CATEDRA: MICROBIOLOGIA GENERAL

CATEDRATICA: BIOLG. ESTHER RUIZ REATEGUI

ALUMNO: JESUS BRIHAM TORRES PAIMA

CODIGO: 0002130084

FECHA DE ENTREGA: 20-01-17

TITULO: PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. TITULO: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO.

II. INTRODUCCION:

Por su minscultura tamao, los microorganismos no pueden estudiarse como

individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es
 necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicacin in vitro, en ambientes
especiales que proporcionan las condiciones semejantes a las de sus hbitos
naturales. En esos ambientes se debe eliminar a todos aquellos
microorganismos que interfieren en el estudio del microrganismo de inters, al
que adems de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento
multiplicacin.
En muchos aspectos, el pequeo tamao de los microrganismos los hace
sujetos ideales para la experimentacin. Se pueden cultivar millones de
organismos en un solo mililitro de medio para su estudio. La rpida multiplicacin
de estas diminutas criaturas constituye tambin una ventaja experimental, ya que
se puede trabajar con muchas generalizados a los sistemas celulares, planta y
animales, incluida la especie humana. Para llevar a cabo experimentos con
microrganismos es usualmente necesario cultivarlos en el laboratorio.

III. OBJETIVOS:

Preparar adecuadamente los medios de cultivos deshidratados y por

componentes.
Envasar los medios de cultivos de manera adecuada en los diferentes
recipientes de acuerdo al uso que se les dar.
Relacionar la composicin de los diversos medios de cultivo con sus
caractersticas y aplicaciones.

IV. GENERALIDADES:
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivos son una mezcla de nutrientes que en concentraciones
adecuadas y en condiciones fsicas optimas, permiten el crecimiento de los
microrganismos. Estos medios son esenciales en el laboratorio de microbiologa
por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso,
asegura la exactitud, confiabilidad y producibilidad de los resultados obtenidos.

Clasificacin de los medios de cultivos. En los laboratorios de microbiologa se

utilizan diferentes tipos de medios de cultivos que pueden ser preparados en
forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio solido se
parte del medio liquido al que se le aade un agente solidificante como el agar,
la gelatina o la slica gel.

Los medios del cultivo se pueden clasificar

de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

1. Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen

animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de
minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las
cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.
2. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin
qumica definida cualitativa y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos
de investigacin. (Para bacterias como: Echerichia coli y Leuconostoc citrovorum)

De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en:

1. Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de
un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se
quieren cultivar.
2. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser
medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos
especficos. (Para bacterias como Salmonella typhi y Clostridium botulinum)
3. Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos
derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn
tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas
fisiolgicas de los microorganismos. ( para bacterias como: Streptococcus
pyogenes y Escherichia coli)

Por su composicin los medios de cultivo se clasifican en:

1. Lquidos: conocidos como caldos, estos son especialmente tiles para hacer
diluciones, para homogenizar mezclas de microorganismos, para enriquecer
cultivos y para rehidratar cepas liofilizadas.
2. Slidos: Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias
aisladas en las que es posible observar las caractersticas tpicas de un solo tipo de
microorganismo.
3. Semislidos: Son aquellos medios lquidos a los que se adiciona agar en
concentraciones de 0.4 a 0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de
los microorganismos microaeroflicos. Los medios de cultivo se pueden preparar en
el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos o por simple
rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo
deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo
deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor
probabilidad de obtener resultados reproducibles.

Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:

- Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores
que suministren productos de calidad.
- Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y
fisicoqumica adecuada.
- Utilizar materiales de vidrio bien lavado y enjuagado con agua destilada o
desmineralizada.
- Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin.
- Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.

Almacenamiento de los medios de cultivo:

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las
condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco
(entre 15 y 25_), con poca humedad y protegidos de la luz solar di recta. Nunca se
deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor; Los
medios de cultivo deshidratados se deben descartar cuando se hidraten o decoloren.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado se debe almacenar
entre 2 y 8_C, a menos que el medio requiera alguna condicin diferente. Se deben
mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin. Cuando se usa
tapn de algodn se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft).

