt LF, Speare R y McCallum H. 2009. Impact and dynamics of
disease in species threatened by amphibian chytrid fungus, Batrachochytrium
dendrobatidis. Conservation Biology 23(5): 1242-1252.
Ojasti J, Gonzlez-Jimnez E, Szeplaski E y Garca LB. 2001. Informe sobre las especies
exticas en Venezuela. Ministerio del Ambiente y de los Recursos Naturales,
Caracas. 205 pp.
Parris MJ y Cornelius TO. 2004. Fungal pathogen causes competitive and developmental
stress in larval amphibian communities. Ecology 85: 3385-3395.
Pearl ChA, Adams MJ, Bury B y McCreary B. 2004. Asymmetrical effects of introduced
bullfrogs (Rana catesbeiana) on native ranid frogs in Oregon. Copeia 2004: 11-20.
Pechmann JHK, Scott DE, Semlitsch RD, Caldwell JP, Vitt LJ y Gibbons W. 1991.
Declining amphibian populations: the problem of separating human impacts from
natural fluctuations. Science 253: 892-895.
Prez Martnez C y Barea Arco J. 2000. Relacin entre el tamao del hospedador y la
intensidad de infeccin de un alga epibionte. Limnetica 19: 193-198.
138
Pessier AP, Nichols DK, Longcore JE y Fuller MS. 1999. Cutaneus chytridiomycosis in
poison dart frogs (Dendrobates spp.) and white's tree frogs (Litoria caerulea).
Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 11: 194-199.
Peterson JD, Wood MB, Hopkins WA, Unrine JM y Mendona MT. 2007. Prevalence of
Batrachochytrium dendrobatidis in American Bullfrog and Southern Leopard Frog
larvae from wetlands on the Savannah River site, South Carolina. Journal of
Wildlife Diseases 43(3): 450-460.
Poulin R y Gugan JF. 2000. Nestedness, anti-nestedness, and the relationship between
prevalence and intensity in ectoparasite assemblages of marine fish: a spatial model
of species coexistence. International Journal for Parasitology 30: 1147-1152.
Pounds A, Bustamante MR, Coloma LA, Consuegra, JA, Fogden MPL, Foster Pru N, La
Marca E, Masters K, Merino-Viteri A, Puschendorf R, Ron S, Snchez-Azofeifa
GA, Still Ch. y Young B. 2006. Widespread amphibian extinctions from epidemic
disease driven by global warming. Nature 439: 161-167.
Pounds A, Bustamante MR, Coloma LA, Consuegra JA, Fogden MPL, Foster PruN, La
Marca E, Masters K, Merino-Viteri A, Puschendorf R, Ron S, Snchez-Azofeifa
GA, Still Ch y Young B. 2007. Pounds et al. reply. Nature 447: E5-E6.
Pounds JA y Coloma LA. 2008. Beware the lone killer. Nature 2: 57-59.
Pounds JA y Crump ML. 1994. Amphibian declines and climate disturbance: The case of
the Golden Toad and the Harlequin Frog. Conservation Biology 8: 72-85.
Pounds JA, Fogden MPL y Campbell JH. 1999. Biological response to climate change on
a tropical mountain. Nature 398: 611-615.
Quinn G y Keough MJ. 2002. Experimental design and data analysis for biologists.
Cambridge University Press, New York. 537 pp.
Rachowicz LJ y Briggs CJ. 2007. Quantifying the disease transmission function: effects
of density on Batrachochytrium dendrobatidis transmission in the mountain
yellow-legged frog Rana mucosa. Journal of Animal 76:711-721.
R Core Development Team. 2005. The R project for statistical computing. Versin 2.3.1.
R Core Development Team, Vienna, Australia.
Ribas L, Ming-Shi L, Doddington BJ, Robert J, Seidel JA, Kroll JS, Zimmerman LB,
Grassly NC, Gainer TWJ y Fisher MC. 2009. Expression profiling the temperature-
dependent amphibian response to infection by Batrachochytrium dendrobatidis.
PloS ONE 4 (12): 1-10.
140
Rohr JR, Elskus AA, Shepherd BS, Crowley PH, McCarthy TM, Niedzwiecki JH, Sager
T, Sih A y Palmer BD. 2004. Multiple stressors and salamanders: effects of an
herbicide, food limitation, and hydroperiod. Ecological Applications 14: 1028-
1040.
