Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

En esta experiencia de laboratorio nmero ocho se tuvo como objetivo realizar

ensayos qumica cualitativos para reconocer las propiedades qumicas de las protenas
e identificar mediante pruebas especficas el grupo funcional presente en las protenas.
En la primera etapa de la experiencia se complet 2 pruebas de hidrolisis (Almidn,
sacarosa) del laboratorio nmero siete, seguidamente se prepar una solucin de clara
de huevo y agua (1:1) que se filtr en una probeta con ayuda de algodn, con esta
solucin se trabaj en todas las siguientes pruebas.
La experiencia comenz con la prueba de Bluret, en el cual se hizo reaccionar
albumina sulfato de cobre e hidrxido de sodio dndonos un color violeta, seguido se
hizo la reaccin xantoproteica en la cual se hizo reaccionar albumina, cido ntrico e
hidrxido de amonio dndonos un coloracin blanco amarillenta, seguido se hizo la
reaccin de la ninhidrina en la cual se hizo reaccionar albmina ninhidrina el cual nos
dio una coloracin purpura luego se le agreg cido actico y cloroformo con lo que
cambio a un color anaranjado con precipitado, seguido se hizo la reaccin de
precipitacin con sales metlicas en la cual se us albumina y se hizo reaccionar con
sulfato de cobre, cloruro de bario y acetato de plata en las cual nos dio coloraciones
verde , blanca blanca respectivamente con una ligera precipitacin, finalmente se hizo
la precipitacin con reactivos alcaloides en la cual se us albumina y se hizo reaccionar
con cido pcrico y cido fosfomolibdico dndonos en los 2 casos una ligera
precipitacin amarillenta.

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

Resumen....1

Introduccin.3

Parte terica...4

Detalles Experimentales 7

Reacciones Qumicas14

Discusin de Resultados.16

Conclusiones..19

Recomendaciones..20

Fichas Internacionales de Seguridad

Qumica.....21

Bibliografa.24

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

Los aminocidos constituyen a las protenas, son substancias que tienen como
caracterstica poseer un carboxilo libre y un grupo amino. Los aminocidos difieren
entre s nicamente por las caractersticas del resto de su molcula, de manera que sus
frmulas generales dependen tanto de su grupo carboxlico como de su grupo amino
alfa. En un polmero lineal de aminocidos o polipptido, de todos los grupos carboxilo
alfa y amino de los aminocidos que intervienen, solo quedan libres un grupo amino
alfa, el grupo terminal y un grupo carboxilo alfa, el grupo carboxilo terminal.
En el presente tema abordaremos aspectos generales sobre estas estructuras y sus
funciones, as como de los medios de laboratorio para identificar a los mismos. Por la
importancia y el papel que desempea las protenas, hemos realizado la siguiente
experiencia de forma que podamos reconocer la presencia de las protenas en la clara
de huevo.

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LOS AMINOCIDOS
Son unas molculas orgnicas con un grupo amino (-NH2) y un grupo carboxilo(-
COOH). Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son aquellos que forman
parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en una reaccin de condensacin
entre el grupo amino de uno y el
carboxilo del otro, liberndose una
molcula de agua y formando un
enlace amida que se denomina enlace
peptdico; estos dos "residuos" de
aminocido forman un dipptido. Si
se une un tercer aminocido se forma
untripptido y as, sucesivamente,
hasta formar un polipptido. Esta
reaccin tiene lugar de manera
natural dentro de las clulas, en los ribosomas. Todos los aminocidos componentes
de las protenas son L-alfa-aminocidos. Esto significa que el grupo amino est unido al
carbono contiguo al grupo carboxilo (carbono alfa) o, dicho de otro modo, que tanto el
carboxilo como el amino estn unidos al mismo carbono; adems, a este carbono alfa
se unen un hidrgeno y una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o
radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada
uno de los diferentes aminocidos. Existen cientos de radicales por lo que se conocen
cientos de aminocidos diferentes, pero slo 22 (los dos ltimos fueron descubiertos
en los aos 1986 - selenocistena- y 2002 -pirrolisina-) forman parte de las protenas y
tienen codones especficos en el cdigo gentico.