V. MATERIALES

De la ctedra del alumno

Matraces Erlenmeyer (250, 500 y 1000ml)
Tubos de ensayo (de 16x150mm y de 22x175mm) ,
Algodn y papel Kraff
Pipetas (1 y 10ml) Gasa
Placas petri de vidrio Hilo pavilo
Probeta (100ml) , 250 ml
Plumn indeleble
Vaso de precipitados (250ml)
Esptula y Agitador de vidrio
Gradilla
Mechero
Agua destilada
Canastilla de metal
EQUIPO: Autoclave, Balanza analtica, potencimetro

MEDIOS DE CULTIVO:

Medio EMB (Agar de Eosina y Azul de metileno)

- Composicin: Peptona de gelatina (10g), lactosa (5g), sacarosa (5g), fosfato
dipotsico (2g), agar (13.5g), eosina (0.4g) y azul de metileno (0.065g). *pHf =
7.20.2
- Sirve para la identificacin, diferenciacin y aislamiento de enterobacterias;
determina la funcionalidad del medio de cultivo con microorganismos tpicos.
- Por su contenido en lactosa y sacarosa es posible diferenciar en el primocultivo:
salmonellas y shigellas. Lactosa y sacarosa negativas de otras enterobacterias pero
sacarosa positivas, tales como Proteus vulgaris, Citobacter y Aeromonas.
- La microflora acompaante que entorpece el aislamiento de los grmenes de
inters mdico, es ampliamente inhibida por los colorantes de la frmula, sobretodo
la flora Gram positiva.
- En este medio tambin es posible la identificacin de Candida albicans (incubacin
en CO2) y a veces se logra asilar Nocardia.

Medio Agar de Mac Conkey.

- Composicin: Peptona de casena (17g), peptona de carne (3g), lactosa (10g),
mezcla de sales biliares(1.5g), NaCl (5g), rojo neutro (0.03g), cristal violeta
(0.001g), agar-agar (13.5g). *pH (37C) = 7.10.1.
- Empleado ampliamente para aislar e identificar selectivamente a enterobacterias
como salmonellas, shigellas y coniformes a partir de heces fecales, orina, aguas
negras y diversos alimentos.
- Los grmenes Grampositivos son inhibidos por las sales brillantes y el cristal violeta.
- Las enterobacterias fermentadoras de la lactosa bajan el pH del medio que es
detectado por el indicador rojo neutro dando colonias rosadas o rojas; Las no
fermentadoras dan colonias transparentes, incoloras o ambarinas.
- Crecen tambin bacilos Gramnegativos que no pertenecen a la familia enterobacteria
e compuntiformes de Streptococcus fecales (enterococos) de color rojo y de
algunos estafilococos cuyas colonias son pequeas, opacas de color rosa plido.
- Puede usarse en la diferenciacin de Mycobacterium. o Pseudomonas y
Aeromonas. Asimismo, pueden desarrollarse un nmero reducido de colonias

Caldo nutritivo

- Composicin: Peptona de gelatina (5.0g) y extracto de carne de res (3.0g) *pH = 7.o
0.2
- Es un medio lquido, elaborado de acuerdo a la frmula del APHA y en el cul se
pueden desarrollar gran variedad de microorganismos que no son muy exigentes en
cuanto a sus necesidades nutricionales.
- Se emplea ampliamente en muchos procedimientos de laboratorio, tal y como viene
preparado o bien adicionado de indicadores, carbohidratos, lquidos orgnicos,
sales, etc

Agar nutritivo

- Composicin: Peptona de carne 5.0g, Extracto de carne 3.0 g, Cloruro de sodio 8.0
g, Agar15.0 g,
pH : 7.0 0.2.
- Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. No
contiene inhibidores de crecimiento. Su uso est descrito en muchos
procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de
importancia sanitaria.
- En este medio el extracto de carne y la peptona aportan la fuente de nitrgeno,
vitaminas y carbono. El agar es adicionado como agente solidificante

Agar Saboroud

- Composicin qumica: peptona 10.0 g, glucosa 40 g, agar 15,0 g. pH = 5.6 0.2

- Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos,
particularmente los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.).
- En el medio de cultivo, la peptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el
pH cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.
- Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de
crecimiento.
VI. PROTOCOLO
Preparar un medio de cultivo con medio EMB

Pesar 9g y Hidratar
Medio EMB colocar en un agregar
matraz 250ml de
agua
destilada

Esterilizar autoclave Homogenizar con

durante 15 minutos calor y agitacin (ya
que contiene agar):
mezcla y dejar en
reposo 5min. calentar