Rollins-Smith LA, Reinert LK, Miera V y Conlon JM. 2002b. Antimicrobial peptide
defenses of Tarahumara frog, Rana tarahumarae. Biochemical and Biophysical
Research Communications 297: 361-367.
141
Ron SR. 2005. Predicting the distribution of the amphibian pathogen Batrachochytrium
dendrobatidis in the New World. Biotropica 37 (2): 209-221.
Ryan M. 1980. The reproductive behavior of the bullfrog (Rana catesbeiana). Copeia 1:
108-114.
Shaw G. 1802. General Zoology or Systematic Natural History. Society for the study of
Amphibians and Reptiles, London 3: 106-108.
Silva Len GA. 2001. Los picos ms altos del estado Mrida-Venezuela. Revista
Geogrfica Venezolana 42: 73-97.
SPSS Inc. 2000. Systad versin 10. SPSS Inc., Chicago, Estados Unidos.
Skerratt LF, Berger L, Speare R, Cashins S, McDonald KR, Phillott AD, Hines HB y
Kenyon N. 2007. Spread of chytridiomycosis has caused the rapid global decline
and extinction of frogs. EcoHealth 10.1007/s10393-007-0093-5.
Sokal RS y Rohlf FJ. 1995. The principles and practice of statistics in biological
research. Tercera edicin. Freeman and Company, New York. 887 pp.
StatSoft. 1997. Statistica for Windonws. StatSoft Inc., Tulsa, Oklahoma, USA.
Stuart SN, Chanson JS, Cox NA, Young BE, Rodrigues ASL, Fischman DL y Waller
RW. 2004. Status and trends of amphibian declines and extinctions worldwide.
Science 306: 1783-1786.
Thoms Ch, Corkran Ch.C y Olson DH. 1997. Basic amphibian survey for inventory and
monitoring in lentic habitas. En: Sampling amphibians in lentic habitas. Olson DH,
Leonard WP y Bury RB (eds.) Northwest Fauna 4: 35-46.
Thorne E y Williams. 1988. Disease and endangered species: the black-footed ferret as
recent example. Conservation Biology 19: 1449-1459.
UICN. 2001. Categoras y criterios de la Lista Roja de la UICN: versin 3.1. Comisin
de Supervivencia de Especies de la UICN. UICN, Gland, Suiza y Cambridge,
Reino Unido. ii + 33 pp.
UICN 2012. The IUCN Red List of Threatened Species. Versin 2012.1.
http://www.iucnredlist.org. Revisado en lnea: febrero de 2012.
Vredenburg VT, Knapp RA, Tunstall TS y Briggs CJ. 2010. Dinamics of an emerging
disease drive large-scale amphibian population extinctions. Proceeding of National
Academy of Science of the United States of America doi/10.1073/pnas.0914111107.
Wang Y, Guo Z, Pearl CA y Li Y. 2007. Body size affects the predatory interactions
between introduced American Bullfrogs (Rana catesbeiana) and native anurans in
China: an experimental study. Journal of Herpetology 41: 514-520.
Yang H, Baek H, Speare R, Webb R, Park S, Kim T, Lasater KC, Shin S, Son S, Park J,
Min M, Kim Y, Na K, Lee H y Park S. 2009. First detection of the amphibian
chytrid fungus Batrachochytrium dendrobatidis in free-ranging populations of
amphibians on mainland Asia: survey in South Korea. Diseases of Aquatic
Organisms 86: 9-13.
Young BE, Lips KR, Reaser JK, Ibez DR, Salas AW, Cedeo JR, Coloma LA, Ron S,
La Marca E, Meyer JR, Muoz A, Bolaos F, Chaves G y Romo D. 2001.
Population declines and priorities for amphibian conservation in Latin America.
Conservation Biology 15: 1213-1223.
146
ANEXOS
147
Anexo 1. Protocolo para PCR a Tiempo Real empleado por el Laboratorio del
Ecologa y Gentica de Poblaciones, Centro de Ecologa, IVIC, para el diagnstico
de Batrachochytrium dendrobatidis (Bd) (preparado a partir de Boyle et al. 2004)
Antes de hacer un PCR se debe verificar si se encuentran los buffer y primers a utilizar
en las cantidades requeridas. En caso de que no se encuentre alguno prepararlo antes de
iniciar la PCR.