LAS PROTENAS
Las protenas son compuestos qumicos muy complejos que se encuentran en todas las
clulas vivas: en la sangre, en la leche, en los huevos y en toda clase de semillas y
plenes. Hay ciertos elementos qumicos que todas ellas poseen, pero los diversos
tipos de protenas los contienen en diferentes cantidades. En todas se encuentran un
alto porcentaje de nitrgeno, as como de oxgeno, hidrgeno y carbono. En la mayor
parte de ellas existe azufre, y en algunas fsforo y hierro. Las protenas son sustancias
complejas, formadas por la unin de ciertas sustancias ms simples llamadas
aminocidos, que los vegetales sintetizan a partir de los nitratos y las sales
amoniacales del suelo. Los animales herbvoros reciben sus protenas de las plantas; el
hombre puede obtenerlas de las plantas o de los animales, pero las protenas de
origen animal son de mayor valor nutritivo que las vegetales. Esto se debe a que, de
los aminocidos que se conocen, que son veinticuatro, hay nueve que son
imprescindibles para la vida, y es en las protenas animales donde stas se encuentran
en mayor cantidad.

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CLASIFICACION Y ESTRUCTURA
ESTRUCTURA
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y
estructura cuaternaria. Cada una de estas estructuras informa de la disposicin de la
anterior en el espacio.

ESTRUCTURA PRIMARIA: La estructura primaria es la secuencia de aa. de la protena.

Nos indica qu aas. componen la cadena polipeptdica y el orden en que dichos aas. se
encuentran. La funcin de una protena depende de su secuencia y de la forma que
sta adopte.

ESTRUCTURA SECUNDARIA: La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia

de aminocidos en el espacio. Los A.A. a medida que van siendo enlazados durante la
sntesis de protenas y gracias a la capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una
disposicin espacial estable, la estructura secundaria.
Existen dos tipos de estructura secundaria:
la a(alfa)-hlice
la conformacin beta
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s misma la estructura
primaria. Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O de un
aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue. En esta disposicin los no
forman una hlice sino una cadena en forma de zigzag, denominada disposicin en
lmina plegada. Presentan esta estructura secundaria la queratina de la seda o
fibrona.

ESTRUCTURA TERCIARIA: La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la

estructura secundaria de un polipptido al plegarse sobre s misma originando una
conformacin globular. En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul
ser la secundaria y por tanto la terciaria. Esta conformacin globular facilita la
solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte, enzimticas, hormonales,
etc. Esta conformacin globular se mantiene estable gracias a la existencia de enlaces
entre los radicales R de los aminocidos. Aparecen varios tipos de enlaces:
El puente disulfuro entre los radicales de aminocidos que tiene azufre.
Los puentes de hidrgeno
Los puentes elctricos
Las interacciones hifrfobas.

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ESTRUCTURA CUATERNARIA:
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria, para formar un complejo proteico. Cada una
de estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre de protmero. El nmero de protmeros
vara desde dos como en la hexoquinasa, cuatro como en la hemoglobina, o muchos como la
cpsida del virus de la poliomielitis, que consta de 60 unidades protecas.

REACCION DE BIURET
Los pptidos y protenas producen una reaccin coloreada muy usada para la
valoracin de los mismos, llamada reaccin del Biuret. Las protenas por sus uniones
peptdicas reaccionan con los iones cpricos del reactivo en medio alcalino formando
un complejo de color violeta. Se necesitan 2 ms uniones peptdicas para que se
forme el complejo coloreado. Esta prueba sirve para la identificacin de tripptidos en
adelante Un color violeta resulta cuando los iones cpricos en medio alcalino se
complejan con los electrones no saturados de los tomos de nitrgeno y oxgeno de
los enlaces de todas las protenas. La cantidad de color producido es proporcional a la
concentracin de protenas.

REACCION XANTOPROTEINA
La reaccin xantoproteica es un mtodo que se puede utilizar para determinar la
presencia de protenas solubles en una solucin, empleando cido ntrico concentrado.
La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de
grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la
prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. La reaccin
xantoproteica se puede considerar como una sustitucin electroflica aromtica de los
residuos de tirosina de las protenas por el cido ntrico dando un compuesto
coloreado amarillo a pH cido. Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa,
mas no cuantitativa. Por ende, determina la presencia o no de protenas. Para
cuantificar se usa otra reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro
fotomtrico.

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MATERIALES Y REACTIVOS

Materiales
Vasos
9 tubos de ensayos
Gradilla
Cocinilla
Huevo

Reactivos
Muestras= sacarosa , maltosa, glucosa, fructosa y almidn.
Agua destilada
Reactivo de Molisch
Lugol
CuSO4 0.5% , 5%
HNO3
NH4OH
cido actico
Cloroformo
NaOH 10%
BaCl2
Acetato de plomo 5%

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PROCEDIMIENTO

1. Hidrolisis del almidn

Se prepar una solucin de 25mL de almidn al 5% en un vaso, para ello se
pes 1.25g de almidn y se agreg 25mL de agua
Se agreg al vaso 1mL de HClc

Se llev a calentar la solucin hasta la ebullicin

Luego se tom una muestra de aproximadamente 1mL en un tubo de ensayo, se

agreg unas gotas de cido clorhdrico y unas gotas de Lugol (prueba de Lugol), se
observ una coloracin azul.