Dispensar en rea asptica en

placas Petri previamente
esterilizadas

1. Proceder a preparar los diferentes medios de cultivos, siguiendo las

indicaciones del frasco y la cantidad solicitada para la prctica.
2. Distribuir los medios de cultivos en los recipientes adecuados (tubos de
ensayo)
3. Tapar los tubos y colocarlos en un cesto de alambre y cubrirlos con papel kraft.
4. Marcar sobre el papel el nmero y tamao de los tubos y nombres del operario.
5. Meter los medios en la autoclave y esterilizar.
6. Al terminar del ciclo de esterilizacin, apagar la autoclave, esperar a que la
presin baje a cero, retirar el material.
7. Junto a la flama del mechero abrir un tubo y vaciar el contenido en una placa
Petri estril, tapar la placa y repetir el procedimiento con los otros tubos.
8. Dejar reposar las placas durante 20 minutos para que solidifique el agar,
despus voltearlas para evitar que se forme agua de condensacin en las
tapas.
 9. Comprobar la esterilidad meter los tubos y las placas a la incubadora durante
24 horas a 28c y 48 horas a 37c. observar que no haya desarrollo
microbiano.
10. Los medios cuya esterilidad ha sido comprobada podrn utilizarse en las
siguientes practicas
11. Los medios en los que se haya registrado desarrollo microbiano, sern
desechados previa esterilizacin.

VII. RESULTADOS.

a) Indicar que tipos de medio de cultivo se prepararon y que aplicacin tendrn

en la siguiente prctica.

MEDIO EMB

Sirve como identificador y aislamiento de enterobacterias

MEDIO AGAR DE MAC CONKEY

Para aislar e identificar selectivamente a los anterobacterias como salmonelas,

etc.

CLADO NUTRITIVO
Se emplea en muchos procedimientos, tal como viene preparado o bien
adicionado de indicadores, carbohidratos, liquidos.

AGAR NUTRITIVO

Para aislamientos de microorganismos

AGAR SABOROUD
Para aislamiento y desarrollo de hongos

b) Escriba la composicin qumica de cada medio de cultivo que se prepar en

la prctica.

Agar nutritivo

Peptona de carne 5.0g

Extracto de carne 3.0g
Cloruro de sodio 8.0g
agar 15g
pH 7.00.2
 c) Describir las dificultades a las que se enfrent y los errores que cometi
durante el desarrollo de esta prctica.

VIII. CONCLUSIONES

La preparacin de estos medios de cultivos se realiz de forma

deshidratada y por componentes.

IX. REFERENCIAS

http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/Cla
seprocariontes/alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20medios%20de
%20cultivo.pdf.
http://www.probiotek.com/producto/agar-nutritivo/
http://es.scribd.com/doc/14173118/4-esterilizacion-y-preparacion-de-medios-
de-cultivo.
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo

CUESTIONARIO
1. Qu es un medio de cultivo?
R- son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones
fsicas optimas,

2. Qu porcentaje de agar utilizara si desea preparar un medio de cultivo

semislido?
R-Un porcentaje de 0.4 a 0.8 %

3. Revise bibliografa y de ejemplos, de medios de cultivos enriquecidos, selectivos y

diferenciales indicando su composicin y su finalidad.
Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con aditivos
adicionales para favorecer el crecimiento de determinados microorganismos
(particularmente hetertrofos exigentes). Ejemplo: adiccin de sangre, suero o
extractos de tejidos de animales y plantas.
Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseo el crecimiento especfico
de un microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad
para el aislamiento de microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta.
Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es selectivo para autotrofos; adiccionando
cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+); utilizando maltosa como nica
fuente de carbono slo crecern los que usen maltosa.

Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminacin de

microorganismos de una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en
dichos medios. Ejemplo: Agar sangre diferencia hemolticos de no hemolticos;
McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-).

4. Que debe contener un medio de cultivo para permitir el desarrollo y crecimiento

de los microorganismos?
R- deben tener un medio de enriquecimiento (medios lquidos)
Medios selectivos (medios solidos)
Medios diferenciales (no contiene ninguna sustancia con actividad antimicrobiana.

5. Qu sustancia permite que los medios lquidos solidifiquen? cules son sus
caractersticas?
R- el agar, la gelatina o la slica de gel, caracterizadas para su fabricacin y
preparacin, conservacin y uso.

6. Por qu es necesario esterilizar a los medios de cultivos?

R- es necesario para la experimentacin como estos medios de cultivos permiten el
crecimiento de los microorganismos. Para ello es necesario cultivarlos es decir
favorecer su multiplicacin in vitro, en ambientes especiales.

7. Por qu necesario mantener encendido el mechero durante toda la practica?