Limpiar el rea de trabajo con alcohol o cloro, luego colocar una hoja o toallin para
trabajar sobre el mismo y hacer la toma de la muestra para la extraccin de ADN.
Se recomienda trabajar con alcuotas del PrepMan ultra (Applied Biosystems) para evitar
contaminacin del mismo.
Toma de la muestra:
1. Antes de realizar la toma de la muestra rotular los viales estriles y colocar entre
30-40mg de perlas de Zirconio.
2. Para la toma de la muestra deben emplearse hojilla de bistur, pinzas o tijeras
estriles, para ello deben sumergirse en etanol al 100% y flamear con mechero
entre cada toma. Se coloca un trocito de paraflim en el mesn y sobre este se
cortar el tejito. El paraflim debe ser desechado entre cada corte. Colocar cada
corte en sus respectivos viales con las perlas de Zirconio y agregar 40 l de
PrepMan Ultra.
Incluir un blanco de extraccin (por duplicado) con el fin de verificar si hubo
contaminacin durante la extraccin. Este blanco incluyes slo las perlas de
Zirconio y 40 l de PrepMan Ultra (sin muestra).
3. Homogeneizar cada vial por 45 segundos en el Mini BeadBeater.
4. Se centrifuga inmediatamente por 30 segundos (13.000 rpm)
148
Para ello se hacen diluciones 1/10 a partir de una solucin de concentracin conocida de
zoosporas (2x105 zoosporas/1m):
Agua destilada.
La cantidad a emplear de cada reactivo debe ser calculado en funcin del nmero de
reacciones, el cual esta definido por:
Cada reactivo debe mezclarse bien (en su mismo envase) antes de colocarlo en el vial
para la preparacin del cctel e igualmente cuando se coloca en el vial estril. Mantener
enfro sin congelar.
1. Colocar en el bloque el rack de los viales especiales para PCR con sus tapas,
evitar tocar las tapas y la boca de los viales.
2. Colocar en cada vial 20 l del cctel y 5 l de ADN del hongo de las muestras,
diluido 1/10 en agua destilada.
3. Incluir los cuatro estndares ((20 l del cctel y 5 l de cada estndar).
4. Se incluir los blancos de extraccin (20 l del cctel y 5 l del blanco).
5. Incluir los blancos de PCR ((20 l del cctel y 5 l de agua destilada).
6. Cerrar los viales al terminar cada lnea.
Anexo 2. Lagunas muestreadas durante 2006 para estimar las densidades de D. meridensis y L.
catesbeianus, en los Municipios Campo Elas y Andrs Bello, Estado Mrida
La Esmeralda La Granzonera
152
Transmisin densodependiente:
dI/dt = SI ( + d + ) I (1.2)
donde,
SI: nmero promedio de nuevos infectados por la clase infectada por unidad de rea y
unidad de tiempo (incidencia).
155
dI/dt = 0
SI = ( + d + ) I
S = ( + d + ) /
Dado que N = S + I,
I=N-S
I = N - [( + d + ) / ]
I/N = 1 - [( + d + ) / N] (1.4)
Transmisin frecuendependiente
dI/dt = 0
SI/N = ( + d + ) I
S = [( + d + ) / ] N
Dado que N = S + I,
I= N - S
I = N - [( + d + ) / ] N
I/N = 1 - [( + d + ) / ] (1.7)
Transmisin densodependiente
Para determinar cules son las condiciones para el establecimiento del patgeno
157
dI/Idt = S ( + d + ) (1.8)
R0 = S / ( + d + ) (1.9)
St = ( + d + ) / (1.10)
S / ( + d + ) 1 ; S( + d + ) / (1.11)
Para saber si la infeccin, una vez establecida, puede regular la poblacin del
husped es necesario determinar si el patgeno y su husped pueden coexistir. Esto se
logra analizando la dinmica del sistema. Para ello se grafican las isoclinas de N e I en un
diagrama de fases, donde dN/dt = 0 y dI/dt = 0 (Figura 2). Se obtiene que el sistema solo
tiene dos puntos de equilibrio estables, uno trivial donde (N,I) = (0,0) y un punto de