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Se tomaron otras dos muestras en intervalos de 5 minutos y se realizaron las pruebas

de Lugol, en la segunda se observ una coloracin parda.

Se neutralizo la solucin con 2 gotas de NaOH al 20%.

Se tom una muestra en un tubo de ensayo y se realiz la prueba de Fehling
Se observ un precipitado rojo ladrillo.

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2. Hidrolisis de la celulosa
En un vaso se pes 1gramo de algodn
Se agreg 5ml de H2SO4 al vaso con algodn y con una bagueta se diluyo el
algodn en el cido.

Se agreg 25mL de agua destilada y se llev a calentar a la cocinilla durante

25minutos aproximadamente.
Se agregaba agua destilada a la solucin de modo que se mantenga un volumen
de 25mL.

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

Se extrajo una muestra en un tubo de ensayo y se realiz la prueba de Fehling

Se obtuvo un precipitado color rojo ladrillo.

3. Preparacin de solucin de Albmina

Se separ la clara de la yema de un huevo en una probeta y se agreg a esta la misma
cantidad de agua destilada a la probeta.
Se vaci a un vaso de precipitado para as poder agitar hasta generar una pequea
espuma.
Se filtr nuevamente a la probeta usando un embudo con algodn.

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I. REACCIONES DE COLORACIN
A. Reaccin de Biuret
En un tubo de ensayo se coloc 1ml de solucin de albmina y 1.5ml de
NaOH al 10%.
Luego se aadi gota a gota CuSO4 al 0.5%

Se Observa: Una coloracin prpura violeta

B. Reaccin Xantoproteica
En un tubo de ensayo se agreg 1ml de albmina y 0.5ml de HNO3

Se Observa: Una coloracin blanca espumosa

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Se llev el tubo a bao mara

Se Observa: Que se disuelve con la aparicin de un precipitado de color amarillo

Luego se enfri y se aadi gota a gota NH4OH

Se Observa: Que se torna una coloracin naranja

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C. Reaccin Ninhidrina
Se agreg a un tubo de ensayo 1ml de solucin de albmina y 0.25ml de
ninhidrina.
De ah se pas a un bao mara.

Se Observa: Que se torna una coloracin violeta

Luego se agreg 1 gota de cido actico y 0.5ml de cloroformo

Se Observa: Una coloracin naranja meln.

II. REACCIONES DE PRECIPITACIN
A. Reacciones de precipitacin con sales metlicas.
En 3 tubos de ensayo se agreg 1ml de solucin de albmina preparada
previamente, seguidamente se agreg sulfato de cobre (5%), cloruro de
bario (5%) y acetato de plomo a cada tubo respectivamente hasta que
aparezca un precipitado.

Figura 1: Albumina Figura 2: Albumina Figura 3: Albumina

+CuSO4 +BaCl2 +Acetato de Plomo

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B. Precipitacin de reactivos alcaloides

En 2 tubos de ensayo se agreg 1mL de albumina de solucin preparada
previamente, seguidamente se agreg 6 gotas de cido pcrico y cido
fosfomolibdico a cada tubo respectivamente.

Figura 4: Albumina
Figura 4: Albumina
+cido fosfomolibdico
+acido pcrico

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

1. Hidrolisis del almidn

hidrolisis

a) Prueba de Fehling con el producto del hidrolisis del almidn(glucosa)

2. Hidrolisis de celulosa

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I. REACCIONES DE COLORACIN
A. Reaccin de Biuret

B. Reaccin Xantoproteica

C. Reaccin Ninhidrina

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II. REACCIONES DE PRECIPITACIN

A. Reacciones de precipitacin con sales metlicas.
Tubo numero 1: 1mL albumina + gotas de sulfato de cobre (Precipitado
celeste).

Tubo nmero 2: 1mL albumina + gotas de cloruro de bario(Precipitado blanco)

Tubo numero 3: 1mL albumina + gotas de acetao de plomo(Precipitado blanco)

B. Precipitacin de reactivos alcaloides

Tubo numero 1: 1Ml albumina + acido picrico

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

1. Hidrolisis del almidn

Muestras tomadas cada 5 minutos Coloracin de la muestra con Lugol

1ra muestra Azul

2da muestra Azul virando a pardo

3ra muestra pardo

En la hidrolisis del almidn, como se observa en el siguiente cuadro, la

primera muestra nos indica la presencia del almidn, pero en segunda se
observ aun un color azul, lo que nos muestra aun la presencia del almidn,
en la tercera muestra se observ solo el color pardo indicando que ya no hay
almidn, esto nos demuestra que el almidn se ha hidrolizado, los enlaces
glucosdicos se rompieron y ahora se tienen molculas de glucosas.
La presencia de la glucosa se verifico con la prueba de Fehling, ya que la
glucosa reduce al cobre de +2 a +1 observndose una coloracin rojo
ladrillo.