equilibrio interno globalmente estable en el que:
N* = (/ -r) (( + d + ) / ); I* = r/ N* (1.12)
Esto ocurre justo al alcanzar St, por lo cual S* = ( + d + )/, es decir, cuando en
promedio cada caso genera exactamente un nuevo caso. Este equilibrio se corresponde
con la intercepcin de las isoclinas en la Figura 2. Es importante resaltar que no existen
equilibrios de frontera para este sistema, de forma tal que no hay un punto en el cual toda
la poblacin sea completamente infecciosa. Esto se deduce fcilmente de la ecuacin
(1.1) ya que si S = 0 entonces dS/dt > 0, por consiguiente siempre hay individuos
susceptibles. Por otro lado, la poblacin del husped crecera exponencialmente si el
patgeno no estuviera presente, ya que si I = 0 S = N, entonces, dS/dt = (b d) N;
siempre que b > d. De esta forma, el punto de equilibrio N*, I* ocurre justo cuando la
mortalidad inducida por la enfermedad balancea la tasa intrnseca de crecimiento de la
poblacin. En conclusin, tenemos que si un parsito logra establecerse (cumpliendo con
la condicin S > St) la poblacin del husped y parsito tendern a un punto endmico
159
dI/dt = 0
Densidad, I
dN/dt = 0
I=N
Nt = St
Densidad, N
Transmisin frecuendependiente
R0 = S / ( + d + ) N (1.13)
R0 / ( + d + ) (1.14)
160
> ( + d + ) (1.15)
dN/dt = 0
Densidad, I
I=N
dI/dt = 0
Densidad, N
Carretera hacia el Pramo Mario, en la va hacia la 2006 Registro de Potrero anegado Rivas Dvila 2185 190593 921479 Muestreo de *** En este trabajo
Laguna de Las Palmas canto campo
Carretera hacia el Pramo Mario, Laguna la Sucia 2006 3 Laguna Rivas Dvila 2072 191010 920877 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Carretera La Sabana-La Trampa 2006 1 Cuneta con agua Sucre 1883 230296 946429 Muestreo de *** En este trabajo
a orilla de campo
carretera
Carretera La Sabana-La Trampa, propiedad de la Sra. 2007 30 Potrero anegado Sucre 2050 230042 950501 Muestreo de *** En este trabajo
Mara campo
Carretera Las Cruces- Jaj 2005 5 Laguna Campo Elas 2000 243949 948687 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Carretera Las Cruces-Miraflores 2006 1 Pozo al lado de la Campo Elas 2037 242575 950547 Muestreo de *** En este trabajo
carretera campo
Carretera Las Cruces-Sector Miraflores 2005- 99 Pozo al lado de la Campo Elas 2214 241242 952501 Muestreo de *** En este trabajo
2006 carretera campo
Carretera va El Morro, en los 2006 1 En vegetacin Libertador 2236 257974 940345 Muestreo de *** En este trabajo
linderos del PN. Sierra Nevada del talud de la campo
carretera
Chama ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo UMMZ 3574, Rivero, 1961
CNHM 3573-4
Chama, cerca de Mrida ____ 1 ____ ____ ____ 263367 949450 Museo USNM 71114 www.herpnet.org;
(Paratipo) Rivero, 1961
La Carbonera, Finca de CREE 1995 1 ____ ____ ____ ____ ____ Museo ULABG 4102 Revisin de la
coleccin
La Culata ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo AMNH 10671-3 Rivero, 1961
163
La Grita, Tchira* 1970 2 ____ ____ ____ 171204 900250 Museo USNM 291068; www.herpnet.org
291069
La Mucuy, Fila la Loma 1952 7 Encontrada en Santos 1870 273419 954185 Museo MHNLS 625- revisin de la
Bromeliacea Marquina 629;632;633 coleccin
Mrida, Venezuela ____ 1 ____ ____ 1630 263927 951106 Museo MCZ A-2527 www.herpnet.org;
(Holotipo) Rivero, 1961
Pramo Mario ____ 4 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin
Sector El Valle, Truchicultura La Cueva del Oso 2006- 23 Laguna Libertador 2355 267601 959906 Muestreo de *** En este trabajo
2007 campo
Sector La Cuchilla Alta 2005- 76 Laguna Campo Elas 2270 235793 957417 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo
Sector La Cuchilla, Hacienda La Esmeralda 2003- 120 Laguna Campo Elas 2330 236991 956519 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo
Sector La Cuchilla, Hacienda La Esmeralda 2005- 110 Laguna Campo Elas 2253 236373 956951 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo
Sector la Osa 2004 1 Andrs Bello 2345 228019 961598 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Sector Las Cruces, sede del IVIC, va Mrida- Jaj 2010 3 En jardn cerca Campo Elas 1873 245130 946925 Museo EBRG 6024-6026 Revisin de la
de tanque coleccin
Australiano
Sector Miraflores Alto, Finca Dulce Virgen de 2006 1 Laguna Campo Elas 2601 238175 953898 Muestreo de *** En este trabajo
Coromoto campo
Sector Miraflores alto, Finca El Roco 2006 10 Laguna Campo Elas 2505 239750 954477 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Sector Miraflores, Casa del Sr. Beto 2006 6 Laguna Campo Elas 2474 239360 954006 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Sector Miraflores, en la base del pramo El Tambor 2005- 127 Laguna Campo Elas 2349 239469 953018 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo
Sector Miraflores, Estancia El Paramito 2006 13 Laguna Campo Elas 2469 239502 954224 Muestreo de *** En este trabajo
campo
164
Sector Miraflores, laguna natural Registro de Laguna Campo Elas 2552 238945 953848 Muestreo de *** En este trabajo
canto campo
Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 5 Pozo en bosque Campo Elas 2448 243157 953763 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo
Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 2 Potrero anegado Campo Elas 2463 242916 953585 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo
Sector Mistaj, alrededores de la finca La Tal, en la 2006 6 Potrero-bosque Campo Elas 242889 953618 Muestreo de *** En este trabajo
base del pramo Campanario campo
Sector Mistaj, Floricultura Cooperativa Mistaj 2005- 123 Laguna Campo Elas 2430 242553 952585 Muestreo de *** En este trabajo
2006 campo
Sector Mistaj, Floricultura Cooperativa Mistaj 2005 47 Laguna Campo Elas 2277 241805 952057 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Sector Palo Negro, Finca de Los Camachos 2005 2 Laguna Campo Elas 2358 239079 952798 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Sector Palo Negro, Finca de Los Camachos 2006 8 Laguna Campo Elas 2343 239150 952765 Muestreo de *** En este trabajo
campo
Valle Grande 1973 3 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin
Venezuela ____ 2 ____ ____ ____ ____ ____ Museo FMNH 3573, www.herpnet.org
3574
Venezuela ____ ____ ____ ____ ____ ____ ____ Museo AMNH 10666-7, Rivero, 1961
10669
Va el Morro ____ 2 ____ ____ ____ ____ ____ Museo CVULA Revisin de la
coleccin
Anexo 6. Ubicacin de las lagunas invadidas por rana toro en el Estado Mrida, Venezuela
Laguna Tipo Municipio Altitud (m) UTM Norte UTM Oeste
Agropecuaria Agua Viva 1 Artificial Campo Elas 2.406 955036 238973
Agropecuaria Agua Viva 2 Artificial Campo Elas 2.410 955470 239063
Altos de Casa Vieja 1 Natural Campo Elas 2.362 953393 240128
Altos de Casa Vieja 2 Artificial Campo Elas 2.303 952943 240041