2. Hidrolisis de celulosa
En la hidrolisis de la celulosa luego de calentar la solucin, se logra romper los
enlaces glucosdicos obtenindose las molculas de glucosa se hizo la prueba
de Fehling, como en la experiencia anterior.

I. REACCIONES DE COLORACIN
A. Reaccin de Biuret
Se observ que la solucin adquiere instantneamente un color violeta
intenso, luego al pasar los minutos se form precipitado indicando que la
reaccin es positiva. Esto se debe a que la albumina contiene uniones
peptdicas en su composicin, y estos reaccionan con los iones cpricos en
medio alcalino, formando as el complejo violeta.

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

B. Reaccin Xantoproteica
Al reaccionar la albumina con el cido ntrico se observ que la solucin
adquiri un tono blanco lechoso. Luego al llevar a bao mara la solucin fue
adquiriendo poco a poco un color amarillo. Luego se calent la solucin
hasta que se disolviera y se le ech hidrxido de amonio, observando una
coloracin anaranjada de la solucin.
En esta reaccin ocurre la nitracin del compuesto (aminocido aromtico
contenido en la albumina), obtenindose un nitrocompuesto de coloracin
amarilla, y de pH acido, que, al neutralizar con hidrxido de amonio, se torna
anaranjado.

C. Reaccin Ninhidrina
Al reaccionar la albumina con la ninhidrina se observ una pequea coloracin
blanca en la solucin, luego al llevar a bao maria la solucin adquiere un color
purpura intenso; precipitndose al cabo de unos minutos.
Durante la reaccin la ninhidrina se reduce y vuelve a reaccionar con el
aminocido y con otra ninhidrina, formando as el compuesto violeta observado
en el experimento.

II. REACCIONES DE PRECIPITACIN

A. Reacciones de precipitacin con sales metlicas.
En esta parte de la experiencia se observ la precipitacin en los 3 tubos de
ensayo, precipitacin se da ya que en la muestra problema es una protena, este
es un mtodo de identificacin de protenas mediante la precipitacin.

B. Precipitacin de reactivos alcaloides

En las 2 pruebas dio un precipitado amarillento con los reactivos alcaloides y la
albumina. Debido a su carcter anftero, las protenas reaccionan con los cidos
y con las bases. Los cidos proteicos y lcali proteicos son insolubles en agua y
en solucin de sales neutras y se disocian en los cidos y en las bases diluidas,
pero precipitan en medio neutro. Las protenas recuperadas resultan
desnaturalizadas.

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

La sacarosa, el almidn y la celulosa se hidrolizan dando monosacridos.

La celulosa y el almidn son polisacridos formados por monosacridos de
glucosas.
La glucosa es un agente reductor
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman soluciones
coloidales al reaccionar con el agua.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados.
Los reactivos de alcaloides dan precipitado con la mayora de las protenas.
Las sales metlicas al reaccionar con las protenas dan precipitado y este es un
mtodo de identificacin.

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

Para limpiar los tubos de ensayo utilizar de preferencia un disolvente orgnico

ya que para esta prctica se us diferentes tipos de reactivos y podran
reaccionar de manera inesperada al no estar limpios los tubos de ensayo.
Prestar suma atencin a la hora de la reaccin donde presenta una etapa de
coloracin de los reactivos.
Realizar con cuidados los ensayos de la prctica, puede ocasionar quemaduras
u otros daos

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 Prctica N9 AMINOCIDOS Y PROTENAS

H. Dupont Durst. ,Qumica Orgnica Experimental. Editorial Reverte. Pg= 223.

E. Solano Oria, E. Perez Pardo y F. Tomas Alonso, Practica de laboratorio de qumica
organica, 1991,pgs=137-141.
David Gutshe, Fundamentos e Qumica Orgnica . pg: 381

L.G.Wade. Jr. Qumica organica. Volumen 2.septima edicin pag.219-820

Robert C. Atkins, Francis A. Carey, Organic Chemistry Editorial McGraw-Hill Companies,

The. Sexta Edicin. 2005 pp 286-291.
Robert C. Atkins, Francis A. Carey, Organic Chemistry Editorial McGraw-Hill Companies,
The. Sexta Edicin. 2005 pp 286-291.

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