Antes Sr. Beto Natural Campo Elas 2.349 953018 239469
Barrancas RM1 Natural Campo Elas 2.196 952372 240871
Barrancas RM2 Natural Campo Elas 2.178 952193 240896
Barrancas RM3 Natural Campo Elas 2.178 952193 240896
Barrancas RM4 Natural Campo Elas 2.227 952400 240965
Canta Rana Artificial Campo Elas 2.601 953898 238175
Finca El Roco Artificial Campo Elas 2.505 954477 239750
Finca La Colina Artificial Campo Elas 2.326 955970 239151
Finca La Pedregosa Natural Sucre 2.360 952261 237784
Finca la Trinidad Artificial Campo Elas 2.439 953717 241929
Finca Los Grisolias Artificial Campo Elas 2.140 957148 240333
Finca MiraSierra Natural Sucre 2.310 952610 239059
Finca Palo Negro Natural Campo Elas 2.440 954478 239944
Frente a la Finca San Onofre Artificial Campo Elas 2.330 956519 236991
Hacienda la Esmeralda 1 Artificial Campo Elas 2.230 957133 236531
Hacienda La Esmeralda 2 Artificial Campo Elas 2.253 956951 236373
La Granzonera 1 Natural Campo Elas 2.394 954224 239328
La Granzonera 2 Artificial Campo Elas 2.469 954224 239502
La Mesa Natural Campo Elas 1.837 949134 245805
Los Camachos 1 Artificial Sucre 2.358 952798 239079
Los Camachos 2 Natural Sucre 2.343 952765 239150
Los Cinaros Artificial Campo Elas 2.289 952715 240241
Laguna Negra del Pramo el
Tambor Natural Sucre 2.600 952582 236870
Sector La Playa Natural Campo Elas 1.810 949100 240710
Sixto Lobo Artificial Campo Elas 2.092 957790 240002
Sixto Lobo 2 Natural Campo Elas 2.248 956814 239388
Sr. Beto Natural Campo Elas 2.474 954006 239360
Sr. Pascual Artificial Campo Elas 2.361 953534 240052
Villa Juanita Natural Campo Elas 2.388 954161 240638
Anexo 9. Comparaciones entre pares de medias del numero de zoosporas (1-3 mg de tejido) en
estados de desarrollo de Dendropsophus meridensis y Lithobates catesbeianus obtenidas con un
prueba de comparaciones mltiples de Bonferroni.
Intervalo de Confianza
Diferencia
(I) Estado- Error (95%)
(J) Estado-Especie entre P
Especie estndar Limite Limite
medias (I-J)
inferior superior
Dm Larva Dm metamorfo -2,30387 0,318831 0,000000a -3,35056 -1,25718
Dm postmetamorfo -2,33055 0,545285 0,001064a -4,12067 -0,54044
Dm juvenil 0,30623 0,740896 1,000000 -2,12606 2,73853
Dm adulto -0,30487 0,231664 1,000000 -1,06540 0,45566
Lc larva -0,66976 0,236451 0,217552 -1,44601 0,10649
Lc metamorfo -1,28153 0,268751 0,000114a -2,16382 -0,39925
Lc postmetamorfo -1,22988 0,283630 0,000813a -2,16101 -0,29874
Lc juvenil -1,19584 0,266276 0,000410a -2,07000 -0,32168
Lc adulto -0,73090 0,248949 0,157644 -1,54818 0,08637
Dm metamorfo Dm postmetamorfo -0,02668 0,554527 1,000000 -1,84714 1,79378
Dm juvenil 2,61011 0,747725 0,023911a 0,15540 5,06482
Dm adulto 1,99900 0,252653 0,000000a 1,16957 2,82844
Lc larva 1,63411 0,257050 0,000000a 0,79024 2,47798
Lc metamorfo 1,02234 0,287041 0,018433a 0,08001 1,96467
Lc postmetamorfo 1,07400 0,301017 0,018012a 0,08579 2,06221
Lc juvenil 1,10804 0,284725 0,005190a 0,17331 2,04276
Lc adulto 1,57297 0,268591 0,000000a 0,69121 2,45473
Dm Dm juvenil 2,63679 0,868778 0,114776 -0,21533 5,48890
postmetamorfo
Dm adulto 2,02568 0,509427 0,003692a 0,35329 3,69808
Lc larva 1,66080 0,511622 0,056749 -0,01881 3,34040
Lc metamorfo 1,04902 0,527328 1,000000 -0,68215 2,78019
Lc postmetamorfo 1,10068 0,535064 1,000000 -0,65589 2,85724
Lc juvenil 1,13472 0,526071 1,000000 -0,59232 2,86176
Lc adulto 1,59965 0,517516 0,095585 -0,09931 3,29861
Dm juvenil Dm adulto -0,61110 0,714918 1,000000 -2,95811 1,73590
Lc larva -0,97599 0,716483 1,000000 -3,32814 1,37615
Lc metamorfo -1,58777 0,727782 1,000000 -3,97701 0,80147
Lc postmetamorfo -1,53611 0,733407 1,000000 -3,94381 0,87159
Lc juvenil -1,50207 0,726871 1,000000 -3,88832 0,88418
Lc adulto -1,03714 0,720704 1,000000 -3,40314 1,32887
Dm adulto Lc larva -0,36489 0,134497 0,312074 -0,80643 0,07665
Lc metamorfo -0,97666 0,185492 0,000010a -1,58562 -0,36771
Lc postmetamorfo -0,92501 0,206462 0,000430a -1,60280 -0,24721
Lc juvenil -0,89097 0,181888 0,000062a -1,48809 -0,29385
Lc adulto -0,42603 0,155422 0,286966 -0,93627 0,08420
Lc larva Lc metamorfo -0,61177 0,191438 0,067393 -1,24025 0,01670
Lc postmetamorfo -0,56012 0,211820 0,381801 -1,25550 0,13527
Lc juvenil -0,52608 0,187948 0,240980 -1,14309 0,09094
Lc adulto -0,06115 0,162472 1,000000 -0,59452 0,47223
Lc metamorfo Lc postmetamorfo 0,05166 0,247357 1,000000 -0,76039 0,86371
Lc juvenil 0,08569 0,227250 1,000000 -0,66034 0,83173
Lc adulto 0,55063 0,206676 0,360283 -0,12787 1,22913
Lc postmetamorfo Lc juvenil 0,03404 0,244666 1,000000 -0,76918 0,83725
Lc adulto 0,49897 0,225686 1,000000 -0,24193 1,23988
Lc juvenil Lc adulto 0,46493 0,203447 1,000000 -0,20296 1,13283
Dm: Dendropsohus meridensis
Lc: Lithobates catesbeianus
a
Diferencias significativas para un nivel de 0,05
1 67 1493 2 5 27
la Esmeralda 8 2 (40-94) 1 1 1 (4-14)
1 31 11
La Granzonera 4 3 (6-56)
L. catesbeianus
1 82 294
Sr. Beto 9 1 (59-100) 8
1 67 168
Camachos 2 8 2 (40-94) 5
100
708
1 1 (100-
7
Camachos 1 4 4 100)
100
246 196 319
1 2 78 2 2 79 805 3 3 (100- 2 2 93
3 7 4
Canta Rana 8 3 (61-95) 2 8 (64-94) 0 0 100) 6 8 (84-102)
1 90 1 1 100 114
514
Villa Juanita 9 0 (71-100) 0 0 (100-100) 76
P: nmero de diagnsticos positivos
Z: promedio de zoosporas 1-3mg de tejido (95% IC)
CURRICULUM VITAE
Nombre: Dinora Snchez.
Lugar y fecha de nacimiento: Maracay, 15 de agosto de 1978.
Nacionalidad: Venezolana.
Estudios Realizados
Ingeniera Agronoma (septiembre 1994- enero 2001): Facultad de Agronoma, Universidad
Central de Venezuela, Maracay, Venezuela.
Cargos desempeados
Estudiante Graduado, Doctorado en Ciencias, mecin Ecologa (septiembre 2002- octubre 2012),
Centro de Ecologa, Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas (IVIC). Tutor:
Margarita Lampo.
Profesional universitario I, empleada fija (diciembre 2009-julio de 2012): Oficina Nacional de
Diversidad Biolgica, Ministerio del Poder Popular para el Ambiente.
Asesor experto, contratada (septiembre 2008-junio de 2009): Oficina Nacional de Diversidad
Biolgica, Ministerio del Poder Popular para el Ambiente.
Profesora de Ecologa Agrcola, contratada (enero 2002 a julio 2002): Facultad de Agronoma,
Universidad Central de Venezuela.
Honores y Distinciones
Categora Nivel I del Programa de Promocin del Investigador (2009-2010). Ministerio de
Ciencia y Tecnologa.
Reconocimiento Orden Jos Flix Ribas en su primera clase en la categora de rea Cientfica
y de Investigacin (febrero 2008). Ministerio de Educacin, Venezuela.
Categora Candidato del Programa de Promocin del Investigador (2006-2008). Ministerio de
Ciencia y Tecnologa.
Reconocimiento Orden Jos Flix Ribas en su tercera clase en la categora de Investigacin
(febrero 2005). Ministerio de Salud y Desarrollo Social, Venezuela.
Beca de Excelencia (abril 2004 septiembre 2007). Instituto Venezolano de Investigaciones
Cientficas, Venezuela.